化學(xué)藥品雜質(zhì)的控制與案例分析

化學(xué)藥品雜質(zhì)的控制與案例分析第1頁/共83頁雜質(zhì)的定義及分類定義：任何影響藥品純度的物質(zhì)。分類：一、按化學(xué)特性分類：有機雜質(zhì)、無機雜質(zhì)、有機揮發(fā)性物質(zhì)。二、按來源分類：有關(guān)物質(zhì)（反應(yīng)前體、中間體、副產(chǎn)物、降解產(chǎn)物等）、其它雜質(zhì)、外來物質(zhì)。三、按結(jié)構(gòu)分類：其他甾體、其他生物堿、幾何異構(gòu)體、光學(xué)異構(gòu)體和聚合物。第2頁/共83頁藥典中的分類方式1

有機物質(zhì)有關(guān)物質(zhì)－起始原料－中間體、副產(chǎn)物－降解產(chǎn)物－聚合物－異構(gòu)體多晶型雜質(zhì)殘留溶劑3

有機揮發(fā)性化合物2無機雜質(zhì)－無機鹽陰離子陽離子－重金屬催化劑

－過濾介質(zhì)、活性炭第3頁/共83頁雜質(zhì)的檢測方法物理常數(shù)測定法旋光度-檢查具有光學(xué)活性的雜質(zhì)紫外分光光度法雜質(zhì)吸光度-在特定波長具有紫外吸收的雜質(zhì)容量滴定法游離脂肪酸、過氧化物、還原糖重量法酸中不溶物、水中可溶物比色比濁法游離淀粉、碘化物、鐵鹽、氯化物、硫酸鹽等第4頁/共83頁雜質(zhì)的檢測方法原子吸收分光光度法：檢查金屬雜質(zhì)毛細管電泳法：抑肽酶中檢查去丙氨酸-去甘氨酸-抑肽酶和去丙氨酸-抑肽酶兩個特定雜質(zhì)色譜法：液相色譜法，檢查有機雜質(zhì)的主要方法薄層色譜法，作為液相色譜法的補充氣相色譜法：檢查揮發(fā)性雜質(zhì)熱分析法：檢查不同晶型的雜質(zhì)（影響生物利用度和穩(wěn)定性）拉曼光譜法、紅外光譜法、X-射線粉末衍射生物檢定法、酶聯(lián)免疫試劑盒（抗生素殘留量）

第5頁/共83頁殘留溶劑控制標準起草過程中，應(yīng)針對所用到的有機溶劑進行檢查建議采用了頂空進樣方式和程序升溫梯度洗脫的方法，應(yīng)注意供試品溶液的配制，要求供試品在溶劑中溶解。方法學(xué)試驗應(yīng)進行回收試驗，確認是否有基質(zhì)干擾。采用標準加入法，該方法可減少基質(zhì)干擾，提高方法的準確度。關(guān)于校正相對保留時間（RART）的應(yīng)用。第6頁/共83頁殘留溶劑檢測的常見問題：共出峰干擾

熱降解干擾

基質(zhì)效應(yīng)的影響

藥品溶解性的影響

溶劑介質(zhì)的影響

第7頁/共83頁共出峰干擾共出峰：在相同的色譜條件下具有相同保留值的組分不一定是同一物質(zhì)。不同的物質(zhì)在某一色譜條件下具有相同保留值的現(xiàn)象，被稱為共出峰現(xiàn)象。不同物質(zhì)在性能（極性或氫鍵形成能力等）不同的色譜柱中具有完全相同保留行為的幾率很小。因此采用不同極性的色譜柱分別測定，可以排除共出峰的干擾。第8頁/共83頁吡柔比星中正己烷共出峰的排除色譜柱樣品批號PS-117PS-118PS-119DB-624柱5.449%6.209%4.794%SPB-1柱0.569%0.631%0.579%第9頁/共83頁熱降解干擾如果藥品對熱不穩(wěn)定，則可能會在直接進樣或頂空加熱過程中發(fā)生熱降解，如果降解產(chǎn)物恰好與待測的有機溶劑共出鋒，或恰好就是某種有機溶劑，則會導(dǎo)致把降解產(chǎn)物當(dāng)作殘留溶劑檢測，得出錯誤結(jié)果。第10頁/共83頁熱降解原因分子結(jié)構(gòu)中有烷氧基的藥品可能熱解產(chǎn)生相應(yīng)的醇。第11頁/共83頁排除干擾的辦法改變頂空溫度可以確定頂空條件下樣品是否能產(chǎn)生熱降解干擾物。也可以通過測定已知不含該溶劑的對照樣品來加以判斷。頂空溫度頭孢西丁鈉頭孢美唑氟氧頭孢利福平70℃21.7815.526.122.7120℃1100.451309.42667.4965.2第12頁/共83頁基質(zhì)效應(yīng)的影響和排出基質(zhì)效應(yīng)－－頂空分析時，因?qū)φ掌啡芤汉凸┰嚻啡芤旱慕M成不同，使得待測揮發(fā)性組分在氣液兩相間的分配系數(shù)不同引起的定量誤差。標準加入法可以有效地排除基質(zhì)效應(yīng)的影響；當(dāng)標準加入法結(jié)果與內(nèi)標法結(jié)果系統(tǒng)偏差約10%（通常偏低）時，可以認為方法存在明顯的基質(zhì)效應(yīng)。第13頁/共83頁內(nèi)標法與標準加入法測定結(jié)果的比較藥品名稱批號或箱號殘留溶劑內(nèi)標法標準加入法頭孢氨芐211848甲醇0.585%0.569%211850甲醇0.445%0.437%211854甲醇0.964%0.972%吡柔比星PS-117正己烷0.569%0.496%PS-118正己烷0.651%0.602%PS-119正己烷0.579%0.509%頭孢哌酮鈉75835031丙酮1.799%1.780%第14頁/共83頁藥品溶解性的影響當(dāng)樣品在溶解介質(zhì)中未溶解時，測定結(jié)果通常偏低且精密度差。如待測溶劑為水溶性不好的溶劑，且選擇水為溶媒時，可先用少量乙醇或甲醇溶解待測溶劑后再用水稀釋的方法配制對照品溶液。第15頁/共83頁藥品溶劑介質(zhì)藥品的溶解性殘留溶劑殘留量（RSD(n=5)）頭孢氨芐水微溶甲醇0.385%（4.4%）0.5mol/LNaOH溶解甲醇0.427%（1.9%）頭孢泊肟酯水不溶丙酮0.0016%（73.0%）DMF溶解丙酮0.0035%（4.1%）第16頁/共83頁供試品溶液的制備對水溶性藥品，采用水為溶劑；當(dāng)藥品不溶于水，但可溶解于一定濃度的酸或堿溶液中時，可采用酸或堿溶液作為溶劑；對于非水溶性藥物，可采用N,N-二甲基甲酰胺（DMF）、DMSO等為溶劑。第17頁/共83頁溶液的配制應(yīng)注意問題：

1、為了避免殘留溶劑揮發(fā)，不可用超聲或加熱方式溶解樣品。如果采用頂空進樣，樣品置頂空瓶并封蓋之后可以超聲或加熱溶解樣品。2、大顆粒樣品不可以研磨取樣，只能取原態(tài)樣品（或冷凍粉碎）。

第18頁/共83頁溶解介質(zhì)的影響當(dāng)藥品在某種溶解介質(zhì)中溶解后，待測溶劑或內(nèi)標可能與藥品產(chǎn)生較強的相互作用，以至采用標準加入法也無法排除對測定結(jié)果的影響。第19頁/共83頁頭孢呋辛酯在不同溶劑介質(zhì)中對

正己烷殘留量測定的影響批號DMF1mol/LNaOH水溶液內(nèi)標法標準加入法內(nèi)標法標準加入法21360170.0023%0.0023%0.081%0.034%21360180.0036%0.0038%0.139%0.067%21360190.0036%0.0040%0.152%0.058%第20頁/共83頁以1mol/LNaOH溶液為溶劑介質(zhì)時，盡管對照品溶液與供試品溶液中內(nèi)標丁酮的濃度相同，但是其峰面積卻相差一倍；而溶劑介質(zhì)為DMF時，相同濃度的丁酮內(nèi)標在對照品溶液和供試品溶液中的峰面積幾乎相同。第21頁/共83頁以1mol/LNaOH溶液為溶劑介質(zhì)時，利用內(nèi)標法得到數(shù)據(jù)與標準加入法得到數(shù)據(jù)，計算對照品（正己烷）的回收率，發(fā)現(xiàn)對照品的回收率約為50%，超出方法可接受的范圍（80-120%）。第22頁/共83頁藥物研發(fā)中殘留溶劑研究存在問題：表述不全面或不準確。對色譜圖中出現(xiàn)的未知峰未進行研究。試驗條件未進行考察。方法學(xué)驗證不全面。第23頁/共83頁

無機雜質(zhì)的控制無機鹽來源：來自工藝、原料或降解產(chǎn)物主要控制項目有：氯化物、硫酸鹽、硫化物、氰化物、磷酸鹽、溴化物、碘化物、重金屬等第24頁/共83頁CompanyLogo供試品溶液的配制標準溶液的最佳顯色量限度的確定

無機雜質(zhì)的控制132第25頁/共83頁無機雜質(zhì)限度試驗計算方法主要參數(shù)：限度、取樣量（W）、對照溶液濃度（C）和對照溶液用量（V）。公式C（g/ml）×V（ml）限度=———————

×100%

W（g）第26頁/共83頁有關(guān)物質(zhì)控制有關(guān)物質(zhì)——要求概述所有品種都應(yīng)進行有關(guān)物質(zhì)的考核對雜質(zhì)進行定性研究，確定結(jié)構(gòu)，從而為實現(xiàn)對已知雜質(zhì)和未知雜質(zhì)的區(qū)別控制，同時也為科學(xué)制訂檢查方法的系統(tǒng)適用性要求提供基礎(chǔ)保障。優(yōu)化方法（增加有效的系統(tǒng)適用性試驗要求）限度合理第27頁/共83頁有關(guān)物質(zhì)的來源－起始原料－中間體、副產(chǎn)物－降解產(chǎn)物－聚合物－異構(gòu)體多晶型雜質(zhì)第28頁/共83頁有關(guān)物質(zhì)控制有關(guān)物質(zhì)——關(guān)于分離及檢測方法ICGCCEPC一般采用色譜法TLCLC（反相、正相、凝膠）第29頁/共83頁有關(guān)物質(zhì)控制有關(guān)物質(zhì)——關(guān)于分離及檢測方法色譜柱原則：方法驗證時進行粗放度試驗（三根以上色譜柱），特殊填料應(yīng)在各論中予以注明，強調(diào)“或效能相當(dāng)”。大多為反相高效液相法，采用C18、C8、苯基等鍵合硅膠填料，以C18為最常用；目前C18色譜柱類型也很多，不同基質(zhì)、不同載碳量、不同封端處理方式、不同純度、不同粒徑、孔徑、柱長等，影響因素較多，方法研究時應(yīng)注意粗放度考察；第30頁/共83頁色譜柱的差異Minutes515253545Symmetry?C18Alconc.<10ppmTFUSP=1.9AmitriptylineNova-Pak?C18Alconc.=~375ppmTFUSP=6.4低金屬不純物的含量第31頁/共83頁有關(guān)物質(zhì)控制有關(guān)物質(zhì)——關(guān)于分離及檢測方法色譜柱也有采用分子排阻色譜法，有的采用親水改性硅膠；例：頭孢地嗪鈉有關(guān)物質(zhì)Ⅱ，以球狀蛋白色譜用親水硅膠（分子量適用范圍為1000～10000）為填充劑還有的采用離子色譜法，采用離子色譜填料。例：氯膦酸二鈉及注射劑，采用陰離子交換色譜柱（推薦使用IonPacAS11-HC，或效能相當(dāng)

）第32頁/共83頁例：離子色譜（氯膦酸二鈉）照離子色譜法試驗用陰離子交換色譜柱（推薦使用IonPacAS11-HC，或效能相當(dāng)），柱溫30℃以水為流動相A，以0.1mol/L氫氧化鉀溶液為流動相B，梯度洗脫，流速為1.2ml/min。檢測器為電導(dǎo)檢測器，檢測方式為抑制電導(dǎo)檢測。

氯膦酸二鈉原料藥的有關(guān)物質(zhì)與制劑的含量測定第33頁/共83頁有關(guān)物質(zhì)控制有關(guān)物質(zhì)——關(guān)于分離及檢測方法流動相在保證靈敏度的前提下，一般采用等度洗脫；必要時可采用梯度洗脫方式（如：多雜質(zhì)組分的分離，等度洗脫分離效果不佳；或雜質(zhì)性質(zhì)相差較大，等度洗脫時間過長，損失靈敏度）例：法莫替丁氯化鈉注射液流動相以揮發(fā)性流動相為好，一般情況下盡量不加離子對試劑。第34頁/共83頁法莫替丁氯化鈉注射液（有關(guān)物質(zhì)）原國家標準方法等度洗脫結(jié)果：23.6%2010年版方法梯度洗脫結(jié)果：28.3%第35頁/共83頁廠家批號2010年版原國家標準最大單個雜質(zhì)%有關(guān)物質(zhì)總量%最大單個雜質(zhì)%有關(guān)物質(zhì)總量%1060301A1.73.70.81.8060301B1.73.90.92.0060301C1.94.00.91.920604091.76.40.93.00604151.86.80.92.90604161.96.60.82.63060214012.57.70.71.7060214022.58.11.01.7060214032.57.60.91.74200603080110.228.39.023.620060218039.928.28.322.9200602180414.835.59.727.95060721010.62.4060817010.62.6060815010.62.7606030161.74.40.51.506030171.84.60.51.306030181.64.40.71.6第36頁/共83頁液相色譜常用檢測器光學(xué)檢測器：紫外、熒光、示差折光、蒸發(fā)光散射（通用型檢測器）電化學(xué)檢測器：極譜、庫侖、安培電學(xué)檢測器：電導(dǎo)、介電常數(shù)質(zhì)譜檢測器選擇性檢測器：靈敏度較高第37頁/共83頁2010版藥典二部采用檢測器情況檢測器類型品種個數(shù)紫外檢測器1333個蒸發(fā)光散射檢測器28個示差檢測器10個電導(dǎo)檢測器5個第38頁/共83頁有關(guān)物質(zhì)控制有關(guān)物質(zhì)——關(guān)于分離及檢測方法檢測器一般采用紫外檢測器：波長的選擇更加關(guān)注雜質(zhì)的最大吸收或最佳檢測參數(shù)，以提高雜質(zhì)的檢測靈敏度。難以兼顧各雜質(zhì)可選擇多波長檢測部分品種采用蒸發(fā)光檢測器：謹慎選用蒸發(fā)光檢測器，必要時對主要實驗參數(shù)進行描述。第39頁/共83頁有關(guān)物質(zhì)檢測波長的確定頭孢地嗪通過采用DAD檢測器在不同檢測波長檢測各種破壞試驗的雜質(zhì)變化情況，發(fā)現(xiàn)有的雜質(zhì)在215nm和262nm的紫外吸收不同。在215nm的吸收與主峰的吸收接近，因此檢測波長定在215nm。第40頁/共83頁破壞試驗不同波長的雜質(zhì)變化加速破壞條件(0.5mg/ml樣品溶液)有關(guān)物質(zhì)(%)波長215nm254nm262nm未破壞單個0.180.170.17總量0.360.330.30加0.1mol/L鹽酸1ml，放置7小時，加0.1mol/L氫氧化鈉1ml單個4.05.24.8總量10.67.46.5加0.1mol/L氫氧化鈉1ml，放置30分鐘，加0.1mol/L鹽酸1ml單個5.86.56.7總量10.38.48.24000lx光照24小時單個1.91.81.6總量4.83.52.9水浴30分鐘單個12.510.59.3總量37.126.724.1加30%過氧化氫1ml，放置24小時單個5.45.55.6總量8.18.08.2第41頁/共83頁頭孢地嗪的紫外吸收圖第42頁/共83頁雜質(zhì)之一的紫外吸收圖第43頁/共83頁蒸發(fā)光散射檢測器優(yōu)點適用于沒有特征紫外吸收或紫外吸收很弱的待測物，使用UV時靈敏度更低；無需衍生化而直接測定，避免了衍生帶來的誤差。可以應(yīng)用有強紫外吸收的試劑，如氯仿、丙酮等。適用于組分復(fù)雜樣品的分析，可以進行梯度洗脫，基線平穩(wěn)。通用型檢測器，只要待測物揮發(fā)性低于溶劑，即可適用。對不同物質(zhì)，ELSD相應(yīng)因子的變化比其它檢測器要小得多。對環(huán)境影響不靈敏，室溫下即可操作。沒有溶劑前緣峰，適用于保留時間短的物質(zhì)的檢測。與LC-MS的色譜條件一致，可直接進行方法轉(zhuǎn)換。第44頁/共83頁蒸發(fā)光散射檢測器影響ELSD響應(yīng)的因素載氣流速、霧化器設(shè)計與溫度、流動相的組成和流速等影響霧化過程。被分析物的濃度和體積質(zhì)量決定了進入光散射池的氣溶膠中的顆粒的直徑。被分析物的折射指數(shù)、光源發(fā)出的光的強度和波長、光電倍增管的位置等影響散射光強度。光電倍增管的靈敏度和入射光的強度決定了檢測的效率，反映為實驗者所觀測的峰面積。第45頁/共83頁蒸發(fā)光散射檢測器硫酸核糖霉素有關(guān)物質(zhì)色譜圖（蒸發(fā)管溫度：65℃，分流模式）總雜質(zhì)：5.26%第46頁/共83頁蒸發(fā)光散射檢測器硫酸核糖霉素有關(guān)物質(zhì)色譜圖（蒸發(fā)管溫度：110℃，不分流模式）總雜質(zhì)：4.18%第47頁/共83頁關(guān)于物料平衡的概念百度中的名詞解釋：系指在藥品生產(chǎn)過程中,同批產(chǎn)品的產(chǎn)量和數(shù)量所應(yīng)保持的平衡程度。如有顯著誤差,必須查明原因,確認無潛在質(zhì)量事故后,方可按正常事故處理,物料平衡是產(chǎn)品質(zhì)量的檢驗性指標。在液相檢測有關(guān)物質(zhì)時的物料平衡：應(yīng)該是指經(jīng)過各種破壞試驗后，主成分峰面積的減少與雜質(zhì)峰面積的增加之間的平衡，以確定檢測方法的準確性。第48頁/共83頁有關(guān)物質(zhì)控制有關(guān)物質(zhì)——關(guān)于系統(tǒng)適用性試驗要求：分離度2010年版加強了對分離度的要求，通過分離度的限制來保證分離的重現(xiàn)性。要求雜質(zhì)和主成分、雜質(zhì)之間的分離度均要得到良好保證。

（1）采用雜質(zhì)對照品溴丙胺太林：呫噸酸、呫噸酮、9－羥基溴丙胺太林與溴丙胺太林峰之間的分離度均應(yīng)符合要求；尼莫地平：雜質(zhì)I與主峰分離度應(yīng)大于3.0；枸櫞酸氯米芬有關(guān)物質(zhì)中要求其順反異構(gòu)體的分離度不得低于1.3。第49頁/共83頁呫噸酸9－羥基溴丙胺太林呫噸酮溴丙胺太林例：有關(guān)物質(zhì)（溴丙胺太林）第50頁/共83頁有關(guān)物質(zhì)控制有關(guān)物質(zhì)——關(guān)于系統(tǒng)適用性試驗要求：分離度

（2）采用混合對照品采用純度稍差但雜質(zhì)組分組成與比例相對穩(wěn)定的原料藥，可以較好地保證分離的重現(xiàn)性。關(guān)鍵在于對照品的提供。例：氯碘羥喹第51頁/共83頁有關(guān)物質(zhì)控制氯碘羥喹系統(tǒng)適用性試驗色譜圖有關(guān)物質(zhì)（關(guān)于系統(tǒng)適用性試驗要求：分離度）第52頁/共83頁有關(guān)物質(zhì)控制有關(guān)物質(zhì)——關(guān)于系統(tǒng)適用性試驗要求：分離度

（3）通過化學(xué)處理或其它降解方式產(chǎn)生雜質(zhì)（注意：反應(yīng)條件的優(yōu)化與重現(xiàn)）例1：鹽酸甲氯芬酯—通過水浴加熱，產(chǎn)生水解產(chǎn)物峰，該峰（相對保留時間0.6）與主峰分離度應(yīng)大于6.0；例2：戊酸雌二醇—稱取戊酸雌二醇對照品10mg，在160℃烘箱中加熱2小時后，用乙腈溶解并稀釋至25ml，搖勻，量取10μl注入液相色譜儀，戊酸雌二醇與降解產(chǎn)物（相對保留時間約為0.92）的分離度應(yīng)符合規(guī)定。第53頁/共83頁有關(guān)物質(zhì)控制戊酸雌二醇系統(tǒng)適用性試驗色譜圖（戊酸雌二醇tR=9.466，降解物tR=8.723，分離度Rs=1.5）有關(guān)物質(zhì)（關(guān)于系統(tǒng)適用性試驗要求：分離度）第54頁/共83頁有關(guān)物質(zhì)控制有關(guān)物質(zhì)——關(guān)于系統(tǒng)適用性試驗要求：分離度

（4）采用其它方法制備系統(tǒng)適用性試驗用樣品（如：采用結(jié)構(gòu)性質(zhì)相近的指標性物質(zhì)）例：茶堿，采用茶堿和可可堿配成溶液作為系統(tǒng)適用性試驗溶液，要求兩者的分離度大于2.0。第55頁/共83頁有關(guān)物質(zhì)控制有關(guān)物質(zhì)——關(guān)于系統(tǒng)適用性試驗要求：分離度

（5）采用相對保留時間定位（如果無法長期獲得該雜質(zhì)對照品時）應(yīng)特別注意色譜條件的耐用性考察如能在標準中列出主成分的保留時間、色譜柱尺寸，可增強此法的可操作性。在梯度洗脫的色譜系統(tǒng)中為保證方法的重現(xiàn)性，應(yīng)對主峰的出峰時間進行規(guī)定。例：己酮可可堿通過梯度洗脫，在系統(tǒng)適用性試驗中不僅規(guī)定相關(guān)雜質(zhì)的分離度，同時規(guī)定己酮可可堿的出峰時間為12分鐘。第56頁/共83頁有關(guān)物質(zhì)控制有關(guān)物質(zhì)——關(guān)于系統(tǒng)適用性試驗要求：拖尾因子對于在色譜系統(tǒng)中峰形非對稱的色譜峰規(guī)定該色譜峰的拖尾因子是很有意義的，以保證色譜峰不會因拖尾嚴重，而導(dǎo)致雜質(zhì)峰包裹在主峰中未被檢出。例：馬來酸依那普利的色譜條件中，除規(guī)定相關(guān)雜質(zhì)的分離度外，同時規(guī)定依那普利峰的拖尾因子不得過2.0。

第57頁/共83頁有關(guān)物質(zhì)控制有關(guān)物質(zhì)——關(guān)于系統(tǒng)適用性試驗要求：靈敏度試驗通過配制靈敏度試驗溶液（主成分濃度一般與報告限一致），并規(guī)定靈敏度試驗溶液中主成分的信噪比，可以更好地保證方法的重現(xiàn)性、靈敏度和測定結(jié)果的準確性。例：紫杉醇—對照溶液（2）（相當(dāng)于0.1%）主成份峰的信噪比應(yīng)不小于10。第58頁/共83頁有關(guān)物質(zhì)控制有關(guān)物質(zhì)——關(guān)于系統(tǒng)適用性試驗要求：報告限通過規(guī)定小于對照溶液主峰面積的一定量的色譜峰可忽略不計，可保證積分參數(shù)設(shè)置的合理性和一致性。例：甘露醇—供試品溶液的色譜圖中，任何小于對照溶液主峰面積的0.05倍的峰可忽略不計。例：十一酸睪酮—供試品溶液色譜圖中，任何小于對照溶液主峰面積0.02倍的色譜峰可忽略不計。第59頁/共83頁ICH新原料藥中的雜質(zhì)指導(dǎo)原則

ICH規(guī)定的雜質(zhì)報告限<鑒定限<論證限

第60頁/共83頁有關(guān)物質(zhì)控制有關(guān)物質(zhì)——關(guān)于定量方法（1）雜質(zhì)對照品外標法：采用雜質(zhì)對照品，按外標法計算，應(yīng)注意該雜質(zhì)線性范圍的考察。（注意：如引入了定量雜質(zhì)對照品，則該雜質(zhì)對照品的質(zhì)量應(yīng)滿足定量要求。）例：熒光素鈉—間苯二酚（雜質(zhì)Ⅰ）、鄰苯二甲酸（雜質(zhì)Ⅱ）例：對氨基水楊酸鈉—間氨基酚例：地塞米松—倍他米松第61頁/共83頁有關(guān)物質(zhì)控制有關(guān)物質(zhì)——關(guān)于定量方法（2）加校正因子的自身對照法：若僅在實驗過程中可提供相應(yīng)質(zhì)量和數(shù)量的雜質(zhì)對照品，而長期提供符合要求的雜質(zhì)對照品難度較大，則考察該雜質(zhì)相對于主成分的校正因子。（用于測定校正因子的雜質(zhì)對照品應(yīng)按定量對照品的要求進行標化），采用加校正因子（超出0.9-1.1）的主成分自身對照法進行檢查。

第62頁/共83頁相關(guān)術(shù)語的定義響應(yīng)因子（K）：當(dāng)檢測器輸出的信號與被測物質(zhì)的濃度呈線性響應(yīng)時，檢測器輸出的信號（A）與被測物質(zhì)的濃度（C）的比值即為響應(yīng)因子。

K=A/C校正因子(F):響應(yīng)因子的比值

F=K1/K2第63頁/共83頁有關(guān)物質(zhì)控制有關(guān)物質(zhì)——關(guān)于定量方法

（3）不加校正因子的主成分自身對照法：大多數(shù)品種采用了這種方法對雜質(zhì)進行控制。

（4）峰面積歸一化法：2010版化學(xué)藥品中很少使用，在保證0.1%或0.05%、甚至更低含量的雜質(zhì)能被檢出的情況下，主成分濃度就會很高，如采用該法應(yīng)考慮最小組分和最大組分的檢測響應(yīng)是否在主成分的線性范圍內(nèi)。謹慎使用。例1：大豆油（供注射用）—脂肪酸組成例2：甘油—二甘醇、乙二醇與其他雜質(zhì)第64頁/共83頁有關(guān)物質(zhì)控制有關(guān)物質(zhì)——氣相色譜法填充柱改毛細管柱，等溫洗脫改程序升溫，增加了系統(tǒng)適用性要求例1：壬苯醇醚（游離環(huán)氧乙烷）—分離度例2：甘油（二甘醇、乙二醇與其他雜質(zhì)）—分離度、重復(fù)進樣精密度第65頁/共83頁有關(guān)物質(zhì)控制有關(guān)物質(zhì)——薄層色譜法優(yōu)化方法，分離度試驗和靈敏度試驗例1：司坦唑醇—與美雄諾龍分離度例2：蘇氨酸（其他氨基酸）

供試品溶液（10mg/ml)對照溶液(0.05mg/ml)靈敏度測試溶液(0.02mg/ml)

混合對照品溶液（蘇氨酸和脯氨酸）—分離度規(guī)定：靈敏度測試溶液應(yīng)顯一個明顯斑點，混合對照品溶液中應(yīng)顯兩個清晰分離的斑點，供試品溶液除主斑點外所顯雜質(zhì)斑點的個數(shù)不得超過1個，其顏色與對照溶液的主斑點比較，不得更深（0.5%）。第66頁/共83頁有關(guān)物質(zhì)控制有關(guān)物質(zhì)——關(guān)于限度理論上講，應(yīng)該根據(jù)雜質(zhì)的毒性、用藥量等多種因素綜合考慮，但由于缺乏對雜質(zhì)的基礎(chǔ)性研究，故一般國內(nèi)產(chǎn)品質(zhì)量能達到歐美要求的，基本上與其保持一致。另結(jié)合樣品穩(wěn)定性考察情況綜合制定。

第67頁/共83頁原料藥有關(guān)物質(zhì)的分析方法方法學(xué)要求：1）專屬性：a、已知雜質(zhì)：可采用在供試品中加入雜質(zhì)對照品的方式。

b、未知雜質(zhì)：用含有雜質(zhì)的樣品進行測定，如粗品和母液。采用破壞方式檢測，如強光、酸、堿、高溫、高濕或氧化反應(yīng)等方式。必要時用二極管陣列或質(zhì)譜檢測，進行純度檢查。第68頁/共83頁原料藥有關(guān)物質(zhì)的分析方法2）檢測限和定量限：目視法和信噪比法。信噪比法：檢測限的信噪比應(yīng)大于3：1。定量限的信噪比應(yīng)大于10：1。3）線性范圍：一定要涵蓋全部測定濃度，特別是面積歸一化法。第69頁/共83頁原料藥有關(guān)物質(zhì)的分析方法4）準確性和重復(fù)性試驗：針對已知雜質(zhì)，采用雜質(zhì)對照品法。5）耐用性：應(yīng)考察因素：被測溶液的穩(wěn)定性、樣品提取次數(shù)、時間、流動相的組成和pH值、色譜柱、柱溫和流速等。第70頁/共83頁原料藥有關(guān)物質(zhì)的分析方法建立方法應(yīng)采用幾種不同的分離方法或不同測試條件，以便對比結(jié)果，選擇較佳的方法。應(yīng)考慮方法普遍適用性，所使用的儀器和試劑易于獲得