功能食品評價的基本原理與方法優(yōu)秀課件

功能食品評價的基本原理與方法第1頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三第四章功能食品評價的

基本原理與方法

第2頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三第四章功能食品評價的基本原理與方法

☆對功能食品的評價是功能食品生產(chǎn)、銷售、食用具有重要意義☆評價包括毒理學評價和功能性評價、衛(wèi)生學評價。衛(wèi)生學評價報告同普通食品的相同，因此對功能食品的毒理學評價和功能學評價則成為對功能食品評價的關鍵內容。☆評價方法涉及到生物學、病理學、實驗動物學、解剖學、微生物學、生物化學、統(tǒng)計學等多學科的知識。3第3頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三第一節(jié)實驗動物與動物試驗技術概述一、常用的實驗動物（一）大鼠（Rattusnorvegcus）(常用的重要動物)哺乳綱嚙齒目鼠科性情遇驚嚇時兇猛,雄性之間毆斗.食性廣泛,壽命-3年,性成熟期2-3月,孕期30天,一年產(chǎn)仔4-7胎,(5-9只).哺乳期30天.飼養(yǎng):安靜、通風、18-25℃、濕度30-50%。長方鐵絲籠、5只、雌雄分養(yǎng)。濕性蒸餅（豆餅、面粉、玉米粉、高粱粉、麩子、魚粉、骨粉、酵母、食鹽等按比例）上午喂一次，30-35g。一定青飼料（白菜、菠菜、胡蘿卜5-8g）清潔水。4第4頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三（一）小鼠（Masmusculus）(常用的重要動物)

哺乳綱嚙齒目鼠科性情溫順,慣于夜間活動.對外界適應能力差，壽命2年,性成熟期雌：35-55天，雄：45-60天,孕期20-25天,一年產(chǎn)仔4-9胎,(2-1225-只).哺乳期30天.飼養(yǎng):安靜、通風、光線較暗、18-25℃、濕度50-60%。長方鐵皮鼠盒、10只、雌雄分養(yǎng)。生長速度快、耗糧少、易捉香脆干餅（豆餅、面粉、玉米粉、高粱粉、麩子、魚粉、骨粉、酵母、食鹽等按比例烤制）上午喂一次，30-35g。一定青飼料（白菜、菠菜、胡蘿卜5-8g）清潔水。豚鼠、金倉鼠、狗、家兔、獼猴純系動物：近親繁殖（20代）5第5頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三第二節(jié)功能食品的毒理學評價原理與方法

★對功能食品的毒理學評價是確保人群食用安全的前提★嚴格按照衛(wèi)生部《食品安全性毒理學評價程序和方法》進行，★主要評價食品生產(chǎn)、加工、保藏、運輸和銷售過程中使用的化學和生物物質以及在這些過程中產(chǎn)生和污染的有害物質、食物新資源及其成分和新資源食品?！飳τ诠δ苁称芳肮πС煞直仨氝M行《食品安全性毒理學評價程序和方法》中規(guī)定的第一、二階段的毒理學試驗，并依據(jù)評判結果決定是否進行三、四階段的毒理學試驗。若功能食品的原料選自普通食品原料或已批準的藥食兩用原料則不再進行試驗。6第6頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三一、食品安全性毒理學評價試驗的四個階段與試驗原則（一）試驗的四個階段第一階段：急性毒性試驗，包括經(jīng)口急性毒性（LD50）和聯(lián)合急性毒性。第二階段：遺傳毒性試驗、傳統(tǒng)致畸試驗、短期喂養(yǎng)試驗。第三階段：亞慢性毒性試驗（90天喂養(yǎng)試驗）、繁殖試驗和代謝試驗。第四階段：慢性毒性實驗（包括致癌試驗）7第7頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三（二）試驗原則功能食品特別是功效成分的毒理學評價原則：?1.凡屬我國創(chuàng)新的物質一般要求進行四個階段的試驗。特別是對其中化學結構提示有慢性毒性、遺傳毒性或致癌性可能者或產(chǎn)量大、使用范圍廣、攝入機會多者，必須進行全部四個階段的毒性試驗。2.凡屬與已知物質（指經(jīng)過安全性評價并允許使用者）的化學結構基本相同的衍生物或類似物，則根據(jù)第一、二、三階段毒性試驗結果判斷是否需進行第四階段的毒性試驗。3.凡屬已知的化學物質，世界衛(wèi)生組織已公布每人每日容許攝入量（ADI），同時又有資料證明我國產(chǎn)品的質量規(guī)格與國外產(chǎn)品一致，則可先進行第一、二階段毒性試驗，若試驗結果與國外產(chǎn)品的結果一致，一般不要求進行進一步的毒性試驗，否則應進行第三階段毒性試驗。8第8頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三

4.食品新資源及其食品原則上應進行第一、二、三個階段毒性試驗，以及必要的人群流行病學調查。必要時應進行第四階段試驗。若根據(jù)有關文獻資料及成分分析，未發(fā)現(xiàn)有或雖有但量甚少，不至構成對健康有害的物質，以及較大數(shù)量人群有長期食用歷史而未發(fā)現(xiàn)有害作用的天然動植物（包括作為調料的天然動植物的粗提制品）可以先進行第一、二階段毒性試驗，經(jīng)初步評價后，決定是否需要進行進一步的毒性試驗。5.凡屬毒理學資料比較完整，世界衛(wèi)生組織已公布日允許量或不需規(guī)定日允許量者，要求進行急性毒性試驗和一項致突變試驗，首選Ames試驗或小鼠骨髓微核試驗。9第9頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三6.凡屬有一個國際組織或國家批準使用，但世界衛(wèi)生組織未公布日許量，或資料不完整者，在進行第一、二階段毒性試驗后作初步評價，以決定是否需進行進一步的毒性試驗。7.對于由天然植物制取的單一組分，高純度的添加劑，凡屬新產(chǎn)品需先進行第一、二、三階段毒性試驗，凡屬國外已批準使用的，則進行第一、二階段毒性試驗。8.凡屬尚無資料可查、國際組織未允許使用的，先進行第一、二階段毒性試驗，經(jīng)初步評價后，決定是否需進行進一步試驗。10第10頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三二、食品毒理學評價試驗的目的與試驗內容

1.第一階段的急性毒性試驗目的：通過測定獲得LD50（半致死劑量），了解受試物的毒性強度、性質和可能的靶器官，為進一步進行毒性試驗的劑量和毒性判定指標的選擇提供依據(jù)。試驗內容：口急性毒性（LD50）試驗、聯(lián)合急性毒性試驗。11第11頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三2.第二階段的遺傳毒性試驗、傳統(tǒng)致畸試驗、短期喂養(yǎng)試驗

目的：?

（1）遺傳毒性試驗?

對受試物的遺傳毒性以及是否具有潛在致癌作用進行篩選。?

（2）傳統(tǒng)致畸試驗?

了解受試物對胎仔是否具有致畸作用。?

（3）短期喂養(yǎng)試驗?

對只需進行第一、二階段毒性試驗的受試物，在急性毒性試驗的基礎上，通過短期（30d）喂養(yǎng)試驗，進一步了解其毒性作用，并可初步估計最大無作用劑量。12第12頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三試驗內容：（1）細菌致突變試驗：鼠傷寒沙門氏菌/哺乳動物微粒體酶試驗（Ames試驗）為首選項目，必要時可另選和加選其他試驗。（2）小鼠骨髓微核率測定或骨髓細胞染色體畸變分析（3）小鼠精子畸形分析和睪丸染色體畸變分析。13第13頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三3.第三階段：亞慢性毒性試驗（90天喂養(yǎng)試驗）、繁殖試驗和代謝試驗。目的：觀察受試物以不同劑量水平經(jīng)較長期喂養(yǎng)后對動物的毒性作用性質和靶器官，并初步確定最大作用劑量；了解受試物對動物繁殖及對仔代的致畸作用，為慢性毒性和致癌試驗的劑量選擇提供依據(jù)。?

試驗內容：?90d喂養(yǎng)試驗?

繁殖試驗：?

代謝試驗：了解受試物在體內的吸收、分布和排泄速度以及蓄積性，尋找可能的靶器官；為選擇慢性毒性試驗的合適動物種系提供依據(jù)；了解有無毒性代謝產(chǎn)物的形成。14第14頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三4.第四階段：慢性毒性試驗（包括致癌試驗）

目的：了解經(jīng)長期接觸受試物后出現(xiàn)的毒性作用，尤其是進行性或不可逆的毒性作用以及致癌作用；最后確定最大無作用劑量，為受試物能否應用于食品的最終評價提供依據(jù)。15第15頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三三、食品毒理學試驗結果的判定（一）急性毒性試驗?

如LD50劑量小于人的可能攝入量的10倍，則放棄該受試物用于食品，不再繼續(xù)其他毒理學試驗。?

如大于10倍者，可進入下一階段毒理學試驗。凡LD50在人的可能攝入量的10倍左右時，應進行重復試驗，或用另一種方法進行驗證。16第16頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三（二）遺傳毒性試驗

根據(jù)受試物的化學結構、理化性質以及對遺傳物質作用終點的不同，并兼顧體外和體內試驗以及體細胞和生殖細胞的原則。

鼠傷寒沙門氏菌/哺乳動物微粒體酶試驗（Ames試驗）小鼠骨髓微核率測定

骨髓細胞染色體畸變分析

小鼠精子畸形分析

睪丸染色體畸變分析試驗選擇四項試驗17第17頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三結果判斷原則：

其中三項試驗為陽性：則表示該受試物很可能具有遺傳毒性作用和致癌作用，一般應放棄該受試物應用于食品；毋需進行其他項目的毒理學試驗。其中兩項試驗為陽性：而且短期喂養(yǎng)試驗顯示該受試物具有顯著的毒性作用，一般應放棄該受試物用于食品；如短期喂養(yǎng)試驗顯示有可疑的毒性作用，則經(jīng)初步評價后，根據(jù)受試物的重要性和可能攝入量等，綜合權衡利弊再作出決定。其中一項試驗為陽性，則再選擇V79/HGPRT基因突變試驗、顯性致死試驗、果蠅伴性隱性致死試驗，程序外DNA修復合成（UDS）試驗中的兩項遺傳毒性試驗。如再選的兩項試驗均為陽性，則無論短期喂養(yǎng)試驗和傳統(tǒng)致畸試驗是否顯示有毒性與致畸作用，均應放棄該受試物用于食品；如有一項為陽性，而在短期喂養(yǎng)試驗和傳統(tǒng)致畸試驗中未見有明顯毒性與致畸作用，則可進入第三階段毒性試驗。如四項試驗均為陰性，則可進入第三階段毒性試驗。18第18頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三（三）短期喂養(yǎng)試驗在只要求進行兩階段毒性試驗時，若短期喂養(yǎng)試驗未發(fā)現(xiàn)有明顯毒性作用，綜合其他各項試驗即可作出初步評價；若試驗中發(fā)現(xiàn)有明顯毒性作用，尤其是有劑量-反應關系時，則考慮進一步的毒性試驗。19第19頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三（四）90d喂養(yǎng)試驗、繁殖試驗、傳統(tǒng)致畸試驗

根據(jù)三項試驗中所采用的最敏感指標所得的最大無作用劑量進行評價，最大無作用劑量小于或等于人的可能攝入量的100倍者表示毒性較強，應放棄該受試物用于食品。最大無作用劑量大于100倍而小于300倍者，應進行毒性試驗。大于或等于300倍者則不必進行慢性毒性試驗，可進行安全性評價。20第20頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三（五）慢性毒性（包括致癌）試驗根據(jù)慢性毒性試驗所得的最大無作用劑量進行評價，最大無作用劑量小于或等于人的可能攝入量的50倍者，表示毒性較強，應放棄該受試物用與食品。最大無作用劑量大于50倍而小于100倍者，經(jīng)安全性評價后，決定該受試物可否用于食品。最大無作用劑量大于或等于100倍者，則可考慮允許使用于食品。新資源食品、復合配方的飲料等在試驗中，若試樣的最大加入量（一般不超過飼料的5%）或液體試樣最大可能的濃縮物加入量仍不能達到最大無作用劑量為人的可能攝入量的規(guī)定倍數(shù)時，則可以綜合其他的毒性試驗結果和實際食用或飲用量進行安全性評價。21第21頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三四、食品安全性評價時需要考慮的因素（一）人的可能攝入量除一般人群的攝入量外，還應考慮特殊和敏感人群（如兒童、孕婦及高攝入量人群）。（二）人體資料由于存在著動物與人之間的種族差異，在將動物試驗結果推論到人時，應盡可能收集人群接觸受試物后反應的資料，如職業(yè)性接觸和意外事故接觸等。志愿受試者體內的代謝資料對于將動物試驗結果推論到人具有重要意義。在確保安全的條件下，可以考慮按照有關規(guī)定進行必要的人體試食試驗。（三）動物毒性試驗和體外試驗資料各項動物毒性試驗和體外試驗系統(tǒng)雖然仍有待完善，卻是目前水平下所得到的最重要的資料，也是進行評價的主要依據(jù)。在試驗得到陽性結果，而且結果的判定涉及到受試物能否應用于食品時，需要考慮結果的重要性和劑量-反應關系。22第22頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三（四）安全系數(shù)由動物毒性試驗結果推論到人時，鑒于動物、人的種屬和個體之間的生物特性差異，一般采用安全系數(shù)的方法，以確保對人的安全性。安全系數(shù)通常為100倍，但可根據(jù)受試物的理化性質、毒性大小、代謝特點、接觸的人群范圍、食品中的使用量及使用范圍等因素，綜合考慮增大或減小安全系數(shù)。23第23頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三（五）代謝試驗的資料

代謝研究是對化學物質進行毒理學評價的一個重要方面，因為不同化學物質、劑量大小，在代謝方面的差別往往對毒性作用影響很大。在毒性試驗中，原則上應盡量使用與人具有相同代謝途徑和模式的動物種系來進行試驗。研究受試物在實驗動物和人體內吸收、分布、排泄和生物轉化方面的差別，對于將動物試驗結果比較正確地推論到人具有重要意義。24第24頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三（六）綜合評價

在進行最后評價時，必須在受試物可能對人體健康造成的危害以及其可能的有益作用之間進行權衡。評價的依據(jù)不僅是科學試驗資料，而且與當時的科學水平、技術條件，以及社會因素有關。因此，隨著時間的推移，很可能結論也不同。隨著情況的不斷改變，科學技術的進步和研究工作的不斷進展，對已通過評價的化學物質需進行重新評價，作出新的結論。25第25頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三第三節(jié)功能食品的功能學評價對功能食品進行功能學評價是功能食品科學研究的核心內容，主要針對功能食品所宣稱的生理功效進行動物學甚至是人體試驗。本節(jié)將介紹評價功能食品的統(tǒng)一程序和試驗規(guī)程。26第26頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三一、功能學評價的基本要求（一）對受試樣品的要求1.學性質（包括化學結構、純度、穩(wěn)定性等）有關資料。2.受試樣品必須是規(guī)格化的定型產(chǎn)品，即符合既定的配方、生產(chǎn)工藝及質量標準。3.提供受試樣品的安全性毒理學評價的資料以及衛(wèi)生學檢驗報告，受試樣品必須是已經(jīng)過食品安全性毒理學評價確認為安全的食品。功能學評價的樣品與安全性毒理學評價、衛(wèi)生學檢驗的樣品必須為同一批次（安全性毒理學評價和功能學評價實驗周期超過受試樣品保質期的除外）。4.應提供功效成分或特征成分、營養(yǎng)成分的名稱及含量。5.如需提供受試樣品違禁藥物檢測報告時，應提交與功能學評價同一批次樣品的違禁藥物檢測報告。27第27頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三（二）對實驗動物的要求1.根據(jù)各項實驗的具體要求，合理選擇實驗動物。常用大鼠和小鼠，品系不限，推薦使用近交系動物。2.動物的性別、年齡依實驗需要進行選擇。實驗動物的數(shù)量要求為小鼠每組10～15只（單一性別），大鼠每組8～12只（單一性別）。3.動物應符合國家對實驗動物的有關規(guī)定。28第28頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三（三）對給受試樣品劑量及時間的要求

1.各種動物實驗至少應設3組，必要時可設陽性對照組或空白對照組。劑量選擇應合理，盡可能找出最低有效劑量。在3個劑量組中，其中一個劑量應相當于人體推薦攝入量（折算為每公斤體重的劑量）的5倍（大鼠）或10倍（小鼠），且最高劑量不得超過人體推薦攝入量的30倍（特殊情況除外），受試樣品的功能實驗劑量必須在毒理學評價確定的安全劑量范圍之內。2.給受試樣品的時間應根據(jù)具體實驗而定，一般為30天。當給予受試樣品的時間已達30天而實驗結果仍為陰性時，則可終止實驗。29第29頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三（四）對受試樣品處理的要求1.受試樣品推薦量較大，超過實驗動物的灌胃量、摻入飼料的承受量等情況時，可適當減少受試樣品的非功效成分的含量。2.對于含乙醇的受試樣品，原則上應使用其定型的產(chǎn)品進行功能實驗，其三個劑量組的乙醇含量與定型產(chǎn)品相同。如受試樣品的推薦量較大，超過動物最大灌胃量時，允許將其進行濃縮，但最終的濃縮液體應恢復原乙醇含量，如乙醇含量超過15％，允許將其含量降至15％。調整受試樣品乙醇含量應使用原產(chǎn)品的酒基。30第30頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三3.液體受試樣品需要濃縮時，應盡可能選擇不破壞其功效成分的方法。一般可選擇60～70℃減壓進行濃縮。濃縮的倍數(shù)依具體實驗要求而定。4.對于以沖泡形式飲用的受試樣品（如袋泡劑），可使用該受試樣品的水提取物進行功能實驗，提取的方式應與產(chǎn)品推薦飲用的方式相同。如產(chǎn)品無特殊推薦飲用方式，則采用下述提取的條件：常壓，溫度80～90℃，時間30～60分鐘，水量為受試樣品體積的10倍以上，提取2次，將其合并濃縮至所需濃度。31第31頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三（五）對給受試樣品方式的要求必須經(jīng)口給予受試樣品，首選灌胃。如無法灌胃則加入飲水或摻入飼料中，計算受試樣品的給予量。（六）對合理設置對照組的要求以載體和功效成分（或原料）組成的受試樣品，當載體本身可能具有相同功能時，應將該載體作為對照。32第32頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三（七）人體試食試驗規(guī)程評價食品保健作用時要考慮的因素?1.人的可能攝入量除一般人群的攝入量外，還應考慮特殊的和敏感的人群(如兒童、孕婦及高攝入量人群)。?2.人體資料由于存在動物與人之間的種屬差異、在將動物試驗結果外推到人時，應盡可能收集人群服用受試物的效應資料，若體外或體內動物試驗未觀察到或不易觀察到食品的保健效應或觀察到不同效應，而有關資料提示對人有保健作用時，在保證安全的前提下，應進行必要的人體試食試驗。?3.結果的重復性和劑量反應關系在將評價程序所列試驗的陽性結果用于評價食品的保健作用時，應考慮結果的重復性和劑量反應關系，并由此找出其最小有作用劑量。33第33頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三二、試驗項目、試驗原則及結果判定(一)免疫調節(jié)作用1.試驗項目:（1）動物試驗①臟器/體重比值:a.胸腺/體重比值b.脾臟/體重比值②細胞免疫功能測定a.小鼠脾淋巴細胞轉化實驗b.遲發(fā)型變態(tài)反應③體液免疫功能測定a.抗體生成細胞檢測b.血清溶血素測定④單核－巨噬細胞功能測定：a.小鼠碳廓清試驗b.小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞試驗⑤NK細胞活性測定34第34頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三（2）人體試食試驗①細胞免疫功能測定

外周血淋巴細胞轉化試驗②體液免疫功能試驗單向免疫擴散法測定IgG、IgA、IgM③非特異性免疫功能測定吞噬與殺菌試驗④NK細胞活性測定35第35頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三2.試驗原則要求選擇一組能夠全面反映免疫系統(tǒng)各方面功能的試驗，其中細胞免疫、體液免疫和單核——巨噬細胞功能三個方面至少各選擇1種試驗，在確保安全的前提下盡可能進行人體試食試驗。36第36頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三3.結果判定在一組試驗中，受試物對免疫系統(tǒng)某方面的試驗具有增強作用而對其他試驗無抑制作用，可以判定該受試物具有該方面的免疫調節(jié)效應；對任何一項免疫試驗具有抑制作用可判定該受試物具有免疫抑制效應。在細胞免疫功能、體液免疫功能、單核－巨噬細胞功能及NK細胞功能檢測中，如有兩個以上(含兩個)功能檢測結果陽性，即可判定該受試物具有免疫調節(jié)作用。37第37頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三（二）延緩衰老作用?1.試驗項目?

（1）動物試驗①生存試驗?a.小鼠生存試驗?b.大鼠生存試驗?c.果蠅生存試驗②過氧化脂質含量測定?a.血(或組織)中過氧化脂質降解產(chǎn)物丙二醛(MDA)含量測定?

組織中脂褐質含量測定?③抗氧化活力測定?a.血(或組織)中超氧化物歧化酶(SOD)活力測定?b.血(或組織)中谷胱甘肽過氧化物酶(GSH－PX)活力測定38第38頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三（2）人體試食試驗血中過氧化脂質降解產(chǎn)物丙二醛(MDA)含量測定血中超氧化物歧化酶(SOD)活力測定血中谷胱甘肽過氧化物酶(GSH－PX)活力測定39第39頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三2.試驗原則衰老機制比較復雜，迄今尚無一種公認的衰老機制學說，因而無單一、簡便、實用的衰老指標可供應用，應采用盡可能多的試驗方法，以保證試驗結果的可信性。動物試驗，除上述生存試驗，過氧化脂質含量測定、抗氧化酶活力測定3個方面各選一項必做外，可能時應多選擇一些指標(如腦、肝組織中單胺氧化酶(MAO-B)活力測定等)加以輔助。生存試驗是最直觀、最可靠的實驗方法，果蠅具有自下而上期短，繁殖快，飼養(yǎng)簡便等優(yōu)點，通常多選果蠅作生存試驗，但果蠅種系分類地位與人較遠，故必須輔助過氧化脂質含量測定及抗氧化活力測定才能判斷是否具有延緩衰老作用。生化指標測定應選用老齡鼠，除設老齡對照外，最好同時增設少齡對照，以比較受試物抗氧化的程度，必要時可將動物試驗與人體試食試驗相結合綜合評價。40第40頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三3.結果判定若大鼠或小鼠生存試驗為陽性，即可判定該受試物具有延緩衰老的作用。若果蠅生存試驗、過氧化脂質和抗氧化酶三項指標均為陽性，即可判定該受試物具有延緩衰老的作用。若過氧化脂質和抗氧化酶兩項為陽性，可判定該受試物具有抗氧化作用，并提示可能具有延緩衰老作用。41第41頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三（三）改善記憶作用1.試驗項目?

（1）動物試驗?①跳臺試驗?②避暗試驗?③穿梭箱試驗?④水迷宮試驗?

（2）人體試食試驗?①韋氏記憶量表?②臨床記憶量表42第42頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三2.試驗原則（1）試驗應通過訓練前、訓練后及重測驗前3種不同的給予受試物方法觀察其對記憶全過程的影響。（2）應采用一組(2個以上)行為學試驗方法，以保證實驗結果的可靠性。（3）人體試食試驗為必做項目，并應在動物試驗有效的前提下進行。（4）除上述試驗項目外，還可以選用嗅覺厭惡試驗、味覺厭惡試驗、操作式條件反射試驗，連續(xù)強化程序試驗、比率程序試驗、間隔程序試驗。43第43頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三3.結果判定動物試驗2項或2項以上的指標為陽性，且2次或2次以上的重復測試結果一致，可以認為該受試物具有改善該類動物記憶作用；人體試食試驗結果陽性，則可認為該受試物具有改善人體記憶作用。44第44頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三（四）促進生長發(fā)育作用1.試驗項目本功能試驗研究是以動物學試驗為研究基礎?

（1）胎仔情況包括活胎數(shù)、雌雄比例、死胎數(shù)、分娩胎仔總數(shù)。?

（2）體重及食物利用率記錄出生時及生后4、7、14、21、30、60d幼鼠的體重，計算斷乳后幼鼠的食物利用率。?

（3）生理發(fā)育指標記錄耳廓分離、門齒萌出、開眼、長毛時間、陰道開放、睪丸下降時間。?

（4）神經(jīng)反射指標平面翻正、前肢抓力、懸崖回避、嗅覺定位、聽覺警戒、負趨地性、回旋運動、視覺發(fā)育、空中翻正、游泳發(fā)育。45第45頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三2.試驗原則（1）給受試物的時間可根據(jù)具體情況選擇在母鼠孕期或哺乳期至成年期。（2）在神經(jīng)反射指標中應選擇一組(5個以上)的行為學試驗方法，以保證結果的可靠性。46第46頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三3.結果判定在胎仔情況、體重及食物利用率、生理發(fā)育、神經(jīng)反射4類指標中有3類以上(含3類)指標為陽性，可認為受試物有促進生長發(fā)育的作用。47第47頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三（五）抗疲勞作用本功能試驗研究是以動物學試驗為研究基礎?1.試驗項目?

（1）運動試驗?a.負重游泳試驗?b.爬桿試驗?

（2）生物化學指標測定?a.血乳酸含量?b.血清尿素氮含量?c.肝/肌糖原比值測定48第48頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三2.試驗原則運動試驗與生化指標檢測相結合。在進行游泳或爬桿試驗前，動物應進行初篩。除以上生化指標外，還可檢測血糖、乳酸脫氫酶、血紅蛋白以及磷酸肌酸等指標。3.結果判定若1項以上(含1項)運動試驗和2項以上(含2項)生化指標為陽性，即可以判斷該受試物具有抗疲勞作用。49第49頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三（六）減肥作用1.減肥原則?（1）減除體現(xiàn)人多余的脂肪，不單純以減輕體重為標準。?（2）每日營養(yǎng)素的攝入量應基本保證機體正常生命活動的要求。?（3）對機體健康無明顯損害。50第50頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三2.試驗項目（1）動物試驗（首先建立動物肥胖模型）?體重測定?體內脂肪重量測定（2）人體試食試驗?主要測定指標：體重、體重指數(shù)、腰圍、腹圍、臀圍、體內脂肪含量。51第51頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三3.試驗原則在進行減肥試驗時，除上述指標必測外，還應進行機體營養(yǎng)狀況檢測，運動耐力測試以及與健康有關的其它指標的觀察。該功能的人體試食試驗為必做項目，動物試驗與人體試食試驗相結合，綜合進行評價。52第52頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三4.結果判定在動物試驗中，體重及體內脂肪重量2個指標均陽性，并且對機體健康無明顯損害，即可初步判定該受試物具有減肥作用。在人體試食試驗中，體內脂肪量顯著減少，且對機體健康無明顯損害，可判定該受試物具有減肥作用。53第53頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三（七）耐缺氧作用本功能試驗研究是以動物學試驗為研究基礎?1.試驗項目?

小鼠常壓耐缺氧實驗?2.結果判定?

耐缺氧實驗陽性，說明該受試物具有耐缺氧作用。54第54頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三（八）抗輻射作用本功能試驗研究是以動物學試驗為研究基礎?1.試驗項目?

（1）亞急性試驗?30天存活率或平均存活時間?

白細胞總數(shù)?

（2）亞慢性或慢性試驗?

小鼠睪丸染色體畸變試驗?

小鼠骨髓細胞微核試驗55第55頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三2.試驗原則較高劑量一次輻射，選擇亞急性試驗；小劑量多次輻射，選擇亞慢性或慢性試驗。56第56頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三3.結果判定亞急性試驗項目中2項結果為陽性，則可判定該受試物對較高劑量一次輻射有拮抗作用。亞慢性或慢性試驗中2項結果為陽性，則可判定該受試物對小劑量多次輻射有拮抗作用。57第57頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三（九）抗突變作用1.試驗項目?Ames試驗或V79細胞基因突變試驗?小鼠骨髓細胞微核試驗?小鼠睪丸染色體畸變試驗58第58頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三2.試驗原則?Ames試驗與V79細胞基因突變試驗任選一項，采用體內與體外試驗相結合的原則。3.結果判定?抗突變三項試驗中有兩項為陽性時，則可判定該受試物具有抗突變作用。59第59頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三（十）抑制腫瘤作用1.試驗項目?(1)動物誘發(fā)性腫瘤試驗?(2)動物移植性腫瘤試驗?(3)免疫功能試驗?NK細胞活性測定?

單核－巨噬細胞功能測定60第60頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三2.試驗原則?

動物誘發(fā)性腫瘤試驗及動物移植性腫瘤試驗兩項中任選一項，同時必做2項免疫功能試驗3.結果判定?

動物誘發(fā)性腫瘤試驗及動物移植性腫瘤試驗兩項試驗中有一項為陽性，并且對免疫功能無抑制作用，則可判定該受試物具有抑制腫瘤的作用。61第61頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三（十一）輔助降血脂1.試驗項目?

（1）動物實驗?①體重?②血清總膽固醇?③甘油三酯?④高密度脂蛋白膽固醇?

（2）人體試食試驗?①血清總膽固醇?②甘油三酯?③高密度脂蛋白膽固醇62第62頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三2.試驗原則（1）動物實驗和人體試食試驗所列指標均為必測項目。（2）動物實驗選用脂代謝紊亂模型法，預防性或治療性任選一種。用高膽固醇和脂類飼料喂養(yǎng)動物可形成酯代謝紊亂動物模型，再給予動物受試樣品或同時給予受試樣品，可檢測受試樣品對高脂血癥的影響，并可判定受試樣品對脂質的吸收、脂蛋白的形成、脂質的降解或排泄產(chǎn)生的影響。63第63頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三（3）在進行人體試食試驗時，應對受試樣品的食用安全性作進一步的觀察后進行。選擇單純血脂異常的人群，保持平常飲食，半年內采血2次，如兩次血清總膽固醇（TC）均為5.2~6.24mmol/L或血清甘油三酯（TG）1.65~2.2mmol/L，均可作為備選對象，受試者最好為非住院的高血脂癥患者，自愿參加試驗。受試期間保持平日的生活和飲食習慣，空腹取血測定各項指標。但年齡在18歲以下或65歲以上者、妊娠或哺乳期婦女、對功能食品過敏者、合并有心、肝、腎和造血系統(tǒng)等嚴重疾病、精神病患者、短期內服用與受試功能有關的物品，影響到對結果的判斷者、未按規(guī)定食用受試樣品，無法判定功效或資料不全影響功效或安全性判斷者不可作為人體試食試驗對象。64第64頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三3.結果判定（1）動物實驗?①輔助降血脂結果判定?檢測中血清總膽固醇和甘油三酯二項指標陽性，可判定該受試樣品輔助降血脂動物實驗結果陽性。?②輔助降低甘油三酯結果判定?

甘油三酯二個劑量組結果陽性；甘油三酯一個劑量組結果陽性，同時高密度脂蛋白膽固醇結果陽性，可判定該受試樣品輔助降低甘油三酯動物實驗結果陽性。?③輔助降低血清總膽固醇結果判定?

血清總膽固醇二個劑量組結果陽性；血清總膽固醇一個劑量組結果陽性，同時高密度脂蛋白膽固醇結果陽性，可判定該受試樣品輔助降低血清總膽固醇動物實驗結果陽性。65第65頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三（2）人體試食試驗血清總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白膽固醇三項指標檢測中，血清總膽固醇和甘油三酯二項指標陽性，可判定該受試樣品具有輔助降血脂作用；血清總膽固醇、甘油三酯兩項指標中任一項指標陽性，同時高密度脂蛋白膽固醇結果陽性，可判定該受試樣品具有輔助降低血清總膽固醇或輔助降低甘油三酯作用。66第66頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三（十二）清咽功能1.試驗項目?

（1）動物試驗?①大鼠棉球植入試驗?②大鼠足趾腫脹試驗?

（2）人體試食試驗?

咽部癥狀、體征67第67頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三

2.試驗原則（1）動物實驗和人體試食試驗為必做項目。（2）大鼠棉球植入實驗和大鼠足趾腫脹實驗任選其一。（3）在進行人體試食試驗時，應對受試樣品的食用安全性作進一步的觀察后進行。選擇慢性咽炎人群，主觀癥狀有咽痛、咽癢、咽干、干咳、異物感、多言加重等。68第68頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三

3.結果判定（1）動物實驗?

大鼠棉球植入實驗或大鼠足趾腫脹實驗結果陽性，可判定受試樣品清咽動物實驗結果陽性。（2）人體試食試驗?

咽部癥狀、體征明顯改善，癥狀、體征的改善率明顯增加，可判定受試樣品具有清咽的作用。69第69頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三（十三）調節(jié)血糖

1.試驗項目?

（1）動物實驗?①高血糖模型動物的空腹血糖值、糖耐量試驗。?②正常動物的降糖試驗。（2）人體試食試驗?

空腹血糖值、糖耐量試驗、胰島素測定、尿糖測定。70第70頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三2.試驗原則（1）建立高血糖動物模型，常用四氧嘧啶作為建模藥物。（2）人體試食試驗是必須項目，在動物學試驗有效基礎上并對受試樣品的食用安全性作進一步的觀察后進行。試驗人群為Ⅱ型糖尿病患者，除測定規(guī)定的指標外，應加測一般健康指標。71第71頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三3.結果判定（1）動物實驗動物學試驗有一項指標陽性；（2）人體試食試驗的空腹血糖值、糖耐量試驗兩項指標中有一項陽性，胰島素又未升高，可判定受試樣品有降血糖作用。72第72頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三（十四）改善胃腸道功能改善胃腸功能表現(xiàn)在多方面：促進消化吸收功能、改善胃腸道菌群功能、潤腸通便、保護胃粘膜功能。分述如下：?1.促進消化吸收功能?（1）試驗項目? ①動物試驗?

體重、食物利用率、胃腸運動實驗、消化酶活性、小腸吸收實驗? ②人體實驗?

食欲、食量、胃脹腹感、大便性狀與次數(shù)、體征癥狀、體重、血紅蛋白、胃腸運動實驗、小腸吸收實驗。73第73頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三（2）試驗原則①動物試驗與人體試驗中的所列項目均為必做項目，人體試驗還應增加一般健康指標。②針對糾正兒童食欲不良或成人消化不良者可從所列項目中選擇重點項目。74第74頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三（3）結果判定①動物實驗中胃腸運動實驗、消化酶活性、小腸吸收實驗三項中一項陽性，檢測結果判定為陽性。②針對糾正兒童食欲不振時，重點觀察人體試驗中食欲、食量明顯增加，體重、血紅蛋白項中有一項陽性，檢測結果判定為有促進消化吸收功能。③針對成人消化不良時，項目中體征癥狀、胃腸運動實驗、小腸吸收實驗項中一項陽性，檢測結果判定為有促進消化吸收功能。75第75頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三2.改善胃腸道菌群功能（1）試驗項目（腸道菌群以cfu/g糞便計）?①動物試驗?

雙歧桿菌、乳桿菌、腸球菌、腸桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌。?②人體實驗?

雙歧桿菌、乳桿菌、腸桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌。?

（2）試驗原則?①動物與人體所列檢驗項目均為必測項目。?②人體試驗為必做項目，還可以加測一般健康指標。?③動物可用正常動物或腸道菌群紊亂動物模型。76第76頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三（3）結果判定①動物試驗?A雙歧桿菌、乳桿菌明顯增加，腸球菌、腸桿菌增加但幅度小于雙歧桿菌、乳桿菌的增幅，產(chǎn)氣莢膜梭菌減少或無變化；B雙歧桿菌、乳桿菌明顯增加而產(chǎn)氣莢膜梭菌減少或無變化、腸球菌、腸桿菌無變化。上兩項中一項符合可判定為陽性。②人體試食試驗?A雙歧桿菌、乳桿菌明顯增加，腸球菌、腸桿菌增加但幅度小于雙歧桿菌、乳桿菌的增幅，產(chǎn)氣莢膜梭菌減少或無變化；B雙歧桿菌、乳桿菌明顯增加而產(chǎn)氣莢膜梭菌減少或無變化、腸球菌、腸桿菌無變化。上兩項中一項符合可判定有改善胃腸道菌群77第77頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三3.潤腸通便功能（1）試驗項目?

動物試驗：體重、小腸吸收實驗(小腸推進速度)、排便時間、糞便重量或粒數(shù)、糞便性狀。?

（2）試驗原則?①制造便秘動物模型，與正常對照動物一起實驗。?②不得引起動物腹瀉。?

（3）結果判定?

動物實驗:糞便重量或粒數(shù)明顯增加，小腸吸收實驗、排便時間一項陽性，檢測結果判定為有潤腸通便功能。78第78頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三4.保護胃粘膜功能（1）試驗項目?①動物試驗?

胃粘膜損傷情況（損傷面積、潰瘍情況）。?②人體試驗?

胃部癥狀、體征、X線鋇餐或胃鏡檢查胃粘膜情況。（2）試驗原則?①人體試驗為必測項目。?②人體試驗還可加測一般健康狀況指標。79第79頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三（3）結果判定①動物試驗?

胃粘膜損傷情況有明顯改善，判定為陽性。②人體試食試驗?

胃部癥狀、體征明顯改善，胃粘膜損傷癥狀好轉，可判定為有保護胃粘膜功能。80第80頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三（十五）改善睡眠1.試驗項目?

動物試驗:?①體重。?②睡眠時間。?③睡眠發(fā)生率。?④睡眠潛伏期。?⑤觀察指標:給被檢樣品在閾上劑量有催眠作用下是否延長睡眠時間;在閾下劑量作用下是否加快入睡時間。81第81頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三?2.試驗原則?(1)體重及另三項為必測項目。?(2)觀測被檢樣品對催眠劑(巴比妥或戊巴比妥)在閾上或閾下劑量時的催眠作用。?3.結果判定?

體重以外三項檢測項目中兩項為陽性，檢測結果判定為有改善睡眠功能。82第82頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三（十六）改善營養(yǎng)性貧血?1.試驗項目?

（1）動物試驗（所列項目均為必測項目）?①體重?②血紅蛋白?③紅細胞壓積?④血清鐵蛋白?⑤紅細胞游離原卟啉?⑥組織細胞鐵?

（2）人體試驗?①體重?②血紅蛋白?③紅細胞壓積?④血清鐵蛋白83第83頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三?2.試驗原則?(1)所列項目均為必測項目。?(2)人體可加測一般健康指標。?(3)貧血:按現(xiàn)行臨床標準診斷。?3.結果判定?（1）動物實驗? ②項陽性③④⑤⑥四項中任一項陽性，檢測結果判定為陽性。?（2）人體實驗? ②項陽性③④⑤四項中任一項陽性，結果判定為有改善營養(yǎng)性貧血功能。84第84頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三（十七）對化學性肝損傷有保護作用

?1.試驗項目?（1）動物試驗? ①體重?②谷丙轉氨酶(ALT)?③谷草轉氨酶(AST)? ④肝組織病理?2.試驗原則?(1)所列項目均為必測項目。?(2)還可加測肝中丙二醛、GSH、甘油三酯。?3.結果判定肝組織病理陽性，②、③項中任一項陽性，檢測結果判定為具有對化學性肝損傷的保護作用.85第85頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三（十八）促進泌乳?1.試驗項目?（1）動物實驗：以下所列項目均為必測項目? ①泌乳量。? ②仔鼠的發(fā)育狀況如：體重與身長。?（2）人體試食試驗? ①泌乳量。? ②母乳質量：乳汁蛋白質含量、脂肪含量。? ③嬰兒生長發(fā)育狀況觀察。86第86頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三?2.試驗原則?(1)所列項目均為必測項目。?(2)人體試驗還可選用母體乳房感覺、乳兒其他發(fā)育指標、乳汁質量指標。?3.結果判定?（1）動物試驗?

泌乳量增加、與對照組相比仔鼠體重、身長增加明顯，結果判定為陽性。?（2）人體試食試驗?

泌乳量增加、嬰兒身高、體重增加、乳汁質量改善或不低于對照組，試驗結果判定為具有促進泌乳功能。87第87頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三（十九）美容?

美容表現(xiàn)在多方面，具體功能應予明確。?1.祛痤瘡功能?

（1）試驗項目?

人體試驗:痤瘡數(shù)量、皮膚損害情況、皮脂分泌狀況。?

（2）結果判定?①人體試驗所列三項指標中二項陽性，且不產(chǎn)生新痤瘡，檢測結果判定為有祛痤瘡功能。?②皮脂分泌減少，不產(chǎn)生新座瘡，其他兩項指標雖無明顯改善，可認為有減少皮腺分泌作用。88第88頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三2.祛黃褐斑功能（1）試驗項目?

人體試驗驗:黃褐斑面積、黃褐斑顏色。（2）結果判定?

黃褐斑面積與顏色有改善，且不產(chǎn)生新黃褐斑，檢測結果判定為有祛黃褐斑功能。89第89頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三3.祛老年斑功能?

（1）試驗項目?①動物試驗?

過氧化脂質（如脂褐質）含量、抗氧化酶(SOD、GSH-PX)活性、皮膚羥脯氨酸含量。?②人體試驗?

老年斑面積或數(shù)量、老年斑顏色、過氧化脂質含量、抗氧化酶(SOD、GSHPX)活性。?

（2）試驗原則?①所列動物及人體試驗項目均為必測項目。?②人體試驗還應加測一般健康指標。?

（3）結果判定?(1)動物試驗?

三項中有二項陽性，檢測結果判定為陽性。?(2)人體試驗?

老年斑面積或數(shù)量、老年斑顏色明顯改善；過氧化脂質含量、抗氧化酶(SOD、GSH-PX)活性有一項陽性，可判定受試物有祛老年斑功能。90第90頁，共103頁，2023年，2月20日，星期三4.保持皮膚水分、油脂和pH?

（1）試驗項目?

人體試驗:?(