化學致癌作用及其評價

化學致癌作用及其評價第1頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三目的與要求1.掌握基本概念2.掌握化學致癌物的分類3.掌握癌變多階段學說4.熟悉化學致癌物的評定5.掌握哺乳動物致癌試驗設計的基本點6.了解化學致癌過程的阻斷第2頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三第一節(jié)概述第3頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三一、癌癥發(fā)病情況癌癥是一種全身性疾病。癌不但可以惡性膨脹，還能擴散和轉(zhuǎn)移，嚴重威脅人類健康和生命?！鞍┌Y正在成為人類第一殺手”。全世界每年因癌癥死亡的人數(shù)高達1000多萬人。世界衛(wèi)生組織（WHO）發(fā)表的資料指出，根據(jù)目前癌癥的發(fā)病趨勢，2020年全世界癌癥發(fā)病率將比現(xiàn)在增加50％，全球每年新增癌癥患者人數(shù)將達到1500萬人。第4頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三一、癌癥發(fā)病情況目前全世界發(fā)病率最高的癌癥是肺癌，每年新增患者為120萬人；其次是乳腺癌，每年新增大約100萬名患者；隨后依次是腸癌(94萬人)、胃癌(87萬人)、肝癌(56萬人)、宮頸癌(47萬人)、食道癌(41萬人)等。其中殺傷力最強的是肺癌、胃癌和肝癌，分別占癌癥死亡人數(shù)的17.8％、10.4％和8.8％。第5頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三一、癌癥發(fā)病情況人類癌癥有80%～90%由環(huán)境因素引起?；瘜W因素是人類腫瘤的主要病因，在環(huán)境因素引起的腫瘤中，其中80%以上為化學因素所致。第6頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三二、研究致癌物的歷史1775年——英國Pott陰囊癌（煤焦油）1895年——德國Rehn膀胱癌（染料廠）1915年——日本山極和市川試驗性皮膚癌（煤焦油）1922年——英國Kennway動物皮膚癌（多環(huán)芳烴）1954年——英國Case職業(yè)性膀胱癌（β-萘胺和聯(lián)苯胺）第7頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三三、相關基礎概念癌（cancer,carcinoma）：指組織或細胞擺脫了體內(nèi)平衡，相對自主生長，不斷分裂而形成的危害機體的新生物。在毒理學中，“癌”的含義應包括上皮的惡性變(癌)、間質(zhì)的惡性變(肉瘤)及良性腫瘤。

第8頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三三、相關基礎概念化學致癌作用(chemicalcarcinogenesis)：是指化學物質(zhì)引起正常細胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化并發(fā)展成腫瘤的作用?；瘜W致癌物(chemicalcarcinogen)：是指具有化學致癌作用的化學物質(zhì)。第9頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三第二節(jié)化學致癌物的分類第10頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三一、按致癌作用機制分類（一）遺傳毒性致癌物(genotoxiccarcinogens)（二）非遺傳毒性致癌物(non-genotoxiccarcinogens)第11頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三1.直接致癌物

(directcarcinogen)2.間接致癌物

(indirectcarcinogen)3.無機致癌物這類化學物質(zhì)進入機體后，不需體內(nèi)代謝活化，其原型就可與遺傳物質(zhì)（主要是DNA）作用而誘導細胞癌變。這類化學致癌物為親電子劑，可與細胞大分子的親核中心發(fā)生共價結(jié)合。大多數(shù)有機致癌物本身不具有與細胞大分子的親核中心發(fā)生共價結(jié)合的能力，進入機體后需經(jīng)過代謝活化生成親電子的活性代謝物，而作用于細胞大分子發(fā)揮致癌作用。此類致癌物稱為間接致癌物。有些無機元素由于其放射性而致癌，如氡、鈾、釙、鐳等。有些可能是親電子劑，但有些是通過選擇性改變DNA復制保真性，導致DNA的改變，如金屬鎳、鉻。（一）遺傳毒性致癌物

(genotoxiccarcinogens)遺傳毒性致癌物進入細胞后作用于遺傳物質(zhì)（主要是DNA），通過引起細胞基因的改變而發(fā)揮致癌作用。第12頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三（二）非遺傳毒性致癌物

(non-genotoxiccarcinogens)這類物質(zhì)不直接作用于遺傳物質(zhì)。1.促長劑2.內(nèi)分泌調(diào)控劑3.細胞毒劑4.過氧化物酶體增殖劑5.免疫抑制劑6.固態(tài)物質(zhì)7.助癌物第13頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三（二）非遺傳毒性致癌物

(non-genotoxiccarcinogens)1.促長劑（promoter）促長劑本身不能誘發(fā)腫瘤，只有作用于引發(fā)細胞才表現(xiàn)其致癌活性；通常是非致突變物，不與DNA發(fā)生反應；促長劑通常具有閾劑量。引發(fā)細胞：在引發(fā)劑的作用下發(fā)生了不可逆的遺傳性改變，但其表型可能正常，不具有自主生長性，因此不是腫瘤細胞。第14頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三（二）非遺傳毒性致癌物

(non-genotoxiccarcinogens)2.內(nèi)分泌調(diào)控劑主要改變內(nèi)分泌系統(tǒng)平衡及細胞正常分化，常起促長劑作用。雌激素：乙烯雌酚、雌二醇雄激素：睪酮抗甲狀腺物質(zhì)：硫脲、某些磺胺類藥物第15頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三（二）非遺傳毒性致癌物

(non-genotoxiccarcinogens)3.細胞毒劑具有細胞毒性的化學物，可通過引起細胞死亡，導致細胞代償性增生而引發(fā)腫瘤。一些氯代烴類促癌劑的作用機理可能與細胞毒性作用有關。第16頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三（二）非遺傳毒性致癌物

4.過氧化物酶體增殖劑(peroxisomeproliferator)有一類化合物可引起肝臟過氧化物酶體增殖，稱之為過氧化物酶體增殖劑。已發(fā)現(xiàn)的過氧化物酶體增殖劑有降血脂藥物安妥明、增塑劑二-（2-乙基己基）鄰苯甲酸酯和有機溶劑1,1,2-三氯乙烯。有關過氧化物酶體增殖劑致癌機制尚未完全闡明，目前理論有：①引起氧化物酶體增多，導致細胞內(nèi)氧自由基過量生成，造成DNA氧化損傷，而啟動致癌過程；②通過短期“暴發(fā)”的DNA修復合成增強，導致細胞增殖；③通過激活受體介導的促有絲分裂作用。第17頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三（二）非遺傳毒性致癌物

(non-genotoxiccarcinogens)5.免疫抑制劑主要對病毒誘導的惡性轉(zhuǎn)化起增強作用。硫唑嘌呤、6-巰基嘌呤等免疫抑制劑或免疫血清均能使動物和人發(fā)生白血病或淋巴瘤，但很少發(fā)生實體腫瘤。第18頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三（二）非遺傳毒性致癌物

(non-genotoxiccarcinogens)6.固態(tài)物質(zhì)一些惰性物質(zhì)及金屬薄片可在嚙齒類動物體內(nèi)的種植部位引發(fā)肉瘤，物理特性及表面積很大程度上決定了植入物的致癌能力。如塑料、石棉等。暴露于石棉纖維會引起惡性間皮瘤或呼吸系腫瘤，而其主要取決于石棉的晶體結(jié)構(gòu)而非其組分。第19頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三（二）非遺傳毒性致癌物

(non-genotoxiccarcinogens)7.助癌物(cocarcinogen)指其單獨接觸無致癌性，但在接觸致癌物之前或同時接觸可增加腫瘤發(fā)生的一類化合物。芘在苯并（a）芘致皮膚腫瘤中起助癌作用，香煙煙霧中的兒茶酚和其他酚類化合物可能兼具促長劑和助癌物的作用。

助癌作用的機制可涉及增強致癌物的吸收，增強間接致癌物的代謝活化或抑制致癌物的代謝解毒，耗竭內(nèi)源性結(jié)合反應底物（如谷胱甘肽等），抑制DNA修復，促進細胞增殖等。第20頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三二、按致癌作用證據(jù)分類（IARC分類）世界衛(wèi)生組織下屬機構(gòu)國際癌癥研究所（internationalagencyforresearchoncancer，IARC）根據(jù)對人類和對實驗動物致癌性資料，以及其他有關的資料進行綜合評價將環(huán)境致癌因素分為四組：組1，對人類是致癌物。組2，對人類是很可能或可能致癌物。組2A，對人類很可能（probably）是致癌物。組2B，對人類是可能(possible)致癌物。組3，現(xiàn)有的證據(jù)不能對人類致癌性進行分類。組4，對人類可能是非致癌物。第21頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三組1（對人類是致癌物）組2（A對人類很可能是致癌物）（B對人類是可能致癌物）組3（現(xiàn)有的證據(jù)不能對人類致癌性進行分類）組4（對人類可能是非致癌物）人類致癌證據(jù)動物致癌證據(jù)充分有限充分有限不充分不足有限沒有沒有IARC分類第22頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三組1（對人類是致癌物）組2（A對人類很可能是致癌物）（B對人類是可能致癌物）組3（現(xiàn)有的證據(jù)不能對人類致癌性進行分類）組4（對人類可能是非致癌物）人類致癌證據(jù)動物致癌證據(jù)充分有限充分有限不充分不足充分不足不足不足有限沒有沒有IARC分類102種

68種245種516種

1種第23頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三第三節(jié)化學致癌物的作用機制第24頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三化學致癌物的作用機制一、體細胞突變學說二、癌基因?qū)W說三、親電子劑學說四、癌變多階段學說五、表觀遺傳機制學說第25頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三一、二、三、引發(fā)階段促長階段進展階段癌變多階段學說

——多因素、多基因參與的多階段過程第26頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三一、引發(fā)階段引發(fā)階段指化學物或其活性代謝物與DNA作用，導致體細胞突變成引發(fā)細胞的階段。引發(fā)劑（initiator）：指具有引發(fā)作用的化學物。引發(fā)劑大多數(shù)是致突變物，沒有可檢測的閾劑量。引發(fā)細胞（initiatedcell）：在引發(fā)劑的作用下發(fā)生了不可逆的遺傳性改變，但其表型可能正常，不具有自主生長性，因此不是腫瘤細胞。引發(fā)劑作用的靶：主要是原癌基因和腫瘤抑制基因。第27頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三一、引發(fā)階段癌基因（oncogene）是一類能引起細胞惡性轉(zhuǎn)化及癌變的基因。癌基因通常是以原癌基因（pro-oncogene）的形式普遍存在于正常動物細胞的基因組內(nèi)，原癌基因在進化過程中高度保守，具有正常的生物學功能，對細胞增殖、分化和信息傳遞的調(diào)控起重要作用。只有當其受到物理、化學或生物等致癌因素作用而激活變?yōu)榛罨陌┗蚝蟛棚@示其致癌活性。原癌基因是一種顯性基因，當其兩個等位基因之一發(fā)生突變，即可被激活。第28頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三一、引發(fā)階段腫瘤抑制基因也稱抑癌基因或抗癌基因，其作用方式與癌基因相反，它們在正常細胞中起著抑制細胞增殖和促進分化的作用，在環(huán)境致癌因素作用下，腫瘤抑制基因失活而引起細胞的惡性轉(zhuǎn)化。抑癌基因?qū)匐[性基因，必須一對等位基因丟失或突變后失活，才能對細胞的惡性轉(zhuǎn)化起作用。在化學致癌過程中癌基因和腫瘤抑制基因往往起協(xié)同作用。第29頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三二、促長階段促長階段指引發(fā)細胞增殖成為癌前病變或良性腫瘤的過程。促長劑（promoter）：指具有促長作用的化學物。促長劑本身不能誘發(fā)腫瘤，只有作用于引發(fā)細胞才表現(xiàn)其致癌活性；通常是非致突變物，不與DNA發(fā)生反應；促長劑通常具有閾劑量。第30頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三二、促長階段惡性腫瘤的發(fā)生是一個逐漸演變的過程，人體上某些器官的一些良性病容易出現(xiàn)細胞異常增生，具有惡性變化傾向，這些異常增生具有癌變傾向的病變稱為癌前病變。屬于癌前病變的疾病乳腺病直腸的家族性乳頭狀腺瘤慢性胃潰瘍肝硬化皮膚的黑痣等慢性胃潰瘍惡變肝硬化第31頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三二、促長階段良性腫瘤是指機體內(nèi)某些組織的細胞發(fā)生異常增殖，呈膨脹性生長，似吹氣球樣逐漸膨大，生長比較緩慢。由于瘤體不斷增大，可擠壓周圍組織，但并不侵入鄰近的正常組織內(nèi)，瘤體多呈球形、結(jié)節(jié)狀。周圍常形成包膜，因此與正常組織分界明顯，用手觸摸，推之可移動，手術時容易切除干凈，摘除不轉(zhuǎn)移，很少有復發(fā)。第32頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三二、促長階段促長階段的特點：促長階段歷時較長，早期有可逆性，晚期為不可逆的，因此在促長階段（特別是在早期）持續(xù)給以促長劑是必需的。2.促長階段的另一個特點是對生理因素調(diào)節(jié)的敏感性，衰老、飲食和激素可影響促長作用，許多影響因素本身就是促長劑。第33頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三二、促長階段促長劑的可能作用機制：干擾細胞信號轉(zhuǎn)導途徑改變細胞周期控制促進引發(fā)細胞的增殖抑制細胞凋亡抑制細胞間通訊免疫抑制等第34頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三三、演進階段演進階段指從癌前病變或良性腫瘤轉(zhuǎn)變成惡性腫瘤的過程。如生長加快、侵襲、轉(zhuǎn)移、抗藥性等。進展劑（progressor）：指使細胞由促長階段進入進展階段的化學物。進展劑具有引起染色體畸變的特性。完全致癌物（completecarcinogen）：指同時具有引發(fā)、促長及進展作用的化學物。第35頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三三、演進階段進展階段關鍵的分子特性：染色體的不穩(wěn)定性主要表現(xiàn)：染色體發(fā)生斷裂染色體斷片易位非整倍體等第36頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三前致癌物終致癌物分化的腫瘤引發(fā)的細胞細胞含錯配堿基細胞死亡不分化的癌致癌物-DNA加合物正常細胞活化轉(zhuǎn)移DNA結(jié)合DNA修復DNA修復失敗促長進展癌變多階段學說第37頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三第四節(jié)化學致癌作用的評價方法第38頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三一、短期試驗（一）致突變試驗（二）哺乳動物細胞惡性轉(zhuǎn)化試驗（三）哺乳動物短期致癌試驗（四）轉(zhuǎn)基因動物致癌檢測模型第39頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三一、短期試驗（一）致突變試驗用于致癌物篩選的致突變試驗如下：1.基因突變試驗：鼠傷寒沙門菌回復突變試驗（Ames試驗）、培養(yǎng)哺乳動物細胞胸苷激酶位點（tk）或次黃嘌呤鳥嘌呤轉(zhuǎn)磷酸核糖基酶位點（hgprt）正向突變試驗2.染色體畸變試驗：體外細胞系細胞遺傳學試驗、小鼠骨髓微核試驗、大鼠骨髓染色體畸變試驗3.原發(fā)性DNA損傷：DNA加合物、鏈斷裂、彗星試驗、DNA修復誘導（細菌SOS反應，大鼠肝UDS誘導）、姐妹染色單體交換試驗第40頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三一、短期試驗（一）致突變試驗預測致癌性的理想的致突變試驗應能靈敏地預測出受試物的致癌性，也能特異地預測出受試物的非致癌性，即要有高的靈敏性、特異性。第41頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三一、短期試驗（二）哺乳動物細胞惡性轉(zhuǎn)化試驗本試驗以細胞惡性轉(zhuǎn)化為觀察終點，在細胞生物學水平上研究腫瘤的發(fā)生與發(fā)展。細胞轉(zhuǎn)化指培養(yǎng)細胞在有害因素作用下發(fā)生一系列與腫瘤形成有關的細胞形態(tài)學及生物學特性的改變。第42頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三一、短期試驗（二）細胞惡性轉(zhuǎn)化試驗細胞惡性轉(zhuǎn)化的判定：

1.形態(tài)學變化

2.凋亡敏感性降低

3.錨著獨立性生長

4.血清抗性試驗

5.刀豆蛋白A凝集試驗

6.動物體內(nèi)成瘤性第43頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三一、短期試驗（二）細胞惡性轉(zhuǎn)化試驗1.形態(tài)學變化正常細胞呈單層生長，排列有序。而轉(zhuǎn)化細胞呈多層生長，極性消失，其中，惡性轉(zhuǎn)化的上皮細胞群中會出現(xiàn)紡錘形的成纖維樣細胞；而成纖維細胞則呈紡錘形或上皮細胞樣改變，并形成轉(zhuǎn)化灶。第44頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三第45頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三一、短期試驗（二）細胞惡性轉(zhuǎn)化試驗2.凋亡敏感性降低凋亡敏感性降低在人細胞轉(zhuǎn)化中起重要作用。常用細胞凋亡的檢測方法：常規(guī)的瓊脂糖凝膠電泳流式細胞儀檢測細胞凋亡（AnnexinV/PI雙染法）脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導的缺口末端標記法（TUNEL法）

第46頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三一、短期試驗（二）細胞惡性轉(zhuǎn)化試驗3.錨著獨立性生長轉(zhuǎn)化細胞對血清及細胞間通訊的依賴性降低，具有在低密度條件下在半固體瓊脂中形成集落的能力，即錨著獨立性生長，它是癌前轉(zhuǎn)化的特征，是體外檢測細胞惡性轉(zhuǎn)化的重要指標。但并不能反映其裸鼠成瘤性。

第47頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三一、短期試驗（二）細胞惡性轉(zhuǎn)化試驗4.血清抗性試驗血清作為上皮細胞的一種終末分化誘導劑，高濃度時可抑制人類上皮細胞生長及誘導腫瘤細胞分化，惡性轉(zhuǎn)化細胞對血清的生長抑制作用具有抗性。第48頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三一、短期試驗（二）細胞惡性轉(zhuǎn)化試驗5.刀豆蛋白A凝集試驗ConA凝集試驗：惡性細胞膜表面的ConA受體增加，在ConA溶液中將出現(xiàn)凝集時間提前和凝集度加強現(xiàn)象。

第49頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三一、短期試驗（二）細胞惡性轉(zhuǎn)化試驗6.動物體內(nèi)成瘤性判定細胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化的最終最可靠指標是動物體內(nèi)成瘤性。一般均采用皮下注射的方法，腫瘤體積需達1cm3以上方能判定為陽性。并要結(jié)合病理檢測。但由于存在種屬差異，裸鼠皮下的成瘤性作為人類細胞惡性轉(zhuǎn)化的最后標準是否可行，尚有異議。第50頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三一、短期試驗（三）哺乳動物短期致癌試驗在哺乳動物致癌試驗中，會發(fā)現(xiàn)受試化合物對某些特定組織的致瘤作用比對其他組織更為明顯，據(jù)此建立了比常規(guī)動物致癌試驗時間更短，更敏感的哺乳動物短期致癌試驗，又稱為有限體內(nèi)試驗。在這些試驗中僅觀察特定靶器官的腫瘤發(fā)生情況，試驗期限一般在數(shù)周到數(shù)月。第51頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三常用的短期致癌試驗有：

小鼠皮膚腫瘤誘發(fā)試驗20周小鼠肺腫瘤誘發(fā)試驗30周大鼠肝轉(zhuǎn)化灶誘發(fā)試驗8-14周雌性大鼠乳腺癌誘發(fā)試驗6個月此四個試驗不是成組試驗，應根據(jù)受試物的特點選擇使用。哺乳動物短期致癌試驗得到陽性結(jié)果時，其意義與長期動物致癌試驗相似。但由于其僅觀察特定器官，試驗期較短，若得到陰性結(jié)果，并不能排除受試物的致癌性。一、短期試驗（三）哺乳動物短期致癌試驗第52頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三一、短期試驗（四）轉(zhuǎn)基因動物致癌檢測模型

隨著致癌作用靶基因的明確和轉(zhuǎn)基因動物技術的發(fā)展，用特定基因改造動物模型進行試驗，使對外來化合物的致癌性檢測更為快速和敏感。目前已建立的檢測模型或研究模型有：

1.過量表達癌基因的轉(zhuǎn)基因動物模型

2.基因刪除動物致癌檢測模型第53頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三1.過量表達癌基因的轉(zhuǎn)基因動物模型如TG，AC小鼠，HK-fos轉(zhuǎn)基因小鼠，Ras-H2轉(zhuǎn)基因小鼠，攜帶激活的H-Ras原癌基因小鼠等。這些轉(zhuǎn)基因動物對化學致癌劑的敏感性提高了許多倍。如帶有激活Pim-1腫瘤基因的轉(zhuǎn)基因動物，對乙基硝基脲的致癌作用，較相應的非轉(zhuǎn)基因動物，其敏感性提高了25倍。一、短期試驗（四）轉(zhuǎn)基因動物致癌檢測模型第54頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三2.基因刪除動物致癌檢測模型用同源重組的方法，將一段DNA整合到抗腫瘤基因，使該抗腫瘤基因不能表達具有正常功能的蛋白質(zhì)，用這種方法培養(yǎng)的動物稱基因刪除動物。一、短期試驗（四）轉(zhuǎn)基因動物致癌檢測模型第55頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三二、哺乳動物致癌試驗需要進行哺乳動物致癌試驗的一般原則是：1.人體可能長期暴露于該化學物；2.該化學物或其代謝物的化學結(jié)構(gòu)與已知致癌物相似；3.反復染毒毒性試驗提示該化學物可能產(chǎn)生癌前病變等。第56頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三（一）試驗動物物種：一般主張用兩種物種進行試驗。常用的是大鼠和小鼠，也可用倉鼠。嚙齒類動物對多數(shù)致癌物易感性較高，壽命相對較短，費用也較低，生理和病理學資料較完備，在致癌試驗中使用最廣泛。品系：在選擇品系時應選擇較敏感、自發(fā)腫瘤率低、生命力強及壽命較長的品系。美國國立癌癥研究所（NCI）推薦

Fischer344大鼠和B6C3F1小鼠。第57頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三（一）試驗動物性別：為接近人類情況，應使用同等數(shù)量的雌雄兩種性別的動物。年齡：一般選用剛離乳的動物，以保證有足夠長的染毒和發(fā)生癌癥時間，而且幼年動物解毒酶及免疫系統(tǒng)尚未完善，對致癌作用比較敏感。數(shù)量：動物數(shù)應滿足統(tǒng)計學分析的要求。各組動物需求數(shù)與實驗動物腫瘤自發(fā)率及受試物誘發(fā)動物腫瘤發(fā)生率有關。一般每組至少有雌雄各50只動物，希望在出現(xiàn)第一個腫瘤時，每組存活動物數(shù)不少于25只。第58頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三（二）劑量設置受試物劑量組：一般設3個劑量組

陰性對照組：溶劑或賦形劑對照組陽性對照組：必要時可設陽性對照組，陽性致癌物最好與受試物的化學結(jié)構(gòu)相近。高劑量組中劑量組低劑量組第59頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三（二）劑量設置為在有限數(shù)量的動物能檢出致癌物，高劑量組應盡可能大，原則上，可引起輕微的毒性反應，但不影響其正常生長、發(fā)育和壽命。中及低劑量組則按等比級數(shù)下推，如分別為上一個劑量水平的1/2或1/3。低劑量組應不影響動物的正常生長、發(fā)育和壽命，即不產(chǎn)生任何毒性效應。但低劑量組應高于人的接觸劑量，一般不低于高劑量的10%。中劑量組介于高、低劑量組之間，如有可能按受試物的毒物動力學性質(zhì)來確定。第60頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三（三）染毒方式應盡可能模擬人體可能的暴露途徑，主要途徑有經(jīng)口、經(jīng)皮和吸入三種，應根據(jù)受試物的理化性質(zhì)和接觸方式選擇確定。染毒時間通常是從實驗開始直至實驗結(jié)束反復多次染毒。第61頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三（四）試驗期限原則上試驗期限要求長期或終生，應包括動物正常壽命的大部分時間：1.一般小鼠和倉鼠至少18個月，大鼠至少24個月。對于某些生命期較長或自發(fā)腫瘤率低的動物品系，小鼠和倉鼠可持續(xù)24個月，大鼠可持續(xù)30個月。2.試驗期中，當最低劑量組或?qū)φ战M存活的動物數(shù)僅為開始時的25%時，可及時中止試驗；但因明顯的受試物毒作用造成高劑量組動物過早死亡，則應繼續(xù)進行試驗。第62頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三（五）觀察指標1.一般觀察每天觀察實驗動物的一般狀況（外表、活動、攝食情況等）和毒性反應，對死亡動物要及時剖檢。試驗最初三個月每周稱體重一次，以后每四周稱體重一次。摻入飼料或飲水中染毒時，應記錄食物消耗量或飲水量。第63頁，共71頁，2023年，2月20日，星期三（五）觀察指標2.腫瘤發(fā)生