大學實驗報告細菌的培養(yǎng)

PAGE大學實驗報告，細菌的培養(yǎng)篇一：培養(yǎng)基的制備與滅菌實驗報告陜西師范大學遠程教育學院生物學實驗報告報告題目培養(yǎng)基的制備與滅菌姓名劉偉學號專業(yè)生物科學批次/層次指導教師學習中心培養(yǎng)基的制備與滅菌一、目的要求1.掌握微生物實驗室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。2.掌握培養(yǎng)基的配置原則和方法。3.掌握高壓蒸汽滅菌的操作方法和注意事項。二、基本原理牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：是一種應用最廣泛和最普通的細菌基礎培養(yǎng)基，有時又稱為普通培養(yǎng)基。由于這種培養(yǎng)基中含有一般細胞生長繁殖所需要的最基本的營養(yǎng)物質(zhì)，所以可供細菌生長繁殖之用。高壓蒸汽滅菌：主要是通過升溫使蛋白質(zhì)變性從而達到殺死微生物的效果。將滅菌的物品放在一個密閉和加壓的滅菌鍋內(nèi)，通過加熱，使滅菌鍋內(nèi)水沸騰而產(chǎn)生蒸汽。待蒸汽將鍋內(nèi)冷空氣從排氣閥中趨盡，關閉排氣閥繼續(xù)加熱。此時蒸汽不溢出，壓力增大，沸點升高，獲得高于100℃的溫度導致菌體蛋白凝固變性，而達到滅菌的目的。三、實驗材料1.藥品：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、瓊脂、1mol/L的NaOH和HCl溶液。2.儀器及玻璃器皿：天平、高壓蒸汽滅菌鍋、移液管、試管、燒杯、量筒、三角瓶、培養(yǎng)皿、玻璃漏斗等。3.其他物品：藥匙、稱量紙、pH試紙、記號筆、棉花等。四、操作步驟（一）玻璃器皿的洗滌和包裝1．玻璃器皿的洗滌玻璃器皿在使用前必須洗刷干凈。將三角瓶、試管、培養(yǎng)皿、量筒等浸入含有洗滌劑的水中．用毛刷刷洗，然后用自來水及蒸餾水沖凈。移液管先用含有洗滌劑的水浸泡，再用自來水及蒸餾水沖洗。洗刷干凈的玻璃器皿置于烘箱中烘干后備用。2．滅菌前玻璃器皿的包裝（1）培養(yǎng)皿的包扎：培養(yǎng)皿由一蓋一底組成一套，可用報紙將幾套培養(yǎng)皿包成一包，或者將幾套培養(yǎng)皿直接置于特制的鐵皮圓筒內(nèi)，加蓋滅菌。包裝后的培養(yǎng)皿須經(jīng)滅菌之后才能使用。（2）移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脫脂棉)，它的作用是避免外界及口中雜菌進入管內(nèi)，并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花應距管口約左右，棉花自身長度約1~。塞棉花時．可用一外圍拉直的曲別針、將少許棉花塞入管口內(nèi)。棉花要塞得松緊適宜，吹時以能通氣而又不使棉花滑下為準。先將報紙裁成寬約5cm左右的長紙條，然后將已塞好棉花的移液管尖端放在長條報紙的一端，約成45℃角，折疊紙條包住尖端，用左手握住移液管身，有手將移液管壓緊．在桌面上向前搓轉(zhuǎn)，以螺旋式包扎起來。上端剩余紙條，折疊打結，準備滅菌。（二）液體及固體培養(yǎng)基的配制過程1．液體培養(yǎng)基配制（1）稱量（假定配制1000ml培養(yǎng)基）按培養(yǎng)基配方比例依次準確地稱取牛肉膏、g蛋白胨、放入燒杯（或1000ml刻度搪瓷杯）中．牛肉膏常用玻棒挑取，放在小燒杯或表面皿中稱量，用熱水溶化后倒入燒杯。（2）溶化在上述燒杯中先加入少于所需要的水量（如約700ml），用玻棒攪勻，然后，在石棉網(wǎng)上加熱使其溶解，將藥品完全溶解后，補充水到所需的總體積（1000ml）；如果配制固體培養(yǎng)基時，將稱好的瓊脂放人已溶的藥品中，再加熱溶化，最后補足所損失的水分。（3）調(diào)pH調(diào)pH：一般用pH試紙測定培養(yǎng)基的pH。用剪刀剪出一小段pH試紙，然后用鑷子夾取此段pH試紙，在培養(yǎng)基中蘸一下，觀看其pH范圍，如培養(yǎng)基偏酸或偏堿時，可用1mol/LNaoH或1mol/LHCl溶液進行調(diào)節(jié)。調(diào)節(jié)pH時，應逐滴加入NaOH或HCI溶液，防止局部過酸或過堿，破壞培養(yǎng)基中成分。邊加邊攪拌，并不時用pH試紙測試，直至pH達。反之，用1mol／LHCl進行調(diào)節(jié)。2．固體培養(yǎng)基的配制配制固體培養(yǎng)基時，應將已配好的液體培養(yǎng)基加熱煮沸，再將稱好的瓊脂~2％)加入，并用玻棒不斷攪拌，以免糊底燒焦。繼續(xù)加熱至瓊脂全部融化，最后補足因蒸發(fā)而失去水分。（三）培養(yǎng)基的分裝根據(jù)不同需要，可將已配好培養(yǎng)基分裝入試管或三角瓶內(nèi)，分裝時注意不要使培養(yǎng)基沾污管口或瓶口，造成污染。如操作不小心，培養(yǎng)基沾污管口或瓶口時，可用鑷子夾一小塊脫脂棉，擦去管口或瓶口的培養(yǎng)基，并將脫脂棉棄去。1．試管的分裝取一個玻璃漏斗，裝在鐵架上，漏斗下連一根橡皮管，橡皮管下端再與另一玻璃管相接，橡皮管的中部加一彈簧夾。分裝時，用左手拿住空試管中部，并將漏斗下的玻璃管嘴插入試管內(nèi)，以右手拇指及食指開放彈簧夾，中指及無名指夾佐玻璃管嘴，使培養(yǎng)基直接流入試管內(nèi)。裝入試管培養(yǎng)基的量視試管大小及需要而定，若所用試管大小為15×150mm時，液體培養(yǎng)基可分裝至試管高度1／4左有為宜；如分裝固體或半固體培養(yǎng)基時，在瓊脂完全融化后，應趁熱分裝于試管中。用于制作斜面的固體培養(yǎng)基的分裝量為管高1／5(約3—4mI)，半固體培養(yǎng)基分裝量為管高的1／3為宜。2．三角瓶的分裝用于振蕩培養(yǎng)微生物時，可在250m1用于制作平板培養(yǎng)基用時，可在250m1三角瓶中加入150ml粉(按2％計算)，滅菌時瓶中瓊脂粉同時被融化。（四）棉塞的制作及試管、三角瓶的包扎為了培養(yǎng)好氣性微生物，需提供優(yōu)良通氣條件，同時為防止雜菌污染，則必須對通入試管或三角瓶內(nèi)空氣預先進行過濾除菌。通常方法是在試管及三角瓶口加上棉花塞等。1．試管棉塞的制作制棉塞時，應選用大小、厚薄適中的普通棉花一塊，鋪展于左手拇指和食指扣成的團孔上，用右手食指將棉花從中央壓入團孔中制成棉塞．然后直接壓入試管或三角瓶口。也可借用玻璃棒塞入，也可用折疊卷塞法制作棉塞。制作的棉塞應緊貼管壁，不留縫隙，以防外界微生物沿縫隙侵入，棉塞不宜過緊或過松，塞好后以手提棉塞，試管不下落為準。棉塞的2／3在試管內(nèi)，1／3在試管外。目前也有采用硅膠塞代替棉塞直接蓋在試管口上。將裝好培養(yǎng)基并塞好棉塞或硅膠塞的試管捆成一捆，外面包上一層牛皮紙。用記號筆注明培養(yǎng)基名稱及配制日期，滅菌待用。2．三角瓶棉塞制作通常在棉塞外包上一層紗布，再塞在瓶口上。有時為了進行液體振蕩培養(yǎng)加大通氣量，則可用8層紗布代替棉塞包在瓶口上，目前也有采用硅膠塞直接蓋在瓶口上。在裝好培養(yǎng)基并塞好棉塞或包扎八層紗布或蓋好硅膠塞的三角瓶口上，再包上一層牛皮紙并用線繩捆好，滅菌待用。（五）培養(yǎng)基的滅菌將上述培養(yǎng)基以，l21℃，20min高壓蒸氣滅菌。滅菌過程：1.加水：首先將內(nèi)層鍋取出，再向外層鍋內(nèi)加入適量的水，使水面沒過加熱蛇管，與三角擱架相平為宜。切勿忘記檢查水位，加水量過少，滅菌鍋會發(fā)生燒干引起炸裂事故。2.裝料：放回內(nèi)層鍋，并裝入待滅菌的物品。注意不要裝得太擠，以免妨礙蒸汽流通而影響滅菌效果。裝有培養(yǎng)基的容器放置時要防止液體溢出，三角瓶與試管口端均不要與桶壁接觸，以免冷凝水淋濕包扎的紙而透入棉塞。3.加蓋：將蓋上與排氣孔相連的排氣軟管插入內(nèi)層鍋的排氣槽內(nèi)，擺正鍋蓋，對齊螺口，然后以對稱方式同時旋緊相對的兩個螺栓，使螺栓松緊一致，勿使漏氣，并打開排氣閥。4.排氣：打開電源加熱滅菌鍋，將水煮沸，使鍋內(nèi)的冷空氣和水蒸汽一起從排氣孔中排出。一般認為當排出的氣流很強并有噓聲時，表明鍋內(nèi)的空氣已排盡，沸騰后約需5分鐘。5.升壓：冷空氣完全排盡后，關閉排氣閥，繼續(xù)加熱，鍋內(nèi)壓力開始上升。6.保壓：當壓力表指針達到所需壓力時，控制電源，開始計時并維持壓力至所需的時間。如本實驗中采用，℃，20分鐘滅菌。滅菌的主要因素是溫度而不是壓力，因此鍋內(nèi)的冷空氣必須完全排盡后，才能關閉排氣閥，維持所需壓力。7.降壓：達到滅菌所需的時間后，切斷電源，讓滅菌鍋溫度自然下降，當壓力表的壓力降至“0”后，方可打開排氣閥，排盡余下的蒸汽，旋松螺栓，打開鍋蓋，取出滅菌物品，倒掉鍋內(nèi)剩水。壓力一定要降到“0”后，才能打開排氣閥，開蓋取物。否則就會因鍋內(nèi)壓力突然下降，使容器內(nèi)的培養(yǎng)基或試劑由于內(nèi)外壓力不平衡而沖出容器口，造成瓶口被污染，甚至灼傷操作者。（六）斜面和平板的制作1．斜面的制作將已滅菌裝有瓊脂培養(yǎng)基的試管，趁熱置于木棒或玻棒上，使成適當斜度，凝固后即成斜面。斜面長度不超過試管長度l／2為宜。如制作半團體或固體深層培養(yǎng)基時，滅菌后則應垂直放置至凝固。2．平板的制作將裝在三角瓶或試管中已滅菌的瓊脂培養(yǎng)基融化后，待冷至50℃左右傾入無菌培養(yǎng)皿中。溫度過高時，皿蓋上的冷凝水太多；溫度低于50℃，培養(yǎng)基易于凝固而無法制作平板。平板的制作應在火旁進行，左手拿培養(yǎng)皿，右手拿三角瓶的底部或試管，左手同時用小指和手掌將棉塞打開，灼燒瓶口，用左手大拇指將培養(yǎng)皿蓋打開一縫，至瓶口正好伸入，傾入10~15mL培養(yǎng)基，迅速蓋好皿蓋，置于桌上，輕輕旋轉(zhuǎn)平皿，使培養(yǎng)基均勻分布于整個平皿中，冷凝后即成平板。（七）培養(yǎng)基的滅菌檢查滅菌后的培養(yǎng)基，一般需進行無菌檢查。最好取出1~2管(瓶)，置于37℃溫箱中培養(yǎng)1~2天，確定無菌后方可使用。篇二：實驗報告XX細菌總數(shù)大學活動場所室內(nèi)環(huán)境細菌密度測定實驗成員：羅小青、施俊譯、上官玉虎、葉紫宇、徐丹丹1、目的：了解在校學生主要活動場所室內(nèi)環(huán)境細菌密度情況，提高學生對自己環(huán)境衛(wèi)生意識，同時鍛煉學生的實際操作能力。2、方法：該測定有兩種方法，其一是撞擊法，它是通過抽氣動力作用，使空氣通過狹縫或小孔而產(chǎn)生高速氣流，從而使懸浮在空氣中的帶菌粒子撞擊到培養(yǎng)瓊脂平板上，經(jīng)37℃、48h培養(yǎng)后，計算每立方米空氣中所含的細菌菌落數(shù)的采樣測定方法。另一種方法是自然沉降法，即采樣法，它是在直徑9cm的營養(yǎng)瓊脂平板在采樣點暴露5min，或更多暴露時間進行分析，再經(jīng)37℃、48h培養(yǎng)后，計算生長的細菌菌落數(shù)的采集測定方法。由于設備的不完全，該細菌測定方法采用采樣法。3、儀器和設備高壓蒸汽滅菌器恒溫培養(yǎng)箱個培養(yǎng)皿（直徑90mm）錐形瓶試紙酒精燈4培養(yǎng)基營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基成分：蛋白胨10g牛肉膏3g氯化鈉5g瓊脂15~20g蒸餾水1000mL制法：將上述各成分混合，加以溶解，校正PH至，過濾分裝，在121℃20min高壓滅菌，用自然沉降法測定時，傾注15mL于培養(yǎng)皿中，制成營養(yǎng)瓊脂平板。5操作步驟設置采樣點時，應根據(jù)現(xiàn)場的大小，選擇有代表性的位置作為空氣細菌檢測的采樣點，通常設置5個采樣點，高度為~。采樣點應遠離墻壁1m以上，并避開空調(diào)、門窗等空氣流通處，本實驗選擇了食堂、宿舍作為實驗場所，其中采樣宿舍位于食堂旁邊的六樓，也是我們隊員男生生活的地方（四人間），通過我們生活場所來反映我們學校學生宿舍的環(huán)境情況，其采樣布置點為陽臺、床鋪旁、書桌、門口和衛(wèi)生間。采樣食堂位于人比較密集的地方，以更準確的反映食堂衛(wèi)生環(huán)境，其采樣布置為收餐臺、臺子、門口、洗碗池和窗戶。將營養(yǎng)瓊脂平板置于采樣點處，打開皿蓋，暴露5min蓋上皿蓋，翻轉(zhuǎn)平板，置36℃±1℃恒溫箱中，培養(yǎng)48h計數(shù)每塊平板上生長的菌落數(shù)，求出全部采樣點的平均菌落數(shù)，以每平皿菌落數(shù)（CFU/皿）報告結果。實驗主要步驟如下圖所示：6結果分析菌落生長情況如圖：結果計算與分析：宿舍對應的數(shù)據(jù)如下：食堂對應的數(shù)據(jù)如下：數(shù)據(jù)分析：我校某宿舍平均菌落數(shù)為(CFU/皿)，依據(jù)《室內(nèi)空氣質(zhì)量標準》GB/T18883-2002衛(wèi)生標準：按奧梅梁斯基氏計算法：在面積為100cm2的培養(yǎng)基表面，5min沉降下來的細菌數(shù)相當于10L空氣中所含的細菌數(shù)。100cm2培養(yǎng)基的菌落數(shù)=每塊平板數(shù)÷πr2×100=(CFU)，1m細菌數(shù)=10*1000=8069(CFU)，遠大于室內(nèi)標準，說明了該宿舍空氣質(zhì)量3比較差，所以在我們生活當中應常開窗，保持空氣對流，同時要定時打掃衛(wèi)生，使我們生活得更加舒適。對于食堂而言，我們可以看到上圖細菌生長情況，有的無法計數(shù)（太多），這也說明了該場所的細菌比較多，依據(jù)《飯館、餐廳衛(wèi)生標準》GB16153-1996衛(wèi)生標準：遠超過標準，食堂其實是我們在學校一日三餐、人流通密度大的重要公共場所，對我們身心健康影響重大，為提高食堂空氣質(zhì)量，應對其場所常開窗（方便而重要的方法），保持空氣對流，吃飯時應養(yǎng)成洗手的好習慣等等。參考文獻：1、環(huán)境工程微生物學（周群英、王士芬編著）2、公共場所空氣中細菌總數(shù)的測定3、《室內(nèi)空氣質(zhì)量標準》GB/T、《飯館、餐廳衛(wèi)生標準》GB16153-19965、劉國強,周婭.校園空氣污染微生物的檢測與評價[J].微生物學雜志,2004(3):56-58.篇三：浙大微生物大實驗報告摘要：本實驗以土壤中的微生物作為原材料，根據(jù)微生物各自的生長特點，配制不同成分的微生物培養(yǎng)基。將微生物培養(yǎng)物或含有微生物的樣品在無菌條件下移植到培養(yǎng)基上培養(yǎng)，在分離出相應微生物后，對其進行進一步的純化，然后觀察其形態(tài)特征，并通過微生物的生理生化反應對其種類進行鑒定，最后研究環(huán)境條件對微生物生長的影響。關鍵字：培養(yǎng)基，分離，純化，鑒定，環(huán)境條件一、實驗材料1、分離細菌、真菌、放線菌的材料：牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂、馬鈴薯、蔗糖；可溶性淀粉、K2HPO4、KNO3、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O等。新鮮土壤；培養(yǎng)基：滅菌的牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基、淀粉瓊脂培養(yǎng)基、馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基（10mL裝）；試劑：5000U/mL鏈霉素液、％重鉛酸鉀液。2、細菌、真菌、放線菌純化與鑒定的材料：菌種：大腸桿菌、枯草桿菌、熒光假單胞菌、金黃色葡萄球菌，前實驗分離的未知菌；培養(yǎng)基：淀粉培養(yǎng)基、硫化氫實驗培養(yǎng)基、石蕊牛乳培養(yǎng)基、油脂培養(yǎng)基；試劑：碘液。菌種：枯草桿菌斜面；靈桿菌菌液；黑曲霉斜面。培養(yǎng)基采用：牛肉膏蛋白胨斜面培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基（10mL）、馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基（10mL）、淀粉瓊脂培養(yǎng)基（10mL）；供試藥劑：％碘酒，75％酒精，％HgCl2，5％石炭酸。二、實驗步驟1、分離細菌、真菌、放線菌的步驟（一）、培養(yǎng)基配制l.培養(yǎng)基配制的一般方法和步驟（1）稱量：按照培養(yǎng)基配方，正確稱取各種原料放于搪瓷杯中。（2）溶化：在搪瓷杯中加入所需水量（根據(jù)實驗需要加入蒸餾水或自來水），用玻棒攪勻，加熱溶解。（3）調(diào)pH值（調(diào)pH也可以在加瓊脂后再調(diào)），用1NNaOH或1NHCl調(diào)pH，用pH試紙對照。（4）加瓊脂溶化，在瓊脂溶化過程中，需不斷攪拌，并控制火力不要使培養(yǎng)基溢出或燒焦，待完全溶化后，補足所失水分，一般數(shù)量少，時間短不必補水。（5）分裝：在漏斗架上分裝。根據(jù)不同的需要進行分裝，一般制斜面的裝置為管高的1／5特別注意不要使培養(yǎng)基粘污在管（瓶）口上以免浸濕棉塞，引起污染。（6）包扎成捆、掛上標簽。培養(yǎng)基分裝好后，塞上棉塞，用防水紙包扎成捆掛上所配培養(yǎng)基名稱的標簽。（7）滅菌備用。滅菌后如需制成斜面的，應在下磅后取出，擺成斜面（見圖6-1）。培養(yǎng)基經(jīng)滅菌后，必須放在37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，如確無菌生長、方可使用。2．三種培養(yǎng)基的配方及具體配制方法（1）.牛肉膏蛋白陳瓊脂培養(yǎng)基（用于分離和培養(yǎng)細菌，是一種天然培養(yǎng)基）。配方：牛肉膏3g瓊脂20g滅菌／cm2，25~30min蛋白胨5g自來水1000mL氯化鈉3g~本實驗將原配方配成各種濃縮液。各種濃度如下：30％牛肉膏、50％蛋白胨、30％氯化鈉。以配制200mL培養(yǎng)基為例。吸取30％牛肉膏2mL；50％蛋白胨2mL；30％氯化鈉2mL；加入有刻度的搪瓷燒杯中，然后用自來水補足到200mL。用玻棒攪勻，在電爐上稍加熱，調(diào)pH至，加瓊脂4g，加熱熔化，用玻棒不斷攪拌，至瓊脂完全溶解為止，趁熱在漏斗架上裝試管，（見圖6－2）。裝帶有棉塞的無菌試管，裝置1／5的試管高度共12支，作斜面培養(yǎng)基、用鋁殼試管帽的里裝10mL。約試管高度的1／2以上，用作分離時倒平板用。分裝完畢，以12支為一捆，用防水紙包扎成捆（圖6-3），掛上標簽，滅菌備用。（2）.馬鈴薯（或豆芽汁）蔗糖（或葡萄糖）瓊脂培養(yǎng)基（用于分離和培養(yǎng)真菌之用，是一種半合成培養(yǎng)基）。配方：去皮馬鈴薯（或鮮豆芽）200g蔗糖（或葡萄糖）20g瓊脂20gpH天然自來水1000mL滅菌（含蔗糖）cm220min（含葡萄糖）cm230min制備方法配制200mL培養(yǎng)基為例取上皮馬鈴薯40g，切成小塊、放入無刻度的搪瓷杯中，加水200mL，置電爐上加熱煮沸10min，用4層紗布過濾至具刻度的搪瓷杯中，濾液加水補足至200mL。然后加蔗糖4g，加瓊脂4g，加熱熔化并用玻棒不斷攪拌直至瓊脂完全溶化分裝試管，下面一系例步驟同配細菌培養(yǎng)基相同。（3）.淀粉瓊脂培養(yǎng)基（高氏一號Gause’I），用干分離和培養(yǎng)放線菌，是一種合成培養(yǎng)基。配方：可溶性淀粉MgSO4·7H2ONaClK2HPO4FeSO4·7H2O瓊脂20g自來水1000mL滅菌cm230min制備方法配制（以配制200mL）培養(yǎng)基為例：吸取配方液：1％KNO320mL；1％K2HPO410mL；1％MgSO4·7H2O10mL；l％NaCl10mL；1％FeSO4．加水補足至200mL，置電爐上加熱.用另一只搪瓷杯稱取可溶性淀粉4g，從200mL中取出少量加入淀粉中，用玻棒調(diào)成糊狀，待液體沸騰后將淀粉糊洗入培養(yǎng)液中，攪勻，調(diào)pH至，加瓊脂4g，加熱至瓊脂完全溶化為止，趁熱分裝試管，以下一系例步驟同于配制細菌培養(yǎng)基的操作方法。3.無菌水的制備無菌水，為下一次微生物分離實驗中所需用而準備。100mL三角瓶（裝有玻璃珠），裝自來水45mL，試管中裝9mL自來水，塞上棉塞，包扎滅菌備用。三角瓶和試管須預先塞好棉塞，并經(jīng)干熱滅菌。（二）分離培養(yǎng)微生物常用器皿的準備1.清洗一些玻璃儀器：如三角瓶試管，培養(yǎng)皿、吸管等。2.棉塞的制作：裝培養(yǎng)基和分離培養(yǎng)需用的部分玻璃器皿，需加棉花塞梯塞的作用為過濾空氣，使試管內(nèi)外空氣可以流通，但外界空氣中雜菌不能進入，避免污染、試管、三角瓶都要做棉塞。吸管上部也要塞入棉花，在管口約1-2mm處，用解剖針塞入少許棉花，（約長）以防止細菌吸入口中，井避免將口中細菌吹入管內(nèi)。棉花要塞得松緊適宜。吹時以能通氣但不使棉花塞下滑為準。3.包裝培養(yǎng)皿和吸管等。為了使培養(yǎng)皿、吸管、三角玻棒等洗凈，干熱滅菌后，不讓表面暴露，以保證無菌狀態(tài)，為此干熱滅菌前先用舊報紙包裝妥當（見示范），每組同學包培養(yǎng)皿6只（一包）。吸管的包裝，將塞好棉花的吸管尖端，放在4~5cm寬的長紙條的一端，約成45°角左右，折疊紙條，包住吸管尖部，用左手握住移液管身，右手將移液管壓緊，在桌面上向前搓轉(zhuǎn)，以螺旋式包扎起來。上端剩余紙條，折疊打結，準備滅菌。（三）微生物的分離1.用稀釋平板法（又名混菌法）從土壤中分離真菌。（1）制備土壤稀釋液無菌操作過程見教師示范。A.取土壤5g，放入裝有45mL無菌水的三角瓶中，振蕩10min，即為稀釋10-1的土壤懸液。B.另取裝有9mL無菌水試管5支，用記號筆編上10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。取已稀釋成10-1土壤液，振蕩后靜止，用無菌吸管吸取1mL土壤懸液加入10’的無菌水的試管中，并在試管內(nèi)輕輕反復吹吸數(shù)次，使之充分混勻，即成10-2土壤稀釋液。同法由10-2的試管中吸取1mL稀釋液加入編號為10-3的無菌水試管中，混勻后即為10-3土壤稀釋液，依次連續(xù)稀釋至10-4、10-5、10-6土壤稀釋液。在土壤稀釋過程中，以用一支吸管由濃到稀，稀釋到底，稀釋方法見圖7-1。圖7－1檢樣的稀釋方法（2）每組取無菌培養(yǎng)皿2付，即每個同學做一只。學號單號學生用10-5稀釋度液，雙號學生用10-4稀釋度液。①先在無菌培養(yǎng)皿底部貼上標簽，注明分離菌名、稀釋度、組別、班級。②取另一吸管，以無菌操作法吸取10-4或10-5土壤稀釋液1mL，加在無菌培養(yǎng)皿的一邊，在皿的另一邊加入2滴5000U/mL的鏈霉素液。此時嚴防兩液相混。③取已融化在水浴鍋中保溫50oC左右的馬鈴薯蔗糖瓊脂培養(yǎng)基2管（10mL裝，一管倒一皿），以不燙手為準，倒入上述培養(yǎng)皿中（見圖7-2），輕輕轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿，使菌液、鏈霉素液、培養(yǎng)基充分混勻鋪平皿底，放在平坦的桌面上，凝固后，翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)血，置28～30oC恒溫培養(yǎng)養(yǎng)5~6d。觀察真菌菌落形態(tài)以及計數(shù)菌落數(shù)。并計算出每1g土壤中真菌的數(shù)量。即用某一培養(yǎng)皿內(nèi)真菌的菌落數(shù)乘以該培養(yǎng)皿接種液的稀釋倍數(shù)即得。（3）挑取單個菌落接種到外面培養(yǎng)基上作純化和性能測定，若不純，需要繼續(xù)分離。2.用平板涂抹法分離土壤中的放線菌（土壤稀釋液制備同上）。①每組取無菌培養(yǎng)皿2付（每個同學各做一只）。各在培養(yǎng)皿底部貼上標簽，注明分離菌名、稀釋度、組別、班級。②以無菌操作法先在培養(yǎng)皿中加入％重鉛酸鉀溶液2滴，取已融化的淀粉瓊脂培養(yǎng)基2管，分別倒入2付培養(yǎng)皿中，輕輕轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿，使培養(yǎng)基與重鉛酸鉀充分混勻，鋪平，制成平板。③待平板凝固后，另取一支吸管吸取10-3（單學號學生）或10-4（雙學號學生）稀釋液土壤稀釋液放在平板上