細胞化學(xué)染色

概念

細胞化學(xué)染色是以細胞形態(tài)學(xué)為基礎(chǔ)，結(jié)合運用化學(xué)反應(yīng)的原理對血細胞內(nèi)的各種化學(xué)物質(zhì)（糖類、蛋白質(zhì)、脂類、酶類、鐵、核酸等）作定性、定位、半定量分析的方法。

細胞原位的化學(xué)反應(yīng)第一頁，共67頁。臨床應(yīng)用輔助判斷急性白血病的細胞類型輔助血液系統(tǒng)等疾病的診斷和鑒別診斷（Fe、NAP等）

第二頁，共67頁。FABALL（急性淋巴細胞白血病）L1、L2、L3AML（急性髓細胞白血?。㎝0急性粒細胞白血?。ㄎ⒎只停㎝1急性粒細胞白血病（未成熟型）M2急性粒細胞白血?。ú糠殖墒煨停㎝3急性早幼粒細胞白血病M4急性粒－單核細胞白血病M5急性單核細胞白血病M6急性紅白血病M7急性巨核細胞白血病第三頁，共67頁。細胞化學(xué)染色的基本步驟固定顯示復(fù)染保持細胞結(jié)構(gòu)及化學(xué)成分不變，并使血膜在染色、沖洗過程中不易脫落損壞形成穩(wěn)定的有色沉淀，顯示出被檢測的化學(xué)物質(zhì)既能顯示細胞結(jié)構(gòu)又能清楚地看出細胞化學(xué)染色結(jié)果第四頁，共67頁。細胞化學(xué)染色的種類過氧化物酶染色（POX)、蘇丹黑染色（SBB)過碘酸-雪夫反應(yīng)（PAS）又稱糖原染色酯酶染色酸性磷酸酶染色（ACP)鐵染色中性粒細胞堿性磷酸酶染色（NAP）第五頁，共67頁。過氧化物酶染色Peroxidasestain,POX第六頁，共67頁。染色原理（四甲基聯(lián)苯胺法）H2O2

溶酶體顆粒中的ＰＯＸ

H2O＋O2四甲基聯(lián)苯胺O2聯(lián)苯胺藍聯(lián)苯胺藍＋亞硝基鐵氰化鈉O2藍色物質(zhì)

（沉淀）第七頁，共67頁。正常血細胞的染色反應(yīng)粒細胞系統(tǒng)原粒（可為陰性）分葉（陽性程度逐漸增強）嗜酸陽性最強嗜堿陰性單核細胞系統(tǒng)陰性或弱陽性（顆粒少而細）其他血細胞陰性第八頁，共67頁。第九頁，共67頁。臨床意義1.ALL：原始細胞的POX陽性＜3%2.AML：原始細胞的陽性≥3%在多數(shù)的M1、絕大部分M2和M3中，原始細胞的陽性率大于85%，M3呈強陽性；M4和M5時，原單有時可呈弱陽性，但絕大多數(shù)的原單是POX陰性。M6，原粒和幼稚粒細胞是POX陽性，幼紅細胞是POX陰性。M7，血小板POX的活性只能在超微結(jié)構(gòu)上證實。

第十頁，共67頁。第十一頁，共67頁。第十二頁，共67頁。POX染色的臨床應(yīng)用◆POX染色是輔助診斷急性白血病細胞類型首選、最重要的細胞化學(xué)染色，主要用于急性白血病的鑒別診斷?！?/p>

急性粒細胞白血病時，其原、幼細胞呈陽性反應(yīng)，以APL反應(yīng)最強;急性單核細胞白血病時，原幼細胞呈弱陽性反應(yīng)◆

ALL時呈陰性反應(yīng)第十三頁，共67頁。用途：鑒別急性淋巴系與非淋巴系白血病結(jié)果：粒系(+)；單核系(±)；淋巴系(–)原粒單核淋巴早幼晚幼中幼過氧化物酶染色(peroxidase，POX)

第十四頁，共67頁。蘇丹黑染色Sudanblack,SBB第十五頁，共67頁。蘇丹黑染色◆原理：SBB能溶解于細胞內(nèi)的含脂結(jié)構(gòu)，使脂類物質(zhì)顯示出來，呈棕黑色或深黑色。◆正常細胞的染色反應(yīng)同POX染色?！襞R床評價POX染色特異性高于SBB染色SBB染色敏感性高于POX染色第十六頁，共67頁。過碘酸-雪夫反應(yīng)(糖原染色）Periodicacid-Schiffreaction,PAS第十七頁，共67頁。染色原理（PAS）乙二醇基（多糖類物質(zhì)中）過碘酸雙醛基＋無色品紅紫紅色化合物第十八頁，共67頁。正常血細胞的染色反應(yīng)粒細胞系統(tǒng)原粒（可為陰性）分葉（陽性程度逐漸增強）嗜酸胞質(zhì)呈紅色，顆粒不著色嗜堿反之紅細胞系統(tǒng)陰性單核細胞系統(tǒng)原單（可為陰性），其他陽性第十九頁，共67頁。正常血細胞的染色反應(yīng)淋巴細胞系統(tǒng)大多數(shù)陰性，少數(shù)陽性。巨核細胞系統(tǒng)

巨核細胞和血小板陽性，陽性反應(yīng)的程度隨細胞的發(fā)育成熟而增強。第二十頁，共67頁。第二十一頁，共67頁。臨床意義◆紅細胞系統(tǒng)疾病紅血病、紅白血病、骨髓增生異常綜合征中幼紅細胞可陽性（均勻紅色或塊狀）；某些紅系良性疾病如缺鐵貧、巨幼貧等陰性。◆白細胞系統(tǒng)疾病

ALL：（原幼淋細胞陽性率升高，呈粗顆?；驂K狀）急粒：少數(shù)原粒呈陽性，陽性細顆粒狀急單：可呈陽性，陽性細顆粒狀第二十二頁，共67頁。PAS臨床意義AML-M6幼紅細胞呈陽性反應(yīng)MA幼紅細胞呈陰性反應(yīng)第二十三頁，共67頁。ALL第二十四頁，共67頁。AML-M6第二十五頁，共67頁。AML-M6PAS(+)第二十六頁，共67頁。AML-M5第二十七頁，共67頁。M5PAS(+)第二十八頁，共67頁。AML-M7第二十九頁，共67頁。M7PAS(+)第三十頁，共67頁。PAS染色的應(yīng)用◆鑒別淋巴系統(tǒng)增生的性質(zhì)：

凡惡性增生時PAS反應(yīng)多呈強陽性反應(yīng)，見于急、慢性淋巴細胞白血病、淋巴瘤等。◆鑒別紅系增生的性質(zhì)：

凡惡性增生者，如紅血病、紅白血病其原、幼紅細胞多呈強陽性反應(yīng)；增生性貧血、巨幼貧，PAS多為陰性?！粲兄诰藓思毎籽〉脑\斷第三十一頁，共67頁。酯酶染色第三十二頁，共67頁。第三十三頁，共67頁。α-醋酸萘酚酯酶染色(α-NAE)原理

α-醋酸萘酚PH中性α-醋酸萘酚酯酶α-萘酚+重氮鹽(堅牢藍B)(黑色或灰黑色)

第三十四頁，共67頁。正常血細胞的染色反應(yīng)◆單核細胞、粒細胞、淋巴細胞（均可+）◆僅單核細胞的陽性可被氟化鈉抑制(NaF抑制率>50%)。NaF抑制率=抑制前的陽性率/積分-抑制后的

抑制前的陽性率/積分

×100%

第三十五頁，共67頁。α-NAE對診斷急性白血病的作用第三十六頁，共67頁。第三十七頁，共67頁。酸性磷酸酶染色Acidphosphatase,ACP第三十八頁，共67頁。ACP染色的臨床意義第三十九頁，共67頁。鐵染色Ferricstain第四十頁，共67頁。染色原理（Fe染色）

鐵+亞鐵氰化鉀

酸性環(huán)境亞鐵氰化鐵（藍色）第四十一頁，共67頁。正常血細胞的染色反應(yīng)◆正常人骨髓中的鐵主要存在于骨髓小粒及幼紅細胞中，分為細胞外鐵和細胞內(nèi)鐵。◆細胞外鐵：骨髓小粒的巨噬細胞中◆細胞內(nèi)鐵:中幼紅細胞、晚幼紅細胞及紅細胞中

鐵粒幼紅細胞--含鐵顆粒的中、晚幼紅細胞

鐵粒紅細胞--含鐵顆粒的紅細胞第四十二頁，共67頁。細胞外鐵的觀察低倍鏡觀察骨髓小粒中的鐵，陽性結(jié)果呈彌散性、顆粒狀、小珠狀或塊狀藍色。第四十三頁，共67頁。第四十四頁，共67頁。第四十五頁，共67頁。細胞內(nèi)鐵的觀察53第四十六頁，共67頁。53第四十七頁，共67頁。第四十八頁，共67頁。第四十九頁，共67頁。第五十頁，共67頁。環(huán)形鐵粒幼細胞第五十一頁，共67頁。參考范圍：細胞外鐵：（+）～（++）細胞內(nèi)鐵：鐵粒幼紅細胞12%～44%，以Ⅰ型為主，少數(shù)為Ⅱ型，無環(huán)形鐵粒幼紅細胞及鐵粒紅細胞。第五十二頁，共67頁。臨床意義MDS第五十三頁，共67頁。第五十四頁，共67頁。中性粒細胞堿性磷酸酶染色NeutrophilicalkalinephosphataseNAP第五十五頁，共67頁。染色原理（NAP染色）Kaplow偶氮偶聯(lián)法：中性粒細胞胞質(zhì)中的堿性磷酸酶在PH9.6的堿性條件下能水解磷酸奈酚鈉底物，生成奈酚，后者與偶氮鹽偶聯(lián)形成不溶性的有色沉淀定位于胞質(zhì)中的酶活性處。（紫黑色顆粒）鈣-鈷法：紅色顆粒第五十六頁，共67頁。正常血細胞的染色反應(yīng)◆NAP主要存在于中性成熟粒細胞（包括中性桿狀核粒細胞和中性分葉核粒細胞）胞漿內(nèi)，故中性成熟粒細胞胞漿呈陽性，其他細胞基本呈陰性。第五十七頁，共67頁。第五十八頁，共67頁。第五十九頁，共67頁。第六十頁，共67頁。第六十一頁，共67頁。參考范圍：陽性率<40%；NAP積分值為30～130分。第六十二頁，共67頁。臨床意義NAP積分增加：細菌性感染(包括類白血病反應(yīng)）、再生障礙性貧血、某些骨髓增殖性疾病、慢性粒細胞白血?。铀倨凇⒓弊兤冢⒓毙粤馨图?/p>