豬人工授精技術(shù)操作規(guī)程

豬人工授精技術(shù)操作規(guī)程人工授精站設(shè)置選址1.1.1地形地勢：地形要求開闊整齊，有足夠面積，并留有發(fā)展余地。地勢要求較高、干燥、平坦、背風(fēng)向陽、有緩坡，但坡度應(yīng)不大于25°。1.1.2建筑朝向：南偏東15°。1.1.3社會條件：要求距鐵路、國家一、二級公路應(yīng)不少于500米，距三級公路應(yīng)不少于200米，距四級公路不少于100米；與村鎮(zhèn)居發(fā)點、工廠及其它牧場的距離應(yīng)不少于1000米。人員1采精員：熟練掌握公豬采精技術(shù)及后備公豬調(diào)教技術(shù)，合理控制公豬采精頻率，能采集體積大、密度高的精液。1.2.2精液配制員：熟練掌握精液品質(zhì)檢查、稀釋液配制、精液稀釋、精液分裝和保存等實驗技術(shù)，樹立清潔、無菌概念。提供優(yōu)質(zhì)合格精液。1.2.3輸精員：熟練掌握母豬發(fā)情鑒定技術(shù)，嚴格按照操作規(guī)程進行輸精，認真填寫母豬輸精登記卡，保證母豬的受胎率和產(chǎn)仔數(shù)。1.2.4公豬飼養(yǎng)員：根據(jù)公豬體況、年齡等控制飼料飼喂量，保證公豬正常性機能，配合采精員的工作。1.3公豬舍1公豬舍：建議采用水簾降溫系統(tǒng)，公豬集中飼養(yǎng)。公豬舍內(nèi)配有足夠的采精欄，應(yīng)緊靠精液配制室。1.3.2公豬欄：地板要求半漏縫，采用防滑材料埔設(shè)，每個公豬欄面積約6M2,要求有三條以上趕豬通道。1.4采精室1建筑設(shè)計：約5-6平方米(如2.1X2.4M)，靠近公豬欄和精液制作室，要求寬敞、平坦、清潔、安靜，地面防滑易清洗，內(nèi)設(shè)工作人員逃逸安全區(qū)。1.4.2工作人員逃逸安全角：以間隔約27厘米、直徑10厘米、高120厘米鋼管直立排列而成，與墻角形成三角形。1.4.3采精架：以鋼材或木材制作，高60-70厘米，寬25-30厘米，長100-120厘米，架背輔適當(dāng)厚度的彈性軟物，外包一張經(jīng)過處理的豬皮或橡膠皮，以利清洗消毒。要求穩(wěn)固、可升降以便為不同高度公豬提供服務(wù)。1.4.4防滑墊：彈性較好的橡膠墊，長100厘米，寬80厘米，位于采精架前。1.4.5精液傳遞窗：位于采精室與精液制作室之間，寬50厘米，高40厘米，墻兩邊設(shè)可推拉的玻璃門。1.4.6滅菌燈：內(nèi)墻安裝紫外線燈用作定期消毒。1.5精液配制室1總體要求：內(nèi)設(shè)工作臺和清洗用具用水池，內(nèi)墻用瓷片鋪面，并安裝空調(diào)機和紫外線消毒燈。以便于工作、衛(wèi)生為主。1.5.2功能區(qū)：用具清洗和雙蒸水制備區(qū)、稀釋液配制區(qū)、精液品質(zhì)檢查區(qū)、精液稀釋區(qū)、精液分裝區(qū)、精液保存區(qū)、精液發(fā)放區(qū)等。1.5.3儀器設(shè)備和用具：所需儀器設(shè)備為：電腦、精子密度測定儀、位相差顯微鏡、37-38°C恒溫板、載玻片和蓋玻片、紅血球計數(shù)板、計數(shù)器、電子天平、磁力攪拌機、電子顯示溫度計、酒精溫度計、精液分裝機、17C精液保存箱、恒溫水浴鍋、恒溫箱、雙蒸水器或去離子水生產(chǎn)器、干燥箱、1000ml、2000、3000ml燒杯、微量加樣器、采精用的保溫集精杯、一次性薄膜手套、精液輸送箱、脫脂紗布。種公豬與公豬飼養(yǎng)管理2.1品種2.1.1品種：長白、大白、杜洛克等。2.1.2引種標(biāo)準(zhǔn)：純種公豬要求達品種標(biāo)準(zhǔn)。2.1.3健康標(biāo)準(zhǔn)：公豬無傳染病。2.2營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)1日糧要求：種公豬日糧以提高公豬產(chǎn)精性能為目的，應(yīng)獨立配制。2.2.2營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)：種公豬每日推薦如表2。飼養(yǎng)管理1飼養(yǎng)：根據(jù)不同品種和品系確定種公豬的日糧配方，日飼喂量一般為2.5-3.0kg。嚴禁發(fā)霉變質(zhì)和有毒飼料混入，要求飼料有良好的適口性，注意日糧體積不能過大，防止公豬腹大影響體形和配種。2.3.2日常管理：每天定時用刷子刷拭豬身，熱天淋浴沖洗，定期稱重和修蹄，嚴防公豬咬架等。2.3.3防暑降溫：種公豬最適宜的溫度為18-20°C。高溫可使種公豬的食欲下降、性欲降低、精液品質(zhì)下降，甚至?xí)惺钏劳?。防暑降溫可采用水簾、通風(fēng)、灑水、沖涼、遮蔭等措施。防疫與健康檢查2.4.1定期檢測：每年定期于月份對公豬進行全面的抽血檢測,對不合格的公豬進行淘汰；檢測的疫病包括：偽狂犬病、藍耳病、豬瘟、布氏、5號病等。2.4.2免疫注射：3月份：乙腦2頭份、豬瘟18月齡前4頭份/18月齡后6頭份、鏈球菌3頭份。6月份：豬肺疫2頭份。9月份：豬瘟18月齡前4頭份/18月齡后6頭份、鏈球菌3頭份。2.4.3驅(qū)蟲：每年每頭豬驅(qū)蟲2次。2.4.4引種隔離：對引進的公豬，先隔離飼養(yǎng)2個月，并抽血檢測，證明無上述5種傳染病者，并入大欄飼養(yǎng)，對不合格的作淘汰處理。采精3.1公豬調(diào)教1調(diào)教年齡：后備公豬7-8月齡可開始調(diào)教，有配種經(jīng)驗的公豬也可進行采精調(diào)教。首先剪去公豬包皮部的長毛。3.1.2調(diào)教方法：①將成年公豬的精液或包皮部分泌物涂在假臺豬后部；②采精欄放置一發(fā)情母豬，在公豬試圖接近發(fā)情母豬時，將公豬引至假臺豬；③讓待訓(xùn)練公豬觀摩已調(diào)教成功的公豬爬跨假臺豬。每天可調(diào)教1次，但每次調(diào)教時間不能超過15分鐘。一旦采精成功，第2天和第3天再繼續(xù)采精，以加強其記憶和促成條件反射的建立。調(diào)教公豬要有耐心，不準(zhǔn)打罵公豬。同時，注意公豬和調(diào)教人員的安全。3.2采精方法3.2.1米精前準(zhǔn)備3.2.1.1米精公豬的準(zhǔn)備：根據(jù)當(dāng)天精液需要情況，確定用于采精的公豬品種、耳號，并安排好采精的先后順序。如果公豬體表有太多臟物，需事先沖洗干凈并擦干體表水漬，才將公豬趕至采精室。3.2.1.2米精器件的準(zhǔn)備：集精器（米精杯或采精盒將一次性使用的食品保鮮袋置于集精器內(nèi)，器口蓋4層一次性使用的消毒紗布或濾精膜，用橡膠圈套上固定，以過濾精液中的膠凍物質(zhì)）置于38C的恒溫箱中備用。當(dāng)公豬引至采精室后，迅速取出集精器，另外，還應(yīng)準(zhǔn)備好采精時清潔公豬包皮內(nèi)污物的紙巾或消毒清潔的干紗布等。3.2.1.3配制精液稀釋液：配制好所需量的稀釋液，置于在水浴鍋中預(yù)熱至35C。3.2.1.4精液質(zhì)檢設(shè)備的準(zhǔn)備：調(diào)節(jié)好質(zhì)檢用的顯微鏡，開啟顯微鏡載物臺上恒溫板以及預(yù)熱精子密度測定儀。3.2.1.5精液分裝器件的準(zhǔn)備：準(zhǔn)備好精液分裝器、精液瓶或袋等。米精技術(shù)3.2.2.1米精員一手帶雙層手套，另一手持37C保溫杯（內(nèi)裝1次性食品袋）用于收集精液；飼養(yǎng)員將待采精的公豬趕至采精欄，用0.1%高錳酸鉀溶液清洗其腹部和包皮，再用溫水（夏天用自來水）清洗干凈，避免藥物殘留對精子的傷害。3.2.2.2采精員擠出公豬包皮積尿，按摩公豬包皮部，刺激其爬跨假臺畜。3.2.2.3公豬爬跨假臺畜并逐步伸出陰莖，脫去外層手套，將公豬陰莖龜頭導(dǎo)入空拳。3.2.2.4用手（大拇指與龜頭相反方向）緊握伸出的公豬陰莖螺旋狀龜頭，順其向前沖力將陰莖的“S’狀彎曲拉直，握緊陰莖龜頭防止其旋轉(zhuǎn)，公豬即可射精。3.2.2.5用四層沙布過濾收集濃份或全份精液于保溫杯內(nèi)的一次性食品袋內(nèi)，最初射出的少量（5ml左右）精清不接取，有些公豬分2-3個階段將濃份精液射出，直到公豬射精完畢，射精過程歷時5-7分鐘。3.2.2.6集精杯位置應(yīng)高于包皮部，可防止包皮部液體流入集精杯內(nèi)。3.2.2.7采精員應(yīng)注意安全，一旦公豬出現(xiàn)攻擊行為，采精員應(yīng)立刻逃至安全角。3.3采精頻率1采精頻率：以單位時間內(nèi)獲得最多的有效精子數(shù)決定其采精頻率。采精頻率的固定比采精頻率本身更重要。3.3.2成年公豬：每周采精1.5-2次。3.3.3青年公豬：每周1次。精液品質(zhì)檢查4.1精液量：以電子天平稱量精液，按每克1毫升計，避免以量筒等轉(zhuǎn)移精液盛放容器的方法測量精液體積。4.2顏色：正常的精液是乳白色或淺灰白，精子密度越高，色澤愈濃，其透明度愈低。如帶有綠色或黃色是混有膿液或尿液，若帶有淡紅色或紅褐色是含有血液。這樣的精液應(yīng)舍棄不用，會同獸醫(yī)尋找原因。4.3氣味：豬精液略帶腥味，如有異常氣味，應(yīng)廢棄。pH值（酸堿度）：以pH計或pH試紙測量。4.5精子活率檢查：活率是指呈直線運動的精子百分率，在顯微鏡下觀察精子活率，一般按0.1-1.0的十級評分法進行，鮮精活率要求不低于0.7;檢查活率時要求載玻片和蓋玻片都應(yīng)37°C預(yù)熱。4.6精子密度：指每毫升精液中所含的精子數(shù)，是確定稀釋倍數(shù)的重要指標(biāo)。要求用血細胞計數(shù)板進行計數(shù)或精液密度儀測定。血細胞計數(shù)板計數(shù)方法：①以微量加樣品取具有代表性原精液200ul，3%NaCl1800U1,混勻，使之稀釋10倍；②在血細胞計數(shù)室上放一蓋玻片，取1滴上述精液放入計數(shù)板的槽中，靠虹吸將精液吸入計數(shù)室內(nèi)；③在高倍鏡下計數(shù)5個中方格內(nèi)的精子總數(shù)，將該數(shù)乘以50萬，即得原精液每毫升的精子數(shù)（即精液密度）。4.7精子畸形率：畸形率是指異常精子的百分率，一般要求畸形率不超過18%，其測定可用普通顯微鏡，但需伊紅或姬姆沙染色，相差顯微鏡可直接觀察活精子的畸形率，公豬使用過頻或高溫環(huán)境會出現(xiàn)精子尾部帶有原生質(zhì)滴的畸形精子；畸形精子種類很多，如：巨型精子、短小精子、雙頭或雙尾精子，頂體膨脹或脫落、精子頭部殘缺或與尾部分離、尾部變曲。要求每頭公豬每兩周檢查一次精子畸形率。4.8認真填寫種公豬精液品質(zhì)檢查登記表（見表1）。精液稀釋、分裝、貯存和運輸稀釋液5.1.1稀釋液:按稀釋液配方（見表4），用稱量紙、電子天平準(zhǔn)確稱量藥品。2按1000ml、2000ml劑量稱量稀釋粉，置于密封袋中。5.1.3使用前1小時將稱量好的稀釋粉溶于定量的雙蒸水中，可用磁力攪拌器助其溶解。5.1.4用0.1N稀鹽酸或0.1N氫氧化鈉調(diào)整稀釋液的PH值為7.2（6.8-7.4）左右，；稀釋液配好，應(yīng)及時貼上標(biāo)簽，標(biāo)明品名、配制日期和時間、經(jīng)手人等。5.1.5液態(tài)狀稀釋液冰箱4C保存，不超過24小時。5.2精液稀釋5.2.1精液采集后應(yīng)盡快稀釋，原精貯存不超過30分鐘。5.2.2未經(jīng)品質(zhì)檢查或檢查不合格（活力0.7以下）的精液不能稀釋。5.2.3稀釋液與精液要求等溫稀釋，兩者溫差不超過1°C,即稀釋液應(yīng)加熱至33°C-37°C,以精液溫度為標(biāo)準(zhǔn)，來調(diào)節(jié)稀釋液的溫度,絕不能反過來操作。5.2.4稀釋時，將稀釋液沿盛精液的杯（瓶）壁緩慢加入到精液中，然后輕輕搖動或用消毒玻璃棒攪拌，使之混合均勻。5.2.5如作高倍稀釋時，應(yīng)進行低倍稀釋（1：1-2），待半分鐘后再將余下的稀釋液沿壁緩慢加入，以防造成“稀釋打擊”。5.2.6稀釋倍數(shù)的確定：活率N0.7的精液，一般按每個輸精劑量含40億個總精子，輸精量為80-100ml確定稀釋倍數(shù)，例如：某頭公豬一次采精量是200ml,活力為0.8,密度為2億/ml,要求每個輸精劑量是含40億精子，輸精量為80ml，則總精子數(shù)為200mlX2億/ml=400億，輸精頭份為400億：40億=10份，加入稀釋液的量為10X80ml-200ml=600ml。5.2.7稀釋后要求靜置片刻再作精子活力檢查，如果稀釋前后活力無太大變化，即可進行分裝與保存,如果活力下降，說明稀釋液的配制或稀釋操作有問題，不宜使用，并應(yīng)查明原因加以改進。5.2.8混合精液：新鮮精液首先按1:1稀釋，根據(jù)精子密度和混合精液的量記錄需加入稀釋液的量，將部分稀釋后精液放入水浴鍋保溫，重復(fù)收集3-4頭公豬品質(zhì)優(yōu)秀精液，將所要混精的精液置于足夠大的容器，加入剩余部分稀釋液（要求與精液等溫），混均后進行分裝。5.3精液分裝1調(diào)好精液分裝機,以每80-100毫升為單位,將精注分裝至精液瓶或袋。5.3.2在瓶或袋上用標(biāo)簽機打上標(biāo)明公豬品種、耳號、生產(chǎn)日期、保存有效期、稀釋液名稱和生產(chǎn)單位等。5.3.3精液置室溫（25C）1-2小時后，放入17C精液保存恒溫冰箱貯藏，也可將精液瓶或袋用毛巾包嚴直接放入17C精液保存恒溫冰箱內(nèi)。5.4精液貯存5.4.1精液須貯存于17C精液保存恒溫冰箱。5.4.2短效稀釋液可保存3天、中效稀釋液可保存4-6天、長效稀釋液可保存7-9天，無論何種稀釋液保存精液，應(yīng)盡快用完。5.4.3每隔12個小時輕輕搖勻一次，防止精子沉淀而引起死亡。精液運輸5.5.1精液運輸應(yīng)置于保溫較好的裝置內(nèi)，如：可用雙層泡沫箱，內(nèi)裝17C“冰皇”，作為保溫材料。5.5.2精液運輸過程中避免強烈震動。6母豬發(fā)情鑒定和輸精6.1發(fā)情鑒定：每日最少要做兩次試情（每天上午6：30-8：30和下午16：00-17：30進行發(fā)情檢查），即在安靜的環(huán)境下，有公豬在旁時，壓背，以觀察其站立反應(yīng)。試情公豬一般選用善于交談、唾液分泌旺盛、行動緩慢的老公豬；在發(fā)情鑒定之前1小時內(nèi)不應(yīng)讓發(fā)情母豬接受公豬刺激。6.2配種方式：①第1次自然交配、第2次人工授精；②第1次自然交配、第2、3次人工授精；③2次人工授精；④3次人工授精。6.3輸精時間：①斷奶后3-6天發(fā)情的經(jīng)產(chǎn)母豬，發(fā)情出現(xiàn)站立反應(yīng)后6-12小時進行第1次輸精配種；②后備母豬、斷奶后7天以上發(fā)情的經(jīng)產(chǎn)母豬和返情母豬，發(fā)情出現(xiàn)站立反應(yīng)，就進行配種（輸精）。6.4精液檢查：從17C保存箱取出的精液，輕輕搖勻，用已滅菌的滴管取1滴放于預(yù)熱的載玻片，置于37C的恒溫板上片刻，用顯微鏡檢查活力，精液活力N0.7,才可進行輸精。6.5輸精管：經(jīng)產(chǎn)母豬用一次性海綿頭輸精管，輸精前檢查海綿頭是否松動；后備母豬用一次性螺旋頭輸精管。為防止子宮炎發(fā)生，每頭母豬每次輸精都應(yīng)使用一條新的輸精管。6.6輸精技術(shù)6.6.1輸精人員消毒清潔雙手。6.6.2用0.1%高錳酸鉀水溶液清潔母豬外陰、尾根及臀部周圍，再用溫水浸濕毛巾，擦干外陰部。6.6.3將試情公豬趕至待配母豬欄之前，使母豬在輸精時與公豬口鼻部接觸。6.6.4從密封袋中取出沒受任何污染的一次性輸精管（手不應(yīng)接觸輸精管前2/3部分），在其前端涂上精液作為潤滑液。6.6.5將輸精管45度角向上插入母豬生殖道內(nèi)，輸精管進入3-4cm之后，順時針旋轉(zhuǎn)，當(dāng)感覺有阻力時，繼續(xù)緩慢旋轉(zhuǎn)同時前后移動，直到感覺輸精管前端被鎖定（輕輕回拉不動），并且確認被子宮頸鎖定。6.6.6從精液貯存箱取出品質(zhì)合格的精液，確認公豬品種、耳號。6.6.7緩慢顛倒搖均精液，用剪刀剪去瓶（管）嘴（或撕開袋口）接到輸精管上，輕輕擠壓確保精液能夠流出輸精瓶（管、袋）。6.6.8用針頭在輸精瓶底部扎一個小孔，撫摸母豬的乳房、脅部、外陰及壓背刺激母豬，使其子宮收縮產(chǎn)生負壓，將精液吸納；輸精時勿將精液擠入母豬生殖道內(nèi)，防止精液倒流。6.6.9控制輸精瓶（管、袋）的高低（或進入空氣的量）來調(diào)節(jié)輸精時間，輸精時間要求3-10分鐘。6.6.10當(dāng)輸精瓶（管、袋）內(nèi)精液排空后，放低輸出精瓶約15秒，觀察精液是否回流到輸精瓶，若有倒流輸精瓶再將其輸入。6.6.11在防止空氣進入母豬生殖道的情況下，把輸精管后端一小段折起，放在輸精瓶（管、袋）中，使其滯留在生殖道內(nèi)5分鐘以上，讓輸精管慢慢滑落。6.6.7從17°C精液保存箱中取出的精液，無需升溫至37°C，搖勻后可直接輸精，但檢查精液活力需將玻片預(yù)熱至37C。6.6.8認真登記母豬生產(chǎn)卡、配種記錄（見表3）。7輸精后母豬的管理7.1輸精后的母豬應(yīng)飼養(yǎng)在安靜的環(huán)境中，防止強的應(yīng)激和夏季的防暑降溫或冬季的保溫。7.2在配種后一月內(nèi)適當(dāng)減少飼料喂量。7.3配種后一月內(nèi)任何不利的因素都可能造成早期胚胎被母豬自體吸收，影響配種效果。表豬精液品質(zhì)檢查登記表采精日期公豬采灶精員采精量ml色澤氣味PH值活率精子密度億/ml畸形精子率%總精子數(shù)億稀釋后總量ml稀釋液量ml頭份數(shù)檢驗員備注

表2種公豬每日營養(yǎng)推薦表營養(yǎng)數(shù)量/頭/日數(shù)量/噸蛋白質(zhì)250g13.5%賴氨酸11g0.60%蛋-胱氨酸5.8g0.31%色氨酸2.3g0.13%蘇氨酸7.6g0.42%纈氨酸8.1g0.44%鈣16g0.90%磷14.5g0.80%有效磷9g0.50%鹽9g0.50%微量元素銅30mg15g碘0.54mg0.27g鐵300mg150g錳72mg36g硒0.54mg0.27g鋅300mg150g維生素維生素A20000usp10000000usp維生素D3000usp1500000usp維生素E80lu40000lu維生素K8mg4000mgvb2或核黃酸18mg9000mg煙酸（抗癩皮病維生素）100mg50000mgd-泛酸60mg30000mg維生素B120.08mg40mg葉酸123mg1500mg生物素、維生素H0.4mg200mg膽酸1000mg5000000mg毗哆醇VB 6 27.5mg13750mg表3母豬輸精登記表耳胎發(fā)情第1次輸精第2次輸精第3次輸精預(yù)產(chǎn)輸精號次日期公豬耳號輸精時間站立反應(yīng)精液倒流公豬耳號輸精時間站立反應(yīng)精液倒流公豬耳號輸精時間站立反應(yīng)精液倒流期員表4常見幾種公豬精液稀釋液配方 單位：克成份BTSGuelphZorpvaReading保存時間（天）3355D-葡萄糖37.1560.0011.5011.50檸檬酸三鈉6.003.7011.6511.65EDTA鈉鹽1.253.702.352.35碳酸氫鈉1.251.201.751.75氯化鉀0.75//0.75青霉素鈉0