月季花藥培養(yǎng)課件

1、被子植物定義：凡是種子有果皮包被著，胚珠有子房壁包被著的植物，就叫做被子植物一、被子植物和裸子植物2、裸子植物定義：凡是胚珠裸露，外面沒有子房壁包被，種子外面沒有果皮包被的植物稱為裸子植物實例：玉米、大豆、梨、杏實例：松、杉、柏花的結構：花梗、花托、萼片、花瓣、雌蕊和雄蕊4、花的作用被子植物的有性生殖是在花里進行的，雌蕊和雄蕊是進行有性生殖的主要部分二、被子植物花粉粒的形成花絲花藥：囊狀結構，內(nèi)有很多花粉粒1、雄蕊的結構雄蕊：藥隔：花藥中部，由薄壁細胞構成，內(nèi)有維管束花藥花粉囊（4或2）囊壁花粉粒表皮纖維層2、花藥的結構3、花藥的發(fā)育周緣細胞（初生壁細胞）外：體積較大藥室內(nèi)壁中：一層或幾層細胞內(nèi)：絨氈層分裂孢原細胞造孢細胞花粉母細胞（小孢子母細胞）有絲分裂絨氈層：為花粉粒的發(fā)育提供營養(yǎng)，最后消失藥室內(nèi)壁：多量淀粉，發(fā)育成纖維層中層：早期分解，吸收，消失花粉是小孢子母細胞經(jīng)過減數(shù)分裂而形成的，因此，花粉是單倍體的生殖細胞4、被子植物的花粉發(fā)育②花粉粒的形成花粉母細胞（小孢子母細胞）減數(shù)分裂①經(jīng)歷時期：四分體時期、單核期、雙核期四分體時期（進入單核期）有絲分裂單核靠邊期(小孢子)單核居中期(小孢子)小孢子（單核花粉粒）精子精子有絲分裂花粉管細胞核生殖細胞核生殖細胞營養(yǎng)細胞雙核期兩個精子和一個營養(yǎng)核的基因型相同1花粉母細胞4個小孢子減分有分4個花粉管細胞核4個生殖細胞核有分8個精子③花粉粒類型一個成熟的花粉粒即為雄配子體，有兩種情況：二核花粉粒:成熟的花粉粒中，只含花粉管細胞核和生殖細胞核。（精子在花粉管中形成）三核花粉粒:有些植物的花粉，在成熟前，生殖細胞進行一次有絲分裂，形成兩個精子，這樣的花粉在成熟時，含有一個營養(yǎng)核和兩個精子。三、被子植物胚囊的形成1、雌蕊的組成柱頭、花柱、子房2、子房的結構被子植物子房的結構胚珠的結構花粉管精子卵細胞極核子房壁珠被珠孔花粉落到雌蕊柱頭上以后，在柱頭上黏液的刺激下，花粉開始萌發(fā)并形成花粉管，花粉管沿著花柱向胚珠方向生長，到達胚珠后從珠孔繞過卵細胞進入胚囊，到達胚囊中卵細胞和極核之間，這時花粉管的前端破裂，兩個精子釋放出來，其中一個精子與兩個極核結合形成受精極核，另一個精子與卵細胞結合形成受精卵，這是被子植物特有的雙受精現(xiàn)象4、受精過程花雄蕊雌蕊花藥花粉粒精子精子子房胚珠胚囊子房壁珠被卵細胞兩個極核受精卵受精極核胚胚乳種皮種子果皮果實有絲分裂有絲分裂1n1n2n1n3n2n2n2n2n胚是一個新個體的幼體5、發(fā)育結果（二）產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑花粉花粉胚狀體愈傷組織叢芽生根移栽脫分化分化再分化誘導脫分化

說明：兩種途徑之間并沒有絕對的界限，主要取決于培養(yǎng)基中激素的種類及其濃度配比。①不選擇單核期之前花藥原因：花藥質(zhì)地幼嫩，容易破碎；②不選擇單核期之后花藥原因：花瓣開始松動，給材料消毒帶來困難；③挑選單核期花藥方法：應當選擇完全未開放的花蕾，菌少，易消毒。（三）影響花藥培養(yǎng)的因素1、材料的選擇：⑴不同種類植物的誘導成功率不同。⑵同一種植物，親本植株的生理狀況對誘導成功率有直接影響。⑶合適的花粉發(fā)育時期：花期早期時的花藥最佳。⑷選擇最合適的花粉發(fā)育時期 1．影響花粉植株的主要因素:

和

等。

2．材料的選擇： ①從花藥來看，應當選擇（初花期、盛花期、晚花期）的花藥； ②從花粉來看，應當選擇（四分體期、單核期、雙核期、萌發(fā)期）的花粉； ③從花蕾來看，應當選擇（完全未開放、略微開放、完全盛開）的花蕾。

〖思考4〗除此之外，你認為影響花粉誘導成功的因素還有哪些？〖思考5〗為什么選擇合適的花粉發(fā)育期是誘導花藥培養(yǎng)成功的重要因素？材料的選擇培養(yǎng)基的組成植物的種類、親本植株的生理狀況、親本生長條件、材料的低溫處理、接種密度、培養(yǎng)基組成、培養(yǎng)的環(huán)境條件等。這是因為并不是任何時期的花粉都可以經(jīng)過培養(yǎng)產(chǎn)生愈傷組織或胚狀體，在花粉發(fā)育的過程中，只有某一個時期對離體刺激敏感?；ㄋ幣囵B(yǎng)所采用的培養(yǎng)基各成分中植物生長調(diào)節(jié)劑的水平和配比起決定作用。⑴誘導愈傷組織或胚狀體產(chǎn)生的培養(yǎng)基：廣泛使用2，4-D、IAA；⑵誘導分化的培養(yǎng)基常除去2，4-D而以IBA代之。親本植株的生長條件、材料的低溫預處理、接種密度、培養(yǎng)的環(huán)境條件等對誘導的成功率都有一定的影響。2、培養(yǎng)基的組成：3、其他因素：花瓣松動后，微生物就可能侵入到花藥，給材料的消毒帶來困難。為什么花瓣松動會給材料的消毒帶來困難？月季花藥培養(yǎng)時的花粉粒最好是（）A、四分體時期B、單核居中期C、單核靠邊期D、二核或三核花粉粒C2、培養(yǎng)基：花藥培養(yǎng)基所采用的培養(yǎng)基可能因植物的不同而有所變化小麥中為N6，馬鈴薯、月季中為MS，油菜中為B5培養(yǎng)基3、其他因素親本植株的生長條件、材料的低溫預處理以及接種的密度等對誘導成功都有一定的影響六、實驗操作（一）材料的選?、谀承┲参锏幕ǚ奂毎瞬灰字璨捎帽夯ㄇ?鉻礬法，這種方法能將花粉細胞核染成藍黑色。①最常用的方法有醋酸洋紅法1、方法①醋酸洋紅法染色機理醋酸洋紅為堿性染色劑，而花粉細胞內(nèi)有染色體，染色體主要成分是DNA和蛋白質(zhì),易被堿性染料著色染成紅色

。將體積分數(shù)45％的醋酸100ml煮沸，緩緩加入1g洋紅，在加熱回流8h，冷卻至50℃，過濾即可。②醋酸洋紅的配置2、醋酸洋紅法將花藥放在載玻片上，加一滴質(zhì)量分數(shù)1％的醋酸洋紅，用鑷柄將花藥搗碎，蓋上蓋玻片在顯微鏡下檢查。③染色操作3、焙花青—鉻釩法將無水酒精與冰醋酸按體積比為3：1的比例混勻①卡諾氏固定液的配制方法花藥應該在卡諾氏固定液中固定20min，然后取出放在載玻片上，加焙花青—鉻釩溶液染色，蓋上蓋玻片后在顯微鏡下檢查。將5g鉻明礬[K2SO4Cr2(SO4)·24H2O]加入90ml蒸餾水中，溶解后加入0.1g焙花青，混勻并加熱至沸騰，煮沸5分鐘后冷卻至室溫，過濾，加蒸餾水定容至100ml。②焙花青—鉻釩溶液的配制方法③染色操作（二）材料的消毒1、酒精處理①花蕾用體積分數(shù)為70%的酒精浸泡30秒，立即取出。②無菌水清洗③無菌吸水紙吸干花蕾表面的水分2、消毒液處理（三）接種和培養(yǎng)①放入質(zhì)量分數(shù)為0.1%的氯化汞溶液中2~4分鐘（也可質(zhì)量分數(shù)為1%的次氯酸鈣溶液或飽和漂白粉溶液）②無菌水沖洗3~5次用于培養(yǎng)花藥，實際上多數(shù)未熟，由于它的外面有花萼、花瓣或穎片保護，通常處于無菌狀態(tài)，所以只要將整個花蕾或幼穗消毒即可。在無菌條件下除去萼片和花瓣用鑷子取出花藥②要徹底去除花絲，因為與花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成立即將花藥接種于培養(yǎng)基上，通常每瓶接種花藥7-10個。1、剝?nèi)』ㄋ帰傥饟p傷花藥，以免誘導出非花粉愈傷組織2、接種注意：①培養(yǎng)條件：溫度控制在25℃左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。

3、培養(yǎng)②培養(yǎng)：一般經(jīng)過20-30天培養(yǎng)后，會發(fā)現(xiàn)花藥開裂，長出愈傷組織或釋放出胚狀體長出愈傷組織則將愈傷組織及時轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上，以便進一步分化出再生植株③注意：如果花藥開裂釋放出胚狀體，則一個花藥內(nèi)就會產(chǎn)生大量幼小植株，必須在花藥開裂后盡快將幼小植株分開，分別移植到新的培養(yǎng)基上，否則這些植株將很難分開。在花藥培養(yǎng)中，特別是通過愈傷組織形成的花粉植株，常常會出現(xiàn)染色體倍性的變化（主要原因是營養(yǎng)核和生殖核融合造成的）4、鑒定和篩選精品課