干化學(xué)尿流式儀及顯微鏡尿液沉渣檢查關(guān)系

干化學(xué)尿流式儀及顯微鏡尿液沉渣檢查關(guān)系第1頁/共56頁尿液沉查鏡檢歷史Ismail（1000年前），宏觀在對尿液進(jìn)行分析Bright（1827年）首次發(fā)現(xiàn)管型Bird（1854年）Purdy（1900年）進(jìn)一步證明了尿沉渣檢查的臨床價值A(chǔ)ddis（1948年）建立了尿沉渣物定量檢查法美國NCCLS（1991年）提出了“尿常規(guī)分析”的推薦標(biāo)準(zhǔn)（GP16-P）；經(jīng)過四年實踐以提出了“尿液分析和尿液標(biāo)本采集、轉(zhuǎn)運和保存”（1995年）的標(biāo)準(zhǔn)文件（GP-16A）日本JCCLS（1995年）制定了“尿沉渣檢查標(biāo)準(zhǔn)）中華醫(yī)學(xué)會第一次全國臨床檢驗學(xué)術(shù)會議（1983年會議）提出了尿常規(guī)檢查標(biāo)準(zhǔn)化問題中華醫(yī)學(xué)會檢驗分會臨床血液學(xué)檢驗與尿液分析專題研討會提出了我國尿沉渣的推薦標(biāo)準(zhǔn)（1995年武夷山會議）。第2頁/共56頁尿常規(guī)檢查的重要意義泌尿系統(tǒng)疾病的診斷和療效觀察其它系統(tǒng)疾病的診斷職業(yè)病的輔助診斷安全用藥的監(jiān)護第3頁/共56頁尿液常規(guī)檢查項目沉渣顯微鏡檢化學(xué)成份分析外觀檢查第4頁/共56頁尿液沉渣顯微鏡檢查尿沉渣顯微鏡檢的重要意義尿沉渣檢查標(biāo)準(zhǔn)化標(biāo)準(zhǔn)化尿沉渣檢查方法第5頁/共56頁標(biāo)準(zhǔn)化尿沉渣檢查方法標(biāo)準(zhǔn)沉渣檢查系統(tǒng)自動充液儀檢查倒置顯微鏡檢查法Censide檢查系統(tǒng)第6頁/共56頁干化學(xué)紅、白細(xì)胞檢測與鏡檢的關(guān)系第7頁/共56頁干化學(xué)尿紅、白細(xì)胞檢查與鏡檢關(guān)系

尿沉渣顯微鏡檢查是診斷泌尿系統(tǒng)疾病的金標(biāo)準(zhǔn)，對診斷、鑒別、予后分析具有重要的意義，迄今為止，尚無一臺儀器能完全替代顯微鏡檢查。八一8解放軍總醫(yī)院

第8頁/共56頁9解放軍總醫(yī)院

干化學(xué)尿紅、白細(xì)胞檢查與鏡檢關(guān)系

尿沉渣的標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化

操作規(guī)程為：尿液10ml，離心5分鐘，相對離心力（RCF）為400g，剩余沉淀為0.2ml，混勻后吸沉淀物約20μl，滴入玻片上，用18mm×18mm蓋玻片覆蓋后鏡檢。先用低倍鏡（10×10）觀察全片，高倍鏡（10×40）仔細(xì)觀察，細(xì)胞檢查10個高倍視野（HP），管型檢查20個低倍視野（LP）。報告方式：個細(xì)胞/HP，個管型/LP。美國NCCLS文件，推薦使用一次性尿檢測板，并用XXul報告，國內(nèi)專家亦認(rèn)為應(yīng)逐步在我國施行個/ul的報告。八一第9頁/共56頁干化學(xué)尿紅、白細(xì)胞檢查與鏡檢關(guān)系規(guī)范的尿沉渣鏡檢在常規(guī)工作的可行性與篩選規(guī)范的尿沉渣鏡檢是保證尿液分析結(jié)果準(zhǔn)確的基礎(chǔ)，原則上每個尿液標(biāo)本都采用這種方法檢查，但目前化驗室人員少，工作量大，每天有幾十甚至于幾百個標(biāo)本需要及時報告，要使用規(guī)范的鏡檢及時地發(fā)出報告是困難的，最好尋找一個簡單、快速的方法進(jìn)行過篩，即將完全正常的標(biāo)本篩去后，對異常的標(biāo)本進(jìn)行規(guī)范性檢查。干化學(xué)尿液分析儀提供了過篩的手段。八一10解放軍總醫(yī)院

第10頁/共56頁干化學(xué)尿紅、白細(xì)胞檢查與鏡檢關(guān)系干化學(xué)尿紅、白細(xì)胞篩選的概念與原則

所謂過篩就是在儀器、試帶符合實驗要求，檢驗人員相對穩(wěn)定的條件下制定的一個標(biāo)準(zhǔn)，達(dá)到此標(biāo)準(zhǔn)可視為尿沉渣成份在正常范圍內(nèi)，可免去進(jìn)一步顯微鏡檢查。如果一個標(biāo)本經(jīng)過干化學(xué)、鏡檢兩種方法檢查，干化學(xué)結(jié)果符合過篩標(biāo)準(zhǔn)，鏡檢結(jié)果在正常范圍內(nèi)，說明過篩是正確的。干化學(xué)結(jié)果不符合過篩標(biāo)準(zhǔn)，鏡檢結(jié)果也異常，也說明過篩標(biāo)準(zhǔn)是正確的。干化學(xué)結(jié)果異常，鏡檢結(jié)果正常視為假陽性，反之干化學(xué)結(jié)果正常，鏡檢結(jié)果異常視為假陰性。八一11解放軍總醫(yī)院

第11頁/共56頁鏡檢與試條同時檢測尿RBC對比試條鏡檢00~33~56~1011~2021~40＞40(個/ul)(個/ul)Neg1409

8110112457742594671198885073163273263351150146681732825917250120336713922325612解放總醫(yī)院

12解放軍總醫(yī)院

第12頁/共56頁不同正常篩選標(biāo)準(zhǔn)的RBC測定結(jié)果對比分析儀篩選標(biāo)準(zhǔn)鏡檢異常鏡檢正常RBC≥3~5/HPRBC≤0~2/HP敏感性(%)特異性(%)假陽性(%)假陰性(%)

正常(RBC陰性)0149010035.855.10

異常(RBC≥u/l)21832676

正常(RBC≤10u/l)4319199.876.630.90.13

異常(RBC≥25u/l2179975

正常(RBC≤25u/l)294386286.592.713.87.1

異常(RBC≥50u/l)188930413解放軍總醫(yī)院

第13頁/共56頁鏡檢與試條同時檢測尿WBC對比八一14解放軍總醫(yī)院

鏡檢00-30-53-56-1011-20>20Neg26386141125125346107024424913243151005*3230851041294950008*5*7428223423(蛋白陽性)9（RBC陽性）7（Nit陽性）3（單核,淋巴）9(蛋白陽性)3(Nit陽性)5(RBC陽性)2(淋巴)2(蛋白陽性)1(Nit陽性)

203(個/ul)(個/ul)試條第14頁/共56頁以試條WBCneg為篩選標(biāo)準(zhǔn)

鏡檢

異常(WBC≥5~10/HP)正常(WBC為0~5/HP)試條正常(WBC為陰性)74(10)3364異常(WBC≥25/ul）1171174015解放軍總醫(yī)院

第15頁/共56頁以WBC≥25/ul為標(biāo)準(zhǔn)篩選鏡下管型WBC陰性WBC＞25/ul0~12~56~10＞100~12~56~10＞10（個/LP）透明管型10840811531558顆粒管型152136141121細(xì)胞管型11512

4

臘樣管型6116解放軍總醫(yī)院

八一第16頁/共56頁以RBC≥25/ul為標(biāo)準(zhǔn)篩選鏡下管型RBC≤10/ulRBC0≥25/ul0~12~56~10＞100~12~56~10＞10（個/LP）透明管型83283278271017顆粒管型972202555細(xì)胞管型5218

7臘樣管型24117解放軍總醫(yī)院

八一第17頁/共56頁以蛋白≥75mg/dl為標(biāo)準(zhǔn)篩選鏡下管型蛋白≤25mg/dl蛋白≥75mg/dl0~12~56~10＞100~12~56~10＞10（個/LP）透明管型1061345542919顆粒管型962202637細(xì)胞管型7516

4臘樣管型18解放軍總醫(yī)院

八一第18頁/共56頁以WBC≥25/ulRBC≥25/ul蛋白≥75mg/dl為標(biāo)準(zhǔn)篩選鏡下管型WBC陰性蛋白25≤mg/dl0~12~56~10＞10（個/LP）透明管型29000顆粒管型0000細(xì)胞管型0000臘樣管型0000RBC≤10/ul19解放軍總醫(yī)院

八一第19頁/共56頁干化學(xué)法檢測白細(xì)胞紅細(xì)胞存在的問題干化學(xué)法檢查尿內(nèi)白細(xì)胞的原理是基于粒細(xì)胞漿內(nèi)有酯酶可作用于試帶中的吲哚酚酯，釋放吲哚酚與重氮鹽反應(yīng)形成縮合物，其顏色與細(xì)胞的多少成比例。此法只能測定粒細(xì)胞，不與淋巴細(xì)胞反應(yīng)。尿液中污染甲醛或高濃度膽紅質(zhì)或使用某些藥物（如呋喃咀啶），可產(chǎn)生假陽性；尿蛋白>5g/L或尿液中含有大劑量先鋒Ⅳ或慶大霉素等藥物時，可使結(jié)果出現(xiàn)假陰性。引起紅細(xì)胞試驗假陽性：肌紅蛋白，易熱酶引起紅細(xì)胞試驗假陰性：維生素C八一20解放軍總醫(yī)院

第20頁/共56頁干化學(xué)尿紅、白細(xì)胞檢查與鏡檢關(guān)系細(xì)胞破壞造成的“假陽性”現(xiàn)象：所謂“假陽性”、“假陰性”是以顯微鏡檢查為基礎(chǔ)的。由于干化學(xué)是檢測細(xì)胞胞漿內(nèi)涵物來確定細(xì)胞的有無.在實際工作中可能存在下列問題：⑴由于尿液在膀胱貯存時間過長，導(dǎo)致白細(xì)胞破壞，酯酶釋放到尿液中，造成干化學(xué)陽性，鏡檢陰性的所謂“假陽性”現(xiàn)象。⑵腎病患者，紅細(xì)胞在腎臟或泌尿道破壞，或尿比重過低、尿PH偏高均易造成經(jīng)細(xì)胞破壞血紅蛋白釋放尿中，造成所謂紅細(xì)胞干化學(xué)檢查的“假陽性”現(xiàn)象。八一21解放軍總醫(yī)院

第21頁/共56頁690例標(biāo)本尿干化學(xué)紅細(xì)胞檢查與統(tǒng)檢結(jié)果分析八一22解放軍總醫(yī)院

鏡檢鏡檢干化學(xué)檢查單克隆潛血板陽性105例(細(xì)胞破壞引起“假陽性”)加熱煮沸后干化學(xué)檢查全部為陰性(易熱酶引起假陽性)690例陽性360例陰性330例陰性330例(符合)陽性0例陽性142例(符合)陰性218例

陰性113例第22頁/共56頁干化學(xué)過篩應(yīng)用范圍的局限性(1)腎科及泌尿科病人尿液不適合于干化學(xué)過篩顯微鏡檢查。即無論干化學(xué)結(jié)果如何，均應(yīng)做顯微鏡檢查。鏡檢結(jié)石、結(jié)晶、腫瘤細(xì)胞作為診斷依據(jù)或觀察療效時，不宜用干化學(xué)方法過篩。由于干化學(xué)分析干擾因素較多，且不可避免的有一定的假陰性率，因此要結(jié)合臨床表現(xiàn)判斷結(jié)果，決不可只看干化學(xué)分析，忽視鏡檢。尿液的外觀（特別是顏色、濁度）與尿沉渣有一定相關(guān)關(guān)系，當(dāng)尿液外觀異常時，應(yīng)注意顯微鏡檢查。八一23解放軍總醫(yī)院

第23頁/共56頁干化學(xué)過篩應(yīng)用范圍的局限性(2)干化學(xué)試帶的質(zhì)量、穩(wěn)定性及質(zhì)量控制與過篩的準(zhǔn)確性密切相關(guān)。儀器及干化學(xué)試帶一定要符合要求：儀器的正常運轉(zhuǎn)和試帶質(zhì)量合格取得是實驗結(jié)果的基本保證。筆者制定上述標(biāo)準(zhǔn)使用的是BM公司的Midiitron尿液分析儀及Combur10TestM配套試帶.每個實驗室使用過篩標(biāo)準(zhǔn)時，首先必須做對照觀察（所用干化學(xué)試帶與顯微鏡對比），確認(rèn)儀器試帶的敏感性與特異性是否符合過篩標(biāo)準(zhǔn)的要求。八一24解放軍總醫(yī)院

第24頁/共56頁尿流式細(xì)胞儀與鏡檢關(guān)系第25頁/共56頁流式細(xì)胞儀的原理與分類流式細(xì)胞儀通用型專用型科研型臨床型網(wǎng)織紅細(xì)胞分析儀血細(xì)胞分析儀尿沉渣分析儀第26頁/共56頁導(dǎo)電率尿?qū)щ娐是跋蛏⑸涔饬魇郊?xì)胞測定法熒光電阻抗測定電阻抗信號前向散射光強度熒光脈沖寬度熒光強度前向散射光脈沖寬度細(xì)胞體積細(xì)胞長度染色部分長度染色強度細(xì)胞大小電阻抗紅細(xì)胞散射圖酵母細(xì)胞結(jié)晶小圓上皮病理管型細(xì)菌白細(xì)胞上皮細(xì)胞管型前向散射光直方圖前向散射光直方圖紅細(xì)胞參數(shù)白細(xì)胞參數(shù)氬激光尿樣品電極電阻信號放大器稀釋導(dǎo)電率感應(yīng)器熒光信號放大器染色鞘液前向散射光信號放大器流式細(xì)胞儀測定原理簡圖第27頁/共56頁流式細(xì)胞儀原理FscFlFlwFscwFlFl2Fscw250ch250chRBCWBCFscFsc第28頁/共56頁尿流式細(xì)胞儀與鏡檢的關(guān)系UF可提供客觀的形態(tài)學(xué)指標(biāo)，尤其對球性血尿和非球性血尿的鑒別UF可直接進(jìn)行定量檢測，簡單、快速

尿流式細(xì)胞儀紅、白細(xì)胞檢查仍是鏡檢篩選

干化學(xué)尿與流式“篩選”之比較

尿流式較鏡檢的優(yōu)勢與局限性第29頁/共56頁再見第30頁/共56頁尿沉渣檢查的重要意義檢查內(nèi)容：上皮細(xì)胞、血細(xì)胞、管型及結(jié)晶臨床意義：

上皮細(xì)胞扁平上皮大圓上皮尾型上皮小圓上皮血細(xì)胞白細(xì)胞及膿細(xì)胞紅細(xì)胞第31頁/共56頁尿沉渣檢查的重要意義臨床意義：

管型透明管型細(xì)胞管型顆粒管型蠟樣管型白細(xì)胞管型紅細(xì)胞管型上皮細(xì)胞管型細(xì)粒管型粗粒管型脂肪管型腎衰竭管型第32頁/共56頁尿沉渣檢查的重要意義臨床意義：

結(jié)晶磺胺結(jié)晶堿性結(jié)晶酸性結(jié)晶亮氨酸及絡(luò)氨酸結(jié)晶三價磷酸鹽尿酸銨結(jié)晶非晶型磷酸鹽尿酸結(jié)晶草酸鈣結(jié)晶非晶型磷酸鹽第33頁/共56頁尿沉渣鏡檢進(jìn)展1.采用干涉、相差、偏振光、掃描及透射電鏡鑒別管型2.有用活體染色及細(xì)胞化學(xué)染色識別各種管型3.應(yīng)用單克隆抗體技術(shù)識別各種細(xì)胞第34頁/共56頁尿沉渣鏡檢進(jìn)展尿中紅細(xì)胞形態(tài)尿中白細(xì)胞形態(tài)第35頁/共56頁尿沉渣鏡檢進(jìn)展S染色各種上皮細(xì)胞形態(tài)第36頁/共56頁尿沉渣鏡檢進(jìn)展S染色各種管型形態(tài)第37頁/共56頁尿沉渣鏡檢進(jìn)展S染色各種管型形態(tài)第38頁/共56頁第39頁/共56頁第40頁/共56頁第41頁/共56頁復(fù)檢條件一REVIEW標(biāo)記計數(shù)錯誤總數(shù)40,000電導(dǎo)率錯誤電導(dǎo)率5ms/cm或38ms/cm界標(biāo)錯誤RBC-Fl-DWSD40ch或紅細(xì)胞數(shù)2.5/l且其Fsc>200ch或紅細(xì)胞數(shù)15/l時未溶解的RBC%

20%二菌尿第42頁/共56頁第43頁/共56頁UF在鑒別血尿來源中的應(yīng)用301醫(yī)院用此儀器對隨機95例腎小球性和非腎小球性出血病人的尿紅細(xì)胞形態(tài)進(jìn)行了觀察，以臨床診斷腎小球病變（腎活檢）為標(biāo)準(zhǔn)，以此儀器檢測尿非均一性紅細(xì)胞為腎小球病變診斷依據(jù)，結(jié)果：敏感性：100％，特異性：78.2％第44頁/共56頁UF在鑒別血尿來源中的應(yīng)用急性腎小球性腎炎病人尿液測定結(jié)果第45頁/共56頁UF在鑒別血尿來源中的應(yīng)用慢性腎小球性腎炎病人尿液測定結(jié)果第46頁/共56頁UF在鑒別血尿來源中的應(yīng)用前列腺癌病人尿液測定結(jié)果第47頁/共56頁UF在鑒別血尿來源中的應(yīng)用腎結(jié)石病人尿液測定結(jié)果第48頁/共56頁UF在鑒別血尿來源中的應(yīng)用慢性膀胱炎病人尿液測定結(jié)果第49頁/共56頁

尿沉渣成分 主要臨床意義

紅細(xì)胞 月經(jīng)、過度運動、各種腎，泌尿系統(tǒng)如外傷、腎小管炎癥、結(jié)石、結(jié)核、腫瘤、急性腎小球腎炎

白細(xì)胞各種腎損害、泌尿道感染、腎盂腎炎 上皮細(xì)胞 腎小管上皮細(xì)胞腎實質(zhì)腎小管受損 鱗狀上皮細(xì)胞正常人或污染

管型

寬型 嚴(yán)重腎疾病 腎上皮細(xì)胞腎小管退化、變性 脂肪 腎病綜合征 顆?；蛳灅幽I實質(zhì)損害 透明 酸性尿-含高鹽，多為病理性 細(xì)菌 泌尿道感染

脂肪體(卵圓小體)

腎病綜合征

各種尿沉渣成分主要臨床意義第50頁/共56頁尿沉渣染色的臨床意義SM染色：管型的鑒別巴氏染色：識別細(xì)胞甲苯胺蘭：觀察管型與核結(jié)構(gòu)過氧化酶：鑒別粒細(xì)胞與上皮細(xì)胞管型非特異酯酶：識別單核細(xì)胞油紅O、蘇丹Ⅲ：脂肪變性細(xì)胞酸性磷酸酶：區(qū)分腎上皮細(xì)胞與前列腺細(xì)胞第51頁/共56頁

方法 白細(xì)胞 紅細(xì)胞普通載玻片不加蓋玻片法 15.0 17.0 載玻片加蓋玻片法 12.0 15.0 改良Neubauer 10.2 9.9 Fast-Read-10R定量板法 9.3 7.0 四種常見尿沉渣檢查法CV%值比較第52頁/共56頁單克隆抗體免疫過氧化物酶染色檢查特異細(xì)胞抗體名稱對應(yīng)的特異細(xì)胞 FMC10粒細(xì)胞 FMC32單核細(xì)胞 AMDT4 輔助/支持T淋巴細(xì)胞 Huly-m8 細(xì)胞毒/抑制T淋巴細(xì)胞 URO1 腎小球/輸尿管上皮細(xì)胞 URO3 近曲小管上皮細(xì)胞 URO5