PVDF轉(zhuǎn)印膜在WB中的應用

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聚偏二氟乙烯（英文名稱：polyvinylidenedifluoride，簡稱PVDF），主要是指偏氟乙烯均聚物或者偏氟乙烯與其他少量含氟乙烯基單體的共聚物。聚偏二氟乙烯分子結(jié)構(gòu)

聚偏二氟乙烯(PVDF)作為一種新型氟碳熱塑型塑料，具有極好的耐氣候性和化學穩(wěn)定性，波長為20～400nm的紫外燈照射一年，其性能基本不變，室溫下不受酸、堿等強氧化劑和鹵素等腐蝕。鑒于以上優(yōu)點，PVDF膜從80年代中期開始得到了大量的應用。第2頁/共18頁

聚偏二氟乙烯（PVDF）是由millipore公司在1985年首創(chuàng)并應用于蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)印。目前國外已經(jīng)能夠生產(chǎn)出各種性能優(yōu)良的PVDF膜。國內(nèi)的PVDF微濾和超濾膜也己形成了一定的生產(chǎn)規(guī)模，但是對于蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)印方面的PVDF膜的生產(chǎn)幾乎為零，而國際上目前也鮮有這方面的文獻報道。第3頁/共18頁

PVDF轉(zhuǎn)印膜是疏水性膜，主要有兩種孔徑形式存在：0.2μmPVDF轉(zhuǎn)印膜：適用于低分子量蛋白(<20KD)、核酸(<300bp)0.45μm

PVDF轉(zhuǎn)印膜：適用于高分子量蛋白(>20KD)、核酸(>300bp)

0.2μmPVDF膜0.45μmPVDF膜第4頁/共18頁

聚偏二氟乙烯（PVDF）采用通過疏水鍵和正電荷與靶分子結(jié)合（1）機械強度高，耐腐蝕，保質(zhì)期長（2）低背景，靈敏度高，優(yōu)異的信噪比（3）對大范圍的化學溶劑具有抵抗性(例如丙酮、DMSO，二甲基甲先胺等）

（4）蛋白結(jié)合能力強。BSA>125μg/cm2，山羊IgG>125μg/cm2，胰島素>125μg/cm2。（5）相容染色劑廣：考馬斯亮藍染色劑、酰胺黑、印度墨水、麗春紅、膠體

金、CPTS、甲苯胺藍、透射顯影和Sypro?ruby等。（6）應用范圍廣：WesternBlot、NorthernBlot、SouthernBlot、吸附分析、

氨基酸分析、N端蛋白質(zhì)測序、Dot/Slotblotting、糖蛋白顯色等。（7）適用多種顯色方：化學發(fā)光、常規(guī)顯色、同位素、標準染色、免疫熒光等。PVDF轉(zhuǎn)印膜特點第5頁/共18頁性能NC膜PVDF膜材料質(zhì)地易脆機械強度高溶劑耐受性無有背景低低SDS存在下蛋白質(zhì)結(jié)合80-100μg/cm2125-300μg/cm2操作程序緩沖液潤濕,避免氣泡使用前100%甲醇潤濕檢測方式常規(guī)染色，可用放射性和非放射性檢測常規(guī)染色，比較于NC膜，可用考馬斯亮藍染色，可用于ECL檢測，快速免疫檢測。適用范圍0.45μm一般蛋白0.2μm分子量小于20kD蛋白糖蛋白檢測和蛋白質(zhì)測序PVDF膜在幾乎所有性能方面都超越了傳統(tǒng)NC膜，因此目前PVDF膜逐漸在取代NC膜成為主流蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)印膜材料。

WesternBlot中PVDF膜與NC膜的選擇第6頁/共18頁由于PVDF膜與硝酸纖維素膜相比有許多突出的優(yōu)點，包括更好的蛋白質(zhì)保留率、更高的機械強度和更廣的化學相容性，因此被廣泛使用于免疫檢測實驗當中。其中更高的機械強度和更優(yōu)的化學相容性使PVDF膜成為免疫檢測中染色和二次免疫檢測時的理想選擇。第7頁/共18頁-濾紙凝膠膜濾紙+原理：蛋白因結(jié)合SDS而帶電荷，轉(zhuǎn)膜即在電場作用下從膠中轉(zhuǎn)至膜上的過程。PVDF轉(zhuǎn)印膜在WB中的應用第8頁/共18頁

濕轉(zhuǎn)濕式成功率高并特別適合用于分子量大于100KD的蛋白半干式轉(zhuǎn)膜速度快，適合與小分子量蛋白方法儀器特點轉(zhuǎn)膜半干轉(zhuǎn)第9頁/共18頁第10頁/共18頁

為檢測轉(zhuǎn)膜是否成功，可用相關(guān)染料對膜進行染色。1x立春紅5min染色前染色后轉(zhuǎn)膜后檢測：（立春紅染色）第11頁/共18頁暗室操作！顯色（結(jié)果檢測）

A液B液11:

膜ECL工作混合液滴加ECL工作液

顯影、定影免疫反應第12頁/共18頁第13頁/共18頁醫(yī)療衛(wèi)生行業(yè)生物制藥行業(yè)高校及科研院所PVDF轉(zhuǎn)印膜應用行業(yè)第14頁/共18頁MSPVDF轉(zhuǎn)印膜分析表第15頁/共18頁MSPVDF轉(zhuǎn)印膜銷售術(shù)語Application:Northern,Southern,andWesternBlot

Proteinsequencing

Dot/slotblotsAminoacidanalysis,solidphaseassaysystems

AdvantagesWesternblotting—PVDFtransfermembranesmanufacturedespeciallyforproteintransferandWesternblotapplicationswithhighsensitivityandlowbackground.Compatibleanddurable—Polyvinyldifluoride(PVDF)iscompatiblewithmostorganicsolvents,acidsandmildbases.Highproteinretentionevenafterhard

washingsteps.Easytouse—Compatiblewithcommonlyusedtransferconditionsanddetectionmethodssuchasstaining,immunodetection,fluorescence,orradiolabeling.Lot-to-lotconsistency—Qualitychecksensureconsistentbindingfordependable