柱色譜分離實(shí)驗(yàn)

（優(yōu)選）柱色譜分離實(shí)驗(yàn)現(xiàn)在是1頁(yè)\一共有38頁(yè)\編輯于星期六了解：1.柱色譜法分離有機(jī)物的原理。2．固定相和流動(dòng)相的選擇原則。掌握：

1.色譜柱的填充方法。2．柱色譜分離的基本操作。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康默F(xiàn)在是2頁(yè)\一共有38頁(yè)\編輯于星期六色譜法簡(jiǎn)介

色譜法亦稱色層法，層析法等，是分離，純化和鑒定有機(jī)化合物的重要方法之一，還可定量分析。

現(xiàn)在是3頁(yè)\一共有38頁(yè)\編輯于星期六色譜法分類固定相、流動(dòng)相的物理狀態(tài)操作形式分離原理液—固色譜法氣—固色譜法氣—液色譜法液—液色譜法柱色譜法（columnchromatography）薄層色譜法（TLC）紙色譜法（paperchromatography）氣相色譜（GC）高效液相色譜（HPLC）吸附色譜法分配色譜法離子交換色譜法排阻色譜操作形式柱色譜法（columnchromatography）二、實(shí)驗(yàn)原理現(xiàn)在是4頁(yè)\一共有38頁(yè)\編輯于星期六現(xiàn)在是5頁(yè)\一共有38頁(yè)\編輯于星期六柱色譜分離示意圖混合物吸附劑(固定相)洗脫劑(流動(dòng)相)二、實(shí)驗(yàn)原理現(xiàn)在是6頁(yè)\一共有38頁(yè)\編輯于星期六現(xiàn)在是7頁(yè)\一共有38頁(yè)\編輯于星期六二、實(shí)驗(yàn)原理吸附劑的性質(zhì)：均勻、表面積大、不反應(yīng)、吸附能力不同化合物的結(jié)構(gòu)：化合物的吸附性和它們的極性成正比洗脫劑的極性：溶解度適中、不反應(yīng)、易獲取回收影響分離效果主要因素現(xiàn)在是8頁(yè)\一共有38頁(yè)\編輯于星期六現(xiàn)在是9頁(yè)\一共有38頁(yè)\編輯于星期六現(xiàn)在是10頁(yè)\一共有38頁(yè)\編輯于星期六現(xiàn)在是11頁(yè)\一共有38頁(yè)\編輯于星期六現(xiàn)在是12頁(yè)\一共有38頁(yè)\編輯于星期六現(xiàn)在是13頁(yè)\一共有38頁(yè)\編輯于星期六現(xiàn)在是14頁(yè)\一共有38頁(yè)\編輯于星期六現(xiàn)在是15頁(yè)\一共有38頁(yè)\編輯于星期六現(xiàn)在是16頁(yè)\一共有38頁(yè)\編輯于星期六現(xiàn)在是17頁(yè)\一共有38頁(yè)\編輯于星期六現(xiàn)在是18頁(yè)\一共有38頁(yè)\編輯于星期六現(xiàn)在是19頁(yè)\一共有38頁(yè)\編輯于星期六現(xiàn)在是20頁(yè)\一共有38頁(yè)\編輯于星期六和和在氧化鋁柱子上若分離下列各組混合物，哪一個(gè)組分先被洗脫下來(lái)？現(xiàn)在是21頁(yè)\一共有38頁(yè)\編輯于星期六三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容裝柱加樣洗脫收集鑒定干法：10g硅膠

+乙醇先用乙醇后用水操作組分顏色組分顏色1mL樣品加樣操作0.5mL×2乙醇洗滌

柱色譜操作：實(shí)驗(yàn)步驟:現(xiàn)在是22頁(yè)\一共有38頁(yè)\編輯于星期六

吸附劑裝填緊密，排除氣泡。最終應(yīng)使吸附劑的上端平整，無(wú)凹凸面，無(wú)斷層。干法裝柱濕法裝柱裝柱三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容現(xiàn)在是23頁(yè)\一共有38頁(yè)\編輯于星期六裝柱時(shí)應(yīng)該注意均勻，不能有氣泡，裂縫，否則樣品可能順縫隙流動(dòng)而不吸附，影響樣品的分離，應(yīng)用質(zhì)軟的物體如吸耳球等輕輕敲擊柱身，促使吸附劑裝填緊密，排除氣泡。最終應(yīng)使吸附劑的上端平整，無(wú)凹凸面．現(xiàn)在是24頁(yè)\一共有38頁(yè)\編輯于星期六

樣品為液體，可直接加樣；樣品為固體，可選擇合適溶劑溶解為液體再加樣。加樣時(shí)，要沿管壁慢慢加入至柱頂部，勿使樣品攪動(dòng)吸附劑表面。

加樣三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容現(xiàn)在是25頁(yè)\一共有38頁(yè)\編輯于星期六洗脫在柱頂不斷加入洗脫劑，使洗脫劑永遠(yuǎn)保持有適當(dāng)?shù)牧?，不要讓洗脫劑表面流干，使流?dòng)相流速適當(dāng)。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容現(xiàn)在是26頁(yè)\一共有38頁(yè)\編輯于星期六洗脫時(shí)應(yīng)注意：（1）向柱內(nèi)加入95%乙醇溶液洗脫（可以通過(guò)注射器沿管壁或安裝滴液漏斗）在恒壓或加壓條件下進(jìn)行洗脫?？刂屏鞒鏊俣?滴/秒。逐漸出現(xiàn)色層帶分離。（2）第一色層帶到達(dá)色譜柱底部時(shí)，立即用錐形瓶收集第一色層的溶液，直到其完全被洗出?！咀⒁狻肯疵摃r(shí)切勿使溶劑流干?。?）然后，改用水溶液作為洗脫劑，當(dāng)?shù)诙珜訋У竭_(dá)色譜柱底部時(shí)，立即收集第二色層的的溶液，直到其完全被洗出。（4）用量筒分別量取所分離出來(lái)的兩種溶液的體積后，倒入指定的回收瓶中。（5）分離結(jié)束后，應(yīng)先讓溶劑盡量流干，然后倒置，用吸耳球從活塞向管內(nèi)擠壓空氣，將吸附劑從柱頂擠壓出。使用過(guò)的吸附劑倒入垃圾桶里?，F(xiàn)在是27頁(yè)\一共有38頁(yè)\編輯于星期六試樣有色，在層析柱上可直接觀察。洗脫后分別收集各個(gè)組分。收集試樣無(wú)色，收集洗脫液時(shí)，多采用等份收集，每份洗脫劑的體積隨所用吸附劑的量及試樣的分離情況而定。收集的每份洗脫劑的體積越小，分離效果越好。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容現(xiàn)在是28頁(yè)\一共有38頁(yè)\編輯于星期六三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容鑒定試樣有色依據(jù)顏色直接鑒定試樣無(wú)色可結(jié)合薄層色譜結(jié)果現(xiàn)在是29頁(yè)\一共有38頁(yè)\編輯于星期六玻砂防堵塞裝柱需緊密加壓不可大溶劑勿流干四、注意事項(xiàng)現(xiàn)在是30頁(yè)\一共有38頁(yè)\編輯于星期六色譜法在有機(jī)化學(xué)中的應(yīng)用:分離混合物精制提純化合物利用比移值(Rf)鑒定化合物跟蹤反應(yīng)進(jìn)程小結(jié)現(xiàn)在是31頁(yè)\一共有38頁(yè)\編輯于星期六色譜法的特點(diǎn):分離效率高復(fù)雜混合物,同系物,異構(gòu)體等。靈敏度高可以檢測(cè)出μg?g-1(10-6)級(jí)甚至ng?g-1(10-9)級(jí)的物質(zhì)量。分析速度快

幾分鐘或幾十分鐘內(nèi)可以完成一個(gè)試樣分析。

小結(jié)現(xiàn)在是32頁(yè)\一共有38頁(yè)\編輯于星期六柱色譜法分離甲基橙和甲基藍(lán)現(xiàn)在是33頁(yè)\一共有38頁(yè)\編輯于星期六實(shí)驗(yàn)原理甲基橙和亞甲基藍(lán)均為指示劑,它們的結(jié)構(gòu)式如下所示:甲基橙亞甲基藍(lán)由于甲基橙和亞甲基藍(lán)的結(jié)構(gòu)不同,極性不同,吸附劑對(duì)它們的吸附能力不同,洗脫劑對(duì)它們的解析速度也不同,極性小、吸附能力弱、解析速度快的亞甲基藍(lán)先被洗脫下來(lái)，而極性大、吸附能力強(qiáng)、解析速度慢的甲基橙后被洗脫下來(lái)，從而使兩種物質(zhì)得以分離。本實(shí)驗(yàn)以硅膠為吸附劑，95%乙醇作為洗脫劑，先洗出亞甲基藍(lán)，再用蒸餾水作洗脫劑把甲基橙洗脫下來(lái)?，F(xiàn)在是34頁(yè)\一共有38頁(yè)\編輯于星期六三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容裝柱加樣洗脫收集鑒定干法：10g硅膠

+乙醇先用乙醇后用水操作組分顏色組分顏色1mL樣品加樣操作0.5mL×2乙醇洗滌

柱色譜操作：實(shí)驗(yàn)步驟:現(xiàn)在是35頁(yè)\一共有38頁(yè)\編輯于星期六儀器和試劑1.儀器 錐形瓶、玻璃漏斗、色譜柱2.試劑柱層析硅膠、脫脂棉、乙醇（95%）甲基橙、亞甲基藍(lán)。H2O∶

95

%乙醇

=

1∶

1

(A

液)

0.

2mol·

L

-1HCl∶

95

%乙醇

=

1∶

1

(B

液)現(xiàn)在是36頁(yè)\一共有38頁(yè)\編輯于星期六裝置圖裝柱洗脫現(xiàn)在是37頁(yè)\一共有38頁(yè)\編輯于星期六實(shí)驗(yàn)步驟

裝柱：1、裝色譜柱：（1）取一支色譜柱，在柱子的收縮部塞一小團(tuán)脫脂棉花將色譜柱垂直固定在鐵架臺(tái)上。(2)關(guān)閉活塞，向柱中倒入蒸餾水（也是洗脫劑，至柱體積的1/2）（3）填吸附劑：稱取10g

硅膠于小燒杯中

,加入

15mL

蒸餾水

,用玻璃棒調(diào)好通過(guò)漏斗