臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)知識點(diǎn)

1/8臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)1、免疫：是機(jī)體識別和排斥抗原性異物的一種生理功能2、免疫防御(對外)；免疫自穩(wěn)(防自身免疫病)；免疫監(jiān)視(防腫瘤)。3、中樞免疫器官：骨髓、胸腺；外周免疫器官：淋巴結(jié)、脾臟(最大)、黏膜相關(guān)淋巴組織B細(xì)胞功能檢測方法：溶血空斑形成試驗(yàn)(體液免疫功能)。CD3＋CD4＋CD8－=輔助性T細(xì)胞(Th)CD3＋CD4－CD8＋=細(xì)胞毒性T細(xì)胞(Tc或CTL)(T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗(yàn))T細(xì)胞功能檢測：植物血凝素(PHA)刀豆素(CONA)刺激T細(xì)胞增殖。增殖試驗(yàn)有：形態(tài)6、NK細(xì)胞：具有細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用。直接殺傷靶細(xì)胞(腫瘤細(xì)胞和病毒感染的細(xì)胞)胞株。7、吞噬細(xì)胞包括：單核-吞噬細(xì)胞系統(tǒng)(MPS，表面標(biāo)志CD14，包括骨髓內(nèi)的前單核細(xì)胞、8、人成熟樹突狀細(xì)胞(DC)(專職抗原呈遞功能)：表面標(biāo)志為CD1a、CD11c和CD83。9、免疫球蛋白可分為分泌型(sIg，主要存在于體液中，具有抗體功能)及膜型(mIg，作H排序)免疫球蛋白含量測定：單向環(huán)狀免疫擴(kuò)散法、免疫比濁法。11、免疫球蛋白的同種型抗原決定簇位于恒定區(qū)(CH、CL)2/813、IgG：血清中含量最高的免疫球蛋白(IgG1最高)，血液和細(xì)胞外液中的主要抗體。也是再次免疫應(yīng)答的主要抗體，是唯一能通過胎盤的抗體，大多數(shù)抗菌抗體、抗病毒抗體是G14、IgA：分血清型(單體存在)及分泌型；分泌型IgA(sIgA)為二聚體，性能穩(wěn)定，主15、IgM：為五聚體，主要存在于血液中，是Ig中分子量最大的(又稱巨球蛋白)。個(gè)體發(fā)育最早合成和分泌的抗體?？乖碳ず篌w液免疫應(yīng)答中最先產(chǎn)生的抗體，感染過程中血清特異性過敏反應(yīng)和寄生蟲早期感染患者血清中可升高。17、補(bǔ)體：具有酶樣活性的球蛋白(肝細(xì)胞、巨噬細(xì)胞產(chǎn)生)；激活途徑主要有三種：經(jīng)典徑(以結(jié)合抗原后的IgG或IgM類抗體為主要激活劑(雙鏈DNA)，C1~C9全部參與)、替代途徑(病原微生物細(xì)胞壁成分(脂多糖)直接激活補(bǔ)體C3，然后完成C5~C9的激活過20、補(bǔ)體清除免疫復(fù)合物的方式：吞噬調(diào)理；免疫粘附；免疫復(fù)合物抑制。21、完全抗原=反應(yīng)原性+免疫原性。半抗原=反應(yīng)原性(無免疫原性)22、抗原抗體結(jié)合力(分子間引力)：靜電吸引、范德華力、氫鍵、疏水作用力(最強(qiáng))23、抗原抗體反應(yīng)的四大特點(diǎn)：特異性、可逆性、比例性、階段性；受反應(yīng)條件(如溫度、pH、電解質(zhì)、抗原抗體比例等)的影響。24、抗體過量——前帶；抗原過量——后帶(鉤狀效應(yīng))25、抗原抗體反應(yīng)可分為兩個(gè)階段：第一階段為抗原與抗體發(fā)生特異性結(jié)合的階段，此階段往往需要數(shù)分鐘至數(shù)小時(shí)?，F(xiàn)沉淀現(xiàn)象。28、最常用于免疫動(dòng)物的佐劑是弗氏佐劑，弗氏佐劑分為弗氏完全佐劑(弗氏不完全佐劑加卡介苗)和弗氏不完全佐劑兩種。29、R(兔子)型抗血清是用家兔及其他動(dòng)物免疫產(chǎn)生的抗體，抗原抗體反應(yīng)比例合適范圍較寬，適于作診斷試劑。H(馬)型抗血清是用馬等大動(dòng)物免疫獲得的抗體，抗原抗體反應(yīng)比例合適范圍較窄，一般疫治療。30、抗血清常見保存條件：2-8℃保存；冷凍保存(最常用)；真空干燥保存(5-10年)。3/831、雜交瘤細(xì)胞放入液氮(-196℃)前，需要逐步降溫。復(fù)蘇細(xì)胞時(shí)，從液氮罐內(nèi)取出凍存32、凝集反應(yīng)分為兩個(gè)階段：①抗原抗體的特異性結(jié)合；②出現(xiàn)可見的顆粒凝聚。33、直接凝集反應(yīng)：細(xì)菌、螺旋體和紅細(xì)胞等顆粒性抗原，在適當(dāng)?shù)碾娊赓|(zhì)(0.85%氯化鈉)參與下可直接與相應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)凝集?？乖?凝集原，抗體=凝集素。試管凝集試驗(yàn)：肥達(dá)氏試驗(yàn)、外斐試驗(yàn)、輸血交叉配血試驗(yàn)；35、正向間接血凝反應(yīng)(PHA)：紅細(xì)胞包被抗原，用以檢測抗體。(凝集)反向間接血凝反應(yīng)(RPHA)：紅細(xì)胞包被抗體，用以檢測抗原。(凝集)37、金黃色葡萄球菌A蛋白(SPA)--協(xié)同凝集反應(yīng)(反向間接凝集)38、血凝試驗(yàn)(載體為綿羊、家兔、雞的紅細(xì)胞及O型人紅細(xì)胞)可在微量滴定板或試管中進(jìn)行，將標(biāo)本倍比稀釋，一般為1:64，同時(shí)設(shè)不含標(biāo)本的稀釋液為對照孔。凡紅細(xì)胞沉積于孔底，集中呈一圓點(diǎn)的為不凝集。如紅細(xì)胞凝集，則分布于孔底周圍。39、膠乳凝集試驗(yàn)(間接凝集)，所用載體為聚苯乙烯膠乳；明膠凝集試驗(yàn)(間接)將病毒抗原或重組抗原吸附于粉紅色明膠顆粒：HIV-1抗體和抗精子抗體檢測出現(xiàn)可溶性小的復(fù)合物，肉眼不可見。第二階段為形成可見的免疫復(fù)合物，約需幾十分鐘到數(shù)小時(shí)才能完成，如沉淀線、沉淀環(huán)。原和抗體比例的直接影響，因此常用來作為測定抗原抗體反應(yīng)最適比例的方法。吐溫-20)。適合于大批量標(biāo)本的檢測。IC峰，這就是經(jīng)典的海德堡曲線理論。當(dāng)抗原過量時(shí)，形成的IC(免疫復(fù)合物)分子小，而且會(huì)發(fā)生再解離，使?jié)岫确炊陆?，光散射亦減少，這就是高劑量鉤狀效應(yīng)。Mancini曲線適用大分子抗原和長時(shí)間擴(kuò)散(＞48小時(shí))的結(jié)果，沉淀環(huán)直徑的平方與抗原濃度呈線性關(guān)系。Fahey曲線適用于小分子抗原和較短時(shí)間擴(kuò)散的結(jié)果處理，用半對數(shù)值畫線，濃度對數(shù)與擴(kuò)散環(huán)直徑呈線性關(guān)系。雙向擴(kuò)散試驗(yàn)是對抗原或抗體進(jìn)行定性分析。4/8沉淀線如果靠近抗原孔，則表示抗體含量較大沉淀線如果靠近抗體孔，則表示抗原含量較大。不出現(xiàn)沉淀線則表明無對應(yīng)的抗體或抗原或者抗原過量。*分子量小者擴(kuò)散快，反之則較慢。由于慢者擴(kuò)散圈小，局部濃度則較大，形成的沉淀線彎向分子量大的一方。如果兩者分子量大致相等，則形成直線。*兩條沉淀線互相吻合相連，表明抗體與兩個(gè)抗原中的相同表位結(jié)合而沉淀，兩個(gè)抗原相同沉淀線呈部分相切，說明兩個(gè)抗原之間有部分相同。兩條沉淀線交叉而過，說明兩個(gè)抗原完全不同。*出現(xiàn)沉淀線最高的抗體稀釋度為該抗體的效價(jià)。*出現(xiàn)一條沉淀線說明待測抗原或抗體純。44、對流免疫電泳(雙向免疫擴(kuò)散與電泳相結(jié)合的定向加速的免疫擴(kuò)散技術(shù))：抗體流向負(fù)極，抗原流向正極；最適比例出現(xiàn)沉淀線。極泳動(dòng)，隨著抗原量的逐漸減少，抗原泳動(dòng)的基底區(qū)越來越窄，抗原抗體分子復(fù)合物形成的沉淀線逐漸變窄，形成一個(gè)形狀如火箭的不溶性復(fù)合物沉淀峰。)頂部呈不清晰的云霧狀或圓形，則表示未達(dá)終點(diǎn)。免疫固定電泳：電泳+沉淀反應(yīng)技術(shù)，可用于各種蛋白質(zhì)的鑒定(M蛋白的鑒定與分型，也予尿液中本-周蛋白的檢測及κ、λ分型，腦脊液中寡克隆蛋白的檢測及分型。)。反比關(guān)系；IRMA(免疫放射)核素標(biāo)記抗體，非競爭結(jié)合(過量標(biāo)記抗體，反應(yīng)速率比RIA快，靈敏度明顯高于RIA)，正比關(guān)系。46、常用的熒光素有：異硫氰酸(FITC，最大吸收光波長490~495nm)黃綠色，最常用；RBnm甲基異硫氰酸羅丹明(TRITC，最大吸引光波長為550nm)橙紅色；藻紅蛋白(R-RE)橙色。其他：銪(Eu3＋)47、熒光標(biāo)記蛋白的常用方法：攪拌法和透析法。48、時(shí)間分辨熒光免疫測定(TRFIA)以鑭系元素(如：銪)化合物為熒光標(biāo)記物。49、偏振免疫測定的偏振波長是485nm(藍(lán)光)。不適宜測定大分子物質(zhì)。50、熒光酶免疫：由于使用酶和熒光底物的化學(xué)反應(yīng)作為放大系統(tǒng)，故靈敏度大大提高。51、均相法：不分離，直接測(用于小分子激素和半抗原(如藥物)的測定)；酶放大免疫測定技術(shù)(EMIT)最早用于臨床。酶標(biāo)半抗原。EIA：異相法：先分離，后測定。固相酶免疫測定(如ELISA)5/852、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)：辣根過氧化物酶(HRP)：底物(1)鄰苯二胺(OPD)，(2)四甲基聯(lián)苯胺(TMB)ELISA中應(yīng)用最廣泛的底物。(HRP標(biāo)記抗體或抗原的最常用方法——改良過碘酸鈉法)堿性磷酸酶(ALP)：底物：對-硝基苯磷酸脂(p-NPP)β-半乳糖苷酶(β-Gal)：底物：4-甲基傘酮基-R-D半乳糖苷(4-MUU)抗原測定：蛋白大分子抗原用得最多的是雙抗體夾心法(HBsAg)。只有單個(gè)抗原決定簇的法?？贵w測定：通常使用間接法(HCV、HIV)、雙抗原夾心法(HBsAb)、競爭法(HBcAb、HBeAb)和捕獲法(IgM)等*待測孔最后顯示的顏色深淺與標(biāo)本中的待測抗原或抗體呈正相關(guān)的是：雙抗體夾心法、雙位點(diǎn)一步法、間接法測抗體；*封閉：1%~5%的牛血清白蛋白或5%~20%小牛血清。HRP)魯米諾及其衍生物、(標(biāo)記酶為堿性磷酸酶)AMPPD；54、免疫印跡實(shí)驗(yàn)中常選用多克隆抗體。Ficoll到下為血漿，單個(gè)核細(xì)胞，粒，紅)和Percoll(由上至下：死細(xì)胞，單個(gè)核細(xì)胞，淋，紅，粒)。再生障礙性貧血等。61、(ELISA)雙抗體夾心法是用于細(xì)胞因子測定的最常用方法。62、流式細(xì)胞儀：前向散射光(FS)反映顆粒的大小。側(cè)向散射光(SS)反映顆粒內(nèi)部結(jié)構(gòu)復(fù)雜程度、表面的光滑程度。熒光(FL)反映顆粒被染上熒光部分?jǐn)?shù)量的多少。63、免疫熒光標(biāo)記最常用的熒光染料：異硫氰酸熒光素(FITC)亮綠色熒光。德州紅紅色熒光。藻膽蛋白類橙色至紅色熒光。B65、強(qiáng)直性脊柱炎——HLA-B276/867、M蛋白(MP)是B淋巴細(xì)胞或漿細(xì)胞單克隆異常增殖(＞30g／L)所產(chǎn)生的一種在氨基多見于多發(fā)性骨髓瘤、高丙種球蛋白血癥、惡性淋巴瘤、重鏈病、輕鏈病等68、M蛋白-最基本方法：血清蛋白區(qū)帶電泳技術(shù)M蛋白-粗篩試驗(yàn)：血清免疫球蛋白定量(單向瓊脂免疫擴(kuò)散法和免疫比濁法)M蛋白-鑒定，首選方法：免疫固定電泳(IFE)技術(shù)(區(qū)帶電泳技術(shù)與特異性抗血清的免疫沉淀反應(yīng)相結(jié)合)是臨床最常用的方法。(感染、血管病變、系統(tǒng)性疾病=IgG升高)分子量小，極易迅速自腎臟排出，血中含量并不升高)72、冷球蛋白又稱冷免疫球蛋白，在-4℃時(shí)發(fā)生沉淀，于37℃時(shí)又復(fù)溶解。采血是冷球蛋白檢測的關(guān)鍵，宜在體溫條件下采集和保存靜脈血。73、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)(CFT)，梅毒的診斷，華氏反應(yīng)。75、鏈球菌感染：ASO(膠乳凝集試驗(yàn)、免疫散射比濁法)77、卡氏肺孢菌，又稱卡氏肺孢子蟲，為類真菌。IgGIgM類抗體結(jié)合后，在補(bǔ)體(細(xì)胞溶解)、巨噬細(xì)胞(吞噬)和NK細(xì)胞(ADCC作用)自身免疫性溶血性貧血、藥物過敏性血細(xì)胞減少癥、肺出血腎炎綜合征、甲狀腺功能亢進(jìn))s敏反應(yīng)(DTH)，是效應(yīng)T細(xì)胞與特異性抗原結(jié)合后，引起的以單個(gè)核細(xì)胞浸潤和組織損傷為主要特征的炎癥反應(yīng)。(細(xì)胞免疫)效應(yīng)性CD4+Th1細(xì)胞識別抗原后活化，可釋放IFN-7/8常見Ⅳ型超敏反應(yīng)性疾?。焊腥拘赃t發(fā)型超敏反應(yīng)(結(jié)核分枝桿菌、病毒、原蟲)、接觸性皮炎、移植排斥反應(yīng)。(結(jié)核菌素皮試、斑貼試驗(yàn))84、抗乙酰膽堿受體抗體：對重癥肌無力(MG)具有診斷意義。為性硬皮病患者抗著絲點(diǎn)抗體陽性。88、自身免疫病(AID)的特征：高滴度自身抗體，病理特點(diǎn)為免疫炎癥損傷與抗原分布一致，能建動(dòng)物模型。NA抗體陽性，可實(shí)驗(yàn)室診斷為SLE)93、抗核RNP抗體：為MCTD(混合性結(jié)締組織病)的診斷指標(biāo)。SSASSBSSANA性而抗dsDNA抗體95、抗Jo-1抗體：多發(fā)性肌炎(PM)患者常為陽性。96、抗Scl-70抗體：進(jìn)行性系統(tǒng)性硬皮癥(PSS)的診斷指標(biāo)。97、NCA：原發(fā)性小血管炎的特異性血清標(biāo)志物98、內(nèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)：自身抗體有RF、抗角蛋白抗體(AKA)、抗環(huán)瓜氨酸肽抗體(anti-CCP)。100、抗線粒體抗體(AMA)：原發(fā)性膽汁性肝硬化主要表現(xiàn)骨髓外浸潤，以肝、脾和淋巴結(jié)腫大為主要