第十周生化實驗 影響酶活性的因素

第十周生化實驗影響酶活性的因素第一頁，共十五頁，2022年，8月28日一、實驗?zāi)康挠^察淀粉在水解過程中遇碘后溶液顏色的變化。觀察唾液淀粉酶在不同底物、溫度、pH、和激活劑、抑制劑存在下活性的變化情況。第二頁，共十五頁，2022年，8月28日二、實驗原理淀粉在唾液淀粉酶（含淀粉酶和少量麥芽糖酶）的作用下被逐步水解成單糖，水解的中間產(chǎn)物遇碘呈現(xiàn)不同的顏色：淀粉→不同大小分子的糊精→麥芽糖、葡萄糖藍(lán)色

紫色→暗褐色→紅色

不變色根據(jù)水解液和碘反應(yīng)的顏色，可以判斷水解是否已完全，觀察底物、溫度、pH及激活劑與抑制劑對唾液淀粉酶活性的影響。第三頁，共十五頁，2022年，8月28日三、試劑和器材

1.試劑新鮮唾液稀釋液、1%蔗糖溶液、Benedict試劑、0.5%淀粉、0.5%淀粉溶液（含0.3%NaCl）、1％氯化鈉溶液、1％硫酸銅溶液、碘液、0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液、0.1mol/L檸檬酸溶液

2.器材恒溫水浴鍋、4°冰箱、電磁爐(沸水鍋)紙杯、試管、試管架、錐形瓶，pH試紙第四頁，共十五頁，2022年，8月28日一、酶的特異性實驗?zāi)康模毫私饷傅奶禺愋圆⒄莆彰柑禺愋缘臋z測方法和原理。實驗原理：

酶的特異性是指一種酶只能對一種或一類化合物（此類化合物通常具有相同的化學(xué)鍵）起作用，而不能對別的化合物起作用。本實驗以唾液淀粉酶對淀粉的作用為例，說明酶的特異性，淀粉酶只能催化淀粉水解，對蔗糖的水解無催化作用。淀粉和蔗糖都無還原性，但淀粉水解產(chǎn)物為葡萄糖，蔗糖水解產(chǎn)物為果糖和葡萄糖，均為還原性糖，糖類的醛基或酮基能與Benedict試劑反應(yīng)，生成磚紅色的氧化亞銅沉淀。第五頁，共十五頁，2022年，8月28日

試管編號試劑處理#1#2含0.3％NaCl的淀粉溶液（mL）3－2%蔗糖溶液（mL）—3Benedict試劑（mL）22搖勻，沸水浴煮沸3min記錄觀察結(jié)果2、檢查試劑（取2只試管，按下表操作）1、唾液淀粉酶液的準(zhǔn)備

實驗者用蒸餾水嗽口，除去食物殘渣。然后含一口蒸餾水于口中，輕嗽一分鐘，吐入小燒杯中。將其稀釋一倍。操作步驟第六頁，共十五頁，2022年，8月28日3.淀粉酶的專一性實驗試管編號試劑處理#1

#2已稀釋的唾液溶液（mL）11含0.3％NaCl的0.5%淀粉溶液（mL）3－2%蔗糖溶液（mL）—3搖勻，置37℃水浴保溫15minBenedict試劑（mL）22搖勻，沸水浴煮沸2min記錄觀察結(jié)果（取2只試管，按下表操作）第七頁，共十五頁，2022年，8月28日二、pH對淀粉酶活性的影響實驗?zāi)康牧私鈖H對酶活性的影響及最適pH的定義。實驗原理

酶的催化活性與環(huán)境pH有密切關(guān)系，通常各種酶只在一定pH范圍內(nèi)才具有活性，酶活性最高時的pH，稱為酶的最適pH，高于或低于此pH時酶的活性都逐漸降低。不同酶的最適pH不同。酶的最適pH不是一個特征性的物理常數(shù)，對于一個酶，其最適pH因緩沖液和底物的性質(zhì)不同而有差異。第八頁，共十五頁，2022年，8月28日操作步驟1.取3個錐形瓶，按下表比例移取磷酸氫二鈉溶液和檸檬酸鈉溶液，制備pH為5.0、6.8、8.0的三種緩沖溶液。錐形瓶號0.2M磷酸氫二鈉（mL）0.1M檸檬酸（mL）緩沖液pH1235.157.729.724.852.280.285.06.88.0第九頁，共十五頁，2022年，8月28日2、另取3只干凈試管，按下表操作。試管編號試劑處理#1#2#3pH5.0緩沖溶液（mL）2--pH6.8緩沖溶液（mL）-2-pH8.0緩沖溶液（mL）--2含0.3%NaCl的0.5%淀粉溶液（mL）111置37℃水浴,每隔1min逐管加入唾液稀釋液1mL，充分搖勻保溫10min，到達(dá)保溫時間后，每隔1min依次取出立即加碘化鉀－碘溶液/滴222記錄觀察結(jié)果第十頁，共十五頁，2022年，8月28日三、溫度對淀粉酶活性的影響實驗?zāi)康牧私鉁囟葘γ富钚缘挠绊懠白钸m溫度的定義。實驗原理

對溫度敏感是酶的一個重要特性，酶作為生物催化劑也有溫度效應(yīng)，提高溫度可以提高酶促反應(yīng)速度，但另一方面又會加速酶蛋白的變性速度，所以在較低的溫度范圍內(nèi)，酶反應(yīng)速度隨溫度升高而增大，但是超過一定溫度后，反應(yīng)速度反而下降。酶反應(yīng)速度達(dá)到最大時的溫度稱為酶的最適溫度。酶的最適溫度不是一個常數(shù)，它與作用時間的長短有關(guān)系。第十一頁，共十五頁，2022年，8月28日操作步驟1.取3支試管，各加2mL含0.3％氯化鈉的0.5％淀粉溶液。2.另取3支試管，各加1mL淀粉酶液。3.將此6支試管分為3組，每組中盛淀粉溶液與淀粉酶液的試管各1支。4.三組試管分別置入0℃、37℃與100℃的水浴中。5.等5min后，將各組中的淀粉溶液倒入淀粉酶液中，繼續(xù)維持原溫度條件5min后，立即滴加2滴碘液，觀察溶液顏色的變化。第十二頁，共十五頁，2022年，8月28日四、激活劑與抑制劑對酶的影響實驗?zāi)康?/p>

了解激活劑和抑制劑對酶活力的影響。實驗原理

酶的活性受某些物質(zhì)的影響，能使酶活性增加的稱為激活劑，能使酶活性降低的稱為抑制劑。很少量的激活劑和抑制劑就會影響酶的活性，而且常具有特異性，但激活劑和抑制劑不是絕對的，濃度的改變可能使激活劑變成抑制劑。第十三頁，共十五頁，2022年，8月28日試管編號試劑處理

#1#2#31%NaCl溶液（mL）1__0.1%CuSO4溶液（mL）_1_蒸餾水（mL）__10.5%淀粉溶液（mL）333稀釋的唾液（mL）111

搖勻，放入37℃恒溫水浴保溫10min，取出，冷卻。KI-I2溶液（mL）2滴2滴2滴記錄觀察結(jié)果（取3支試管，按下表加入各種試劑）操作步驟從1號試管中用玻棒取出1滴溶液，置于白磁板上用碘