科學技術進步獎公示內容

科學技術進步獎公示內容一、項目名稱：肝癌侵襲轉移機制的研究及其應用二、提名單位：河北省衛(wèi)生和計劃生育委員會三、項目簡介：原發(fā)性肝癌是我國常見的惡性腫瘤之一，惡性程度高，易侵襲、轉移及復發(fā)，且預后差，目前急需解決的問題是肝癌的早期診斷和抑制肝癌的侵襲轉移。只有全面認識肝癌的生物學特性，才能有效控制肝癌的侵襲轉移。我們從以下方面進行研究。乙酰肝素酶抑制劑可以抑制腫瘤的生長及侵襲轉移，但目前對乙酰肝素酶的研究僅局限在其本身及下游作用機制方面，國內外尚未見對乙酰肝素酶表達調控機制的系統(tǒng)研究。Raf激酶抑制蛋白(Rafkinaseinhibitorprotein，RKIP)參與多條信號傳導通路的調控，在細胞生長、增殖、分化、凋亡等生理過程中發(fā)揮重要作用。RKIP在肝細胞癌中的作用及其與乙酰肝素酶的關系有重要的研究價值。我們通過檢測肝細胞癌組織中RKIP、乙酰肝素酶及其可能相關蛋白P-RKIP、p65和P-ERK的表達，了解RKIP與肝細胞癌臨床病理學特征的關系及其與P-RKIP、p65和P-ERK、乙酰肝素酶的相關性。進一步通過RKIP基因轉染或干擾體外培養(yǎng)的肝癌細胞，觀察上調或抑制RKIP表達后肝癌細胞增殖、凋亡、侵襲轉移能力的變化，明確RKIP在肝癌細胞侵襲轉移過程中的作用。最后，檢測RKIP表達或抑制后肝癌細胞Raf-MEK1/2-ERK1/2和NF-kB信號轉導通路相關蛋白和乙酰肝素酶蛋白的表達，了解RKIP在肝細胞癌侵襲轉移中的作用機制，RKIP是否通過下調控乙酰肝素酶表達，從而抑制肝癌細胞侵襲轉移，其機制是否與Raf-MEK1/2-ERK1/2和NF-kB信號轉導通路有關。斑螫素能夠抑制食管癌等惡性腫瘤細胞的生長并誘導其凋亡，并能夠抑制體外移植瘤的生長，而且具有抗肝癌的作用，因此斑螫酸鈉維生素B6可能對肝癌的侵襲轉移具有抑制作用。我們通過斑螫酸鈉維生素B6作用于肝癌細胞株，觀察細胞增殖、凋亡及侵襲力的變化，檢測肝癌細胞ERK1、P-ERK1、和乙酰肝素酶的表達，明確斑螫酸鈉維生素B6對肝癌細胞增殖、凋亡及侵襲力以及對乙酰肝素酶表達的影響，并進一步明確其機制。近年研究發(fā)現缺氧是實質性腫瘤微環(huán)境的基本特征之一，是腫瘤發(fā)生惡性轉化及轉移的啟動因子。腫瘤缺氧首先誘導缺氧誘導因子(hypoxiainduciblefactor,HIF)的表達，其中HIF-1與腫瘤血管生成最為密切，而且HIF-1a決定HIF的活性。目前HIF-1被認為是實體腫瘤的促發(fā)因素且與多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲轉移及預后相關。我們對HIF-1a與肝癌的關系進行了深入研究，首先從基因和蛋白水平，運用RT-PCR和免疫組織化學方法證實HIF-1a在肝癌組織及肝癌細胞株中表達水平；進一步用HIF-1a反義寡核甘酸和抑制劑作用于人肝癌細胞株，結果HIF-1a的表達下降，肝癌細胞的VEGF表達下調，體內外增殖力受到明顯抑制，表明以HIF-1為靶點的治療方法是可行的。目前認為腫瘤干細胞同時具有腫瘤細胞和干細胞的特性，如無限自我更新和分裂增殖能力，以及很強的分化能力，是腫瘤發(fā)生、發(fā)展的根源，腫瘤干細胞學說的提出為肝癌的研究和治療帶來了新的希望。近年來有報道CD133和CD90可能為腫瘤干細胞表面標記物，但檢索國內外文獻，有關CD133和CD90在肝癌中的表達及意義報道較少。因此，有必要擴大研究面，明確CD133+細胞是否為肝癌干細胞，進一步展開以CD133和CD90為標志的肝癌干細胞的研究對于闡明肝癌的發(fā)病機理、揭示肝癌的耐藥、復發(fā)和轉移的機制具有重要的意義，并為肝癌的靶向治療提供一個新的策略。研究表明CD133及CD90在肝癌的生長，侵襲和轉

移過程中發(fā)揮著重大作用，并與肝癌患者的預后密切相關，提示CD133及CD90陽性腫瘤細胞具有干細胞特點。然后懸浮培養(yǎng)法獲取CD133及CD90陽性人肝癌細胞株SMMC-7721干細胞樣細胞，應用羽扇豆醇對獲得的肝癌干細胞樣細胞凋亡、生長能力、成球能力、侵襲能力、遷移能力、粘附能力的作用，以及這些作用與羽扇豆醇濃度及作用時間的關系。為羽扇豆醇在肝癌治療中的應用提供了理論基礎。分析總結后的論文已在《BiochimicaetBiophysicaActa》、《腫瘤防治研究》、《中華腫瘤雜志》、《腫瘤》等國內外核心期刊上發(fā)表。四、全部完成人及技術貢獻（公示內容包括姓名、排名、技術職稱、工作單位、對本項目技術創(chuàng)造性貢獻、曾獲科學技術獎勵情況）：姓名排名技術職稱工作單位完成單位對本項目技術創(chuàng)造性貢獻曾獲科學技術獎勵情況王順祥1主任醫(yī)師教授河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院全面負責整個課題的設計規(guī)劃、實驗指導、人員任務安排、數據統(tǒng)計分析、文章發(fā)表等工作。期間以第一作者發(fā)表論文3篇，以通訊作者發(fā)表論文14篇，其中SCI一篇。2007年度河北省科技進步獎三等獎（第一）2017年度河北省中醫(yī)藥學會科學技術一等獎（第四）2017年河北醫(yī)學科技獎一等獎（第一）2015年河北醫(yī)學科技獎一等獎（第一）吳曉慧2副主任醫(yī)師河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院在“Raf激酶抑制蛋白介導的信號轉導對肝癌細胞侵襲轉移的影響”部分負責細胞培養(yǎng)、RT-PCR和Western-blot篩選出RKIP低表達肝癌細胞株和RKIP高表達細胞株、MTT檢測肝癌細胞增殖能力、流式細胞術（FCM）檢測肝癌細胞周期和凋亡、Matrigel侵襲實驗檢測細胞侵襲力。在“斑螫酸鈉維生素B6對肝癌細胞侵襲轉移的影響及機制的研究及應用”部分中負責項目的整體2007年度河北省科技進步獎三等獎（第二）2017年度河北省中醫(yī)藥學會科學技術一等獎（第一）2017年河北

實施，并采用蛋白質印跡法檢測斑螫酸鈉維生素B6對肝癌細胞SMMC-7721細胞中HPA、ERK1/2和p-ERK1/2蛋白表達的影響，分析實驗數據、撰寫論文；在“腫瘤內缺氧與肝癌侵襲轉移之間關系的研究及應用”、“肝癌干細胞與羽扇豆醇對肝癌肝細胞樣細胞作用的研究”工作中負責查閱文獻、免疫組化實驗、分析整理資料、論文撰寫工作。醫(yī)學科技獎一等獎（第二）2015年河北醫(yī)學科技獎一等獎（第二）楊寶明3主治醫(yī)師河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院在“Raf激酶抑制蛋白介導的信號轉導對肝癌細胞侵襲轉移的影響”部分負責統(tǒng)計數據、論文撰寫工作；在“斑螫酸鈉維生素B6對肝癌細胞侵襲轉移的影響及機制的研究及應用”研究中負責FCM法檢測斑螫酸鈉維生素B6對肝癌SMMC-7721細胞凋亡率的影響，結果顯示斑螫酸鈉維生素B6可促進細胞凋亡；在“腫瘤內缺氧與肝癌侵襲轉移之間關系的研究及應用”、“肝癌干細胞與羽扇豆醇對肝癌肝細胞樣細胞作用的研究”工作中負責RT-PCR工作，并同時負責統(tǒng)計數據，撰寫論文；期間以第一作者發(fā)表論文兩篇。2017年度河北省中醫(yī)藥學會科學技術一等獎（第二）2015年河北醫(yī)學科技獎一等獎（第四）李建坤4主治醫(yī)師河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院在“Raf激酶抑制蛋白介導的信號轉導對肝癌細胞侵襲轉移的影響”部分負責上調Raf激酶抑制蛋白的表達對肝癌細胞生物學行為的影響；在“斑螫酸鈉維生素B6對肝癌細胞侵襲轉移的影響及機制的研究及應用”研究中負責細胞培養(yǎng)并完成Transwell侵襲實驗，檢測細胞侵襲能力的變化；在“腫瘤內缺氧與肝癌侵襲轉移之間關系的研究及應用”工作中負責部分負責細胞培養(yǎng)、Westernblot實驗、裸鼠實驗。2017年度河北省中醫(yī)藥學會科學技術一等獎（第三）2017年河北醫(yī)學科技獎一等獎（第五）2015年河北醫(yī)學科技獎一等獎（第三）張越5主治醫(yī)師河北醫(yī)科河北醫(yī)科查閱資料、統(tǒng)計數據，撰寫論文山大學第四醫(yī)院大學第四醫(yī)院馮6主治醫(yī)河北河北查閱資料、統(tǒng)計數據，撰寫論文寧師醫(yī)科醫(yī)科寧大學大學第四第四醫(yī)院醫(yī)院五、主要完成單位及創(chuàng)新推廣貢獻、推廣應用及經濟社會效益情況：本項目為河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院完成，所應用實驗設備、器材、藥品均為河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院科研中心提供，項目組主要人員均為河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院人員。發(fā)表論文及研究成果產權屬于本單位。臨床利用手術切除的肝癌患者標本檢測HIF1、VEGF、Raf激酶抑制蛋白及其相關通路蛋白的表達，術后給予個體化綜合治療，密切監(jiān)測患者的復發(fā)轉移情況。有助于客觀把握肝癌的生物學特征，有利于臨床上評估肝癌患者的預后及轉移復發(fā)，并指導治療，尤其是索拉菲尼為主的靶向治療。同時祖國傳統(tǒng)醫(yī)學也可以在肝癌的治療方面發(fā)揮積極的作用。相關論文已在《BiochimicaetBiophysicaActa》、《腫瘤防治研究》、《中華腫瘤雜志》等國內外核心期刊上發(fā)表20余篇。該研究結果已被國內同行密切關注，在河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院和河北省人民醫(yī)院得到應用。六、主要知識產權證明目錄、代表性論文專著目錄：本項目由河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院承擔，為第一完成單位，知識產權歸屬河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院。發(fā)表相關論文如下：[1]XiaohuiWu（吳曉慧），YongjiangYang（楊永江），ZhuoXu（徐卓），JiankunLi（李建坤），BaomingYang（楊寶明），NingningFeng（馮寧寧），YueshanZhang（張越山），ShunxiangWang（王順祥）.Rafkinaseinhibitorproteinmediatedsignalinginhibitsinvasionandmetastasisofhepatocellularcarcinoma.BiochimicaetBiophysicaActa，2016，1860（2）:384-391.（通訊作者：王順祥）[2]吳曉慧，王順祥，楊永江，李建坤，徐卓，唐瑞峰Raf激酶抑制蛋白與肝細胞癌侵襲轉移的關系.中華腫瘤雜志[J],2011,33（5）:358-362[3]吳曉慧，王順祥，王士杰，楊永江，李建坤，彭利，唐瑞峰，徐卓.肝癌組織中Raf激酶抑制蛋白的表達及其臨床意義.第三軍醫(yī)大學學報[J],2009,31（5）：416-419[4]吳曉慧，張越山，王順祥，李建坤.肝癌中RKIP與HPA的表達及臨床意義.腫瘤防治研究[J],2014,41（2）:166-167[5]王順祥，高峰，吳曉慧，宋西進，李建坤，TNF-a及IL-1B促進肝癌細胞系SMMC-7721乙酰肝素酶表達.基礎醫(yī)學與臨床[J],2007,27（12）:1352-1355[6]吳曉慧，王順祥，施喆，王超，張越山，馮寧寧.斑螫酸鈉維生素B6對肝癌SMMC-7721細胞中乙酰肝素酶表達的抑制作用[J].腫瘤，2015,35（10）:1092-1097[7]吳曉慧，白喜豐，施喆，王超，馮寧寧，王順祥.斑螫酸鈉維生素B6對肝癌細胞侵襲力的抑制作用及機制.中成藥[J].2016,38(11):2487-2489[8]吳曉慧，王順祥，楊永江，李建坤，彭利，唐瑞峰，王士杰Raf激酶抑制蛋白和P-ERK在肝細胞癌中的表達及其臨床意義.腫瘤[J].2008,28(10):869-872[9]吳曉慧，王順祥，楊永江，李建坤，彭利，唐瑞峰，王士杰肝癌組織中Raf激酶抑制蛋白和磷酸化Raf激酶抑制蛋白的表達及其意義.腫瘤防治研究仃].2009,36(3):221-224吳曉慧，王順祥，崔大鵬，李建坤，楊寶明CD133和CD90在肝細胞癌中的表達及其意義.中華肝臟病雜志[J].2011,19(5):376-377楊寶明,王順祥,吳曉慧,李建坤,黃寧,張越山，馮寧寧.HIF-1a反義寡核甘酸對肝癌細胞增殖凋亡的影響及機制[J].河北醫(yī)藥.2016,38(5):645-649王順祥,李建坤,吳曉慧,高峰,宋西進,彭利,張萌,唐瑞峰.HPA與CXCR4的表達及其與肝癌浸潤轉移的關系[J].腫瘤，2007,27(4):294-297吳曉慧，王順祥，李建坤，彭利，張萌，肖冰.HIF-1a和VEGF的表達與肝細胞癌侵襲轉移的關系.腫瘤防治研究仃].2007,34(7):504-507吳曉慧，王順祥，裴志忠，馮寧寧，李建坤，張越山.HIF1a對人肝癌細胞MDR1表達的影響.河北醫(yī)科大學學報[J]. 2011,32(1):23-26吳曉慧，王順祥，楊永江，李建坤.YC-1對人肝細胞癌裸鼠移植瘤的影響及其機制.腫瘤防治研究仃].2011,38(8):895-898楊寶明，王順祥，黃寧，吳曉慧，李建坤HIF-1a抑制劑YC-1對肝癌細胞增殖凋亡的影響及機制.河北醫(yī)科大學學報[J].2011,32(11)1268-1274吳曉慧，王順祥，周少英，李建坤，張越山.肝癌組織、缺氧SMMC-7721細胞中HPA的表達變化及機制探討.山東醫(yī)藥[J].2010,50(42):19-21王順祥，裴志忠，吳曉慧，李建坤，楊永江YC-1對人肝癌細胞缺氧誘導因子1a及血管內皮生長因子表達的影響.中華肝臟病雜志[J].2009,17(4):308-309王順祥，吳曉慧，高峰，宋西進，李建坤，彭利，唐瑞峰，張萌，肖燕，張風瑞，缺氧對肝細胞癌乙酰肝素酶表達的的影響.第四屆中國腫瘤學術大會暨第五屆海峽兩岸腫瘤學術會議論文集.中國抗癌協(xié)會,2006:2.王順祥，李建坤，吳曉慧，高峰，彭利，唐瑞峰，張萌，肖燕，張風瑞，HPA與CXCR4的表達及其與肝癌浸潤轉移的關系.第四屆中國腫瘤學術大會暨第五屆海峽兩岸腫瘤學術會議論文集.中國抗癌協(xié)會,2006:1.王順祥，高峰，宋西進，吳曉慧，彭利，唐瑞峰，張萌，肖燕，張風瑞，TNF-a和IL-1B對肝癌細胞乙酰肝素酶表達的影響第四屆中國腫瘤學術大會暨第五屆海峽兩岸腫瘤學術會議論文集.中國抗癌協(xié)會,2006:2.王順祥，吳曉慧，李建坤，楊永江，彭利，唐瑞峰，Ca2+信號對肝癌細胞乙酰肝素酶表達的影響.第五屆中國腫瘤學術大會暨第七屆海峽兩岸腫瘤學術會議、國際腫瘤細胞與基因治療學會會議、第二屆中日腫瘤介入治療學術會議論文集.中國環(huán)境誘變劑學會2008:1.王順祥，李建坤，吳曉慧，HIF-1a的表達與肝細胞癌生物學特征及增殖、凋亡的關系.中華醫(yī)學會腫瘤學分會.第五屆中國腫瘤學術大會暨第七屆海峽兩岸腫瘤學術會議、國際腫瘤細胞與基因治療學會會議論文集中國環(huán)境誘變劑學會,2008:1.王順祥，吳曉慧，李建坤，楊永江，彭利，唐瑞峰，YC-1對人肝癌細胞HIF-1a及VEGF表達的影響.中華醫(yī)學會腫瘤學分會.第五屆中國腫瘤學術大會暨第七屆海峽兩岸腫瘤學術會議、國際腫瘤細胞與基因治療學會會議論文集中國環(huán)境誘變劑學會,2008:1.王順祥，吳曉慧，李建坤，楊永江，彭利，唐瑞峰，缺氧對肝細胞癌乙酰肝素酶表達的的影響.中華醫(yī)學會腫瘤學分會.第五屆中國腫瘤學術大會暨第七屆海峽兩岸腫瘤學術會議、國際腫瘤細胞與基因治療學會會議論文集.中國環(huán)境誘變劑學會,2008:1.王順祥，史帥，楊寶明，吳曉慧，李建坤，羽扇豆醇對肝癌細胞株HepG2抑制作用的研究..第八屆中國腫瘤學術大會暨第十三屆海峽兩岸腫瘤學術會議論文匯編.中國抗癌協(xié)會,2014:1.王順祥，田孜博，楊寶明，吳曉慧，李建坤，羽扇豆醇對人肝癌細胞Wnt通路影響的研究.中國免疫學會.第九屆全國免疫學學術大會論文集.中國免疫學會,2014:1.七、項目曾獲科技獎勵情況：《Raf激酶抑制蛋白介導的信號轉導對肝癌細胞乙酰肝素酶表達的影響》獲2017年河北醫(yī)學科技獎一等獎?！赌[瘤內缺氧與肝癌血管生成、生物學特性之間關系的研究及臨床應用》獲2015年河北醫(yī)學科技獎一等獎?！栋唧徕c維生素B6對肝癌細胞乙酰肝素酶表達的影響及機制》獲2017年度河北省中醫(yī)藥學會科學技術一等獎八、完成人合作關系說明及完成人合作關系情況匯總（要簡要敘述在項目中的合作經歷，包括合作時間、方式及共同產出，并提供相關佐證材料來證明是真實合作，嚴禁拼湊報獎）：完成人合作關系說明第1完成人王順祥，河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院肝膽外科主任，主任醫(yī)師，教授，博士，全面負責整個課題的設計規(guī)劃、實驗指導、人員任務安排、數據統(tǒng)計分析、文章發(fā)表等工作。期間以第一作者發(fā)表論文3篇，以通訊作者發(fā)表論文14篇，其中SCI一篇。合作時間：2007-2017；合作方式：共同研究、論文合著、共同獲獎；合作成果：論文、獲獎。第2完成人吳曉慧，2007年博士研究生畢業(yè)，于河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院工作，參加該項目組，在“Raf激酶抑制蛋白介導的信號轉導對肝癌細胞侵襲轉移的影響”部分負責細胞培養(yǎng)、RT-PCR和Western-blot篩選出RKIP低表達肝癌細胞株和RKIP高表達細胞株、MTT檢測肝癌細胞增殖能力、流式細胞術（FCM）檢測肝癌細胞周期和凋亡、Matrigel侵襲實驗檢測細胞侵襲力。在“斑螫酸鈉維生素B6對肝癌細胞侵襲轉移的影響及機制的研究及應用”部分中負責項目的整體實施，并采用蛋白質印跡法檢測斑螫酸鈉維生素B6對肝癌細胞SMMC-7721細胞中HPA、ERK1/2和p-ERK1/2蛋白表達的影響，分析實驗數據、撰寫論文；在“腫瘤內缺氧與肝癌侵襲轉移之間關系的研究及應用”工作中負責查閱文獻、免疫組化實驗、分析整理資料、論文撰寫工作。合作時間：2007-2017；合作方式：共同研究、論文合著、共同獲獎；合作成果：論文、獲獎。第3完成人楊寶明，2009年碩士研究生畢業(yè)，于河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院工作，參加該項目組，在“Raf激酶抑制蛋白介導的信號轉導對肝癌細胞侵襲轉移的影響”部分負責統(tǒng)計數據、論文撰寫工作；在“斑螫酸鈉維生素B6對肝癌細胞侵襲轉移的影響及機制的研究及應用”研究中負責FCM法檢測斑螫酸鈉維生素B6對肝癌SMMC-7721細胞凋亡率的影響，結果顯示斑螫酸鈉維生素B6可促進細胞凋亡；在“腫瘤內缺氧與肝癌侵襲轉移之間關系的研究及應用”工作中負責RT-PCR工作，并同時負責統(tǒng)計數據，撰寫論文；期間以第一作者發(fā)表論文兩篇。合作時間：2009-2017；合作方式：共同研究、論文合著、共同獲獎，合作成果：論文、獲獎。第4完成人李建坤，2007年碩士研究生畢業(yè)，于河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院工作，參加該項目組，在“Raf激酶抑制蛋白介導的信號轉導對肝癌細胞侵襲轉移的影響”部分負責上調Raf激酶抑制蛋白的表達對肝癌細胞生物學行為的影響；在“斑螫酸鈉維生素B6對