DB3301T 1082-2018堇葉紫金牛組賠繁育技術(shù)規(guī)程

ICS65.020.20B05浙江DB3301省杭州市地方標(biāo)準(zhǔn)DB/T1082—2018杭州市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布IDB3301/T1082—2018前言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1－2009《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫(xiě)》給出的規(guī)定起草。本標(biāo)準(zhǔn)由杭州市林業(yè)水利局提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草單位：杭州市園林綠化股份有限公司、杭州市林木種苗管理中心。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：楊浩、孫英坤、胡亞芬、高凱、陳林敬、魏建芬、樊靖、姚濤、邱影、崔曉燕、王霽、李紅霞。1DB3301/T1082—2018堇葉紫金牛組培繁育技術(shù)規(guī)程1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了堇葉紫金牛(Ardisiaviolacea)組培快繁過(guò)程中的外植體制備、組織培養(yǎng)、煉苗、上盆、容器苗管理、苗木出圃、檔案管理等內(nèi)容。本標(biāo)準(zhǔn)適用于杭州市范圍內(nèi)堇葉紫金牛的組培繁育。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。NY/T2306－2013花卉種苗組培快繁技術(shù)規(guī)程DB33/T179林業(yè)育苗技術(shù)規(guī)程3母株選擇選擇長(zhǎng)勢(shì)旺盛、葉背暗紫色、葉脈清晰、無(wú)病蟲(chóng)害的植株作為組培繁殖母株，置于溫室內(nèi)培養(yǎng)。4外植體制備4.1外植體采集選擇健壯選擇健壯、無(wú)病蟲(chóng)害、帶休眠腋芽的新發(fā)莖段為外植體材料。外植體采集后宜當(dāng)日進(jìn)行消毒處理，或保存于4℃冰箱，保存時(shí)間不宜超過(guò)2d。4.2外植體消毒4.2.1表面消毒沿葉柄基部切除外植體材料的葉片，用小毛刷蘸取少量洗潔精輕輕刷洗莖段表面，反復(fù)刷洗葉腋附近，用自來(lái)水沖洗干凈；將外植體莖段切段，用0.1%的苯扎溴銨于磁力攪拌器上進(jìn)行消毒處理,轉(zhuǎn)速不宜超過(guò)200轉(zhuǎn)/min；處理時(shí)間與莖段幼嫩程度選擇5min~12min；倒掉消毒液，在流水下沖洗30min~60min。4.2.2深度消毒將表面消毒后的外植體材料置于無(wú)菌操作臺(tái)上，用無(wú)菌水沖洗外植體莖段1次；使用75%乙醇溶液搖晃消毒處理，處理時(shí)間根據(jù)莖段幼嫩程度選擇15s~90s；倒掉乙醇溶液，用1%次氯酸鈉溶液搖晃消毒處理，處理時(shí)間與莖段幼嫩程度成反比，宜選擇3s~10min；倒掉消毒液，用無(wú)菌水反復(fù)沖洗4~5次，每次5min。2DB3301/T1082—20185組培擴(kuò)繁5.1培養(yǎng)基制備5.1.1培養(yǎng)基制備方法參照NY/T2306－2013花卉種苗組培快繁技術(shù)規(guī)程。5.1.2培養(yǎng)基配方參照附錄A。5.2初代培養(yǎng)5.2.1將外植體莖段切成長(zhǎng)度約2cm的小段，并帶有1個(gè)休眠腋芽。5.2.2用無(wú)菌刀片切除小段下端(芽向上)褐化部分，迅速接種到初代培養(yǎng)基上。5.2.3培養(yǎng)條件：溫度25±2℃、光照時(shí)間10h/d、光照強(qiáng)度1500Lx~2000Lx，相對(duì)濕度60%~65%。5.3增殖培養(yǎng)5.3.1將新發(fā)的側(cè)芽嫩莖切下，接種到增殖培養(yǎng)基上。5.3.2培養(yǎng)條件：溫度25±2℃，光照時(shí)間12h/d，光照強(qiáng)度2000Lx~2500Lx，相對(duì)濕度為60%~65%。5.3.3培養(yǎng)約40d后分化產(chǎn)生大量側(cè)芽和不定芽叢。5.4壯苗培養(yǎng)5.4.1將不定芽叢輕輕撥散成單個(gè)不定芽，將伸長(zhǎng)的側(cè)芽嫩莖切下，接種到壯苗培養(yǎng)基。5.4.2培養(yǎng)條件為溫度25±2℃、光照時(shí)間12h/d、光照強(qiáng)度2000Lx~2500Lx、相對(duì)濕度60%~65%。5.4.3壯苗培養(yǎng)約20d后，再生小苗達(dá)到葉片數(shù)量6枚以上、高度5cm以上、莖粗2mm以上可進(jìn)行生根培養(yǎng)。5.5生根培養(yǎng)5.5.1切除再生小苗基部愈傷組織，接種到生根培養(yǎng)基上。5.5.2培養(yǎng)條件：溫度28±2℃、光照時(shí)間為8h/d、光照強(qiáng)度1000Lx~1500Lx、相對(duì)濕度70%~80%。5.5.3生根培養(yǎng)40d~50d后，不定根或主根數(shù)量達(dá)到4條以上、根長(zhǎng)1cm~3cm、葉片數(shù)量8枚以上、6煉苗6.1煉苗條件宜選擇溫室。煉苗控制條件：遮光率90%以上、溫度20~25℃、相對(duì)濕度約60%。6.2煉苗方法將組培瓶苗置于溫室苗床上馴化25d~30d；移栽前3d~4d松動(dòng)組培瓶蓋，部分打開(kāi)；移栽前1d~2d，完全打開(kāi)組培瓶蓋，并加入少量無(wú)菌水，無(wú)菌水以達(dá)到最下端葉片為宜。7移栽3DB3301/T1082—20187.1基質(zhì)準(zhǔn)備7.1.1配方選用粒徑2cm~3cm的松鱗作為煉苗基質(zhì)。基質(zhì)應(yīng)理化性能穩(wěn)定、不帶病菌、蟲(chóng)卵、雜草等。7.1.2分裝將煉苗基質(zhì)分裝到42cm×42cm×5cm方盤(pán)，擺放至苗床上，基質(zhì)表面與方盤(pán)上邊緣齊平為宜。7.1.3消毒移栽前7d使用0.2%高錳酸鉀對(duì)基質(zhì)進(jìn)行消毒處理，消毒液宜浸透基質(zhì)底部，并用塑料薄膜覆蓋嚴(yán)實(shí)。7.2移栽7.2.1輕輕取出生根苗，用清水洗凈根部培養(yǎng)基后，以3株~4株為一叢植入煉苗基質(zhì)中，深度以基質(zhì)剛覆蓋根系為宜，密度以4cm×4cm為宜。7.2.2生根苗植入方盤(pán)后澆透水，均勻噴灑0.3%多菌靈溶液，用封閉小拱棚覆蓋約30d。小拱棚內(nèi)溫度應(yīng)控制在28℃~33℃、相對(duì)濕度約80%。覆蓋期間可適當(dāng)打開(kāi)小拱棚兩端通風(fēng)以調(diào)節(jié)溫度、相對(duì)濕度；7.2.3待小苗長(zhǎng)出新的須狀根并恢復(fù)正常生長(zhǎng)后，打開(kāi)小拱棚兩端通風(fēng)7d~14d，然后完全打開(kāi)小拱棚培養(yǎng)6個(gè)月以上。通風(fēng)期間應(yīng)及時(shí)觀測(cè)基質(zhì)水分變化，適時(shí)補(bǔ)水以保持基質(zhì)濕潤(rùn)。8上盆8.1基質(zhì)準(zhǔn)備基質(zhì)配方為50%珍珠巖、25%泥炭、25%松磷(體積比)，充分拌勻備用?；|(zhì)應(yīng)理化性能穩(wěn)定、不帶病菌、蟲(chóng)卵、雜草等。8.2容器選擇可選用12cmX10cm營(yíng)養(yǎng)缽。8.3上盆容器中裝填1/2容器體積的基質(zhì)，將方盤(pán)苗單株放入容器中間，裝入基質(zhì)蓋住根系并墩實(shí)，基質(zhì)低于容器口1cm左右。8.4上盆苗擺放于溫室或陰盆區(qū)條狀擺放，條寬1m~1.2m，留操作步道0.5m。9容器苗管理9.1遮陰遮光率應(yīng)達(dá)到70%以上。9.2水分管理上盆后及時(shí)澆透水，隔天檢查基質(zhì)水分情況，水分不足的及時(shí)補(bǔ)澆；梅雨季應(yīng)注意排水。4DB3301/T1082—20189.3病蟲(chóng)害防治上盆1個(gè)月后，噴施0.1%~0.3%除蝸靈或預(yù)防蝸牛危害，并噴施0.1%~0.15%多菌靈溶液預(yù)防病害。10苗木出圃10.1出圃質(zhì)量要求無(wú)病蟲(chóng)害；1年~2年生容器苗XXX，2年~3年生容器苗XXX。葉背暗紫色、葉脈清晰；根系發(fā)達(dá)、無(wú)機(jī)械損傷。10.2容器苗出圃按DB33/T179執(zhí)行。10.3苗木檢疫按照《植物檢疫條例實(shí)施細(xì)則(林業(yè)部分)》進(jìn)行檢疫。10.4包裝與運(yùn)輸按DB33/T179執(zhí)行。11檔案管理按DB33/T179執(zhí)行。5DB3301/T1082—2018AA附錄A(資料性附錄)堇葉紫金牛常用培養(yǎng)基配方A.1堇葉紫金牛常用培養(yǎng)基配方表A.1堇葉紫金牛常用培養(yǎng)基配方基本培養(yǎng)基氯吡苯脲(CPPU)mg/L萘乙酸(NAA)mg/L吲哚丁酸(IBA)mg/L蔗糖g/L卡拉膠g/L活性炭(AC)g/LpH初代培養(yǎng)基MS0.15~0.300.10~0.20—307—5.8~6.2增殖培養(yǎng)基MS0.50~0.800.10~0.20—307—5.8~6.2壯苗培養(yǎng)基MS0.10~0.15——307—5.8~6.2生根培養(yǎng)基1/2MS—0.50~0.800.50~0.802070.56.0注：1/2MS培養(yǎng)基是MS培養(yǎng)基大量元素減半。A.2堇葉紫金牛基本培養(yǎng)基成分表A.2堇葉紫金?；九囵B(yǎng)基成分名稱(chēng)成分濃度(mg/l)大量元素NH4NO31650KNO31900CaCl2·2H2O440MgSO4·7H2O370KH2PO4微量元素KI0.83H3BO36.20MnSO4·4HO22.30Z