分子生物學(xué)第五章翻譯

第五章蛋白質(zhì)的合成，轉(zhuǎn)運(yùn)和加工第一節(jié)氨基酰-tRNA的形成及核糖體的作用位點(diǎn)一.氨基酰tRNA分子的形成氨基酸的活化活化：

aa+ATP+E*氨基酰-AMP-E+PPi

轉(zhuǎn)移：氨基酰-AMP-E+tRNAaa-tRNA+AMP+E現(xiàn)在是1頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四現(xiàn)在是2頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四現(xiàn)在是3頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四現(xiàn)在是4頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四二．氨酰tRNA合成酶的鑒別功能動(dòng)力學(xué)校對(duì)（Kineticprofreading）化學(xué)校對(duì)（Chemicalproofreading）現(xiàn)在是5頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四現(xiàn)在是6頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四現(xiàn)在是7頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四現(xiàn)在是8頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四現(xiàn)在是9頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四三核糖體的作用位點(diǎn)⑴A位點(diǎn)（或稱acceptorsite）可以進(jìn)入氨基酰-tRNA(aminoacyl-tRNA)。⑵P位點(diǎn)(或稱供位，donorsite)是被肽基酰-tRNA(peptidyl-tRNA)所占據(jù)。(3)E位點(diǎn)(Exitsite)脫酰tRNA(deacylated-tRNA)短暫地占據(jù)。現(xiàn)在是10頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四現(xiàn)在是11頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四現(xiàn)在是12頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四第二節(jié)肽鏈的合成一.在細(xì)菌中翻譯的起始⑴IF-3是30S亞基與mRNA起始位點(diǎn)的特異結(jié)合所必須的。⑵IF-2是特異地和起始tRNA結(jié)合并把它帶到起始復(fù)合體中。⑶IF-1僅作為完整的起始復(fù)合物的一部分,與30S亞基結(jié)合。它結(jié)合在A位能阻止氨酰tRNA的進(jìn)入。它的定位還阻止30S和50S的結(jié)合?，F(xiàn)在是13頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四現(xiàn)在是14頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四現(xiàn)在是15頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四2.起始復(fù)合物的形成(1)IF-3和核糖體30SrRNA結(jié)合使16SRNA和mRNA的S-D順序結(jié)合a.使30S保持游離b.形成起始復(fù)合體I(2)IF-2+GTP+氨酰甲硫氨酸中間復(fù)合體。

(3)50S+30S復(fù)合體III，釋放IF-1,IF-2?，F(xiàn)在是16頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四現(xiàn)在是17頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四現(xiàn)在是18頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四現(xiàn)在是19頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四現(xiàn)在是20頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四現(xiàn)在是21頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四原核生物翻譯起始因子現(xiàn)在是22頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四二.起始tRNA的特點(diǎn)翻譯時(shí)的第一個(gè)密碼子是怎樣被識(shí)別的呢？(一)小亞基上16SrRNA3′端的六核苷酸(3′-UCCUCC-5′）和Shine-Dalgarno順序（5′-AAACAGGAGG-3′）互補(bǔ)，相互結(jié)合，使下游的AUG起始密碼子定位在P位上。(二)核糖體結(jié)合位點(diǎn)也含有一個(gè)信號(hào)起始密碼子（initiationcodon）－AUG。現(xiàn)在是23頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四起始和延伸Met-tRNAs的區(qū)別⑴兩種tRNA本身有差別；⑵氨基酸的狀態(tài)不同?，F(xiàn)在是24頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四現(xiàn)在是25頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四fMet-tRNA與Met-tRNA有什么不同？⑴Met-tRNAmMet在受體臂末端的一對(duì)堿基是GC，在fMet-tRNAfMet是CA，C可以和起始因子IF-2結(jié)合。⑵tRNAfMet在反密碼子環(huán)的莖上有3對(duì)G-C,若發(fā)生突變將會(huì)阻止其進(jìn)入P位點(diǎn)。⑶tRNAfMet的反密碼子環(huán)上的是A，tRNAmMet是烷基化腺嘌呤。tRNAfMetTψC環(huán)端是A，tRNAmMet的相應(yīng)位置是G，作用不清?，F(xiàn)在是26頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四現(xiàn)在是27頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四現(xiàn)在是28頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四三真核生物蛋白質(zhì)合成的起始現(xiàn)在是29頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四現(xiàn)在是30頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四現(xiàn)在是31頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四現(xiàn)在是32頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四

四.起始時(shí)mRNA和rRNA的堿基配對(duì)(一)原核30S小亞基和S-D順序的結(jié)合在細(xì)菌中被核糖體保護(hù)的DNA區(qū)域長(zhǎng)35-40堿基長(zhǎng)。有2個(gè)共同的特點(diǎn):⑴含有起始密碼子AUG；⑵有一個(gè)順序和16SrRNA近3端的順序互補(bǔ)?，F(xiàn)在是33頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四現(xiàn)在是34頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四現(xiàn)在是35頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四現(xiàn)在是36頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四現(xiàn)在是37頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四(二)真核合成起始時(shí)小亞基和

起始位點(diǎn)的結(jié)合真核細(xì)胞質(zhì)中的核糖體并不在編碼區(qū)開(kāi)始處直接和起始位點(diǎn)相結(jié)合。首先識(shí)別5端甲基化的帽子結(jié)構(gòu)。內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)(internalribosomeentrysite,IERS)A最適合的鄰接順序是GCCCCAUGGG稱為Kozak順序現(xiàn)在是38頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四現(xiàn)在是39頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四第二節(jié)肽鏈合成的延伸和終止一肽鏈合成的延伸肽鏈的延伸可分為三個(gè)階段：⑴進(jìn)位反應(yīng)：主要是密碼子-反密碼子的識(shí)別；⑵轉(zhuǎn)位反應(yīng)：涉及肽鏈的形成；⑶移位反應(yīng)：tRNA和mRNA相對(duì)核糖體的移動(dòng)?，F(xiàn)在是40頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四(一)進(jìn)位反應(yīng)1.延伸因子（elongationfactor）(1)當(dāng)GTP存在時(shí)，EF-Tu呈活性狀態(tài)。(2)當(dāng)GTP水解成GDP時(shí)，EF-Tu便失活。(3)GDP被GTP取代后，它又恢復(fù)活性?，F(xiàn)在是41頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四

翻譯的延伸現(xiàn)在是42頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四現(xiàn)在是43頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四現(xiàn)在是44頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四現(xiàn)在是45頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四現(xiàn)在是46頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四表15-4原核生物蛋白質(zhì)合成的延伸因子

因子基因功能抑制劑EF-TutufA,tufB與氨基酰tRNA黃色霉素及GTP結(jié)合EF-Tstsr結(jié)合EF-Tu，取代GDPEF-G結(jié)合核糖體梭鏈孢酸

和GTP

現(xiàn)在是47頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四現(xiàn)在是48頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四現(xiàn)在是49頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四現(xiàn)在是50頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四

真核生物翻譯的延伸現(xiàn)在是51頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四現(xiàn)在是52頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四現(xiàn)在是53頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四現(xiàn)在是54頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四現(xiàn)在是55頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四二．肽鏈合成的終止終止密碼UAA,UGA,UAG；在E.coli中釋放因子（releasefactors（RF））;RF1識(shí)別UAA；RF2識(shí)別UGA和UAG。這兩種因子作用于A位點(diǎn),且需要P位點(diǎn)的肽酰-tRNA存在。終止反應(yīng)是釋放因子識(shí)別終止位點(diǎn)并與之結(jié)合，激活肽基轉(zhuǎn)移酶，水解了P位點(diǎn)上多肽與tRNA之間的鍵，然后釋放了多肽和tRNA。在真核系統(tǒng)中只有一種釋放因子——eEF可識(shí)別3種終止密碼子?，F(xiàn)在是56頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四現(xiàn)在是57頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯于星期四現(xiàn)在是58頁(yè)\一共有60頁(yè)\編輯