新版CNAS對臨床基因擴增分析前要求要素

分析前階段定義CNAS-CL02定義（ISO15189同等引用）按時間順序自醫(yī)生申請至分析檢驗啟動的過程，包括檢驗申請、患者準備和識別、原始樣品采集、運送和實驗室內(nèi)傳遞等。（檢驗前過程/分析前階段）檢驗申請患者準備

和識別原始樣品采集原始樣品運送實驗室內(nèi)傳遞第一頁，共36頁。全面質(zhì)量控制第二頁，共36頁。分子診斷分析前質(zhì)量控制特點環(huán)節(jié)眾多包括檢驗申請、患者準備、標本采集、標本運送、標本接收及處理、保存等參與人員復雜包括醫(yī)生、患者、護士、標本運送人員以及檢驗技師等難以標準化不同醫(yī)院、同一醫(yī)院不同科室條件不同，人員熟練程度不一致，難以標準化標本類型多、運輸及保存條件復雜第三頁，共36頁。分子診斷分析前要求的要素5.1人員5.2設施和環(huán)境條件5.3實驗室設備、試劑和耗材5.4檢驗前過程分析前前階段第四頁，共36頁。人員人員資質(zhì)PCR上崗證（《醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增實驗室管理辦法》的規(guī)定）員工能力評審新員工培訓、考核與授權(quán)離崗6個月以上的人員培訓第五頁，共36頁。設施和環(huán)境條件實驗室原則上分四個分隔開的工作區(qū)域?qū)嶒炇腋鞣謪^(qū)應配置固定和移動紫外線燈，標本制備區(qū)應配置二級生物安全柜制定實驗室溫濕度的要求并監(jiān)測制定實驗室用水的要求并定期監(jiān)測第六頁，共36頁。實驗室設施與環(huán)境條件標準化5分區(qū)PCR實驗室，各區(qū)之間物理分隔、空氣單向流動、可適當合并,具體分區(qū)，視實驗室所開展的項目定，以工作空間夠用，不影響報告時間，操作互不干擾，防止污染為基本原則傳遞倉傳遞標本和試劑生物安全柜內(nèi)操作，避免污染環(huán)境第七頁，共36頁。設施和環(huán)境條件基因擴增檢驗各工作區(qū)域應有明確的標記，不同工作區(qū)域內(nèi)的設備、物品不能混用應有足夠的、溫度適宜的儲存空間（如冰箱），用以保存臨床樣品和試劑，設置目標溫度和允許范圍，并記錄。應有溫度失控時的處理措施，并記錄。

第八頁，共36頁。冷鏈系統(tǒng)面臨風險冷鏈停止工作，溫度快速升高，導致試劑失效，樣本損壞突然停電工作制冷壓縮機故障無人值守，非工作時間很難快速發(fā)現(xiàn)故障試劑庫標本庫生物樣本庫軟件來解決！第九頁，共36頁。冷鏈監(jiān)控系統(tǒng)通過終端采集的實時數(shù)據(jù)，設定報警范圍，選擇報警方式（短信或郵件），選擇接收報警信息的人員系統(tǒng)終端采集到報警數(shù)據(jù)時，自動向相關(guān)人員發(fā)出報警信息，并提醒工作人員及時處理智能化監(jiān)控，實時處理！第十頁，共36頁。實驗室設備、試劑及耗材從事RNA的檢測，應配備高速冷凍離心機應按國家法規(guī)要求對強檢設備進行檢定（PCR儀、加樣器、溫度計和恒溫設備等）應對試劑和耗材進行合格性驗收，故障后修復的設備應對其性能進行驗證第十一頁，共36頁。案例：HPV基因分型試劑驗證不合格試劑失效，Globin值普遍在200左右原因分析：試劑運輸途中熒光染料失效（SA-PE），導致Globin值偏低采取措施：新批（貨）次試劑與老批（貨）次試劑比對第十二頁，共36頁。CNAS-CL02:2012檢驗前過程要素5.4.1總則5.4.2提供給患者和用戶的信息5.4.3申請單信息5.4.4原始樣品采集和處理5.4.5樣品運送5.4.6樣品接收5.4.7檢驗前處理、準備和儲存第十三頁，共36頁。質(zhì)量控制關(guān)鍵點實驗室應制定檢驗前活動的文件化程序和信息，以保證檢驗結(jié)果的有效性患者知情同意要求（例如：需要委托檢驗時，同意向相關(guān)醫(yī)療專家公開臨床信息和家族史）與患者和申請項目相關(guān)的臨床資料，用于檢驗操作和解釋檢驗結(jié)果目的第十四頁，共36頁。總則科室《原是樣品采集和運送管理程序》《標本核收、處理和儲存程序》《原始樣品采集手冊》專業(yè)組《實驗室標本接收與處理程序》

第十五頁，共36頁。案例：原始樣品采集手冊第十六頁，共36頁。微創(chuàng)產(chǎn)前染色體非整倍體（T21/T18/T13）檢測知情同意書案例：2015年10月，一例無創(chuàng)產(chǎn)篩多條染色體數(shù)量信號異常，而B超未提示任何異常，遂于孕婦溝通結(jié)果，孕婦孕前1月有異體輸血病史第十七頁，共36頁。乳腺癌風險評估相關(guān)基因高通量測序申請單申請單——一筆業(yè)務患者基本信息申請項目申請醫(yī)生信息流轉(zhuǎn)流程記錄采集確認標本轉(zhuǎn)運標本接收……第十八頁，共36頁。CNAS-CL02:2012檢驗前過程要素5.4.1總則5.4.2提供給患者和用戶的信息5.4.3申請單信息5.4.4原始樣品采集和處理5.4.5樣品運送5.4.6樣品接收5.4.7檢驗前處理、準備和儲存第十九頁，共36頁。質(zhì)量控制關(guān)鍵點正確選擇原始樣本類型考慮檢測目的、原始樣本穩(wěn)定性及影響因素正確采集標本考慮采集原是樣品對檢測的結(jié)果的影響正確運送標本和保存考慮運送過程中原是樣品的穩(wěn)定性、生物安全等因素樣品接收初步判斷樣品是否適合檢驗，信息是否齊全第二十頁，共36頁。標本類型適合的檢測項目全血/血漿/血清HBV、HCV、CMV等血液病毒定量、定型、突變檢測，血流感染細菌/真菌等鼻咽拭子H7N9、H5N1等呼吸道病毒檢測女性陰道拭子NG、UU、CT、HPV基因分型乳汁CMV、HBV、HCV等腦脊液HSV、CMV、EBV、VZV感染性疾病分子診斷標本類型選擇第二十一頁，共36頁。遺傳病分子診斷標本類型選擇標本類型適合的檢測項目采集容器/量全血遺傳病診斷，微創(chuàng)產(chǎn)前篩查紫頭管/2-3ml羊水產(chǎn)前遺傳病診斷無菌容器/最少10ml/雙份絨毛膜產(chǎn)前遺傳病診斷無菌容器/15mg以上第二十二頁，共36頁。腫瘤個體化醫(yī)療標本類型選擇標本類型適合的檢測項目血液乳腺癌基因（CYP2D6，BRCA1/2），血液系統(tǒng)疾病(JAK2)，嘌呤類化療藥物等骨髓血液系統(tǒng)疾?。ㄈ诤匣蚝Y查）石蠟組織切片/新鮮組織1、鉑類/紫杉類/氟類/嘌呤類化療藥物，吉西他濱個體化用藥；2、結(jié)腸癌(KRAS/BRAF)、非小細胞肺癌（EGFR/EML4-ALK）、乳腺癌（PI3KCA/HER2）、胃間質(zhì)瘤（KIT/PDGFRA）、腦膠質(zhì)瘤（1p/19q、IDH1/2）脫落細胞（胸腹水、支氣管肺泡灌洗液等）結(jié)腸癌(KRAS)、非小細胞肺癌(EGFR)等甲狀腺癌(RET)、乳腺癌(BRCA1/2)等口腔黏膜細胞乳腺癌基因（CYP2D6，BRCA1/2）第二十三頁，共36頁。血清Vs.血漿HBV熒光定量檢測結(jié)果可相差10倍Vs.盡管行業(yè)規(guī)范文件以及試劑說明書規(guī)定，HBV-DNA定量既可以用血清也可以用血漿標本，實驗室為減少臨床醫(yī)生和患者對結(jié)果的誤解，應盡量規(guī)定單一標本類型第二十四頁，共36頁。全血、血清、血漿全血/血漿推薦采用EDTA抗凝HIV或HCV等RNA病毒檢測的標本需在4h離心分離血漿，含分離膠采血管可原管運送、血漿標本2-8℃可穩(wěn)定5天，-20℃或-70℃可穩(wěn)定更長時間實驗室應評估反復凍融次數(shù)對檢測目標的影響第二十五頁，共36頁。全血、血清、血漿DNA檢測全血標本提取核酸之前室溫可穩(wěn)定24h，2-8℃可穩(wěn)定72h，RNA檢測的全血標本需加入核酸穩(wěn)定劑血清應該在干冰上運輸，血漿應該在2-8℃條件下運輸，并在-20℃以下存放血漿標本保存不應使用自動除霜的冰箱第二十六頁，共36頁。骨髓推薦以EDTA作為抗凝劑（不可使用肝素）DNA分析時核酸提取之前應放置在2-8℃環(huán)境下，必須在72h內(nèi)完成核酸的提取，RNA分析時，骨髓標本中應加入核酸穩(wěn)定劑、冰上運輸至實驗室，2-8℃保存應在4h內(nèi)提取核酸不能按時提取核酸應將標本保存在-20℃條件下，可穩(wěn)定數(shù)月建議凍存前先分離出有核細胞，避免因凍融紅細胞裂解釋放亞鐵血紅素抑制PCR第二十七頁，共36頁。新鮮組織以DNA為分析目標冰上運輸至實驗室DNA在新鮮組織中2-8℃可穩(wěn)定24h、-20℃可穩(wěn)定2w、-70℃以下可穩(wěn)定至少2年實體組織富含內(nèi)源性核酸酶，處理前需盡快保存于-70℃或更低溫度帶血的組織凍存之前應用無菌生理鹽水充分洗凈組織凍存應盡量以液氮或-70℃的低溫凍存效果最好不可使用自動除霜冰箱保存新鮮組織對于進行FISH檢測的新鮮組織，應包埋于最佳切割溫度復合物中，直至檢測開始第二十八頁，共36頁。新鮮組織以RNA為分析目標時新鮮組織應以干冰運輸至實驗室RNA如果不能在1-4h內(nèi)完成提取必須在-70℃凍存，如無條件保存應盡快完成RNA抽提，保存RNA，-20℃條件下RNA酶仍然有活性所有冷凍過程都應該是快速冷凍標本保存容器必須是無菌、疏水性的塑料容器第二十九頁，共36頁。產(chǎn)前標本超聲引導下穿刺采集絨毛膜：洗凈后15mg以上（去除母體雜質(zhì)）羊水：最少10ml推薦同時采集母親外周血，供實驗室排除母體基因組的影響絨毛膜運輸必須使用惰性組織培養(yǎng)基或者生理鹽水緩沖液培養(yǎng)細胞必須雙瓶，且75%融合，對于未達到75%融合的樣本，應繼續(xù)培養(yǎng)，如滿足要求應當天處理絨毛膜/羊水細胞樣本檢測前需通過顯微鏡評價是否母體污染，應盡量去除，如不能當天處理，必須放置2-8℃保存，次日提取DNA第三十頁，共36頁。干血片干血片適用于DNA分析，血片不應放置在密封的塑料袋中，濕氣會是血片長菌，如果放置塑料袋或容器中，應配備足夠的干燥劑和指示劑不同血片之間應用玻璃紙或隔開以避免交叉污染，可室溫保存和運輸，可穩(wěn)定至少19個月第三十一頁，共36頁。其它標本支氣管肺泡盥洗液，室溫運輸，穩(wěn)定24h、2-8℃穩(wěn)定72h，更長時間保存需放置-20℃或-70℃、用于結(jié)核分枝桿菌檢測的標本凍存之前需經(jīng)過消化去除污染男性尿道標本應使用聚酯拭子標本采集女性子宮頸標本或者尿道標本可以聚酯拭子或者人造絲拭子、運輸需采用轉(zhuǎn)運培養(yǎng)基HPV檢測標本的采集和轉(zhuǎn)運應按照試劑生產(chǎn)商的要求進行第三十二頁，共36頁。口腔黏膜細胞石蠟組織切片脫落細胞其它標本脫落細胞：胸水，無菌容器40-50ml；細胞穿刺，一次性注射器口腔黏膜細胞：無菌拭子取樣石蠟組織