實(shí)驗(yàn)四蛋白質(zhì)的鹽析作用和透析

實(shí)驗(yàn)三

蛋白質(zhì)的鹽析作用一、目的要求了解蛋白質(zhì)的的沉淀反應(yīng)學(xué)習(xí)鹽析操作技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)原理用大量中性鹽使蛋白質(zhì)從溶液中沉淀析出的過程稱為蛋白質(zhì)的鹽析作用。蛋白質(zhì)是親水膠體，蛋白質(zhì)溶液在高濃度中性鹽的影響下，蛋白質(zhì)分子被中性鹽脫去水化層，同時(shí)所帶電荷被中和，結(jié)果蛋白質(zhì)的膠體穩(wěn)定性遭到破壞而沉淀析出。析出的蛋白質(zhì)仍保持其天然性質(zhì)，當(dāng)降低鹽的濃度時(shí)，還能溶解。因此，蛋白質(zhì)的鹽析作用是可逆過程。3、實(shí)驗(yàn)器材試管及試管架、濾紙、研缽、燒杯、玻璃棒、漏斗四、操作方法（1）取一個(gè)燒杯，加入10ml蛋白質(zhì)氯化鈉溶液和10ml飽和硫酸銨溶液，混勻，靜置約10min，則球蛋白沉淀析出；（2）過濾后向?yàn)V液中加入硫酸銨粉末，邊加邊用玻璃棒攪拌，直至粉末不再溶解，達(dá)到飽和為止，此時(shí)析出的沉淀為清蛋白；（3）靜置，倒去上清液，取部分清蛋白沉淀，加水稀釋，觀察它是否溶解，留取部分作透析用。實(shí)驗(yàn)四蛋白質(zhì)可逆沉淀和不可逆沉淀的比較一、目的要求了解蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)、變性作用。學(xué)習(xí)透析操作技術(shù)。二、實(shí)驗(yàn)原理蛋白質(zhì)分子在水溶液中，由于其表面形成了水化層和雙電層而成為穩(wěn)定的膠體顆粒，所以蛋白質(zhì)溶液和其他親水膠體溶液相似。但是，在一定的物理化學(xué)因素影響下，由于蛋白質(zhì)膠體顆粒的穩(wěn)定條件被破壞，如失去電荷、脫水、甚至變性，而以固體形式從溶液中析出，這個(gè)過程稱為蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)。這種反應(yīng)可分為可逆沉淀反應(yīng)和不可逆沉淀反應(yīng)。不可逆沉淀反應(yīng)—蛋白質(zhì)發(fā)生沉淀時(shí)，其內(nèi)部結(jié)構(gòu)空間構(gòu)象遭到破壞，蛋白質(zhì)分子由規(guī)則性的結(jié)構(gòu)變?yōu)闊o秩序的伸展肽鏈，使原有的天然性質(zhì)喪失，這時(shí)蛋白質(zhì)已發(fā)生變性。這種變性蛋白已不能再溶解于原來溶劑中。三、試劑和器材1、實(shí)驗(yàn)材料：雞蛋2、實(shí)驗(yàn)試劑蛋白質(zhì)溶液：取5ml雞蛋清，用蒸餾水稀釋至100ml，攪拌均與后用4-8層紗布過濾，新鮮配制。蛋白質(zhì)鹽析溶液其他試劑：0.1%硫酸銅溶液3、實(shí)驗(yàn)器材試管及試管架、透析袋、玻璃棒、線繩、燒杯四、操作方法（1）取1支試管，加入約1ml蛋白質(zhì)溶液，加入1%硫酸銅溶液3-4滴，觀察沉淀的生成。（2）在蛋白質(zhì)可逆沉淀反應(yīng)中，將用硫酸銨鹽析所得的清蛋白沉淀倒入透析袋內(nèi)，用線繩或透析袋夾江透析袋口扎緊，把透析袋浸入盛有蒸