藥物分析課件雜環(huán)類藥物的分析詳解

藥物分析課件雜環(huán)類藥物的分析詳解演示文稿當(dāng)前1頁，總共109頁。（優(yōu)選）藥物分析課件雜環(huán)類藥物的分析當(dāng)前2頁，總共109頁。第一節(jié)吡啶類藥物一、典型藥物的結(jié)構(gòu)與主要化學(xué)性質(zhì)（一）典型藥物的結(jié)構(gòu)吡啶（pyridine）異煙肼（isoniazid）當(dāng)前3頁，總共109頁。尼可剎米（nikethamide）當(dāng)前4頁，總共109頁。硝苯地平（nifedipine)當(dāng)前5頁，總共109頁。（二）主要化學(xué)性質(zhì)

1.弱堿性

吡啶環(huán)上的氮為堿性氮原子，吡啶環(huán)的pKb

值為8.8（水中）。尼可剎米除了吡啶環(huán)上氮外，β位上被酰氨基取代。酰氨基化學(xué)性質(zhì)不甚活潑，但遇堿水解后釋放出具有堿性的二乙胺，故可以進(jìn)行鑒別。

當(dāng)前6頁，總共109頁。

2．還原性

異煙肼的吡啶環(huán)γ位上被具有還原性酰肼取代，可被氧化劑氧化，可與含羰基的化合物發(fā)生縮合反應(yīng)。

3．吡啶環(huán)的特性

異煙肼和尼可剎米的吡啶環(huán)α、α’位未取代，而β或γ位被羧基衍生物所取代；硝苯地平的吡啶環(huán)β、β’位被甲酸甲酯所取代，其吡啶環(huán)可發(fā)生開環(huán)反應(yīng)。

當(dāng)前7頁，總共109頁。二、鑒別試驗(yàn)（一）吡啶環(huán)的開環(huán)反應(yīng)

本反應(yīng)適用于吡啶環(huán)的α、α’位無取代基的異煙肼和尼可剎米。1.戊烯二醛反應(yīng)（k?ning反應(yīng)）尼可剎米+溴化氰H2O戊烯二醛衍生物苯胺黃色當(dāng)前8頁，總共109頁。當(dāng)前9頁，總共109頁。（黃色~黃棕色）當(dāng)前10頁，總共109頁。2．二硝基氯苯反應(yīng)（Vongerichten反應(yīng)）吡啶及其衍生物+2,4-二硝基氯苯至熔融或混合醇制KOH紫紅色無水條件當(dāng)前11頁，總共109頁。采用本法鑒別異煙肼、尼可剎米時(shí)，需適當(dāng)處理，即將酰肼氧化成羧基或?qū)Ⅴ０匪鉃轸然筮M(jìn)行鑒別。如異煙肼鑒別：當(dāng)前12頁，總共109頁。異煙肼不經(jīng)處理的反應(yīng)：異煙肼+2，4-二硝基氯苯乙醇OH-紫紅色當(dāng)前13頁，總共109頁。（二）酰肼基團(tuán)的反應(yīng)

1．還原反應(yīng)異煙肼+AgNO3異煙酸銀+N2+Ag(白色）銀鏡異煙肼+亞硒酸硒（紅色）當(dāng)前14頁，總共109頁。2．縮合反應(yīng)

異煙肼的酰肼基與芳醛縮合形成腙，其有固定的熔點(diǎn)，可用以鑒別。ChP和BP均采用本法鑒別.

黃色結(jié)晶mp為228℃～231℃

當(dāng)前15頁，總共109頁。-NH2活性-CH2-+1，2-萘醌-4-磺酸OH-紅色當(dāng)前16頁，總共109頁。（三）

形成沉淀的反應(yīng)

具有吡啶環(huán)的結(jié)構(gòu)，可與重金屬鹽類及苦味酸等試劑形成沉淀。

如尼可剎米+CuSO4+硫氰酸銨草綠色尼可剎米異煙肼+HgCl2白色當(dāng)前17頁，總共109頁。

（四）分解產(chǎn)物的反應(yīng)使?jié)駶櫟募t色石蕊試紙變藍(lán)尼可剎米異煙肼+無水Na2CO3Ca(OH)2吡啶臭尼可剎米+NaOH二乙胺當(dāng)前18頁，總共109頁。（五）

紫外吸收光譜特征

本類藥物的分子結(jié)構(gòu)中均含有芳雜環(huán)，在紫外光區(qū)有特征吸收，其最大、最小吸收波長及百分吸收系數(shù)可供鑒別。本類藥物的紫外特征吸收鑒別方法見下表。本類藥物的紫外特征吸收鑒別方法

藥物溶劑λmax（nm）λmin（nm）E1cm1%

異煙肼HCl（0.01mol/L）265—約420水266234378尼可剎米HCl（0.01mol/L）263—285NaOH（0.1mol/L）255—840260—860

硝苯地平無水乙醇333—140當(dāng)前19頁，總共109頁。

（一）異煙肼中游離肼的檢查

1.TLC法

Ch.P中異煙肼及其注射,采用TLC法中雜質(zhì)對照法。

對照品：硫酸肼0.20mg/ml（相當(dāng)于游離肼50μg）

薄層板：硅膠（用羧甲基纖維素鈉溶液制備）

展開劑：異丙醇-丙酮（3：2）

顯色劑：乙醇制對-二甲氨基苯甲醛試液

檢測結(jié)果：供試品主斑點(diǎn)前方，不得顯黃色斑點(diǎn)

三、有關(guān)物質(zhì)檢查當(dāng)前20頁，總共109頁。

BP的檢查方法：

供試品溶液制備:

取異煙肼1.0g，加丙酮-水(1:1)制成10ml.

對照溶液制備:

取硫酸肼50mg，加水50ml使溶解后，加丙酮稀釋至100ml；量取10ml，加供試品溶液0.2ml，加丙酮-水(1:1)稀釋至100ml。

薄層板：硅膠GF254薄層板

展開劑：醋酸乙酯-丙酮－甲醇－水(50:20:20:10)

顯色劑：乙醇制對-二甲氨基苯甲醛試液當(dāng)前21頁，總共109頁。

檢測結(jié)果：

于254nm紫外光下檢測，供試品中的雜質(zhì)斑點(diǎn)強(qiáng)度應(yīng)小于對照溶液中異煙肼色譜斑點(diǎn)；再噴以對-二甲氨基苯甲醛溶液，并在日光下檢視，對照溶液中硫酸肼斑點(diǎn)的強(qiáng)度大于供試液中的雜質(zhì)斑點(diǎn)。當(dāng)前22頁，總共109頁。

2．比濁法

JP（14）采用樣品中加水楊醛的乙醇溶液觀察混濁的方法來控制游離肼的限量。

此法專屬性差，因異煙肼(慢)和硫酸肼均生成腙而析出沉淀。當(dāng)前23頁，總共109頁。3.差示分光光度法

肼異煙肼+對-二甲氨基苯甲醛黃色縮合物對-二甲氨基苯甲醛連氮(λmax=456nm有最大吸收)形成的縮合產(chǎn)物對-二甲氨基芐叉(于λmax=456nm波長處無吸收)

可在456nm波長處測定并計(jì)算二者的差示吸收度ΔA456，同時(shí)以對照品比較法計(jì)算游離肼含量。當(dāng)前24頁，總共109頁。

具體測定法：

對照品溶液：硫酸肼CR＝1μg/ml

5ml+丙酮λmax=456nm測A1+對-二甲氨基苯甲醛(ΔA456＝A2－A1)ΔAR5mlλmax=456nm測A2

供試品溶液：異煙肼C＝2mg/ml

游離肼CX=ΔAs/AR×CR

1份+丙酮

λmax=456nm測A1

+對-二甲氨基苯甲醛

(ΔA456＝A2－A1)ΔAs

2份

λmax=456nm測A2當(dāng)前25頁，總共109頁。(二)尼可剎米中有關(guān)雜質(zhì)檢查

因有關(guān)雜質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)不明，故Ch.P采用TLC法中的高低濃度對比法進(jìn)行檢查。

當(dāng)前26頁，總共109頁。

(三)硝苯地平中有關(guān)物質(zhì)檢查

硝苯地平遇光分子內(nèi)部發(fā)生光化學(xué)歧化作用，降解為4-（2-硝基苯基）-2,6-二甲基吡啶-3,5-二羧酸二甲酯（A）和4-（2-亞硝基苯基）-2,6-二甲基吡啶-3,5-二羧酸二甲酯（B）。其化學(xué)結(jié)構(gòu)如下:當(dāng)前27頁，總共109頁。具體方法

1。供試液Ⅰ和Ⅱ的制備2。有關(guān)雜質(zhì)對照品液Ⅰ和Ⅱ的制備3.色譜條件與靈敏度調(diào)節(jié)填充劑：十八烷基硅烷鍵合硅膠

流動(dòng)相：甲醇-水（3：2）；檢測波長：235nm。取對照品溶液Ⅱ20μl注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使雜質(zhì)A和B組分色譜峰的峰高為滿量程的20%；雜質(zhì)A和B組分之間，雜質(zhì)B與硝苯地平之間的分離度均符合規(guī)定。當(dāng)前28頁，總共109頁。4.有關(guān)物質(zhì)檢測

取供試液Ⅰ和對照液Ⅱ各20μl，分別進(jìn)樣記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的2倍。供試液Ⅰ如出現(xiàn)與對照液Ⅱ中雜質(zhì)A和B相對應(yīng)的峰，其峰面積不得大于對照液Ⅱ中雜質(zhì)A和B的峰面積；如出現(xiàn)除雜質(zhì)A和B以外的其他雜質(zhì)峰，其峰面積不得大于對照液Ⅱ中硝苯地平的峰面積；各雜質(zhì)總量不得大于0.5%。供試液Ⅰ中小于對照液Ⅱ中硝苯地平峰面積的10%以下的雜質(zhì)峰忽略不計(jì)。

返回當(dāng)前29頁，總共109頁。

一、基本結(jié)構(gòu)與化學(xué)性質(zhì)（一）典型藥物的結(jié)構(gòu)硫酸奎寧硫酸奎尼?。╭uininesulfate）(quinidinesulfate)第二節(jié)

喹啉類藥物當(dāng)前30頁，總共109頁。

鹽酸環(huán)丙沙星(ciprofloxacinhydrochloride)當(dāng)前31頁，總共109頁。（二）主要化學(xué)性質(zhì)

1.堿性

喹啉環(huán)上的氮原子具有堿性，與強(qiáng)酸形成穩(wěn)定的鹽。

環(huán)丙沙星與鹽酸成鹽，奎寧和奎尼丁可與二元酸成鹽，結(jié)構(gòu)中喹核堿含脂環(huán)氮，堿性強(qiáng)，可與硫酸成鹽；而喹啉環(huán)系芳環(huán)氮，堿性較弱，不與硫酸成鹽?？鼘巔Kb1為5.07，pKb2為9.7，飽和溶液的pH值為8.8。奎尼丁pKb1為5.4，pKb2為10。

當(dāng)前32頁，總共109頁。2.旋光性硫酸奎寧為左旋體，其比旋度為-237o至-244o；硫酸奎尼丁為右旋體，其比旋度為+275o至+290o；而鹽酸環(huán)丙沙星無旋光性。3.熒光特性硫酸奎寧和硫酸奎尼丁在稀硫酸溶液中均顯藍(lán)色熒光，而鹽酸環(huán)丙沙星則無熒光。當(dāng)前33頁，總共109頁。

（一）綠奎寧反應(yīng)（Thalleioquin）

綠奎寧反應(yīng)是奎寧和奎尼丁的特殊鑒別反應(yīng)。其反應(yīng)如下：Ch.P收載方法二、鑒別試驗(yàn)當(dāng)前34頁，總共109頁。（二）光譜特征1.UVCh.P采用本法鑒別鹽酸環(huán)丙沙星。2.熒光光譜特征硫酸奎寧和硫酸奎尼丁，在稀H2SO4中均顯藍(lán)色熒光，鹽酸環(huán)丙沙星則無熒光，可用于本類藥物的鑒別。3.IRCh.P中硫酸奎寧和鹽酸環(huán)丙沙星均采用紅外光譜的方法進(jìn)行鑒別，而硫酸奎尼丁未采用此法。當(dāng)前35頁，總共109頁。（三）無機(jī)酸鹽

利用硫酸奎寧和硫酸奎尼丁顯硫酸鹽的反應(yīng)；鹽酸環(huán)丙沙星顯氯化物的反應(yīng)，可用無機(jī)鹽的鑒別方法進(jìn)行鑒別。當(dāng)前36頁，總共109頁。

（一）硫酸奎寧中特殊雜質(zhì)檢查

1.酸度主要控制藥物中酸性雜質(zhì)。用pH計(jì)測定,pH為5.7～6.6。

2.氯仿-乙醇中不溶物主要控制藥物中不溶性雜質(zhì)或無機(jī)鹽類.

3.其他金雞納堿主要控制硫酸奎寧中其他生物堿，因沒有合適的對照品，因此采用薄層色譜中的高低濃度對比法進(jìn)行檢查。三、特殊雜質(zhì)檢查當(dāng)前37頁，總共109頁。（二）鹽酸環(huán)丙沙星中特殊雜質(zhì)的檢查1。酸度主要控制藥物中酸性雜質(zhì)。用pH計(jì)測定,pH為3.0～4.5。2.溶液的澄清度與顏色主要控制本品中不溶性物質(zhì)和有色雜質(zhì)。3.有關(guān)物質(zhì)主要控制本品中可能引入結(jié)構(gòu)不清的有關(guān)雜質(zhì)，采用HPLC法中歸一化法進(jìn)行檢查，其檢查方法如下：當(dāng)前38頁，總共109頁。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充柱流動(dòng)相：0.05mol/L枸櫞酸-乙腈(82:18)用三乙胺調(diào)節(jié)pH值3.檢測器：UV檢測波長為277nm；按鹽酸環(huán)丙沙星峰計(jì)算n＞2000;

鹽酸環(huán)丙沙星峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度R＞1.5.測定方法：取本品適量，加水制成每1ml中含0.4mg的溶液，取20μl注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度和記錄儀衰減，使主成分的峰高為記錄儀滿量程的2-4倍，記錄時(shí)間應(yīng)為主成分峰保留時(shí)間的2倍。按面積歸一化法計(jì)算，雜質(zhì)總量不得超過1.5%。

返回當(dāng)前39頁，總共109頁。

一、基本結(jié)構(gòu)與化學(xué)性質(zhì)（一）典型藥物的結(jié)構(gòu)

硫酸阿托品氫溴酸東莨菪堿（atropinesulfate）(copolaminehydrobromide）第三節(jié)托烷類藥物當(dāng)前40頁，總共109頁。（二）主要化學(xué)性質(zhì)1。水解性本類藥物分子結(jié)構(gòu)中具有酯的結(jié)構(gòu)，易水解。以阿托品為例，水解生成莨菪醇(Ⅰ)和莨菪酸(Ⅱ)。2.堿性

阿托品和東莨菪堿的結(jié)構(gòu)中，五元脂環(huán)上含有叔胺氮原子,具有較強(qiáng)的堿性,易與酸成鹽。如阿托品的pKb1為4.35。當(dāng)前41頁，總共109頁。3.旋光性

氫溴酸東莨菪堿結(jié)構(gòu)中含有不對稱碳原子，呈左旋體，比旋度為-24ο至-27ο，而阿托品結(jié)構(gòu)中雖然也含有不對稱碳原子，但因外消旋化而為消旋體，無旋光性。利用此性質(zhì)可區(qū)別阿托品與東莨菪堿。

當(dāng)前42頁，總共109頁。（一）托烷生物堿一般鑒別試驗(yàn)二、鑒別試驗(yàn)生物堿水解莨菪酸發(fā)煙硝酸三硝基衍生物KOH（C2H5OH）固體KOH有色的醌型產(chǎn)物當(dāng)前43頁，總共109頁。（二）氧化反應(yīng)

本類藥物水解后，生成的莨菪酸，可與硫酸和重鉻酸鉀在加熱的條件下，發(fā)生氧化反應(yīng)，生成苯甲醛，而逸出類似苦杏仁的臭味。其反應(yīng)式為：當(dāng)前44頁，總共109頁。(三)沉淀反應(yīng)

本類藥物具有堿性，可與生物堿沉淀劑生成沉淀。如：阿托品+氯化汞醇試液黃色沉淀東莨菪堿+氯化汞醇試液白色沉淀（四）硫酸鹽與溴化物反應(yīng)當(dāng)前45頁，總共109頁。

1.酸度

東莨菪堿堿性很弱，對石蕊試紙幾乎不顯堿性反應(yīng)。氫溴酸東莨菪堿為強(qiáng)酸弱堿形成的鹽，通過其5%水溶液的pH值為4.0～5.5，來控制本品中的酸性雜質(zhì)。

2.其他生物堿三、氫溴酸東莨菪中特殊雜質(zhì)檢查本品水溶液+氨試液不混濁合格混濁存在其他生物堿+KOH試液混濁（東莨菪堿）當(dāng)前46頁，總共109頁。

3.易氧化物

主要是檢查本品在生產(chǎn)中可能引入的阿撲阿托品及其它含有雙鍵的有機(jī)物質(zhì)，可使KMnO4溶液褪色。返回當(dāng)前47頁，總共109頁。第四節(jié)吩噻嗪類藥物一、基本結(jié)構(gòu)與化學(xué)性質(zhì)（一）結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與典型藥物當(dāng)前48頁，總共109頁。當(dāng)前49頁，總共109頁。當(dāng)前50頁，總共109頁。奮乃靜當(dāng)前51頁，總共109頁。癸氟奮乃靜當(dāng)前52頁，總共109頁。鹽酸氟奮乃靜當(dāng)前53頁，總共109頁。鹽酸三氟拉嗪當(dāng)前54頁，總共109頁。（二）主要化學(xué)性質(zhì)1.紫外和紅外吸收光譜特征硫氮雜蒽母核為共軛三環(huán)л系統(tǒng)

三個(gè)最大吸收峰別在：205nm、254nm、300nm由于2位、10位上的取代基不同，可引起最大吸收峰的位移。

硫氮雜蒽母核的硫?yàn)槎r(jià)，易氧化為砜和亞砜，其紫外吸收光譜有明顯不同，它們具有四個(gè)峰值。另外，取代基R和R’的不同，則可產(chǎn)生不同的紅外光譜當(dāng)前55頁，總共109頁。2.易氧化呈色二價(jià)硫易氧化，遇不同氧化劑如硫酸、硝酸、三氯化鐵試液及過氧化氫等，隨著取代基的不同，而呈不同的顏色。

3.與金屬離子絡(luò)合呈色

本類藥物中未被氧化的硫，可與鈀離子形成配位化合物，其氧化產(chǎn)物則無此反應(yīng)。此性質(zhì)可用于鑒別和含量測定，并具有專屬性，可消除氧化產(chǎn)物的干擾。當(dāng)前56頁，總共109頁。（一）紫外特征吸收和紅外吸收光譜

本類藥物可用UV和IR鑒別，Ch.P中UV鑒別實(shí)例如下：

藥物名稱溶劑濃度（μg/ml）λmax（nm）AE1%1cm鹽酸氯丙嗪鹽酸（9→1000）52540.46915306——鹽酸異丙嗪鹽酸（0.01mol/L）6249—883~937奮乃靜無水乙醇72580.65—癸氟奮乃靜乙醇10260——鹽酸氟奮乃靜鹽酸（9→1000）10255—553~593鹽酸三氟拉嗪鹽酸（1→20）10256—630鹽酸硫利達(dá)嗪乙醇8264與315——二、鑒別試驗(yàn)當(dāng)前57頁，總共109頁。

（二）顯色反應(yīng)

1.與氧化劑的顯色反應(yīng)

藥物名稱硫酸硝酸過氧化氫

鹽酸氯丙嗪顯紅色,漸變淡黃色—鹽酸異丙嗪顯櫻桃紅色,放置生成紅色沉淀,加熱即溶解,后顏色漸變深溶液由紅色轉(zhuǎn)變?yōu)槌赛S色奮乃靜——顯深紅色;放置后紅色漸褪去鹽酸氟奮乃靜顯淡紅色,溫?zé)帷笞兂杉t褐色鹽酸三氟拉嗪—生成微帶紅色的白色沉淀;放—置后,紅色變深,加熱后變黃色

鹽酸硫利達(dá)嗪顯藍(lán)色—

—

當(dāng)前58頁，總共109頁。

2.與鈀離子絡(luò)合顯色反應(yīng)

利用分子結(jié)構(gòu)中未被氧化的硫與金屬鈀離子絡(luò)合形成有色絡(luò)合物，如與癸氟奮乃靜形成紅色絡(luò)合物。當(dāng)前59頁，總共109頁。當(dāng)前60頁，總共109頁。（三）分解產(chǎn)物的反應(yīng)

癸氟奮乃靜碳酸鈉及碳酸鉀F-+酸性茜素鋯試液[ZrF6]2-配位離子，茜素游離使溶液由紅色變?yōu)辄S色。600℃熾灼當(dāng)前61頁，總共109頁。

(一)鹽酸異丙嗪中特殊雜質(zhì)檢查

主要有：2-二甲氨基-1-丙醇；N,N,β-三甲基-10H-吩噻嗪-10-乙胺異構(gòu)體和結(jié)構(gòu)不清的分解產(chǎn)物

。因此采用TLC法中的

高低濃度對比法控制上述這些雜質(zhì)的限量。(二)鹽酸硫利達(dá)嗪中有關(guān)物質(zhì)檢查

本品遇光不穩(wěn)定，在生產(chǎn)和貯藏過程中易引入有關(guān)物質(zhì)，因其結(jié)構(gòu)不清，因此也采用TLC法中的高低濃度對比法控制雜質(zhì)的限量。三、特殊雜質(zhì)檢查返回當(dāng)前62頁，總共109頁。第五節(jié)苯并二氮雜卓類藥物一、結(jié)構(gòu)特征與典型藥物NNClH3CO地西泮當(dāng)前63頁，總共109頁。阿普唑侖當(dāng)前64頁，總共109頁。奧沙西泮當(dāng)前65頁，總共109頁。氯氮卓NNNCH3OClH當(dāng)前66頁，總共109頁。

(一)化學(xué)鑒別試驗(yàn)

1。沉淀反應(yīng)

氯氮卓

橙紅色沉淀

阿普唑侖鹽酸氟西泮

＋KBiI4

也生成橙紅色沉淀氯硝西泮放置后，沉淀顏色變深，

因此可以相互區(qū)別。二、鑒別試驗(yàn)阿普唑侖+遇硅鎢酸白色沉淀，藥典中也用于鑒別。當(dāng)前67頁，總共109頁。2.水解后呈芳伯胺反應(yīng)

氯氮卓和奧沙西泮，其反應(yīng)如下：當(dāng)前68頁，總共109頁。3.硫酸-熒光反應(yīng)

本類藥物溶于硫酸后，在紫外光（365nm）下，顯不同顏色的熒光。例如：

地西泮黃綠色

黃色氯氮卓黃色

紫色艾司唑侖+H2SO4亮綠色+稀硫酸天藍(lán)色硝西泮淡藍(lán)色

藍(lán)綠色奧沙西泮淡黃綠色當(dāng)前69頁，總共109頁。4.分解產(chǎn)物的反應(yīng)

本類藥物多為有機(jī)氯化合物，用氧瓶燃燒法破壞，顯氯化物反應(yīng)。Ch.P用于地西泮和三唑侖藥物的鑒別。

5.氯化銅焰色反應(yīng)

分子結(jié)構(gòu)中含有氯元素的藥物，在銅網(wǎng)上燃燒發(fā)出CuCl2綠色火焰。此反應(yīng)藥典未用于本類藥物鑒別。當(dāng)前70頁，總共109頁。

（二）紫外特征吸收和紅外吸收光譜

藥物名稱溶劑濃度（μg/ml）λmax（nm）A

地西泮0.5%硫酸甲醇溶液5242約0.51282

約0.23366氯氮卓鹽酸溶液(9→1000)7245,308阿普唑侖鹽酸溶液(9→1000)12264鹽酸氟西泮硫酸甲醇(1→36)10239±2,284±2比值1.95～2.50362±2氯硝西泮0.5%硫酸甲醇溶液10239±2,307±2奧沙西泮乙醇10229,315±2(較弱)

紅外吸收光譜:已用于地西泮、阿普唑侖、艾司唑侖、鹽酸氟西泮、氯硝西泮和奧沙西泮的鑒別。

當(dāng)前71頁，總共109頁。（三）TLC法

1.常用的五種苯并二氮雜卓類藥物的TLC法

按常規(guī)法點(diǎn)樣10μl于硅膠G薄層板上，以苯-丙酮（3：2）為展開劑,飽和15min，用上行法展開15cm，揮發(fā)溶劑，用稀硫酸噴霧，于105℃干燥30min，置紫外燈下檢視熒光斑點(diǎn)，結(jié)果見表8-6。

當(dāng)前72頁，總共109頁。2.酸水解產(chǎn)物的TLC法

利用苯并二氮雜卓類藥物經(jīng)酸水解產(chǎn)生的二苯甲酮衍生物進(jìn)行鑒別。由于不同的苯并二氮雜卓類藥物水解后可能會獲得相同的二苯甲酮衍生物，因此本法的專屬性較差。

當(dāng)前73頁，總共109頁。

（一）有關(guān)物質(zhì)檢查

Ch.P收載的八種本類藥物，除氯氮卓外，其余均作此項(xiàng)檢查。其檢查方法除了三唑侖采用GC法外，其余均用TLC法進(jìn)行檢查。USP(24)和BP(2000)中對氯氮卓都規(guī)定了此項(xiàng)檢查，而且均用TLC法進(jìn)行檢查。三、特殊雜質(zhì)檢查當(dāng)前74頁，總共109頁。

1.地西泮中有關(guān)物質(zhì)的檢查

地西泮在合成過程中因其副反應(yīng)，可能引入N-去甲基苯甲二氮卓及化學(xué)結(jié)構(gòu)不清的有關(guān)物質(zhì)，可采用TLC法中的高低濃度對比法進(jìn)行檢查。

2.氯氮卓中有關(guān)物質(zhì)的檢查

USP(24)用TLC法檢查氯氮卓中的有關(guān)物質(zhì)，并規(guī)定其分解產(chǎn)物2-氨基-5-氯-2-苯甲酮含量不得過0.01%；中間體7-氯-1，3-二氫-5-苯基-2H-1，4-苯并二氮雜卓-2-酮-4-氧化物含量不得過0.1%。當(dāng)前75頁，總共109頁。3.氯氮卓中有關(guān)物質(zhì)的反相高效液相色譜法

色譜條件：色譜柱為250mm×2.6mm（i.d.）Nucleosil10C18柱；

n=3000；流動(dòng)相為甲醇-磷酸液(0.05mol/L)(60:40),40%氫氧化鈉溶液調(diào)pH為6.0；流速為1ml/min;紫外檢測器波長為254nm。

檢測結(jié)果：氨基物（Ⅱ）的tR為12.0min、氧化物（Ⅲ）的tR

為4.3min，痕量雜質(zhì)（Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ）的tR為13.8、3.6、4.7min。

當(dāng)前76頁，總共109頁。(二)降解產(chǎn)物的檢查

地西泮注射液列入此項(xiàng)檢查，因本品在貯藏過程中有可能分解成2-甲氨基-5-氯-二苯甲酮等雜質(zhì)。采用HPLC法進(jìn)行檢查。返回當(dāng)前77頁，總共109頁。一、非水溶液滴定法(一)基本原理第六節(jié)含量測定當(dāng)HA酸性較強(qiáng)時(shí)，反應(yīng)不能定量完成，必須除去或降低HA的酸性，使反應(yīng)順利地完成。BH+A-+HClO4BH+ClO4+HA游離堿類鹽被置換出的弱酸因此，要根據(jù)不同情況采用相應(yīng)測定條件。當(dāng)前78頁，總共109頁。(二)一般方法供試品+冰醋酸10ml~30ml若供試品為氫鹵酸鹽再加5%醋酸汞的冰醋酸液3ml~5ml結(jié)果高氯酸滴定液滴定以空白試驗(yàn)校正當(dāng)前79頁，總共109頁。(三)問題討論1.適用范圍

主要用于Kb＜10-8的有機(jī)堿鹽的含量測定。對堿性較弱的雜環(huán)類藥物，只要選擇合適的溶劑、滴定劑和終點(diǎn)指示的方法，可使pKb為8～13的弱堿性藥物采用本法滴定。

一般來說：

Kb為10-8～10-10時(shí)，宜選冰醋酸作為溶劑；藥物的Kb為10-10～10-12時(shí)，宜選冰醋酸與醋酐的混合溶液；Kb＜10-12時(shí)，應(yīng)用醋酐作為溶劑。

另外，在冰醋酸中加入不同量的甲酸，也能使滴定突躍顯著增大，使一些堿性極弱的雜環(huán)類藥物獲得滿意測定結(jié)果。

當(dāng)前80頁，總共109頁。

2.酸根的影響：無機(jī)酸類，在醋酸介質(zhì)中的酸性以下列排序遞減：

高氯酸＞氫溴酸＞硫酸＞鹽酸＞硝酸

消除HX干擾的方法：加Hg(Ac)2

量不足終點(diǎn)不明顯，結(jié)果偏低。

2B·HX+Hg(Ac)2→2B·HAc+HgX2

過量(1～3倍)不影響測定結(jié)果當(dāng)前81頁，總共109頁。3.滴定劑的穩(wěn)定性非水溶液滴定法所用的溶劑為醋酸，具有揮發(fā)性，膨脹系數(shù)較大，溫度和貯存條件都影響滴定劑的濃度。若滴定樣品與標(biāo)定HClO4溶液時(shí)的溫度不一致，溫差未超過10℃時(shí)，應(yīng)將高氯酸滴定液的濃度用公式加以校正。

4.終點(diǎn)指示方法常用電位法和指示劑法。Ch.P收載的本類藥物大多采用結(jié)晶紫指示劑指示終點(diǎn)，少數(shù)采用電位法指示終點(diǎn)。當(dāng)前82頁，總共109頁。(四)應(yīng)用實(shí)例

1.游離弱堿性藥物測定

異煙肼、尼可剎米、地西泮及氯氮卓等?；谶@些藥物分子結(jié)構(gòu)中氮原子的弱堿性，可用非水溶液滴定法直接測定其含量。由于這些藥物的堿性強(qiáng)弱不同，測定時(shí)所采用溶劑、指示劑及其指示終點(diǎn)的方法也不盡相同。

藥物名稱取樣量(g)溶劑指示劑終點(diǎn)顏色

尼可剎米0.15冰醋酸10ml結(jié)晶紫藍(lán)綠色地西泮0.2冰醋酸、酸酐10ml結(jié)晶紫綠色氯氮卓0.3冰醋酸10ml結(jié)晶紫藍(lán)色當(dāng)前83頁，總共109頁。

2.氫鹵酸鹽類藥物測定

當(dāng)這些藥物溶于冰醋酸時(shí)，由于氫鹵酸在冰醋酸中酸性較強(qiáng)，對測定有干擾，必須先加入過量的醋酸汞冰醋酸溶液，使其形成難以電離的鹵化汞，而氫鹵酸鹽藥物，則轉(zhuǎn)變成可測定的醋酸鹽。然后再用高氯酸滴定液滴定，并可獲得滿意的結(jié)果。應(yīng)用示例如下：

藥物名稱取樣量(g)溶劑加入醋酸汞試液(ml)指示劑終點(diǎn)顏色鹽酸氯丙嗪0.2醋酐10ml5橙黃Ⅳ玫瑰紅色鹽酸異丙嗪0.3冰醋酸10ml4結(jié)晶紫藍(lán)色鹽酸氟奮乃靜0.3冰醋酸20ml5結(jié)晶紫藍(lán)綠色鹽酸環(huán)丙沙星0.2冰醋酸25ml5橙黃Ⅳ粉紅色氫溴酸東莨菪堿0.3冰醋酸20ml5結(jié)晶紫純藍(lán)色鹽酸硫利達(dá)嗪0.3丙酮100ml5電位滴定法

當(dāng)前84頁，總共109頁。3.硫酸鹽類藥物測定

硫酸是二元酸，在水溶液中能完成二級解離，生成SO42-，但在非水介質(zhì)中，只顯示一元酸解離為HSO4-，即只供給一個(gè)H+，所以硫酸鹽類藥物在冰醋酸中，只能滴定至硫酸氫鹽，因此可以用高氯酸滴定液直接滴定。當(dāng)前85頁，總共109頁。（1）硫酸阿托品測定：阿托品為堿性較強(qiáng)的

一元堿藥物，因而硫酸阿托品的化學(xué)結(jié)構(gòu)式可以簡寫為(BH+)2·SO42-，用高氯酸直接滴定時(shí)的反應(yīng)式為：(BH+)2·SO42-+HClO4→(BH+)·ClO4-+(BH+)·HSO4-可根據(jù)1mol的硫酸阿托品消耗1mol高氯酸的關(guān)系計(jì)算其含量。當(dāng)前86頁，總共109頁。（2）硫酸奎寧測定：奎寧為二元堿，其中喹核堿的堿性較強(qiáng)，可與硫酸生成鹽；而喹啉環(huán)的堿性極弱，不能與硫酸成鹽，而保持游離狀態(tài)。當(dāng)用高氯酸直接滴定硫酸奎寧時(shí)，1mol的硫酸奎寧消耗3mol的高氯酸。其反應(yīng)式如下：(C20H24N2·H+)2SO4+3HClO4→(C20H24N2·2H+)·2ClO4-

+(C20H24N2·2H+)·HSO4-·ClO4-

Ch.P和USP(24)都采用此法測定硫酸奎寧和硫酸奎尼丁的含量。當(dāng)前87頁，總共109頁。(3)硫酸奎寧片的測定：

硫酸奎寧片劑堿化處理，生成奎寧游離堿，然后再用高氯酸標(biāo)準(zhǔn)溶液直接滴定。此時(shí)1摩爾的硫酸奎寧可消耗4摩爾的高氯酸，因此片劑分析的滴定度與原料藥分析的滴定度不同。

當(dāng)前88頁，總共109頁。4.硝酸鹽的測定

硝酸在冰醋酸介質(zhì)中酸性不強(qiáng)，滴定反應(yīng)可以進(jìn)行完全。但是硝酸具有氧化性可以破壞指示劑使其變色，使指示劑無法指示終點(diǎn)。因此采用非水溶液滴定法測定硝酸鹽時(shí)，一般不用指示劑法而用電位法指示終點(diǎn)。當(dāng)前89頁，總共109頁。5.磷酸鹽與有機(jī)酸鹽

磷酸與有機(jī)酸在冰醋酸介質(zhì)中酸性極弱，不影響滴定反應(yīng)的定量完成，可以按常規(guī)方法直接滴定。當(dāng)前90頁，總共109頁。（一）硝苯地平的測定

基本原理硝苯地平的測定原理，可用下列反應(yīng)式表示：

終點(diǎn)時(shí):微過量的Ce4+將指示劑中的Fe2+氧化成Fe3+，使橙紅色配合物離子呈淡藍(lán)色或無色，以指示終點(diǎn)的到達(dá)。二、鈰量法當(dāng)前91頁，總共109頁。（二）吩噻嗪類藥物的測定藥物Ce(SO4),-e紅色Ce(SO4),-2e紅色消退自身指示終點(diǎn)或電位法、永停法指示終點(diǎn)當(dāng)前92頁，總共109頁。(一）酸性染料比色法

1.基本原理三、比色法當(dāng)前93頁，總共109頁。

2.影響因素

(1)水相最佳pH值的選擇：本法中水相的pH應(yīng)使有機(jī)堿性藥物均成陽離子(BH+)，而酸性染料應(yīng)電離足夠的陰離子(In-),陰陽離子才能定量生成離子對，并完全溶于有機(jī)溶劑中，而過量的染料完全保留在水相中，才能保證定量的測定。

(2)酸性染料及其濃度：常用酸性染料有溴麝香草酚藍(lán)、甲基橙、溴甲酚綠等。酸性染料濃度，對測定影響不大，有足夠量即可。

當(dāng)前94頁，總共109頁。(3)有機(jī)溶劑的選擇

有機(jī)堿藥物應(yīng)對離子對提取率高，不與水混溶，或能與離子對形成氫鍵的有機(jī)溶劑。常用的有機(jī)溶劑有氯仿、二氯甲烷、二氯乙烯、苯、甲苯、四氯化碳等。(4)水分的影響：嚴(yán)防水分混入有機(jī)溶劑中，水相中過量有色酸性染料，而影響測定結(jié)果；水分的混入使氯仿混濁，而影響比色測定。一般加入脫水劑，或?yàn)V紙過濾的方法，除去混入的水分。當(dāng)前95頁，總共109頁。3.應(yīng)用示例

Ch.P中硫酸阿托品片、氫溴酸東莨菪堿片和氫溴酸山莨菪堿片等，采用本法測定含量測定。當(dāng)前96頁，總共109頁。（二）鈀離子比色法優(yōu)點(diǎn)：鈀離子比色法可選擇性地用于未被氧化的吩噻嗪類藥物的測定。max~500nm吩噻嗪類藥物

+Pd2+pH2±0.1紅色絡(luò)合物在max處測定A，以對照法定量當(dāng)前97頁，總共109頁。（一）直接分光光度法

供試品不需提取分離，溶于適當(dāng)?shù)娜軇┲屑纯蛇M(jìn)行含量測定。

1.奧沙西泮原料的測定在229nm，采用標(biāo)準(zhǔn)對照法測定。

2.鹽酸異丙嗪片的測定在249nm，采用E1cm1%＝910測定。

3.鹽酸異丙嗪注射液的測定

測定波長的選擇：注射液處方加VC作抗氧劑，可還原異丙嗪紅色氧化產(chǎn)物，從而防止異丙嗪氧化變色。VC在鹽酸異丙嗪最大吸收波長249nm處有吸收，干擾測定。因此選用299nm波長測定鹽酸異丙嗪注射液的含量時(shí)，維生素C在此波長處則不產(chǎn)生干擾,但E1cm1%＝108。四、紫外分光光度法當(dāng)前98頁，總共109頁。(二)萃取后分光光度法鹽酸氯丙嗪注射液鹽酸氯丙嗪氨水堿化氯丙嗪乙醚提取乙醚層鹽酸提取鹽酸氯丙嗪max254±1nm處測定A，E1cm1%＝915當(dāng)前99頁，總共109頁。（三）萃取-雙波長分光光度法

本法是USP（24）收載的方法，用于鹽酸氯丙嗪注射液的含量測定，主要用來校正樣品中氧化物對測定的干擾。測定原理利用氯丙嗪的最λmax為254nm，其氧化物在此波長也有吸收，同時(shí)在277nm氧化物也有吸收，且其A254=A277.而氯丙嗪在此波長無吸收。因此，可由兩波長處測得△A計(jì)算氯丙嗪含量。當(dāng)前100頁，總共109頁。當(dāng)前101頁，總共109頁。（四）二階導(dǎo)數(shù)分光光度法鹽酸氯丙嗪注射液抗氧劑維生素C的二階導(dǎo)數(shù)光譜近似為接近基線的一條直線，不干擾鹽酸氯丙嗪的測定。因此鹽酸氯丙嗪可從其二階導(dǎo)數(shù)光譜量取峰266nm～谷254nm距離，標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量

其測定方法如下：

當(dāng)前102頁，總共109頁。1.光譜繪制

測繪條件：波長范圍為200nm～320nm；狹縫為12nm；紙速為120mm/min。2.線性關(guān)系精取鹽酸氯丙嗪對照液(50μg/ml)制得標(biāo)準(zhǔn)系列，以HCI(0.1mol/L)為空白，按光譜繪制項(xiàng)下分別測定。用尺量取不同濃度系列溶液光譜266nm