選修一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專(zhuān)家講座

專(zhuān)題2微生物培養(yǎng)與應(yīng)用課題1微生物試驗(yàn)室培養(yǎng)選修一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專(zhuān)家講座第1頁(yè)培養(yǎng)基能夠分為哪幾類(lèi)？培養(yǎng)基普通都含有哪些營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，另外還要滿(mǎn)足哪些要求？取得純凈培養(yǎng)物關(guān)鍵是什么？什么是消毒、滅菌，慣用方法有哪些？制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基方法步驟？

學(xué)習(xí)目標(biāo)怎樣倒平板？選修一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專(zhuān)家講座第2頁(yè)微生物類(lèi)群原生生物：原核生物:真菌:病毒:如酵母菌如草履蟲(chóng)、單細(xì)胞藻類(lèi)等無(wú)細(xì)胞結(jié)構(gòu)真核細(xì)胞細(xì)菌、藍(lán)藻原核細(xì)胞？選修一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專(zhuān)家講座第3頁(yè)選修一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專(zhuān)家講座第4頁(yè)一、培養(yǎng)基1.概念：人們按照微生物對(duì)_________不一樣需求，配置出供其____________營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)生長(zhǎng)繁殖2.培養(yǎng)基類(lèi)型和用途按物理性質(zhì)固體培養(yǎng)基:加瓊脂；用于分離、判定、計(jì)數(shù)液體培養(yǎng)基：不加凝固劑；用于工業(yè)生產(chǎn)。半固體培養(yǎng)基：加少許瓊脂；可用于保藏菌種。選修一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專(zhuān)家講座第5頁(yè)按化學(xué)成份合成培養(yǎng)基：成份明確；分類(lèi)判定。天然培養(yǎng)基：成份不明確；用于工業(yè)生產(chǎn)。按目標(biāo)用途分判別培養(yǎng)基：培養(yǎng)基中加入某種試劑或化學(xué)藥品，區(qū)分出不一樣類(lèi)型微生物。選擇培養(yǎng)基：依據(jù)某一個(gè)或一類(lèi)微生物特殊營(yíng)養(yǎng)要求或?qū)σ恍┪锢怼⒒瘜W(xué)抗性設(shè)計(jì)培養(yǎng)基。如用青霉素選出酵母菌等。選修一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專(zhuān)家講座第6頁(yè)選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基應(yīng)用加入青霉素分離酵母菌、霉菌等真菌加入高濃度食鹽分離金黃色葡萄球菌不加氮源分離固氮菌不加含碳有機(jī)物無(wú)碳培養(yǎng)基分離自養(yǎng)型微生物加入青霉素等抗生素分離導(dǎo)入了目標(biāo)基因受體細(xì)胞在微生物學(xué)中，將允許特定種類(lèi)微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其它種類(lèi)微生物生長(zhǎng)培養(yǎng)基。選修一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專(zhuān)家講座第7頁(yè)判別培養(yǎng)基依據(jù)微生物代謝特點(diǎn)在培養(yǎng)基加入某種指示劑或化學(xué)藥品配制而成，用以判別不一樣微生物只起判別作用，并不能抑制其它微生物

選修一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專(zhuān)家講座第8頁(yè)固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基選修一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專(zhuān)家講座第9頁(yè)培養(yǎng)基普通都含有哪些營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，另外還要滿(mǎn)足哪些要求？選修一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專(zhuān)家講座第10頁(yè)不論哪種培養(yǎng)基，普通都含有水、碳源、和氮源、無(wú)機(jī)鹽等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)另外還需要滿(mǎn)足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),比如:生長(zhǎng)因子(即細(xì)菌生長(zhǎng)必需，而本身不能合成化合物,如維生素、一些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧氣、二氧化碳、滲透壓等要求。選修一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專(zhuān)家講座第11頁(yè)一.培養(yǎng)基：微生物生存環(huán)境和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)1.基本成份：碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽⑴碳源無(wú)機(jī)碳源：有機(jī)碳源：CO2、CO32-、HCO3-牛肉膏、蛋白胨等自養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物⑵氮源無(wú)機(jī)氮源：有機(jī)氮源：NH4＋、NO3-牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：對(duì)于異養(yǎng)微生物，含C、N化合物既為碳源，也是氮源。選修一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專(zhuān)家講座第12頁(yè)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一個(gè)應(yīng)用最廣泛和最普通細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基。1000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基配方H2O定容至1000mlNacl5g蛋白胨10g牛肉膏5g瓊脂20.0g選修一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專(zhuān)家講座第13頁(yè)培養(yǎng)基配制標(biāo)準(zhǔn)⑴目標(biāo)明確：⑵營(yíng)養(yǎng)全方面、濃度適宜、百分比恰當(dāng)⑶適宜pH值：有機(jī)碳源異養(yǎng)型：依據(jù)微生物種類(lèi)、培養(yǎng)目標(biāo)選擇原料自養(yǎng)型：不加碳源加入緩沖劑（CO2碳源）生產(chǎn)科研選修一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專(zhuān)家講座第14頁(yè)2.無(wú)菌范圍：試驗(yàn)操作空間消毒操作者手、衣著消毒試驗(yàn)用具滅菌試驗(yàn)操作過(guò)程二.無(wú)菌技術(shù)：預(yù)防外來(lái)雜菌污染1.消毒與滅菌：酒精燈旁操作超凈工作臺(tái)選修一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專(zhuān)家講座第15頁(yè)二、無(wú)菌操作技術(shù)1.取得純凈培養(yǎng)物關(guān)鍵？預(yù)防外來(lái)雜菌入侵2、無(wú)菌技術(shù)除了用來(lái)預(yù)防試驗(yàn)室培養(yǎng)物被其它外來(lái)微生物污染外，還有什么目標(biāo)？防止操作者本身被微生物感染選修一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專(zhuān)家講座第16頁(yè)消毒與滅菌消毒：使用較溫和物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害微生物（不包含芽孢和孢子）。滅菌：使用強(qiáng)烈理化原因殺死物體內(nèi)全部微生物，包含芽孢和孢子。滅菌與消毒技術(shù)是微生物相關(guān)工作中最普通也是最主要技術(shù)。選修一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專(zhuān)家講座第17頁(yè)芽孢

有些細(xì)菌在一定條件下，細(xì)胞里面形成一個(gè)橢圓形休眠體，叫做芽孢。芽孢壁很厚，對(duì)惡劣環(huán)境有很強(qiáng)抵抗力。每一細(xì)胞僅形成一個(gè)芽孢，所以其沒(méi)有繁殖功效。細(xì)菌、原生動(dòng)物、真菌和植物等產(chǎn)生一個(gè)有繁殖或休眠作用生殖細(xì)胞。能直接發(fā)育成新個(gè)體。孢子——特殊休眠結(jié)構(gòu)選修一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專(zhuān)家講座第18頁(yè)消毒方法：1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min3、化學(xué)藥劑消毒法:用75%酒精進(jìn)行皮膚消毒;氯氣消毒水源4、紫外線適用對(duì)象：操作空間、液體、雙手等選修一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專(zhuān)家講座第19頁(yè)滅菌方法：1、灼燒滅菌2、干熱滅菌：160-170℃下加熱1-2h。3、高壓蒸汽滅菌：100kPa、121℃下維持15-30min.選修一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專(zhuān)家講座第20頁(yè)請(qǐng)你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。假如需要，請(qǐng)選擇適當(dāng)方法。（1）培養(yǎng)細(xì)菌用培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2）玻棒、試管、燒瓶和吸管（3）試驗(yàn)操作者雙手思考消毒滅菌滅菌選修一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專(zhuān)家講座第21頁(yè)練習(xí)：思索并討論下面儀器分別用什么樣消毒和滅菌方法？培養(yǎng)基培養(yǎng)皿空氣接種環(huán)雙手牛奶②巴氏消毒③化學(xué)消毒⑤紫外線消毒⑥高壓蒸氣滅菌①灼燒滅菌④干熱滅菌選修一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專(zhuān)家講座第22頁(yè)單個(gè)或少數(shù)菌體2.特征：大小、形狀、光澤度、顏色、透明度等。3.功效：1.定義：三、菌落判定菌種主要依據(jù)固體培養(yǎng)基上大量繁殖子細(xì)胞群體選修一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專(zhuān)家講座第23頁(yè)1000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基配方H2O定容至1000mlNacl5g蛋白胨10g牛肉膏5g瓊脂20.0g四.大腸桿菌純化培養(yǎng)㈠制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基1.計(jì)算：培養(yǎng)基用量依配方計(jì)算各成份用量2.稱(chēng)量：3.溶化：牛肉膏黏稠，用稱(chēng)量紙稱(chēng)取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加蓋牛肉膏、稱(chēng)量紙、少許水加熱溶解→取紙→蛋白胨、NaCl→瓊脂→補(bǔ)水定容4.調(diào)pH、分裝、封口：5.滅菌：6.倒平板：培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿選修一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專(zhuān)家講座第24頁(yè)倒平板約50℃預(yù)防皿蓋上水珠落入培養(yǎng)基，造成污染灼燒滅菌，預(yù)防瓶口微生物污染培養(yǎng)基選修一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專(zhuān)家講座第25頁(yè)1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時(shí)，才能用來(lái)倒平板。你用什么方法來(lái)預(yù)計(jì)培養(yǎng)基溫度？問(wèn)題討論

答：用手觸摸，剛不燙手。2.為何需要使錐形瓶瓶口經(jīng)過(guò)火焰？

答：灼燒滅菌，預(yù)防瓶口微生物污染培養(yǎng)基。選修一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專(zhuān)家講座第26頁(yè)3.平板冷凝后，為何要將平板倒置？4.在倒平板過(guò)程中，假如不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間部位，這個(gè)平板還能用來(lái)培養(yǎng)微生物嗎？為何？

答：皿蓋凝結(jié)水珠，預(yù)防水珠落入培養(yǎng)基，造成污染；平板倒置，預(yù)防培養(yǎng)基表面水分揮發(fā)。

答：最好不用，空氣中微生物可能在皿蓋與皿底之間培養(yǎng)基上滋生。選修一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專(zhuān)家講座第27頁(yè)二.大腸桿菌純化培養(yǎng)：㈠制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基㈡純化大腸桿菌：⑴平板劃線法：菌種劃3個(gè)平板1個(gè)不劃線1.接種：接種環(huán)預(yù)防劃破培養(yǎng)基（重復(fù)試驗(yàn)）（空白對(duì)照）選修一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專(zhuān)家講座第28頁(yè)問(wèn)題2：每次劃線前灼燒接種環(huán)目標(biāo)：?jiǎn)栴}3：劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)目標(biāo)：防止接種環(huán)上可能存在微生物污染培養(yǎng)基殺死上次劃線結(jié)束后殘留菌種及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留菌種，防止污染環(huán)境和操作者。問(wèn)題1：第一步灼燒接種環(huán)目標(biāo)：?jiǎn)栴}討論選修一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專(zhuān)家講座第29頁(yè)2.在灼燒接種環(huán)之后，為何要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。3.在作第二次以及其后劃線操作時(shí)，為何總是從上一次劃線末端開(kāi)始劃線？

答：線條末端細(xì)菌數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線末端開(kāi)始，能使細(xì)菌數(shù)目伴隨劃線次數(shù)增加而逐步降低，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)菌落。選修一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專(zhuān)家講座第30頁(yè)4.為何不能劃破培養(yǎng)基？一旦劃破，會(huì)造成劃線不均勻，難以到達(dá)分離單菌落目標(biāo)；二是存留在劃破處單個(gè)細(xì)胞無(wú)法形成規(guī)矩菌落，菌落會(huì)沿著劃破處生長(zhǎng)，會(huì)形成一個(gè)條狀菌落。選修一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專(zhuān)家講座第31頁(yè)6支試管，分別加入9ml無(wú)菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106⑵稀釋涂布平板法：a.梯度稀釋菌液：菌液選修一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專(zhuān)家講座第32頁(yè)⑵稀釋涂布平板法：a.梯度稀釋菌液：b.涂布平板：不超出0.1ml各梯度分別涂布3個(gè)平板1個(gè)不涂布作空白對(duì)照滴灼試涂稀釋103倍稀釋104倍稀釋105倍選修一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專(zhuān)家講座第33頁(yè)⑴平板劃線法：二.大腸桿菌純化培養(yǎng)：㈠制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基㈡純化大腸桿菌：1.接種：⑵稀釋涂布平板法：2.培養(yǎng)：將接種后培養(yǎng)基和一個(gè)未接種培養(yǎng)基放入37℃恒溫箱中培養(yǎng)12h～24h后，觀察并統(tǒng)計(jì)選修一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專(zhuān)家講座第34頁(yè)微生物培養(yǎng)與觀察選修一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專(zhuān)家講座第35頁(yè)大腸桿菌在伊紅美藍(lán)瓊脂(EMB)上經(jīng)典特征

在普通瓊脂培養(yǎng)基上：圓形，邊緣整齊，表面光滑，半透明。經(jīng)典大腸桿菌在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上特征為:深紫黑色、光滑、濕潤(rùn)、帶有金屬光澤圓形菌落。選修一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專(zhuān)家講座第36頁(yè)1.未接種培養(yǎng)基表面是否有菌落生長(zhǎng)？假如有菌落生長(zhǎng)，說(shuō)明了什么？

2.在接種大腸桿菌培養(yǎng)基上，能否觀察到獨(dú)立菌落？它們大小、形狀、顏色相同嗎？

五、結(jié)果分析與評(píng)價(jià)若有，說(shuō)明培養(yǎng)基滅菌不徹底

相同菌落，接種符合要求選修一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專(zhuān)家講座第37頁(yè)3.培養(yǎng)12h和24h后，觀察到試驗(yàn)結(jié)果相同嗎？假如不一樣，請(qǐng)分析產(chǎn)生差異原因？4.假如在培養(yǎng)基上觀察到不一樣形態(tài)菌落，請(qǐng)分析其可能原因。

大小會(huì)有顯著不一樣無(wú)菌操作未到達(dá)要求：培養(yǎng)基滅菌不徹底；可能是接種時(shí)或培養(yǎng)時(shí)污染選修一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專(zhuān)家講座第38頁(yè)六.菌種保藏1.暫時(shí)保藏：試管固體斜面培養(yǎng)基上4℃2.長(zhǎng)久保留：菌種易被污染、變異甘油管藏1ml甘油＋1ml菌液－20℃斜面保藏