水衛(wèi)生生物學(xué)

水衛(wèi)生生物學(xué)第一頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日第一節(jié)

水中的病原微生物基礎(chǔ)知識(shí)：水體中的微生物主要來(lái)源于土壤、以及人類和動(dòng)物的排泄物。其中，能夠引起疾病的微生物稱之為病原微生物。與水有關(guān)的微生物感染疾病主要有：霍亂、傷寒、沙眼、血吸蟲(chóng)病、軍團(tuán)病等。目前，80%的疾病都與水有關(guān)。第二頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日水中常見(jiàn)的病原細(xì)菌：

1致病性大腸桿菌

2傷寒桿菌（沙門氏菌）

3痢疾桿菌（志賀氏菌）

4霍亂弧菌

5軍團(tuán)菌

6糞鏈球菌第一節(jié)

水中的病原微生物第三頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日水中常見(jiàn)的病毒：

1腸道病毒（脊髓灰質(zhì)炎病毒等）

2肝炎病毒

3輪狀病毒

4冠狀病毒（SARS）第一節(jié)

水中的病原微生物第四頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日水中常見(jiàn)的病原性原生動(dòng)物及寄生蟲(chóng)：

1隱孢子蟲(chóng)和賈第鞭毛蟲(chóng)（兩蟲(chóng)）

2溶組織內(nèi)阿米巴（痢疾阿米巴）

3蛔蟲(chóng)

4血吸蟲(chóng)第一節(jié)

水中的病原微生物第五頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日第二節(jié)水質(zhì)生物學(xué)指標(biāo)水質(zhì)生物學(xué)指標(biāo)用來(lái)評(píng)價(jià)水中的病原性微生物，預(yù)防流行性傳染病爆發(fā)。對(duì)每種病原微生物進(jìn)行檢測(cè)是不切實(shí)際的。研究發(fā)現(xiàn)，水中病原微生物主要來(lái)源于人畜糞便。因此檢查人畜糞便中通常存在的微生物，作為評(píng)價(jià)水受糞便污染的程度。這樣的微生物稱作指示微生物。第六頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日第二節(jié)水質(zhì)生物學(xué)指標(biāo)幾種常用的指示微生物病原細(xì)菌指示微生物：細(xì)菌總數(shù);大腸菌群；糞大腸菌群;糞鏈球菌;梭菌/產(chǎn)氣莢膜梭菌病毒指示微生物：

SC噬菌體；F-RNA噬菌體；脆弱擬桿菌噬菌體;脊髓灰質(zhì)炎病毒病原性原生動(dòng)物：隱孢子蟲(chóng)、賈第鞭毛蟲(chóng)第七頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日為何選擇大腸菌群作為病原細(xì)菌指示微生物？（1）大腸菌群的生理習(xí)性與大部分病原菌相似，并且外界存活時(shí)間基本一致；（2）大腸菌群在人糞便中數(shù)量很大。（3）檢驗(yàn)技術(shù)不復(fù)雜。

大腸菌群第二節(jié)水質(zhì)生物學(xué)指標(biāo)第八頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日大腸菌群的形態(tài)和生理特性1種類（1）大腸埃希氏桿菌（最為常見(jiàn)）

Escherichiacoli；E.coli

（2）產(chǎn)氣桿菌（3）枸櫞酸鹽桿菌（4）副大腸桿菌第二節(jié)水質(zhì)生物學(xué)指標(biāo)

大腸菌群第九頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日

大腸埃希氏桿菌特性兼性好氧革蘭氏陰性菌，無(wú)芽孢，兩端鈍圓短桿菌。大小約0.5～0.8×2.0～3.0微米。生長(zhǎng)溫度10～46攝氏度，適宜溫度37攝氏度，生長(zhǎng)pH范圍4.5～9.0，適宜的pH為中性。能分解葡萄糖、甘露醇、乳糖等多種碳水化合物，并產(chǎn)酸產(chǎn)氣，所產(chǎn)生的CO2/H2為1:1。遠(yuǎn)藤氏培養(yǎng)基上菌落呈紅色、帶金屬光澤，直徑約2～3mm。第二節(jié)水質(zhì)生物學(xué)指標(biāo)

大腸菌群第十頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日賈第蟲(chóng)病藍(lán)氏賈第鞭毛蟲(chóng)所致賈第蟲(chóng)滋養(yǎng)體蟲(chóng)群隔離免疫缺陷及免疫功能低下者易發(fā)生嚴(yán)重感染第十一頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日癥狀：腹瀉96%、上腹痛61%、疲乏72%、體重減輕62%、惡心60%、稀便57%、腹脹42%、發(fā)熱17%⑴急性患者：暴發(fā)性腹瀉、水樣便、惡臭、腹痛等。⑶慢性患者：多見(jiàn)，周期性稀便，很臭，反復(fù)發(fā)作。兒童較易感染，可出現(xiàn)脂肪痢。⑵亞急性患者：間歇性稀便，腹痛等。第十二頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日隱孢子蟲(chóng)病隱孢子蟲(chóng)所致⒉寄生部位：人及哺乳動(dòng)物的腸上皮細(xì)胞及呼吸道上皮細(xì)胞⒊感染途徑：經(jīng)口誤食被污染的食物或飲水⒈感染期：卵囊第十三頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日4.臨床表現(xiàn)⑴免疫功能缺陷型隱孢子蟲(chóng)病：癥狀多而重，持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，直至死亡。多有嚴(yán)重腹瀉與吸收不良?；魜y樣水瀉最常見(jiàn)，數(shù)十次/日。有脫水及酸中毒，體重，惡病質(zhì)。第十四頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日⑵免疫功能正常型隱孢子蟲(chóng)?。鹤韵扌愿篂a，5~10次/日，可自愈。大便量多，水樣/粘液稀便，無(wú)血便。可伴有上腹部疼痛、惡心、嘔吐、腹脹、厭食、體重減輕等。少數(shù)可發(fā)熱，頭疼，嬰幼兒可出現(xiàn)脫水及酸中毒。第十五頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日第三節(jié)

水的衛(wèi)生學(xué)檢驗(yàn)方法

主要內(nèi)容：1細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定2大腸菌群測(cè)定

1）發(fā)酵法

2）濾膜法3）病毒監(jiān)測(cè)方法（蝕斑檢驗(yàn)法）4）噬菌體監(jiān)測(cè)方法（ISO10705）5）原生動(dòng)物的監(jiān)測(cè)方法（USEPA1623）第十六頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日第三節(jié)

水的衛(wèi)生學(xué)檢驗(yàn)方法

細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定將定量的水樣接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，在37℃溫度下培養(yǎng)24hr后，計(jì)數(shù)生長(zhǎng)的細(xì)菌菌落數(shù)，然后根據(jù)接種的水樣數(shù)量就可算出每毫升水中的細(xì)菌數(shù)。1ml1ml1ml1ml1ml1ml

原水9毫升無(wú)菌水1ml1ml1mlCK對(duì)照先接種稀釋水樣再傾注培養(yǎng)基10-210-337℃培養(yǎng)第十七頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日

大腸菌群的測(cè)定：發(fā)酵法第三節(jié)

水的衛(wèi)生學(xué)檢驗(yàn)方法水樣接種初步發(fā)酵產(chǎn)酸產(chǎn)氣大腸菌群厭氧芽孢桿菌好氧芽孢桿菌大腸菌群好氧芽孢桿菌陽(yáng)性管大腸菌群革蘭氏陰性無(wú)芽孢革蘭氏染色產(chǎn)生典型菌落鑒別培養(yǎng)基平板分離產(chǎn)酸產(chǎn)氣復(fù)發(fā)酵三步：（1）初步發(fā)酵試驗(yàn)；（2）平板分離；（3）復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)第十八頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日

大腸菌群的測(cè)定：發(fā)酵法說(shuō)明：（1）采用含有乳糖的培養(yǎng)基，則分析結(jié)果不包括副大腸桿菌；采用葡萄藤或甘露醇培養(yǎng)基，則分析結(jié)果包括副大腸桿菌.因?yàn)楦贝竽c桿菌分解乳糖緩慢或不能分解（2）我國(guó)一般采用乳糖培養(yǎng)基第三節(jié)

水的衛(wèi)生學(xué)檢驗(yàn)方法第十九頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日方法：將水樣置于乳糖液體培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)24h，觀察產(chǎn)酸和產(chǎn)氣情況。如產(chǎn)酸產(chǎn)氣可初步確定有大腸菌群。

產(chǎn)酸：溴甲酚紫作指示劑，培養(yǎng)基由紫色

變?yōu)辄S色。

產(chǎn)氣：杜氏小管頂端有氣泡。杜氏小管產(chǎn)酸產(chǎn)氣的菌有:1大腸菌群;2厭氧芽孢桿菌;3好氧芽孢桿菌第三節(jié)

水的衛(wèi)生學(xué)檢驗(yàn)方法發(fā)酵法測(cè)定大腸菌群步驟：1初步發(fā)酵試驗(yàn)

第二十頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日（1）

將第一步產(chǎn)酸產(chǎn)氣的菌落劃線接種在遠(yuǎn)藤氏培養(yǎng)基或伊紅美蘭培養(yǎng)基表面，

37℃培養(yǎng)24h，目的阻止厭氧芽孢桿菌生長(zhǎng)。（2）革蘭氏染色

取有典型菌落特征的單個(gè)菌落進(jìn)行革蘭氏染色。大腸菌群和好氧芽孢桿菌生長(zhǎng)。同時(shí)大腸菌群有特征性菌落出現(xiàn)。發(fā)酵法測(cè)定大腸菌群步驟：2平板分離第三節(jié)

水的衛(wèi)生學(xué)檢驗(yàn)方法大腸菌群：革蘭氏陰性菌、不生芽孢、好氧。好氧芽孢桿菌：革蘭氏陽(yáng)性菌、生芽孢、好氧。第二十一頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日

將可疑菌落（革蘭氏陰性、大腸桿菌特征菌落）移接于乳糖液體培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)24h。產(chǎn)酸產(chǎn)氣者確定為有大腸菌群存在。最后根據(jù)有大腸菌群的陽(yáng)性管數(shù)查表或通過(guò)公式計(jì)算。發(fā)酵法測(cè)定大腸菌群步驟：3復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)第三節(jié)

水的衛(wèi)生學(xué)檢驗(yàn)方法第二十二頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日第二十三頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日1、抽濾法過(guò)濾定量水樣，將細(xì)菌截留在濾膜上。2、將濾膜中沒(méi)有細(xì)菌的一面貼在品紅硫酸鈉培養(yǎng)基或伊紅美藍(lán)固體培養(yǎng)基上，以培育和獲得單個(gè)菌落。3、將濾膜上符合大腸菌群菌落特征的菌落進(jìn)行革蘭氏染色、鏡檢。4、將革蘭氏染色陰性無(wú)芽孢桿菌的菌落接種到含糖培養(yǎng)基中，根據(jù)產(chǎn)氣與否來(lái)判斷有無(wú)大腸菌群存在、5、根據(jù)濾膜上大腸菌落數(shù)和水樣體積，計(jì)算結(jié)果。濾膜法測(cè)定大腸菌群步驟：第三節(jié)

水的衛(wèi)生學(xué)檢驗(yàn)方法第二十四頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日病毒的檢測(cè)方法蝕斑檢驗(yàn)法第二十五頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日生活飲用水的衛(wèi)生學(xué)標(biāo)準(zhǔn)

（GB5749-2006）第三節(jié)水質(zhì)生物學(xué)指標(biāo)常規(guī)指標(biāo):總大腸菌群、耐熱大腸菌群、大腸埃希氏菌群(MPN/100ml或CFU/100ml)不得檢出細(xì)菌總數(shù)(CFU/100ml)<100非常規(guī)指標(biāo):賈第鞭毛蟲(chóng)(個(gè)/10L)<1隱孢子蟲(chóng)(個(gè)/10L)<1第二十六頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日新增方法介紹耐熱大腸菌群和大腸埃希氏菌?耐熱大腸菌群定義：用提高其培養(yǎng)溫度的方法將自然環(huán)境中的大腸菌群與糞便中的大腸菌群區(qū)分開(kāi)，在44.5℃仍能生長(zhǎng)的大腸菌群?WHO第二版：建議將糞大腸菌群改為耐熱大腸菌群?大腸埃希氏菌：WHO第三版提出其為糞便污染最合適的指示菌?大腸埃希