第八章 人體健康

第八章人體健康第一頁，共四十七頁，2022年，8月28日幾種重大疾病癌癥心血管疾?。焊哐獕骸用}粥樣硬化（冠心?。┌滩魅拘约膊。焊窝?、肺結(jié)核、流感第二頁，共四十七頁，2022年，8月28日癌癥化學(xué)致癌物：占80％以上放射性物質(zhì)病毒第三頁，共四十七頁，2022年，8月28日原癌基因是一些與調(diào)節(jié)和控制細(xì)胞生長、分裂和細(xì)胞周期相關(guān)的基因。原癌基因的結(jié)構(gòu)變化或者失控就會演變成癌基因。原癌基因的結(jié)構(gòu)變化或者失控就會演變成癌基因。抑癌細(xì)胞：編碼防止細(xì)胞無節(jié)制分裂的蛋白的基因。第四頁，共四十七頁，2022年，8月28日一、非特異性防御及淋巴系統(tǒng)人體對病原體侵害的防御共設(shè)置了三道防線。（1）皮膚、口腔、鼻腔、消化道與呼吸道中的黏膜及其分泌物等構(gòu)成了第一道防線。第一道防線對病原體不具有選擇性或特異性，因此稱為非特異性防御。第五頁，共四十七頁，2022年，8月28日（2）部分侵入到組織或細(xì)胞內(nèi)的病原體還會受到人體內(nèi)特殊免疫細(xì)胞與化學(xué)成分的抵御和攻擊，吞噬作用、抗菌蛋白和炎癥反應(yīng)等構(gòu)成了人體抵御病原體入侵的第二道防線。這些特殊的免疫細(xì)胞與化學(xué)成分一般都是淋巴系統(tǒng)的組成部分。第六頁，共四十七頁，2022年，8月28日人體的淋巴系統(tǒng)是各種免疫細(xì)胞協(xié)同作用的網(wǎng)狀系統(tǒng)，它們由淋巴管、淋巴結(jié)和包括胸腺、骨髓、脾臟和扁桃體等器官共同組成。第七頁，共四十七頁，2022年，8月28日在人體及哺乳動物中最重要的一類非特異性防御細(xì)胞是白細(xì)胞。它們既可存在于血管中，又可分布于組織液中。巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞是3種具有非特異性防御作用的白細(xì)胞。第八頁，共四十七頁，2022年，8月28日巨噬細(xì)胞由單核細(xì)胞（一種吞噬性白細(xì)胞）特化而來，細(xì)胞內(nèi)富含溶酶體，可以通過其伸展出的偽足捕捉細(xì)菌和病毒。巨噬細(xì)胞可以通過其伸展出的偽足捕捉細(xì)菌第九頁，共四十七頁，2022年，8月28日中性粒細(xì)胞吞噬受感染組織中的細(xì)菌和病毒釋放出殺死細(xì)菌的其他化學(xué)物質(zhì)第十頁，共四十七頁，2022年，8月28日自然殺傷細(xì)胞不直接攻擊入侵的微生物通過增加質(zhì)膜的通透性來殺死受到病毒感染的細(xì)胞第十一頁，共四十七頁，2022年，8月28日人體非特異性防御系統(tǒng)中抗菌蛋白可以直接攻擊細(xì)菌和病毒，阻礙其復(fù)制。例：干擾素的作用機(jī)理研究發(fā)現(xiàn)，這種抗菌蛋白的短期免疫作用對于抵御引起流感和普通感冒的病毒比較有效。第十二頁，共四十七頁，2022年，8月28日干擾素（IFN）1957年Isaacs和Indemann用滅活的流感病毒作用于雞胚后，可使細(xì)胞產(chǎn)生一種干擾病毒繁殖的可溶性物質(zhì)，并將這種物質(zhì)命名為干擾素最早被發(fā)現(xiàn)研究最多第一個被克隆第一個用于臨床治療干擾素是一種在同種細(xì)胞上具有廣譜抗病毒活性的蛋白質(zhì)。第十三頁，共四十七頁，2022年，8月28日干擾素的分類INF-αINF-βINF-γINF-ωINF-τ25個亞型4個亞型4個亞型α1bα2a氨基酸序列個別氨基酸差異第十四頁，共四十七頁，2022年，8月28日三種主要干擾素比較INF-αINF-βINF-γ位置9號9號12號基因產(chǎn)物大小188-189Aa187Aa166Aa成熟產(chǎn)物大小165-166Aa166Aa143Aa主要產(chǎn)生細(xì)胞白細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞成纖維細(xì)胞、胚胎細(xì)胞、羊膜細(xì)胞、上皮細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞活化T細(xì)胞、NK細(xì)胞第十五頁，共四十七頁，2022年，8月28日干擾素生物學(xué)活性抑制病毒等細(xì)胞內(nèi)微生物的增殖抗細(xì)胞增殖通過作用于巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞而進(jìn)行免疫調(diào)節(jié)改變細(xì)胞表面的狀態(tài)，使負(fù)電荷增多，組織相容性抗原表達(dá)增加增加細(xì)胞對雙鏈DNA的敏感性第十六頁，共四十七頁，2022年，8月28日干擾素的用途病毒性疾?。浩胀ǜ忻啊捳钚越悄ぱ?、帶狀皰疹、水痘、慢性活動性乙型肝炎惡性腫瘤：成骨肉瘤、乳腺癌、多發(fā)性骨髓瘤、黑色素瘤、淋巴瘤、白血病、腎細(xì)胞癌、鼻咽癌等，可獲得部分緩解用于病毒引起的良性腫瘤，控制疾病發(fā)展第十七頁，共四十七頁，2022年，8月28日重組干擾素國外：1986年rHuIFN-α2a和rHuIFN-α2b上市1990年rHuIFN-β上市1993年rHuIFN-γ上市國內(nèi)：1989年申報，1993年試生產(chǎn)rHuIFN-α1b同期，rHuIFN-α2a和rHuIFN-γ批準(zhǔn)上市第十八頁，共四十七頁，2022年，8月28日中國上市的主要重組干擾素劑型IFN-α2a?？堤ㄩL春生物制品研究所）萊福?。ㄩL生藥業(yè)）迪恩安（遼寧生物制品研究所）因特粉（沈陽三生制藥公司）貝而芬（新大洲藥業(yè)公司）毛細(xì)胞白血病乙、丙、丁型肝炎原發(fā)性肝癌各種惡性腫瘤第十九頁，共四十七頁，2022年，8月28日中國市場上主要重組干擾素劑型賽若金（深圳科興公司）毛細(xì)胞白血病慢性乙、丙、型肝炎慢性粒細(xì)胞白血病尖銳濕疣慢性宮頸炎皰疹性角膜炎IFN-α1b干擾靈（上海生物制品研究所）毛細(xì)胞白血病慢性乙、丙、型肝炎第二十頁，共四十七頁，2022年，8月28日中國上市的主要重組干擾素劑型IFN-α2b安達(dá)芬（安科生物制品公司）隆化諾（華新生物制品公司）安福萊（浙江漢生制藥公司）急慢性乙型肝炎毛細(xì)胞白血病丙型肝炎尖銳濕疣慢性粒細(xì)胞白血病生殖器皰疹等病毒病腫瘤第二十一頁，共四十七頁，2022年，8月28日傳統(tǒng)方法生產(chǎn)干擾素第二十二頁，共四十七頁，2022年，8月28日傳統(tǒng)方法生產(chǎn)干擾素成本高組分多純度低，活性低產(chǎn)品不穩(wěn)定第二十三頁，共四十七頁，2022年，8月28日啟動種子→制備種子液→發(fā)酵培養(yǎng)→粗提→精提→半成品制備→半成品檢定→分裝→凍干→成品檢定→成品包裝基因工程干擾素的生產(chǎn)工藝

第二十四頁，共四十七頁，2022年，8月28日基因工程干擾素的純化提取：離心、冰浴超聲破碎、離心、超濾濃縮、離子層析純化：DE-52柱純化、利用不同濃度的NaCl磷酸緩沖液洗滌，收集第二十五頁，共四十七頁，2022年，8月28日基因干擾素質(zhì)量檢驗－－半成品（１）干擾素效價測定：用細(xì)胞病變抑制法，以wish細(xì)胞、VSV病毒為基本檢測系統(tǒng)。測定中必須用國家或國際參考品校準(zhǔn)為國際單位（２）蛋白質(zhì)含量測定及比活性：以福林酚法（３）純度測定：SDS、高效液相色譜反相柱或ＧＰＣ柱（４）相對分子質(zhì)量測定：SDS第二十六頁，共四十七頁，2022年，8月28日（５）殘余外源性DNA含量測定：放射性核素或生物素探針法（６）殘余血清IgG含量測定：親和層析（７）殘余抗生素活性測定（８）紫外光譜掃描（９）肽圖測定：CNBr裂解法（１０）等電點(diǎn)測定：等電點(diǎn)聚焦電泳（１１）無菌試驗、熱原質(zhì)試驗第二十七頁，共四十七頁，2022年，8月28日基因干擾素質(zhì)量檢驗－成品物理性狀：凍干制品白色或微黃色疏松體鑒別試驗：應(yīng)用ELISA或中和試驗水分測定：水分低于３％無菌試驗熱原質(zhì)試驗干擾素效價測定安全試驗第二十八頁，共四十七頁，2022年，8月28日炎癥反應(yīng)也是一種非特異性防御現(xiàn)象。炎癥與發(fā)燒：白細(xì)胞遭遇入侵微生物時會釋放出一種調(diào)節(jié)性化學(xué)分子白細(xì)胞介素-1，白細(xì)胞介素-1經(jīng)過血液輸送到大腦，與細(xì)菌內(nèi)毒素共同作用刺激下丘腦中神經(jīng)元，導(dǎo)致發(fā)燒。體溫升高（發(fā)燒）可刺激白細(xì)胞的吞噬作用，還可以增加肝臟和脾臟中鐵的濃度以降低血液中鐵的濃度。發(fā)燒對機(jī)體也有傷害作用。第二十九頁，共四十七頁，2022年，8月28日（3）第三道防線：特異性免疫特異性免疫的發(fā)現(xiàn)：天花JennerPasteur可以引起人或動物體內(nèi)免疫應(yīng)答的特殊外來物質(zhì)稱為抗原。人體和哺乳動物對不同的抗原具有特殊的識別能力，并能立即作出相應(yīng)的反應(yīng)，釋放出許多直接攻擊入侵抗原的細(xì)胞，或者通過另一類細(xì)胞制造出相應(yīng)的具有識別抗原功能的防御性蛋白質(zhì)，我們把這些特異性的蛋白質(zhì)稱為抗體。第三十頁，共四十七頁，2022年，8月28日骨髓種牛痘或患天花、麻疹等疾病痊愈以后，人體一種稱為B細(xì)胞的淋巴細(xì)胞產(chǎn)生出游離于體液中的抗體蛋白，依靠B細(xì)胞的免疫方式稱為體液免疫。人體還能針對病原體產(chǎn)生出一種稱為T細(xì)胞的淋巴細(xì)胞直接對病原體進(jìn)行攻擊，依靠T細(xì)胞的免疫方式稱為細(xì)胞免疫。B細(xì)胞和T細(xì)胞的分化特異性免疫第三十一頁，共四十七頁，2022年，8月28日二、特異性免疫識別抗原性病原體和啟動免疫應(yīng)答當(dāng)一種病毒或細(xì)菌突破了非特異性防御由呼吸道進(jìn)入人體后，巨噬細(xì)胞便會立即啟動免疫應(yīng)答。MHC（組織相容性復(fù)合體）第三十二頁，共四十七頁，2022年，8月28日免疫系統(tǒng)的T細(xì)胞通過細(xì)胞表面MHC蛋白的進(jìn)行自我與非我的識別。MHC分子嵌合抗原的細(xì)胞（抗原呈遞細(xì)胞）將加工過的抗原提交給T細(xì)胞，進(jìn)一步激活細(xì)胞毒性T細(xì)胞，最終殺死被病毒和細(xì)菌感染的細(xì)胞。第三十三頁，共四十七頁，2022年，8月28日細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答可以防御病毒感染和癌癥，殺死并消滅被感染的體細(xì)胞，同時也消滅了其中的病毒等病原體。T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫過程三、T細(xì)胞及細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答第三十四頁，共四十七頁，2022年，8月28日當(dāng)細(xì)菌和病毒等病原體入侵到我們的血液、淋巴或組織液中時，由B細(xì)胞介導(dǎo)的體液免疫起著關(guān)鍵的作用。

四、B細(xì)胞及體液介導(dǎo)的免疫應(yīng)答細(xì)胞被抗原活化，克隆出更多的漿細(xì)胞和記憶細(xì)胞。B細(xì)胞與抗原結(jié)合后的分化發(fā)育還需要巨噬細(xì)胞和T細(xì)胞的參與。第三十五頁，共四十七頁，2022年，8月28日在體液免疫中，抗體是攻擊病原體的分子級武器，它是一種γ-球蛋白(Ig)，或稱為免疫球蛋白。免疫球蛋白的基本結(jié)構(gòu)：“Y”型的四鏈分子按照抗體的結(jié)構(gòu)與功能的差別，它們被分成IgM,IgG,IgD,IgA,IgE等5類第三十六頁，共四十七頁，2022年，8月28日免疫球蛋白分類IgG：體內(nèi)最主要的免疫球蛋白，唯一能通過胎盤由母體傳輸給胎兒的免疫球蛋白

IgA：主要由黏膜相關(guān)淋巴組織中漿細(xì)胞產(chǎn)生，主要分布在鼻、咽、支氣管、胃腸道、生殖器官等黏膜及分泌液中

IgM：主要分布在血液中，具有補(bǔ)體激活功能，在防止發(fā)生菌血癥、敗血癥等方面起重要作用

IgE：是半衰期最短、血清濃度最低的一類免疫球蛋白

IgD：為單體球免疫蛋白，僅在B細(xì)胞成熟的某一階段出現(xiàn)在B細(xì)胞膜上，在防止免疫耐受方面有一定的作用

第三十七頁，共四十七頁，2022年，8月28日單克隆是指所有制備抗體的細(xì)胞都是同一個細(xì)胞的拷貝，因此其產(chǎn)生的抗體完全相同。單克隆抗體是大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)的產(chǎn)物，而不是直接來自于動物血清。單克隆抗體制備單克隆抗體的過程涉及到細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞融合等多種步驟。第三十八頁，共四十七頁，2022年，8月28日Monoclonalantibody動物細(xì)胞融合技術(shù)骨髓瘤（Myeloma）是一種惡性腫瘤，可在體外進(jìn)行培養(yǎng)并無限制繁殖，但不能產(chǎn)生抗體免疫淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生抗體，但不能在體外長期培養(yǎng)和無限期繁殖不能產(chǎn)生抗體的骨髓瘤細(xì)胞與產(chǎn)生抗體的B細(xì)胞融合，產(chǎn)生雜交瘤細(xì)胞（Hybridomacells）第三十九頁，共四十七頁，2022年，8月28日接受抗原刺激后，能分泌針對該抗原的特異性抗體，在體液免疫中具有重要功能。B淋巴細(xì)胞本身是一種終末分化細(xì)胞，通常不再進(jìn)行細(xì)胞分裂，存活一段時間后便會死亡——短命細(xì)胞雜交瘤技術(shù)產(chǎn)生的3個技術(shù)關(guān)鍵1.B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞的特性：B淋巴細(xì)胞(Blymphocytes)：第四十頁，共四十七頁，2022年，8月28日骨髓瘤細(xì)胞(myelomacells):惡性增殖的轉(zhuǎn)化細(xì)胞，只要營養(yǎng)條件適合可永遠(yuǎn)分裂和存活——長命細(xì)胞。經(jīng)篩選與馴化，現(xiàn)已建立多種骨髓瘤細(xì)胞株——沒有抗體分泌物。第四十一頁，共四十七頁，2022年，8月28日2.細(xì)胞融合技術(shù)：脾細(xì)胞(B淋巴細(xì)胞)骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞長命不分泌抗體分泌抗體短命分泌抗體長命K?hler和Milstein,19751984年Nobel醫(yī)學(xué)獎第四十二頁，共四十七頁，2022年，8月28日3.雜交瘤細(xì)胞的篩選：脾細(xì)胞(B淋巴細(xì)胞)骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞脾細(xì)胞/脾細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞/骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞脾細(xì)胞篩選出不能長期存活不能長期存活第四十三頁，共四十七頁，2022年，8月28日培養(yǎng)上清中X抗體的檢測克隆化培養(yǎng)單克隆雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清中X抗體的檢測雜交瘤細(xì)胞可持續(xù)分泌單克隆抗體規(guī)?；囵B(yǎng)獲得大量單克隆抗體動物免疫細(xì)胞融合混合細(xì)胞的HAT篩選)分泌X抗體B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞X抗原B淋巴細(xì)胞瘤的突變株培養(yǎng)數(shù)天后細(xì)胞死亡無限生長細(xì)胞分泌X抗體只有雜交瘤細(xì)胞可長期存活下來BALB/c雜交瘤技術(shù)操作流程圖解第四十四頁，共四十七頁，2022年，8月28日雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體的主要步驟（1）抗原制備:對抗原的要求是純度越高越好，尤其是初次免疫所用的抗原。（2）免疫動物：選擇與所用骨髓瘤細(xì)胞同源的健康小鼠，鼠齡在8～12周，雌雄不限。為避免小鼠反應(yīng)不佳或免疫過程中死亡，可同時免疫3～4只小鼠。先給小鼠接種一個抗原，并在隨后的幾個星期內(nèi)連續(xù)接種幾次，但是幾次免疫之間的時間間隔不能太短，以防動物死亡，一般2～3周.然后檢測小鼠體內(nèi)是否已經(jīng)引起了免疫反應(yīng)。如果發(fā)生了免疫反應(yīng)，就殺死小鼠，取出小鼠的脾臟，清洗干凈，研磨碎，制成B細(xì)胞懸浮液。（3）免疫脾細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞的制備：采用眼球摘除放血法處死小鼠，無菌操作取出脾臟，在平皿內(nèi)擠壓研磨，制備脾細(xì)胞懸液。

（4）細(xì)胞融合：將準(zhǔn)備好的同系骨髓瘤細(xì)胞與小鼠脾細(xì)胞按一定比例混合，并加入促融合劑聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各種淋巴細(xì)胞可與骨髓瘤細(xì)胞發(fā)生融合，形成雜交瘤細(xì)胞

第四十五頁，共四十七頁，2022年，8月28日（5）雜交瘤細(xì)胞的選擇培養(yǎng)：一般采用HAT選擇性培養(yǎng)基。在HAT培養(yǎng)基中，未融合的骨髓瘤細(xì)胞因缺乏次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶，不能利用補(bǔ)救途徑合成DNA而死亡。未融合的淋巴細(xì)胞雖具有次黃嘌呤-