遺傳毒性試驗123課件

遺傳毒性試驗主要內(nèi)容1.遺傳毒性試驗GBT16886.1-2001持久表面粘膜接觸類持久損傷表面接觸類持久血路接觸類長期組織/骨/牙接觸長期循環(huán)血液接觸長期植入類醫(yī)療器械3.遺傳毒性試驗內(nèi)容遺傳毒性-食品檢測Ames試驗鼠傷寒沙門氏菌的組氨酸營養(yǎng)缺陷型（his－）菌株，在含微量組氨酸的培養(yǎng)基中，除極少數(shù)自發(fā)回復(fù)突變的細胞外，一般只能分裂幾次，形成微菌落。受誘變劑作用后，大量細菌發(fā)生回復(fù)突變，自行合成組氨酸，發(fā)育成2倍以上陰性對照的菌落數(shù)。Ames試驗流程菌株鑒定鑒定內(nèi)容組氨酸缺陷性鑒定

TA97TA98TA100TA102TA97TA98TA100TA102無組氨酸有組氨酸R因子鑒定

TA97TA98TA100TA102青霉素沾有青霉素濾紙片四環(huán)素鑒定TA98TA102四環(huán)素沾有四環(huán)素濾紙片uvrB突變鑒定TA97TA98TA100TA102紫外線照射8s33cm菌株自發(fā)回復(fù)圖變數(shù)TA9790~180TA9830~50TA100100~200YA102240~320平板滲入試驗試驗前準備樣品劑量設(shè)定平板分組陰性陽性樣品TA97試驗底層培養(yǎng)基每支試管試驗原理在加入和不加入代謝活化系統(tǒng)的條件下，使培養(yǎng)的哺乳動物細胞暴露于受試物中。用中期分裂相阻斷劑（如秋水仙素或秋水仙胺）處理，使細胞停止在中期分裂相，隨后收獲細胞，制片，染色，分析染色體畸變。試驗流程染毒樣品設(shè)計三個劑量，0.2g/ml0.1g/ml0.05g/ml染毒過程分加S9混合物和不加S9混合物陰性S1陰性S1S2S2S3S3

陽性

陽性

-S9&+S9-S9陽性對照為甲磺酸甲酯+S9陽性對照為環(huán)磷酰胺秋水仙素處理，收細胞，制片消化細胞后加含血清培養(yǎng)液，以1200r/min離心7min，棄上清。加入0.075mol/L氯化鉀溶液7ml，于37℃水浴低滲處理7min，加入2ml固定液，以1500r/min離心5min~7min，棄去上清液。再加入7ml固定液，固定7min，以1500r/min離心7min，棄上清。同法再固定1~2次，棄上清，加入數(shù)滴新鮮固定液自然干燥，用姬姆薩染液染色。制片結(jié)論判斷在光學(xué)顯微鏡下每一試驗組選擇100個分散良好的中期分裂相進行染色體畸變分析染色體結(jié)構(gòu)異常包括：裂隙、斷裂、微小體，單體互換等用χ2

檢驗或其他適當?shù)娘@著性檢驗方法，對所得試驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)處理。當各劑量組與陰性(溶劑)對照組相比，畸變細胞率的增加有顯著性意義，并有劑量-反應(yīng)關(guān)系時；

或僅一個劑量組有顯著性意義的增加，并經(jīng)重復(fù)試驗證實時，可判為該受試物在本試驗中具有致突變性。當畸變率≤4.9%為陰性，5.0%~9.9%為可疑陽性，10%~19.9%為+，20%~49.9%為++，≥50%為+++注意事項1.劇毒物質(zhì)：敵克松、疊氮鈉、2-蒽基芴、1,8-二羥基蒽醌、多氯聯(lián)苯、甲磺酸甲酯2.操作中，避免菌株的交叉污染3.廢棄菌液煮沸10min處理4.低滲時間的把握5.染色體結(jié)構(gòu)異常的判斷擴項的實驗設(shè)備和試劑Ames實驗培養(yǎng)箱、水浴搖床、水浴箱、滅菌器、烘箱、普通冰箱、液氮灌、電子天平等

組氨酸、生物素、瓊脂粉、氯化鈉、檸檬酸、磷酸氫二鉀、磷酸氫氨鈉、硫酸鎂、葡萄糖、牛肉膏、胰胨、氯化鉀、氯化鎂、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、輔酶2、6-磷酸葡萄糖、氨芐青霉素、四環(huán)素、結(jié)晶紫、