梅毒的實(shí)驗(yàn)室診斷

梅毒的實(shí)驗(yàn)室診斷第一頁，共四十八頁，2022年，8月28日一、概述-梅毒病原體（一）、名詞由梅毒螺旋體感染引起的一種慢性全身性性傳播疾病是我國衛(wèi)生部規(guī)定的8種重點(diǎn)防治性病之一《中華人民共和國傳染病防治法》規(guī)定的乙類傳染病世界衛(wèi)生組織列為世界上最常見的50種傳染病之一

梅毒螺旋體（Treponemapallidum，TP）是梅毒的病原體，因其透明，不易著色，故又稱蒼白螺旋體

第二頁，共四十八頁，2022年，8月28日（二）、生物學(xué)特性小而纖細(xì)的螺旋狀微生物長5～20μm，粗細(xì)<0.2μm有6～12個(gè)規(guī)則的螺旋基本結(jié)構(gòu)為一原生質(zhì)的圓柱體，為兩層膜所圍繞行動(dòng)緩慢而有規(guī)律

-圍繞其長軸旋轉(zhuǎn)中前后移動(dòng)-伸縮其圈間之距離而移動(dòng)-全身彎曲如蛇行

第三頁，共四十八頁，2022年，8月28日（三）、繁殖繁殖方式與其生活環(huán)境有關(guān)近年來電子顯微鏡觀察，在培養(yǎng)條件下或在體內(nèi)適宜環(huán)境中為橫斷分裂，分裂時(shí)將軀干分裂成長短兩段分裂增代時(shí)間為30—33小時(shí)當(dāng)條件不利時(shí)，以分芽子繁殖生活發(fā)育周期:顆粒期、球形體期及螺旋體期，與所致疾病周期、隱伏發(fā)作及慢性病程有關(guān)

第四頁，共四十八頁，2022年，8月28日（四）、培養(yǎng)一般不能人工培養(yǎng)Nichols株（有毒株）能接種在家兔睪丸中或眼前房內(nèi)繁殖，能保持毒力Reiter株能生長繁殖，已喪失致病力Nichols株和Reiter株已廣泛用作多種梅毒血清學(xué)的診斷抗原第五頁，共四十八頁，2022年，8月28日(五）、生存條件厭氧寄生物，在人體內(nèi)可長期生存，體外不易生存干燥、肥皂水及一般消毒劑如1：1000苯酚、新潔爾滅、稀酒精均可于短時(shí)間將其殺死在血液中4℃經(jīng)3日可死亡，故在血庫冰箱冷藏3日以上的血液就無傳染性溫度的影響：41-42℃時(shí)可生活1-2小時(shí)，在48℃僅半小時(shí)即失去感染力，100℃立即死亡。對寒冷抵抗力大，在0℃時(shí)，可生活48小時(shí)，如將梅毒病損標(biāo)本置于冰箱內(nèi)，經(jīng)1周仍可致病。在低溫（-78℃）保存數(shù)年，仍可保持其形態(tài)、活動(dòng)及毒性在封存的生理鹽水稀釋的組織液中可生活10小時(shí)左右在潮濕的器具或濕毛巾中，亦可生存數(shù)小時(shí)在干燥環(huán)境中可見迅速死亡。第六頁，共四十八頁，2022年，8月28日（六）、宿主梅毒螺旋體只感染人類人是梅毒的唯一傳染源第七頁，共四十八頁，2022年，8月28日（七）、毒力因子目前未證明具有內(nèi)毒素或外毒素粘多糖和粘多糖酶是其主要毒力因子

第八頁，共四十八頁，2022年，8月28日（八）、致病性由于其表面有賴以生存的莢膜樣的粘多糖，由于粘多糖是宿主組織和血管支架的重要基質(zhì)成分，粘多糖被梅毒螺旋體分解后，組織受到損傷破壞，從而引起血管的塌陷，血供受阻，造成管腔閉合性動(dòng)脈內(nèi)膜炎，動(dòng)脈周圍炎及壞死，潰瘍等病變第九頁，共四十八頁，2022年，8月28日（九）、抗原1．表面特異性抗原：刺激機(jī)體產(chǎn)生特異凝集抗體及密螺旋體制動(dòng)或溶解抗體，后者加補(bǔ)體可溶解螺旋體2．螺旋體內(nèi)類屬抗原：可產(chǎn)生補(bǔ)體結(jié)合抗體，與非病原性螺旋體有交叉反應(yīng)3，螺旋體與宿主組織磷脂形成的復(fù)合抗原：當(dāng)螺旋體侵入組織后，組織中的磷脂可粘附在螺旋體上，形成復(fù)合抗原，此種復(fù)合抗原可刺激機(jī)體產(chǎn)生抗磷脂的自身免疫抗體，稱為反應(yīng)素（Aegagin），可與牛心肌或其他正常動(dòng)物心肌提取的類脂質(zhì)抗原起沉淀反應(yīng)（康氏試驗(yàn)）或補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)（華氏試驗(yàn)）第十頁，共四十八頁，2022年，8月28日(十）、免疫以細(xì)胞免疫為主，體液免疫只有一定的輔助防御作用當(dāng)螺旋體從體內(nèi)清除后可再感染，而且仍可出現(xiàn)一期梅毒癥狀此病周期性潛伏與再發(fā)的原因可能與體內(nèi)產(chǎn)生的免疫力有關(guān)第十一頁，共四十八頁，2022年，8月28日二、檢測方法-病原體檢查梅毒螺旋體檢查是診斷早期梅毒的最佳方法。診斷一期梅毒、二期梅毒時(shí)，可取患者的滲出液或淋巴結(jié)穿刺術(shù)得到的組織液，在暗視野顯微鏡下觀察螺旋體的特征性形態(tài)和運(yùn)動(dòng)方式.病原學(xué)檢查的主要方法有暗視顯微鏡檢查、鍍銀染色法和直接熒光法第十二頁，共四十八頁，2022年，8月28日暗視野顯微鏡檢查、鍍銀染色和熒光抗梅毒螺旋體單克隆抗體等檢查方法，直接鏡檢到梅毒螺旋體，在臨床可確診梅毒，且具有快速、方便、易操作的特點(diǎn)。暗視野顯微鏡檢查已被世界衛(wèi)生組織指定為性病實(shí)驗(yàn)室必備項(xiàng)目之一。螺旋體檢查是診斷早期現(xiàn)癥梅毒的最佳方法，對于患者的早期診斷、及時(shí)治療、預(yù)后和盡早切斷傳染源都有十分重要的意義。如未見到梅毒螺旋體，并不能排除患梅毒的可能性，第十三頁，共四十八頁，2022年，8月28日第十四頁，共四十八頁，2022年，8月28日暗視野顯微鏡檢查第十五頁，共四十八頁，2022年，8月28日鍍銀染色第十六頁，共四十八頁，2022年，8月28日

檢測方法-血清學(xué)檢測

根據(jù)檢測所用抗原不同，臨床血清試驗(yàn)分為兩大類：1.非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)2.梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)第十七頁，共四十八頁，2022年，8月28日

檢測方法-非梅毒螺旋體血清試驗(yàn)性病研究實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)（VDRL）不加熱血清反應(yīng)素試驗(yàn)（USR）血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)（RPR、TRUST）第十八頁，共四十八頁，2022年，8月28日檢測方法-非梅毒螺旋體血清試驗(yàn)所有的非梅毒螺旋體血清試驗(yàn)的抗原基本成分都一樣,其基本成分是心磷脂、卵磷脂和膽固醇抗原抗體結(jié)合形成復(fù)合物凝集成網(wǎng)狀沉淀顆粒被肉眼所見上述方法的敏感性和特異性都基本相似第十九頁，共四十八頁，2022年，8月28日檢測方法-非梅毒螺旋體血清試驗(yàn)RPR試驗(yàn)特點(diǎn)：在USR試劑成分的基礎(chǔ)上加入黑色碳顆粒作為沉淀的指示物用白色的硬紙片替代玻片血清不需要滅活不需要顯微鏡觀測結(jié)果可作定量試驗(yàn)有現(xiàn)成的試劑盒攜帶方便操作簡單價(jià)格便宜試驗(yàn)的結(jié)果可長期保存

第二十頁，共四十八頁，2022年，8月28日檢測方法-非梅毒螺旋體血清試驗(yàn)甲苯胺紅試驗(yàn)(TRUST)特點(diǎn)：其原理和成分與RPR試驗(yàn)相同用紅色的甲苯胺紅替代了碳顆粒其余的特點(diǎn)均與RPR相同第二十一頁，共四十八頁，2022年，8月28日非梅毒螺旋體血清試驗(yàn)原理示意圖第二十二頁，共四十八頁，2022年，8月28日RPR結(jié)果第二十三頁，共四十八頁，2022年，8月28日TRUST結(jié)果第二十四頁，共四十八頁，2022年，8月28日檢測方法非梅毒螺旋體血清試驗(yàn)臨床意義非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)方法簡單、快速、敏感性和特異性較好。適用于大量人群的篩查。早期梅毒硬下疳出現(xiàn)1周-2周后，血清可呈陽性。經(jīng)治療后血清滴度可下降并陰性，故可作為療效觀察、判愈、復(fù)發(fā)或再感染的指征。第二十五頁，共四十八頁，2022年，8月28日檢測方法-非梅毒螺旋體血清試驗(yàn)特點(diǎn)前帶現(xiàn)象

指非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)中，有時(shí)血清中存在高濃度的抗體時(shí)出現(xiàn)的弱陽性、不典型或陰性反應(yīng)的結(jié)果，而臨床上又象二期梅毒，此時(shí)將血清稀釋后再進(jìn)行試驗(yàn)，出現(xiàn)了陽性的結(jié)果，該現(xiàn)象稱為前帶現(xiàn)象。第二十六頁，共四十八頁，2022年，8月28日第二十七頁，共四十八頁，2022年，8月28日第二十八頁，共四十八頁，2022年，8月28日檢測方法-梅毒螺旋體血清試驗(yàn)

采用梅毒螺旋體作抗原，是特異性的抗原體反應(yīng)。梅毒螺旋體血球凝集試驗(yàn)（TPHA）梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(yàn)（TP-PA）熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗(yàn)（FTA-ABS）、梅毒螺旋體抗體酶聯(lián)免疫試驗(yàn)（ELSA-TP）梅毒螺旋體蛋白印跡試驗(yàn)（WB-Test）第二十九頁，共四十八頁，2022年，8月28日檢測方法-梅毒螺旋體血清試驗(yàn)

TPPATPPA試驗(yàn)原理與TPHA試驗(yàn)基本相同。TPPA試驗(yàn)用梅毒螺旋體致敏明膠顆粒替代TPHA試驗(yàn)中致敏羊紅細(xì)胞，此致敏顆粒與人血清中的抗梅毒螺旋體抗體結(jié)合，產(chǎn)生可見的凝集反應(yīng)，具有較高的敏感性。明膠粒子為洋紅色，在操作部步上也較為方便，出結(jié)果較快。檢測IgM或IgG抗體第三十頁，共四十八頁，2022年，8月28日檢測方法-梅毒螺旋體血清試驗(yàn)FTA-ABSFTA-ABS試驗(yàn)是檢測梅毒的“金標(biāo)準(zhǔn)”試驗(yàn)。其原理是將有完整形態(tài)的梅毒螺旋體作為抗原，加上經(jīng)吸收劑（用Reiter螺旋體制備而成）吸收過的梅毒患者血清形成抗原抗體復(fù)合物，再加入熒光素（FTIC）標(biāo)記的抗人免疫球蛋白，與抗梅毒螺旋體抗體結(jié)合，形成熒光的抗原抗體復(fù)合物。在熒光顯微鏡下，螺旋體顯出蘋果綠色的熒光，即為陽性反應(yīng)。第三十一頁，共四十八頁，2022年，8月28日+SheepredcellT.pallidum+SensitisedcellSensitisedcellSpecificAntibodyHemagglutinationTPPA/TPHA第三十二頁，共四十八頁，2022年，8月28日檢測方法-梅毒螺旋體血清試驗(yàn)梅毒螺旋體抗體酶聯(lián)免疫試驗(yàn)（ELSA-TP抗原采用超聲破碎的螺旋體抗原或重組抗原檢測IgM或IgG敏感性和特異性與其他試劑基本一致應(yīng)作進(jìn)一步評價(jià)第三十三頁，共四十八頁，2022年，8月28日梅毒診斷方法比較

RPR、TRUST、USR、VDRLTPHA、FTA-ABS間接EIA、雙抗原夾心EIA牛心磷脂完整病原體純化抗原梅毒非特異性抗原梅毒特異性抗原梅毒特異性抗原特異性中特異性高特異性高敏感性低敏感性中敏感性高肉眼判讀結(jié)果肉眼判讀結(jié)果機(jī)器判讀結(jié)果自動(dòng)化程度低自動(dòng)化程度低自動(dòng)化程度高單獨(dú)適用血液篩查單獨(dú)不適用血液篩查單獨(dú)適用血液篩查適用少批量樣本檢測適用少批量樣本檢測適用大批量樣本檢測價(jià)格低價(jià)格高價(jià)格中

注：反應(yīng)素存在生物學(xué)真陽性反應(yīng)、生物學(xué)假陽性反應(yīng)、人工假陽性反應(yīng)。第三十四頁，共四十八頁，2022年，8月28日

梅毒各期血清學(xué)檢驗(yàn)的陽性率（%）試驗(yàn)一期梅毒二期梅毒三期梅毒RPR8510075FTA-ABS8610097TPHA77100100

第三十五頁，共四十八頁，2022年，8月28日

2008年梅毒試劑評估參比試劑：1.美國BD公司生產(chǎn)的“梅毒快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)診斷試劑盒(RPR試劑盒)(批號：8095883)”

2.日本富士株式會社生產(chǎn)的“梅毒螺旋體抗體診斷試劑(凝集法)(TPPA試劑盒)(批號：VN80807)”

3.抗梅毒螺旋體抗體(IgG)檢測試劑盒(免疫印漬法)(16人份/盒)（批號：D081009A1）第三十六頁，共四十八頁，2022年，8月28日非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)檢測用試劑敏感性和特異性

試劑名稱生產(chǎn)廠家生產(chǎn)批號敏感性(%)特異性(%)

梅毒快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀上?？迫A生物技術(shù)有限公司2007062097.293.4卡片試驗(yàn)診斷試劑盒(RPR)梅毒甲苯胺紅不加熱血清上海榮盛生物技術(shù)有限公司2007050195.495.1試驗(yàn)診斷試劑盒(TRUST)梅毒甲苯胺紅不加熱血清蘭州生物制品研究所2007020192.296.2試驗(yàn)診斷試劑盒(TRUST)梅毒甲苯胺紅不加熱血清英科新創(chuàng)(廈門)科技有限公司200806760297.293.4試驗(yàn)診斷試劑(TRUST)梅毒甲苯胺紅不加熱血清鄭州安圖綠科生物工程有限公司2007050987.194.4試驗(yàn)診斷試劑盒(TRUST)第三十七頁，共四十八頁，2022年，8月28日梅毒螺旋體血清學(xué)檢測用試劑(ELISA法)的敏感性和特異性試劑名稱生產(chǎn)廠家生產(chǎn)批號敏感性(%)特異性(%)

梅毒螺旋體抗體診斷試劑珠海麗珠試劑有限公司2008061899.699.6(雙抗夾心法)(ELISA-TP)梅毒螺旋體抗體診斷試劑英科新創(chuàng)(廈門)科技有限公司200807750699.698.3(雙抗夾心法)(ELISA-TP)梅毒螺旋體抗體診斷試劑北京華大吉比愛生物技術(shù)有限公司2008091299.697.1(雙抗夾心法)(ELISA-TP)梅毒螺旋體抗體診斷試劑北京萬泰生物藥業(yè)有限N2008060699.299.6(雙抗夾心法)(ELISA-TP)梅毒螺旋體抗體診斷試劑北京現(xiàn)代高達(dá)生物技術(shù)20080600398.999.6(雙抗夾心法)(ELISA-TP)有限責(zé)任公司梅毒螺旋體抗體診斷試劑北京金豪制藥股份有限公司20080707698.998.3(雙抗夾心法)(ELISA-TP) 梅毒螺旋體抗體診斷試劑上?？迫A生物技術(shù)有限公司2008071497.793.8(雙抗夾心法)(ELISA-TP)

第三十八頁，共四十八頁，2022年，8月28日梅毒螺旋體血清學(xué)檢測用試劑(快速)的敏感性和特異性

試劑名稱生產(chǎn)廠家生產(chǎn)批號敏感性(%)特異性(%)

梅毒螺旋體抗體診斷北京萬泰生物藥業(yè)有限公司02008080398.196.3試紙盒(膠體金法)梅毒螺旋體抗體檢測英科新創(chuàng)(廈門)科技有限公司02712270295.893.8試紙條(膠體金)梅毒螺旋體抗體膠體韓國SD公司02503591.699.2金診斷試劑梅毒螺旋體抗體膠體艾康生物技術(shù)(杭州)有限公司20081021687.8100金診斷試劑

第三十九頁，共四十八頁，2022年，8月28日檢測方法-梅毒螺旋體血清試驗(yàn)的臨床意義作為非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)(如RPR等)初篩陽性標(biāo)本的確證試驗(yàn)。梅毒患者經(jīng)過抗梅治療后，ELSA、TPPA試驗(yàn)仍可陽性，故TPPA試驗(yàn)陽性不能作為療效觀察的指標(biāo)。ELSA、TPPA陽性不能區(qū)分既往感染和現(xiàn)癥感染，應(yīng)結(jié)合非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行診斷。第四十頁，共四十八頁，2022年，8月28日非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果解釋示意圖早期晚期一期二期早期潛伏晚期潛伏三期

治療前治療后

陽性陰性第四十一頁，共四十八頁，2022年，8月28日梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果解釋示意圖早期一期二期早期潛伏晚期晚期潛伏三期治療前治療后陽性陰性第四十二頁，共四十八頁，2022年，8月28日梅毒血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果的臨床意義總匯USRELISA意義RPRTPPAVDRLFTA-ABS__排除梅毒一期梅毒的早期