(30)-1.3.2血紅蛋白測定教你讀懂化驗單

血紅蛋白測定

2血紅蛋白（Hb）的結(jié)構(gòu)血紅素珠蛋白肽鏈珠蛋白+亞鐵血紅素亞鐵血紅素結(jié)構(gòu)3還原血紅蛋白（Hbred）：含F(xiàn)e2+，可與O2可逆結(jié)合，占Hb總量的99%氧合血紅蛋白（HbO2）：Hbred與O2結(jié)合高鐵血紅蛋白（Hi）或正鐵血紅蛋白（MHb）：Fe2+被氧化成Fe3+碳氧血紅蛋白（HbCO）、硫化血紅蛋白（SHb）：與O2結(jié)合的配位鍵被CO、S占據(jù)CO與血紅蛋白的結(jié)合力比氧結(jié)合力高240倍45一、測定方法與評價

◆比色法

氰化高鐵血紅蛋白測定法十二烷基硫酸鈉血紅蛋白測定法堿羥血紅蛋白測定法

61、氰化高鐵血紅蛋白測定法

原理：血液在血紅蛋白轉(zhuǎn)化液中溶血后，除SHb外各種血紅蛋白均可被高鐵氰化鉀氧化為高鐵血紅蛋白（Hi），在一定的pH值下，Hi與氰離子（CN－）結(jié)合生成穩(wěn)定棕紅色氰化高鐵血紅蛋白（HiCN）。HiCN在540nm處有一吸收峰，測定其吸光度，即可換算求得血紅蛋白濃度（g／L）。7HiCN540nm比色血液+轉(zhuǎn)化液

Hb(SHb除外)+K3[Fe(CN)6]

5ml20μl5min9血紅蛋白轉(zhuǎn)化液文齊液的組成：K3Fe（CN）6氧化劑KCN提供CN離子KH2PO4調(diào)節(jié)pHTritonX-100（非離子表面活性劑）:加速溶血、防止渾濁蒸餾水10計算A——540nm波長測定管吸光度64458——目前國際公認的血紅蛋白平均分子量

44——毫摩爾消光系數(shù)L/（mmol*cm）

251——稀釋倍數(shù)。注意：必須使用符合WHO標準的分光光度計11

在實際工作中，通常沒有符合標準的分光光度計。需使用定值的HiCN參考液通過制作標準曲線或計算K值得到結(jié)果。12評價主要優(yōu)點：1．操作簡便。2．試劑較穩(wěn)定，易保存，測定結(jié)果穩(wěn)定。3．血標本中的血紅蛋白（除SHb外）在轉(zhuǎn)化液的作用下能迅速被轉(zhuǎn)化為HiCN，且HiCN穩(wěn)定便于測定。4．ICSH和WHO推薦的參考方法。13缺點：1．試劑含劇毒品氰化鉀，使用、處理不當可能污染環(huán)境，引起公害。2．對HbCO轉(zhuǎn)化較慢。3．不能轉(zhuǎn)化SHb。4．遇高白細胞和高球蛋白血癥的血標本會出現(xiàn)渾濁，標本或試劑應經(jīng)處理后才能比色。評價142、十二烷基硫酸鈉血紅蛋白（SDS-Hb）測定法

原理除SHb外，血液中各種血紅蛋白均可與十二烷基硫酸鈉（SDS）作用，生成SDS-Hb棕紅色化合物。SDS-Hb最大吸收峰為538nm，測定其吸光度，通過制備本法的標準曲線，間接得到血紅蛋白濃度。15主要優(yōu)點：1．試劑無毒性。2．操作簡便。3.呈色穩(wěn)定，準確性和精確性符合要求。評價16缺點：1．SDS質(zhì)量差異大，摩爾消光系數(shù)未確定。不能直接用吸光度換算Hb濃度。一般先用HiCN法標定新鮮血標本，再用來制備本法的標準曲線。2．易破壞白細胞，不適用于同時進行WBC計數(shù)的血細胞分析儀。評價173、堿羥血紅蛋白（AHD575）測定法試劑無毒，呈色穩(wěn)定，準確度、精密度均較高。需在575nm比色，限制了該法在血細胞分析儀的使用。血細胞分析儀多采用540nm左右范圍濾光板。18

成年男性：120～160g/L成年女性：110～150g/L新生兒：170～200g/L二、參考范圍19

血紅蛋白測定的臨床意義與紅細胞計數(shù)相似，但判斷貧血程度優(yōu)于紅細胞計數(shù)。

三、臨床意義貧血程度的劃分輕度貧血：Hb91～1