中藥材的學(xué)習(xí)資料

中藥材的學(xué)習(xí)資料第1頁(yè)/共94頁(yè)中藥材及其制劑常用分析方法質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立

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定性分析顯微鑒別理化鑒別(試管)

薄層色譜(HPTLC，TLC)化學(xué)對(duì)照品對(duì)照藥材

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HPTLC與普通TLCA:HPTLCSilicagel60（Merck）B:硅膠G預(yù)制板(青島海洋化工廠)

展開(kāi)劑:氯仿-甲醇-水（15：5：1），10℃以下放置后的下層溶液顯色:10%硫酸：乙醇，105℃加熱約5分鐘檢視:

可見(jiàn)光和紫外光燈（366nm）樣品：1.華重樓；2.華重樓；3.重樓皂苷I；4.重樓對(duì)照藥材；5.滇重樓；6.滇重樓；7.滇重樓AB

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定性分析

HPLC,HPLC-MS,HPLC-MS-MSGC,GC-MS

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烏頭類(lèi)藥材的HPLC分析烏頭對(duì)照品生川烏

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生川烏總生物堿成分HPLC-MS圖

牛牛文庫(kù)文檔分享第8頁(yè)/共94頁(yè)中藥材及其制劑常用分析方法定量分析分光光度法

薄層色譜法（TLC）薄層掃描法氣相色譜法（GC）中藥材及其制劑中揮發(fā)性成分

農(nóng)藥殘留

有機(jī)溶劑殘留高效液相色譜法（HPLC）

牛牛文庫(kù)文檔分享第9頁(yè)/共94頁(yè)檢查重金屬（砷，鉛，汞等）農(nóng)藥殘留（有機(jī)氯，有機(jī)磷和除蟲(chóng)菊酯等）中藥材及其制劑常用分析方法

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中藥材及其制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

我國(guó)中藥材及制劑法定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)概況

中藥材及制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究制訂

牛牛文庫(kù)文檔分享第11頁(yè)/共94頁(yè)藥品標(biāo)準(zhǔn)系根據(jù)藥物來(lái)源、生產(chǎn)工藝及貯運(yùn)過(guò)程中的各個(gè)環(huán)節(jié)所制定的、用以檢測(cè)藥品質(zhì)量是否達(dá)到用藥要求并衡量其質(zhì)量是否穩(wěn)定均一的技術(shù)規(guī)定。由國(guó)家政府制定并頒布的藥品標(biāo)準(zhǔn)即為國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)，系國(guó)家站在公眾立場(chǎng)為保證藥品質(zhì)量而規(guī)定的藥品所必須達(dá)到的最基本的技術(shù)要求。國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)屬于強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)。不能達(dá)到國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)要求的藥品，不得作為藥品銷(xiāo)售或使用。

中藥材及制劑法定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)概況

牛牛文庫(kù)文檔分享第12頁(yè)/共94頁(yè)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中華人民共和國(guó)藥典《中國(guó)藥典》

中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)（部頒標(biāo)準(zhǔn)）國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局藥品標(biāo)準(zhǔn)（局頒標(biāo)準(zhǔn)）地方標(biāo)準(zhǔn)現(xiàn)行中藥材及制劑法定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

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中華人民共和國(guó)藥典《中國(guó)藥典》《中國(guó)藥典》是國(guó)家為保證藥品質(zhì)量所制訂的法典，是藥品生產(chǎn)、經(jīng)營(yíng)、使用，檢驗(yàn)和監(jiān)督管理部門(mén)共同遵循的法定依據(jù)，也是對(duì)外貿(mào)易和技術(shù)交流不可缺少的準(zhǔn)繩。在《中國(guó)藥典》一部中，國(guó)家對(duì)常用藥材編纂制定了統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，并對(duì)其中共性要求在附錄等部分給予統(tǒng)一的規(guī)定。

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自1953年第一版中國(guó)藥典頒布以來(lái)，已連續(xù)8版收載中藥材及制劑，在品種數(shù)量、檢測(cè)方法的科學(xué)性、專(zhuān)屬性及合理性等方面不斷完善、發(fā)展。

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衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)與局頒標(biāo)準(zhǔn)《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥材（簡(jiǎn)稱(chēng)《部頒藥材標(biāo)準(zhǔn)》）《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑《國(guó)家食品藥品監(jiān)管局進(jìn)口藥材標(biāo)準(zhǔn)》43種

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除《中國(guó)藥典》收載的品種外，凡來(lái)源清楚，療效確切，較多地區(qū)經(jīng)營(yíng)使用的中藥材，本著“一名一物”原則，分期分批制訂部標(biāo)準(zhǔn)，第一批收載了101種，匯編為《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥材(第一冊(cè))，于1991年12月10日頒布。

2004年5月8日，國(guó)家食品藥品監(jiān)管局印發(fā)了《關(guān)于頒布兒茶等43種進(jìn)口藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的通知》（國(guó)食藥監(jiān)注[2004]144號(hào)），頒布了經(jīng)國(guó)家食品藥品監(jiān)管局修（制）訂的兒茶等43種進(jìn)口藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

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局頒標(biāo)準(zhǔn)

包括《維藥標(biāo)準(zhǔn)》、《蒙藥標(biāo)準(zhǔn)》、《進(jìn)口藥材標(biāo)準(zhǔn)》、《新藥標(biāo)準(zhǔn)》等數(shù)種地方標(biāo)準(zhǔn)

指各省、自治區(qū)，直轄市使用的中藥材，除《中國(guó)藥典》

與部頒標(biāo)準(zhǔn)已收載的品種外，另行頒布的標(biāo)準(zhǔn)。如《四川省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》、《貴州省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》、《黑龍江省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》等。

飲片按照國(guó)家或省、自治區(qū)、直轄市制定頒布的《飲片炮制規(guī)范》炮制。

牛牛文庫(kù)文檔分享第18頁(yè)/共94頁(yè)制定藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的原則和基本程序

原則確保藥品安全性與有效性密切結(jié)合實(shí)驗(yàn)研究和生產(chǎn)實(shí)際的原則嚴(yán)格統(tǒng)一與協(xié)調(diào)一致的原則（規(guī)范化）先進(jìn)技術(shù)與經(jīng)濟(jì)合理相結(jié)合的原則

牛牛文庫(kù)文檔分享第19頁(yè)/共94頁(yè)制定藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的原則和基本程序基本程序藥品的命名考察藥品生產(chǎn)全過(guò)程：原料，純度，中間體殘留溶劑，溫度，濕度光照收集國(guó)內(nèi)外相關(guān)資料對(duì)藥品質(zhì)量考察中發(fā)現(xiàn)的問(wèn)題進(jìn)行科學(xué)實(shí)驗(yàn)起草藥品標(biāo)準(zhǔn)及起草說(shuō)明

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中藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容簡(jiǎn)介基原：中藥材的來(lái)源。性狀：為中藥材的宏觀特征,用語(yǔ)以現(xiàn)代科學(xué)術(shù)語(yǔ)為主鑒別：經(jīng)驗(yàn)鑒別、顯微鑒別、一般理化鑒別、色譜鑒別、光譜鑒別檢查：包括雜質(zhì)、水分、灰分、酸不溶性灰分、重金屬、砷鹽、農(nóng)藥殘留量、有關(guān)的毒性成分及其它必要的檢查項(xiàng)目。浸出物：主要針對(duì)目前尚無(wú)成熟的含量測(cè)定方法或所測(cè)成分含量低于萬(wàn)分之一的品種，常用的有醚浸出物、醇浸出物和水浸出物的測(cè)定。

牛牛文庫(kù)文檔分享第21頁(yè)/共94頁(yè)含量測(cè)定：系指藥材中某類(lèi)成分或某一成分的含量測(cè)定（已知有效成分，毒性成分或能反映內(nèi)在質(zhì)量的指標(biāo)成分）含量測(cè)定書(shū)寫(xiě)內(nèi)容及順序：藥材粉碎程度、提取分離、供試液配置、測(cè)定方法、含量限度重量法指采用溶劑萃取或沉淀劑沉淀等方法，對(duì)藥材提取物進(jìn)行適當(dāng)?shù)募兓?，進(jìn)行稱(chēng)量的一種測(cè)定方法。容量法指采用滴定的方法對(duì)藥材中某類(lèi)成分進(jìn)行測(cè)定的方法，常用于總生物堿、總有機(jī)酸等的含量測(cè)定。

牛牛文庫(kù)文檔分享第22頁(yè)/共94頁(yè)色譜法包括薄層掃描法、高效液相色譜法、氣相色譜法、毛細(xì)管電泳色譜法等。光譜法常用的為可見(jiàn)紫外分光光度法，主要用于測(cè)定藥材及制劑中的某類(lèi)成分。

牛牛文庫(kù)文檔分享第23頁(yè)/共94頁(yè)中藥制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容簡(jiǎn)介處方：制劑組成制法：制劑的制備方法性狀：制劑的宏觀特征鑒別：理化鑒別、色譜鑒別、光譜鑒別含量測(cè)定：系指中藥制劑中某類(lèi)成分或某一成分的含量測(cè)定

測(cè)定方法同藥材功能與主治：用法用量：規(guī)格：貯藏：

牛牛文庫(kù)文檔分享第24頁(yè)/共94頁(yè)中藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究制訂含量測(cè)定

對(duì)藥物中的有效或指標(biāo)成分及成分類(lèi)別的質(zhì)量評(píng)價(jià)進(jìn)行的測(cè)定。藥效成分或成分類(lèi)別指標(biāo)成分或成分類(lèi)別應(yīng)選擇專(zhuān)屬性強(qiáng)、靈敏度高、重現(xiàn)性好，簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)的含量測(cè)定方法。中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中含量測(cè)定項(xiàng)要求

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分析方法的驗(yàn)證

準(zhǔn)確性→回收率試驗(yàn)精密度（重復(fù)性）→重復(fù)性試驗(yàn)檢測(cè)限度→檢出限定量限度→測(cè)定限線(xiàn)性和范圍→線(xiàn)性范圍專(zhuān)屬性耐用性中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中含量測(cè)定項(xiàng)要求

牛牛文庫(kù)文檔分享第26頁(yè)/共94頁(yè)回收率試驗(yàn)

考察測(cè)量值與真實(shí)值或認(rèn)可的參考值之間的接近程度。一般采用加樣回收方法進(jìn)行試驗(yàn)，樣品中含有量與加入的純品量應(yīng)大致相當(dāng)。

中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中含量測(cè)定項(xiàng)要求

牛牛文庫(kù)文檔分享第27頁(yè)/共94頁(yè)回收率計(jì)算

測(cè)得量-樣品中含量回收率%=X100%加入量

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同一樣品，制備相同濃度的6份供試品（樣品取樣量減半，以1：1比例加入對(duì)照品）；同一樣品，制備3個(gè)濃度的供試品，每個(gè)濃度分別制備3份供試液，對(duì)照品的加入方式又有以下三種方式：中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中含量測(cè)定項(xiàng)要求

牛牛文庫(kù)文檔分享第29頁(yè)/共94頁(yè)取相同量樣品9份（一般為樣品取樣量的一半），設(shè)計(jì)3個(gè)濃度，按不同比例加入對(duì)照品。中間濃度一般按1：1比例加入，低、高濃度可選0.5：1，1.5：1的比例。加入的對(duì)照品的量要適當(dāng)，保證供試品溶液的濃度（或量）在考察的線(xiàn)性范圍內(nèi)取3種不同量的樣品各3份，每個(gè)取樣量分別按1：1比例加入對(duì)照品，中間濃度應(yīng)選定在正常測(cè)定濃度，其他兩個(gè)濃度可以結(jié)合范圍測(cè)定項(xiàng)目選擇低、高濃度。按標(biāo)示量計(jì)算的組分，可參照化學(xué)藥品測(cè)定方法，取9份樣品，按0.8：1，1：1，1：1.2

的比例加入對(duì)照（樣品取樣量減半）。

牛牛文庫(kù)文檔分享第30頁(yè)/共94頁(yè)測(cè)定數(shù)據(jù)的精度要求，一般應(yīng)滿(mǎn)足以下規(guī)定：回收率計(jì)算值在95－105％范圍，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD%）薄層掃描法＜5%，高效液相色譜法/氣相色譜法＜3%。

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精密度試驗(yàn)

儀器精密度薄層掃描法同板精密度異板精密度

重復(fù)性試驗(yàn)

指在同樣的操作條件下，在較短的時(shí)間間隔的精密度。一般取不少于5份樣品，重復(fù)測(cè)定，以含量值計(jì)算RSD%。

重現(xiàn)性試驗(yàn)

指不同試驗(yàn)室之間的精密度(用于合作研究或協(xié)作標(biāo)定等)。中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中含量測(cè)定項(xiàng)要求

牛牛文庫(kù)文檔分享第33頁(yè)/共94頁(yè)重復(fù)性：以下幾種方法可選擇使用。測(cè)定數(shù)據(jù)的精度要求，一般應(yīng)滿(mǎn)足以下規(guī)定：相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD%）薄層掃描法＜5%，高效液相色譜法/氣相色譜法＜3%測(cè)定同一濃度6份樣品，計(jì)算含量平均值和RSD%測(cè)定3個(gè)不同濃度9份樣品（三個(gè)不同濃度，每個(gè)不同濃度分別制備3份供試品溶液），高低濃度可以結(jié)合線(xiàn)性范圍測(cè)定項(xiàng)目考察設(shè)計(jì)。一般中間濃度為正常測(cè)定的樣品濃度。計(jì)算9份樣品的含量平均值和RSD%

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牛牛文庫(kù)文檔分享第35頁(yè)/共94頁(yè)線(xiàn)性關(guān)系考察

以分析方法的響應(yīng)值對(duì)被分析物的濃度或含量作圖，或用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)方法評(píng)價(jià)兩者是否呈線(xiàn)性關(guān)系，以及線(xiàn)性的程度。*至少要用5個(gè)濃度*線(xiàn)性關(guān)系的測(cè)試范圍一般為正常分析量的25%-150%

中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中含量測(cè)定項(xiàng)要求

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牛牛文庫(kù)文檔分享第37頁(yè)/共94頁(yè)將苦參堿對(duì)照品稀釋至20%、50%、100%、120%、150%五個(gè)濃度，按上述色譜條件，分別精密吸取10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，以對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算得回歸方程：苦參堿：y=2056508.06x+36389.72r=0.9997。表明苦參堿在0.792-5.996μg范圍內(nèi)具有良好的線(xiàn)性關(guān)系。

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專(zhuān)屬性試驗(yàn)

指可能存在的組分，如類(lèi)似物、降解物、基質(zhì)等存在時(shí)，對(duì)被分析物準(zhǔn)確可靠測(cè)定的能力?？瞻钻幮詫?duì)照與參照物比較保留時(shí)間

DAD吸收光譜等對(duì)照物加入試驗(yàn)中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中含量測(cè)定項(xiàng)要求

牛牛文庫(kù)文檔分享第40頁(yè)/共94頁(yè)耐用性試驗(yàn)

*

指試驗(yàn)參數(shù)發(fā)生一定范圍的改變時(shí)，測(cè)量保持不受影響的能力。不同色譜柱比較流動(dòng)相組成比例變化比較(不同pH值)

不同柱溫比較不同檢測(cè)波長(zhǎng)的比較

中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中含量測(cè)定項(xiàng)要求

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按中藥材所含化合物的類(lèi)別，選擇適當(dāng)溶劑進(jìn)行提取。根據(jù)提取物的性質(zhì)，選擇適當(dāng)?shù)姆蛛x方法，如：正相或反相HPLC、CE等等，摸索出若干套最佳色譜條件，盡可能達(dá)到樣品中的各化學(xué)成分被分離和檢測(cè)到。結(jié)合各分離組分的性質(zhì)，選擇合適的檢測(cè)系統(tǒng)和手段，如：紫外、蒸發(fā)光散射、HPLC/MS、GC/MS等方法獲取化學(xué)成分的數(shù)據(jù)。中藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)中的指紋圖譜方法

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指紋圖譜是指采用一定的分析方法得到的中藥化學(xué)物質(zhì)或生物物質(zhì)的圖譜，包括化學(xué)指紋圖譜和生物指紋圖譜。用于中藥質(zhì)量控制的主要為化學(xué)指紋圖譜，即采用一定的分析方法得到的能夠標(biāo)示該中藥主要化學(xué)成分的圖譜，簡(jiǎn)稱(chēng)指紋圖譜。中藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)中的指紋圖譜方法

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我國(guó)對(duì)黃芪、三七、黃芩等多種常用中藥材的指紋圖譜進(jìn)行了系統(tǒng)研究，建立了指紋圖譜檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，此方法對(duì)比較藥材質(zhì)量與鑒別物種具有較大的作用。

中藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)中的指紋圖譜方法

黃芩HPLC圖譜12黃芩苷23漢黃芩苷25黃芩素26漢黃芩素

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在中藥材指紋圖譜的相似性評(píng)價(jià)研究技術(shù)和方法方面已取得了較大進(jìn)展，開(kāi)發(fā)了多種計(jì)算機(jī)指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)軟件，使指紋圖譜評(píng)價(jià)由最初的峰面積比值計(jì)算發(fā)展成為計(jì)算機(jī)模擬識(shí)別。這不僅節(jié)約了大量的時(shí)間，而且使評(píng)價(jià)更加客觀、科學(xué)。

中藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)中的指紋圖譜方法

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由于中藥材大部分來(lái)源于生物體，其化學(xué)成分受產(chǎn)地、氣候、生態(tài)環(huán)境、栽培、加工技術(shù)等影響很大。選擇“地道藥材”或現(xiàn)代研究證明為優(yōu)質(zhì)的藥材樣品作為“中藥材實(shí)物對(duì)照”，用于研究中藥材質(zhì)量的變化較為可行，且可以消除一些噪音和干擾，使對(duì)質(zhì)量的評(píng)價(jià)更科學(xué)和合理。中藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)中的指紋圖譜方法

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品名

所測(cè)成分測(cè)定方法含量限度

人參人參皂甙Re，和人參皂甙Rg1的總量HPLC≥0.25

人參葉人參皂甙Re，和人參皂甙Rg1的總量HPLC≥2.25

兒茶兒茶素和表兒茶素的總量HPLC≥21.0

大黃大黃素和大黃酚的總量HPLC≥0.5

吳茱黃吳茱萸堿和吳茱萸次堿的總量HPLC≥0.20

厚樸厚樸酚與和厚樸酚的總量HPLC≥2.0

穿心蓮穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的總量TLCS≥0.80

蟾酥華蟾蜍次素與脂蟾毒配基的總量HPLC≥6.0

總量結(jié)合某一成分的含量測(cè)定是今后一段時(shí)間內(nèi)中藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的發(fā)展方向。

牛牛文庫(kù)文檔分享第47頁(yè)/共94頁(yè)川烏、草烏、附子及炮制品品質(zhì)鑒定

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研究目的活性成分的分離制備及結(jié)構(gòu)鑒定草烏，川烏，附子及炮制品雙酯，單酯型生物堿成分的含量測(cè)定草烏，川烏，附子及炮制品HPLC–MS分析生、制川烏的藥效學(xué)和毒理學(xué)初步研究小結(jié)

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川烏，草烏，附子為常用有毒中藥，川烏和附子分別是毛茛科植物烏頭(Aconitumcarmichaeli

Debx.)的干燥母根和子根，草烏是毛茛科植物北烏頭

(Aconitum

kusnezoffiiReichb.)的干燥塊根，具有回陽(yáng)救逆、祛風(fēng)除濕、溫經(jīng)止痛等功效，生品有大毒，其中所含的雙酯型二萜生物堿烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿等毒性很強(qiáng)，用藥劑量與中毒劑量接近。

概述

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烏頭AconitumcarmichaeliDebx.

川烏

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烏頭AconitumcarmichaeliDebx.

川烏附子

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北烏頭AconitumkusnezoffiiReichb.

草烏

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北烏頭AconitumkusnezoffiiReichb.草烏

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烏頭AconitumcarmichaeliDebx.

川烏白附片

黑順片

鹽附子

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經(jīng)炮制加工后雙酯型生物堿可轉(zhuǎn)化為單酯型生物堿,從而減小毒性。炮制過(guò)程中應(yīng)嚴(yán)格控制雙酯型生物堿的轉(zhuǎn)化程度,防止炮制不完全,有毒成分含量偏高,用藥不安全;或炮制太過(guò),有效成分流失嚴(yán)重,影響療效。建立專(zhuān)屬的,可有效控制飲片質(zhì)量的檢測(cè)方法，一直是一項(xiàng)難度很大的課題

。

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活性成分的提取分離和結(jié)構(gòu)鑒定

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StructureMesaconitine（新烏頭堿）

Benzoylmesaconine

(苯甲酰新烏頭堿)

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StructureHypaconitine（次烏頭堿）

Benzoylhypaconine(苯甲酰次烏頭堿)

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從制川烏中分離得到苯甲酰次烏頭堿、苯甲酰新烏頭堿2個(gè)單酯型生物堿,為制川烏炮制原理的闡明，質(zhì)量評(píng)價(jià)和質(zhì)量控制奠定了基礎(chǔ)。

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烏頭類(lèi)藥材的HPLC定量分析

在制川烏質(zhì)量控制方面,國(guó)內(nèi)外學(xué)者在生物堿含量測(cè)定方法上作了大量研究，高效液相色譜法測(cè)定生物堿成分，選擇性較好，但目前報(bào)道的方法中多采用二乙胺或三乙胺為流動(dòng)相，堿性較強(qiáng)，易破壞色譜柱固定相，且一般只測(cè)定雙酯型烏頭生物堿，而單酯型烏頭生物堿測(cè)定及同時(shí)測(cè)定單、雙酯型烏頭生物堿的文獻(xiàn)幾乎沒(méi)有報(bào)道。

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烏頭類(lèi)藥材的HPLC定量分析HPLC色譜條件

儀器:島津10AD,島津2010/SPD-M,Waters2690

色譜柱:DiamonsilTMC185μm,4.6mmX250mm

流動(dòng)相:流動(dòng)相A:乙腈-四氫呋喃流動(dòng)相B:0.1M醋酸銨梯度洗脫流速：0.8mL?min-1

檢測(cè)波長(zhǎng)：235nm

柱溫：室溫

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烏頭類(lèi)藥材的HPLC定量分析烏頭對(duì)照品生川烏

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制川烏對(duì)照品制川烏

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生川烏制川烏

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方法學(xué)考察

線(xiàn)性范圍的考察

精密度試驗(yàn)

穩(wěn)定性試驗(yàn)

重復(fù)性試驗(yàn)

加樣回收率試驗(yàn)

耐受性試驗(yàn)—

流動(dòng)相不同pH對(duì)含量的影響

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烏頭堿

(aconitine)

Y=1.820×106X-2.591×105

0.32-5.16

0.9999Y=2.620×106X-6.301×103

0.01-0.360.9996

次烏頭堿(hypaconitine）

Y=1.791×106X-5.409×105

1.29-20.600.9999Y=2.022×106X-2.591×105

0.05-1.320.9999Y=1.366×106X+2.604×102

0.01-1.060.9999

新烏頭堿（mesaconitine）

Y=1.832×106X-1.727×105

0.22-3.590.9999

苯甲酰新烏頭堿（Benzoylmesaconine）

Y=1.110×106X+2.374×104

0.13-2.040.9998

Y=1.033×106X+1.326×103

0.02-0.100.9997苯甲酰次烏頭堿（benzoylhypaconine）

Y=1.318×106X+3.571×104

0.15-2.410.9999Y=1.613×106X+1.127×1030.02-0.120.9996線(xiàn)性范圍

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精密度試驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液(四川江油1)10μL，按上述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積積分值，結(jié)果生川烏中烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿峰面積的RSD（n=5）分別為0.51%，0.18%和0.21%，制川烏中苯甲酰新烏頭堿、苯甲酰次烏頭堿和次烏頭堿峰面積的RSD（n=5）分別為1.1%，1.5%和0.32%。

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重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批生川烏藥材樣品（四川江油1）5份，按供試品溶液制備方法操作，依上述測(cè)定條件分別進(jìn)樣10μL測(cè)定含量，結(jié)果烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿平均含量分別為0.011%，0.138%，0.024%，RSD分別為2.1%，1.1%和2.5%。同法測(cè)得制川烏中苯甲酰新烏頭堿、苯甲酰次烏頭堿和次烏頭堿平均含量分別為0.050%，0.059%和0.016%，RSD分別為1.8%，2.5%和1.6%。

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加樣回收率試驗(yàn)精密稱(chēng)取已測(cè)知含量的生川烏藥材樣品（四川江油1）0.5g，共9份，平均分為3組，分別精密加入烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿混合對(duì)照品適量（分別約相當(dāng)于樣品中含量的50%，100%，150%），照供試品溶液制備方法操作，并按上述測(cè)定條件測(cè)定，每份進(jìn)樣2次，進(jìn)樣量10μL，計(jì)算回收率，結(jié)果低、中、高3個(gè)加入量的平均回收率（n=3）分別為新烏頭堿112.2%（RSD=3.2%），106.3%(RSD=1.5%），103.5%（RSD=2.3%）；次烏頭堿107.6%（RSD=3.3%），104.2%（RSD=1.5%），102.9%（RSD=1.9%）；烏頭堿105.0%（RSD=4.4%），104.9%（RSD=1.8%），新烏頭堿100.4%（RSD=3.0%）。精密稱(chēng)取已測(cè)知含量的制川烏樣品0.5g，共5份，分別精密加入苯甲酰新烏頭堿、苯甲酰次烏頭堿混合對(duì)照品適量，同法測(cè)得制川烏中苯甲酰新烏頭堿、苯甲酰次烏頭堿的平均回收率（n=5）分別為104.1%（RSD=2.2%），100.8%（RSD=2.9%）。

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耐受性試驗(yàn)—

流動(dòng)相不同pH對(duì)含量的影響

由于烏頭中所含生物堿成分結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，對(duì)酸堿較敏感，因此考察了流動(dòng)相不同pH（5.50，5.75，6.00）對(duì)含量的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，流動(dòng)相pH在5.5-6.0范圍內(nèi)苯甲酰新頭堿、苯甲酰次烏頭堿、新烏頭堿、次烏頭堿和烏頭堿含量基本穩(wěn)定。

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穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液(四川江油1)，在0，4，8，14，20h進(jìn)樣10μL測(cè)定，結(jié)果生川烏中烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿峰面積的RSD分別為0.89%，0.94%，0.71%；制川烏中苯甲酰新烏頭堿、苯甲酰次烏頭堿和次烏頭堿峰面積的RSD分別為0.45%，0.50%，0.99%。表明供試品溶液在20h內(nèi)測(cè)得峰面積值基本不變。

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烏頭類(lèi)藥材的HPLC定量分析對(duì)68個(gè)樣品（川烏13個(gè)，制川烏17個(gè)，草烏9個(gè)，附子3個(gè)，附片9個(gè)，偽品17個(gè)）藥材樣品：

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生川烏樣品測(cè)定結(jié)果(%,n=2)ResultsofRadixAconitisamplesdetermination來(lái)源（sour