實驗十一多管發(fā)酵法測定水中大腸菌群

實驗十一多管發(fā)酵法測定水中大腸菌群第1頁/共13頁多管發(fā)酵法測定水中大腸菌群考查內(nèi)容：一、預習報告（包括提問）二、操作（無菌操作，隨機抽看）三、實驗報告實驗十一(綜合實驗）第2頁/共13頁多管發(fā)酵法測定水中大腸菌群一、實驗目的二、實驗原理三、實驗材料四、實驗步驟五、實驗報告第3頁/共13頁一、實驗目的1、學習測定水中大腸菌群數(shù)量的多管發(fā)酵法。2、了解大腸菌群的數(shù)量在飲水中的重要性。第4頁/共13頁

發(fā)酵法：又稱多管發(fā)酵法或三步發(fā)酵法

1)初發(fā)酵（推測試驗）：將不同稀釋度的水樣，分別接種于含有乳糖等糖類的培養(yǎng)液中（3倍或1倍乳糖液），經(jīng)37oC培養(yǎng)24h，觀察產(chǎn)酸產(chǎn)氣情況，培養(yǎng)基內(nèi)加有溴甲酚紫作為PH指示劑，細菌產(chǎn)酸后，培養(yǎng)基即由原來的紫色變?yōu)辄S色，以初步判斷是否有大腸菌群存在。二、實驗原理第5頁/共13頁2）平皿分離（證實試驗）

水中除大腸菌群外，尚有其它細菌可能引起糖類發(fā)酵，因此需要進一步證實。將初發(fā)酵管中已發(fā)酵的菌液接種于伊紅美蘭培養(yǎng)基，37oC培養(yǎng)24h，根據(jù)菌落特征（帶核心的、有金屬光澤的深紫色菌落），挑取可能為大腸菌群的菌落制片，經(jīng)革蘭氏染色，進一步證實是否為大腸菌群。第6頁/共13頁3）復發(fā)酵試驗(完成實驗）

將上述可能為大腸菌群的菌落再次轉(zhuǎn)接入1倍乳糖培養(yǎng)液中，經(jīng)37oC培養(yǎng)24h，產(chǎn)酸產(chǎn)氣者即最后確證為存在大腸菌群。產(chǎn)酸、產(chǎn)氣分別記為陽性反應，不產(chǎn)酸、產(chǎn)氣則記為陰性反應；根據(jù)陽性管數(shù)量，查表求得水體大腸菌群的數(shù)量。第7頁/共13頁三、實驗材料1、培養(yǎng)基：乳糖蛋白胨發(fā)酵管（內(nèi)有倒置小套管），三倍濃縮乳糖蛋白胨發(fā)酵管（瓶）（內(nèi)有倒置小套管），伊紅美藍瓊脂平板，滅菌水。2、儀器或其他用具：載玻片，滅菌帶玻璃塞空瓶，滅菌吸管，滅菌試管等。第8頁/共13頁四、操作步驟1．水樣的采取實驗室提供水樣2．河水的檢查（1）初（步）發(fā)酵實驗水樣的稀釋：10-1與10-2

接種：分別吸取1ml10-2

、10-1和原水樣接入裝有10ml普通濃度乳糖蛋白胨發(fā)酵管；另取10ml原水樣接入裝有5ml三倍濃縮乳糖蛋白胨發(fā)酵管，混勻后，37℃培養(yǎng)24h，24h未產(chǎn)氣的繼續(xù)培養(yǎng)48h。第9頁/共13頁（2）平板分離將經(jīng)24h和48h培養(yǎng)后產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管，分別劃線接種于伊紅美藍瓊脂平板上，再于37℃培養(yǎng)18～24h，將符合下列特征的菌落進行染色鏡檢。深紫黑色，有金屬光澤；紫黑色，不帶或略帶金屬光澤；淡紫紅色，中心顏色較深。第10頁/共13頁（3）復發(fā)酵試驗將鏡檢為革蘭氏陰性無芽孢桿菌的菌株重復初步發(fā)酵試驗。并根據(jù)初發(fā)酵管試驗的陽性管查表，即得大腸菌群數(shù)。第11頁/共13頁圖1多管發(fā)酵測定水中大腸菌群的操作步驟和結(jié)果解釋10ml×1001ml×100