(2.19)-第十五章病毒感染的檢查方法與防治原則

第二十四章病毒感染的檢查方法與防治原則重點難點重點病毒培養(yǎng)標本采集與處理原則病毒分離培養(yǎng)方法病毒在培養(yǎng)細胞中的增殖指標病毒感染特異性預(yù)防方法難點病毒鑒定技術(shù)病毒感染的診斷方法第一節(jié)病毒感染的檢查方法目錄一、標本的采集與處理二、病毒的分離培養(yǎng)與鑒定三、病毒感染的診斷原則基本與細菌相似，但應(yīng)注意：

1.發(fā)病早期或急性期采集

2.污染標本用“雙抗”或兩性霉素B處理

3.低溫保存，盡快送檢

4.血清學診斷采集雙份血清（早期和恢復(fù)期）一、標本的采集與處理病毒病原學診斷的金標準，不適用于臨床診斷，適合于實驗室研究和流行病學調(diào)查1.動物接種2.雞胚培養(yǎng)3.細胞培養(yǎng)二、病毒的分離培養(yǎng)與鑒定（一）病毒的分離培養(yǎng)1.動物接種目前較少應(yīng)用應(yīng)用：無敏感細胞培養(yǎng)的病毒、狂犬病病毒、乙型腦炎病毒2.雞胚培養(yǎng)一般選用孵化9～14d雞胚卵黃囊接種：乙腦病毒羊膜腔接種：流感病毒初次分離尿囊腔接種：流感病毒傳代培養(yǎng)絨毛尿囊膜接種：天花、牛痘、皰疹病毒3.細胞培養(yǎng)（1）細胞分類根據(jù)細胞生長方式單層細胞培養(yǎng)懸浮細胞培養(yǎng)根據(jù)細胞來源、染色體特征及傳代次數(shù)原代細胞----敏感性高但來源困難二倍體細胞----多次連續(xù)傳代會出現(xiàn)細胞老化和衰亡傳代細胞系---對病毒敏感性穩(wěn)定，便于保存常用鑒定方法：形態(tài)學鑒定：電子顯微鏡血清學鑒定：用已知抗體鑒定病毒種、型和亞型。常采用免疫學方法分子生物學鑒定：主要檢測病毒核酸。主要方法有核酸擴增、核酸雜交、基因測序等（二）、病毒的鑒定（二）、病毒的鑒定3.病毒在細胞培養(yǎng)中的鑒定細胞病變效應(yīng)（CPE）：細胞聚集、融合、壞死、脫落溶解或形成包涵體等紅細胞吸附：包膜上帶有血凝素的病毒感染細胞后，宿主細胞膜表達病毒血凝素，與加入的脊椎動物紅細胞結(jié)合。若預(yù)先加入相應(yīng)抗體，則能中和細胞膜上血凝素，稱為紅細胞吸附抑制試驗。干擾作用：抑制其后加入病毒的增殖，阻抑后者特有的CPE細胞代謝改變：pH值改變1.50%組織細胞感染量（TCID50）測定病毒系列稀釋后接種于單層細胞，培養(yǎng)后觀察CPE，以感染50%細胞的最高稀釋度為判定終點，判斷病毒的感染性和毒力。2.紅細胞凝集試驗----血凝試驗將含有血凝素的病毒接種于雞胚或細胞后，收集雞胚羊膜腔液、尿囊液或細胞培養(yǎng)液，加入動物紅細胞后出現(xiàn)紅細胞凝集的現(xiàn)象。（三）病毒數(shù)量和感染性鑒定3.空斑形成試驗將適量稀釋的病毒懸液接種于敏感單層細胞中，經(jīng)一定時間培養(yǎng)后，由于病毒增殖使感染細胞溶解脫落，形成肉眼可見的空斑。一個空斑是一個病毒增殖所致，計數(shù)空斑數(shù)可推算樣品中活病毒數(shù)量，通常以每毫升病毒液的空斑形成單位表示，PFU/ml。1.形態(tài)學檢查電鏡檢查病毒顆粒，光鏡檢查病毒感染細胞2.病毒成分檢測：病毒蛋白抗原（ELISA/IF/RIA）、病毒核酸(PCR/northernblot/southernblot/genechip)3.血清學診斷中和試驗血凝抑制試驗特異性IgM抗體檢測（三）病毒感染的診斷第二節(jié)病毒感染的特異性預(yù)防目錄一、病毒感染的特異性預(yù)防二、病毒感染的治療1.人工主動免疫以病毒抗原刺激機體，使其主動產(chǎn)生抗病毒免疫應(yīng)答，預(yù)防疾病。常用生物制品：滅活疫苗(狂犬病疫苗、HAV)、減毒活疫苗（流感、麻疹）、亞單位疫苗（去除與激發(fā)保護性免疫無關(guān)的成分）、基因工程疫苗(乙肝)、重組載體疫苗（HAV/HBV）、核酸疫苗（DNA疫苗）等。2.人工被動免疫給予機體特異性免疫產(chǎn)物，如免疫球蛋白（人血清丙種球蛋白）、細胞免疫制劑（IFN/IL/TNF/CSF）。一、病毒感染的特異性預(yù)防1.抑制病毒生物合成的藥物抑制病毒基因的轉(zhuǎn)錄和復(fù)制：核苷類藥物---碘苷、阿昔洛韋、阿糖腺苷等；非核苷類藥物---奈韋拉平蛋白酶抑制劑：沙奎那韋干擾素及誘生劑---polyI:C、甘草甜素、蕓芝多糖2.整合酶抑