維生素膠丸中維生素的含量測(cè)定

維生素膠丸中維生素的含量測(cè)定第一頁(yè)，共十八頁(yè)，2022年，8月28日維生素A的結(jié)構(gòu)為具有一個(gè)共軛多烯醇側(cè)鏈的環(huán)己烷，由于其中有多個(gè)不飽和鍵，性質(zhì)不穩(wěn)定，易被空氣中氧或氧化劑氧化，易被紫外光裂解，并且其對(duì)酸不穩(wěn)定。其醋酸酯比維生素A穩(wěn)定，臨床使用一般將本品或棕櫚酸酯溶于植物油中應(yīng)用。因此，維生素A及其制劑除需密封在涼暗處保存外，還需充氮或加入合適的抗氧劑。維生素A與氯仿、乙醚、環(huán)己烷或石油醚能任意混合，在乙醇中微溶，在水中不溶。第二頁(yè)，共十八頁(yè)，2022年，8月28日一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩?、主要儀器和試劑紫外分光光度儀，100ml容量瓶，燒杯若干個(gè)，維生素A膠丸（規(guī)格2.5萬(wàn)單位/粒）環(huán)己烷，乙醚掌握UV三點(diǎn)校正法的原理和維生素A含量測(cè)定的方法。第三頁(yè)，共十八頁(yè)，2022年，8月28日三、實(shí)驗(yàn)原理本法是在三個(gè)波長(zhǎng)處測(cè)得吸收度，根據(jù)校正公式計(jì)算吸收度A校正值后，再計(jì)算含量，故本法稱為“三點(diǎn)校正法”。該原理主要基于：（1）雜質(zhì)的無(wú)關(guān)吸收在310nm～340nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)幾乎呈一條直線，且隨波長(zhǎng)的增長(zhǎng)吸收度下降。（2）物質(zhì)對(duì)光吸收呈加和性的原理。即在某一樣品的吸收曲線上，各波長(zhǎng)處的吸收度是維生素A與雜質(zhì)吸收度的代數(shù)和，因而吸收曲線也是二者的疊加。第四頁(yè)，共十八頁(yè)，2022年，8月28日（一）膠丸內(nèi)容物平均重量的測(cè)定四、實(shí)驗(yàn)過(guò)程取膠丸20粒，精密稱定，用注射將內(nèi)容物抽出，再用刀片切開(kāi)丸殼，用乙醚逐個(gè)洗滌丸殼三次，置50ml燒杯中，再用乙醚浸洗1～2次，置通風(fēng)處，使乙醚揮散，精密稱定，算出每丸內(nèi)容物的平均重量。第五頁(yè)，共十八頁(yè)，2022年，8月28日四、實(shí)驗(yàn)過(guò)程（二）供試品溶液的制備與測(cè)定取維生素AD膠丸內(nèi)容物適量，精密稱定，用環(huán)己烷溶解并定量稀釋成每1mL中含9～15單位的溶液。按照分光光度法，測(cè)定其吸收峰的波長(zhǎng)，并在下列各波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度。計(jì)算各吸收度與波長(zhǎng)328nm處吸收度的比值和波長(zhǎng)328nm處的E1%1cm值。第一法第六頁(yè)，共十八頁(yè)，2022年，8月28日[計(jì)算]①求：由A=×C×L，求得=A/（C×L）。②求效價(jià)（IU/g）：效價(jià)系指每克供試品中所含維生素A的國(guó)際單位數(shù)（IU/g）。即IU/g=×1900。③求維生素A占標(biāo)示量的百分含量：標(biāo)示量%=（A×D×1900×W×100%）/（W×100×L×標(biāo)示量）×100%。第七頁(yè)，共十八頁(yè)，2022年，8月28日[A值的選擇]首先計(jì)算吸收度比值（即Ai/A328）①如果最大吸收波長(zhǎng)在326nm～329nm之間，并分別計(jì)算5個(gè)波長(zhǎng)下的差值，均不得超過(guò)±0.02時(shí)，則不用校正公式計(jì)算吸收度，而直接用328nm處測(cè)得的吸收度A328求得。②如果最大吸收波長(zhǎng)在326nm～329nm之間，并分別計(jì)算5個(gè)波長(zhǎng)下的差值，如有一個(gè)或幾個(gè)超過(guò)±0.02，這時(shí)應(yīng)按以下方法判斷：第八頁(yè)，共十八頁(yè)，2022年，8月28日若A328（校正）與A328的吸收度相差不超過(guò)±3.0%，則不用校正吸收度，仍以未經(jīng)校正的A328求得。若A328（校正）與A328的吸收度相差在-15%～-3%之間，則以A328（校正）得。若A328（校正）與A328的吸收度相差小于-15%或大于+3%，則不能用本法測(cè)定，而應(yīng)用第二法（皂化法）測(cè)定含量。③如果最大吸收波長(zhǎng)不在326nm～329nm之間，也不能用本法測(cè)定，而應(yīng)用第二法（皂化法）測(cè)定含量。第一法校正公式：A328(校正)=3.52(2A328-A316-A340)第九頁(yè)，共十八頁(yè)，2022年，8月28日維生素A吸收度差值第十頁(yè)，共十八頁(yè)，2022年，8月28日由掃描結(jié)果得最大吸收波長(zhǎng)為327.7nm（326~329nm）各個(gè)差值均不超過(guò)±0.02，不需用校正公式。故直接用A328進(jìn)行計(jì)算。（328）=A328/（100×ms/D）=0.746/(100×0.0048/100)=155.42效價(jià)=×1900=155.42×1900=295298標(biāo)示量%=[(A×D×1900×W)/(W×100×L×標(biāo)示量)]×100%=(0.746×100×1900×0.08714)/(0.0048×100×1×25000)×100%=102.9%第十一頁(yè)，共十八頁(yè)，2022年，8月28日二法：方法：精密稱取一定量供試品，加氫氧化鉀乙醇溶液后煮沸回流，得到的皂化液再經(jīng)乙醚提取、洗滌、濾過(guò)、濃縮和干燥等處理，最后用異丙醇溶解殘?jiān)⑾♂尦擅?ml中含維生素A為9~15單位的溶液，在300、310、325、334波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，并確定最大吸收波長(zhǎng)。計(jì)算同第一法，換算因子為1830。二法校正公式：A325（校正）=6.815A325－2.555Ａ310－4.260A334第十二頁(yè)，共十八頁(yè)，2022年，8月28日討論：1、維生素A具有紫外吸收特征，在325nm~328nm的范圍內(nèi)有最大吸收；并且，它能與三氯化銻試劑作用，產(chǎn)生不穩(wěn)定的藍(lán)色。故可利用這些性質(zhì)對(duì)其進(jìn)行鑒別和含量測(cè)定。2、維生素A醋酸酯的吸收度校正公式是用直線方程式法（即代數(shù)法）推導(dǎo)而來(lái)；維生素A醇的吸收度校正公式是用相似三角形法（幾何法或稱6/7定位法）推導(dǎo)而來(lái)。第十三頁(yè)，共十八頁(yè)，2022年，8月28日3、在應(yīng)用三點(diǎn)校正法時(shí)，除其中一點(diǎn)在最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)定外，其余兩點(diǎn)均在最大吸收峰的兩側(cè)進(jìn)行測(cè)定。如果儀器波長(zhǎng)精度不準(zhǔn)確時(shí)，會(huì)產(chǎn)生較大誤差。因此，在測(cè)定前務(wù)必要校正波長(zhǎng)，并可用全反式維生素A進(jìn)行測(cè)定，比較測(cè)定結(jié)果和比值是否與對(duì)照品相符合，以進(jìn)一步核對(duì)儀器波長(zhǎng)是否準(zhǔn)確。測(cè)定的樣品應(yīng)不得少于兩份。第十四頁(yè)，共十八頁(yè)，2022年，8月28日4、本組在對(duì)維生素A含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)過(guò)一些問(wèn)題。第一次用一法測(cè)定結(jié)果不符合規(guī)定，按照要求應(yīng)該用二法測(cè)定。但分析原因后，我們重新做了一遍，用一法測(cè)定取得了較好結(jié)果，所給維生素A含量符合規(guī)定。我們發(fā)現(xiàn)第一次實(shí)驗(yàn)失敗的原因是：①紫外分光光度計(jì)出現(xiàn)了問(wèn)題，波長(zhǎng)不準(zhǔn)確，從而導(dǎo)致在相應(yīng)波長(zhǎng)下測(cè)得的吸收度不準(zhǔn)確。可見(jiàn)儀器波長(zhǎng)的準(zhǔn)確與否在實(shí)驗(yàn)中是致關(guān)重要的。②整個(gè)操作過(guò)程沒(méi)有進(jìn)行暗室操作，在光照下暴露了較長(zhǎng)時(shí)間，而維生素A不穩(wěn)定，見(jiàn)光易變質(zhì)，所以導(dǎo)致測(cè)定含量不準(zhǔn)。第十五頁(yè)，共十八頁(yè)，2022年，8月28日另外，在操作中應(yīng)注意：①在含量測(cè)定時(shí)膠殼要盡量洗干凈，避免內(nèi)容物殘留，使粒重盡量準(zhǔn)確。②由于所取的樣品量非常小，所以用于收集樣品的小燒杯一定要用溶劑洗滌多次并合并入容量瓶中，容量瓶口也要沖洗使樣品全部轉(zhuǎn)入。③在測(cè)定不同波長(zhǎng)下的吸收度時(shí)每一次都要用空白液進(jìn)行調(diào)零。第十六頁(yè)，共十八頁(yè)，2022年，8月28日按下列操作步驟制備供試品溶液，請(qǐng)計(jì)算應(yīng)取膠丸內(nèi)容物多少g？（已知膠丸內(nèi)