藥物分析第七章芳香胺類藥物分析

Contents理化特征1鑒別試驗(yàn)2特殊雜質(zhì)檢查3含量測定4第一頁，共68頁。芳香胺(Aromaticamines)

芳胺類

芳烴胺類（1）（2）（1）（2）第二頁，共68頁。芳胺類藥物分為兩類芳伯氨基未被取代芳伯氨基被?；?、對氨基苯甲酸酯類藥物的基本結(jié)構(gòu)與主要化學(xué)性質(zhì)（一）基本結(jié)構(gòu)與典型藥物第三頁，共68頁。苯佐卡因鹽酸普魯卡因第四頁，共68頁。鹽酸丁卡因鹽酸普魯卡因胺第五頁，共68頁。1.芳伯氨基特性：重氮化－偶合反應(yīng)；芳醛縮合成Schiff堿；易氧化變色等。鹽酸丁卡因無此特性。（二）主要理化性質(zhì)水解特性：分子結(jié)構(gòu)中的酯鍵或酰胺鍵易水解，除鹽酸丁卡因水產(chǎn)物為對丁氨基苯甲酸外，上述均為對氨基苯甲酸。弱堿性：除苯佐卡因外，其余均含有叔胺氮的側(cè)鏈，故具有弱堿性，與生物堿沉淀劑反應(yīng)，非水滴定。4.其它特性：因結(jié)構(gòu)中有芳伯氨基或同時(shí)具有脂烴胺側(cè)鏈，其

游離堿多為油狀液體或低熔點(diǎn)固體，難溶于水，可溶于有機(jī)溶劑。其鹽酸鹽則易溶于水。第六頁，共68頁。二、酰胺類藥物的基本結(jié)構(gòu)與主要化學(xué)性質(zhì)（一）基本結(jié)構(gòu)與典型藥物第七頁，共68頁。對乙酰氨基酚（撲熱息痛）醋氨苯砜第八頁，共68頁。鹽酸布比卡因鹽酸利多卡因第九頁，共68頁。

1.水解后顯芳伯氨基特性：分子結(jié)構(gòu)中含有芳酰氨基，酸水解后顯芳伯氨基的特性反應(yīng)。注意空間位阻的影響。

2.水解產(chǎn)物易酯化：對乙酰氨基酚和醋氨苯砜，酸水解生成醋酸，在硫酸中與乙醇反應(yīng)，發(fā)出醋酸乙酯香味。

（二）主要化學(xué)性質(zhì)第十頁，共68頁。3.酚羥基特性：對乙?；佑杏坞x酚羥基；醋氨苯砜酸水解有酚羥基，可與FeCl3發(fā)生顯色反應(yīng)，可相互區(qū)別。4.弱堿性：利多卡因和布比卡因烴胺側(cè)鏈有叔胺氮，顯堿性，可與生物堿沉淀劑發(fā)生沉淀反應(yīng)，可相互區(qū)別。5.與金屬離子發(fā)生沉淀反應(yīng)：利多卡因和布比卡因酰氨

基上氮可與Cu2+,Co2+生成有色配位化合物沉淀。第十一頁，共68頁。三、鑒別試驗(yàn)（一）重氮化-偶合反應(yīng)

分子結(jié)構(gòu)中含有芳伯氨基或潛在芳伯氨基的藥物，均可發(fā)生此反應(yīng)。Ar-NH2HClNaNO2重氮鹽OH--萘酚橙黃~猩紅色第十二頁，共68頁。

直接反應(yīng)：苯佐卡因、鹽酸普魯卡因、鹽酸普魯卡因胺間接反應(yīng)：對乙酰氨基酚、醋氨苯砜利多卡因和布比卡因由于空間位阻很難發(fā)生此反應(yīng)。第十三頁，共68頁。第十四頁，共68頁。

丁卡因雖無芳伯氨基，但可與NaNO2反應(yīng)生成N－亞硝基化合物的乳白色沉淀。

第十五頁，共68頁。第十六頁，共68頁。（二）與三氯化鐵反應(yīng)對乙酰氨基酚+FeCl3藍(lán)紫色化合物第十七頁，共68頁。

1.與銅和鈷離子反應(yīng)：

利多卡因與硫酸銅生成藍(lán)紫色配位化合物；與氯化鈷生成亮綠色沉淀。（三）與金屬離子反應(yīng)第十八頁，共68頁。第十九頁，共68頁。2.羥肟酸鐵鹽反應(yīng)

基于普魯卡因胺分子中的芳酰胺結(jié)構(gòu)。第二十頁，共68頁。3.與汞離子反應(yīng)鹽酸利多卡因+H2NO3++Hg(NO3)2黃色對氨基苯甲酸酯＋H2NO3++Hg(NO3)2紅色或橙黃色芳酰胺類對氨基苯甲酸酯類第二十一頁，共68頁。1.鹽酸普魯卡因的鑒別

(四)水解產(chǎn)物反應(yīng)鹽酸普魯卡因+1%NaOH普魯卡因（白色↓）油狀物對氨基苯甲酸鈉+二乙氨基乙醇（使?jié)駶櫟募t色石蕊試紙變蘭色）對氨基苯甲酸鈉+HCl對氨基苯甲酸（白色）第二十二頁，共68頁。第二十三頁，共68頁。2.苯佐卡因的鑒別

苯佐卡因+NaOH乙醇乙醇+I2

+NaOHCHI3（碘仿臭氣，黃色沉淀）第二十四頁，共68頁。(五)制備衍生物測熔點(diǎn)1.三硝基苯酚衍生物的制備：利多卡因和布比卡因第二十五頁，共68頁。

2.硫氰酸鹽衍生物的制備：鹽酸丁卡因

第二十六頁，共68頁。（六）紫外特征吸收光譜藥物溶劑濃度(μg/mL)λmax(nm)備注對乙酰氨基酚HCl(10.3g/L)-甲醇(1:99)0.4%NaOH10249860～980BP2003,8257715Chp2005用于含量測定苯佐卡因氯仿278USP24與對照吸收相同，兩者之差不超過3.0%鹽酸丁卡因pH6磷酸鹽緩沖液10310同上，兩者之差不超過2.0%鹽酸普魯卡因胺0.1mol/LNaOH10273580～610BP2003水5280Chp2005，片劑和注射劑鑒別醋氨苯砜無水乙醇5256，284Chp2005第二十七頁，共68頁。（七）紅外吸收光譜鹽酸普魯卡因鹽酸普魯卡因胺

波數(shù)cm-1

波數(shù)cm-1

酯羰基υC=O1692－酯基υC-O1271,1170,1115－二乙胺鹽υN-H25852645（略向高波數(shù)）－1550（δN-H酰胺Ⅱ帶）－1280（υN-H酰胺Ⅲ帶）第二十八頁，共68頁。（一）對乙酰氨基酚中的特殊雜質(zhì)檢查

1.乙醇溶液的澄清度與顏色：因其生產(chǎn)工藝用鐵粉作還原劑，可能帶入，致使乙醇溶液產(chǎn)生混濁，中間體對氨基酚易氧化產(chǎn)生有色化物，在乙醇溶液中顯橙紅色或棕色。

四、特殊雜質(zhì)檢查檢查方法：配制0.1g/ml本品乙醇溶液，溶液應(yīng)澄清，無色；如顯混濁，與1號濁度標(biāo)準(zhǔn)液比較，不得更濃；如顯色，與棕紅色2號或橙紅色2號標(biāo)準(zhǔn)液比較，不得更深。第二十九頁，共68頁。2.有關(guān)物質(zhì)檢查：Ch.P是以對氯苯乙酰胺為對照品，采用TLC法中的雜質(zhì)對照品法。3.對氨基酚檢查：利用對氨基酚在堿性條件下可與

亞硝基鐵氰化鈉生成藍(lán)色配位化合物，采用比色法。第三十頁，共68頁。(二)鹽酸普魯卡因注射液中對氨基苯甲酸的檢查為什么要檢查？怎樣檢查？TLC法，對氨基苯甲酸對照品對照，對二甲氨基苯甲醛溶液顯。第三十一頁，共68頁。容量分析方法色譜法分光光度法亞硝酸鈉滴定法非水溶液滴定法五、含量測定spectrometrysodiumnitritemethodnon-aqueoustitrimetryvolumetricanalysischrometography第三十二頁，共68頁。（一）亞硝酸鈉滴定法

Ar-NH2;Ar-NHCOR;Ar-NO2均可采用此法

Ch.P中的苯佐卡因；鹽酸普魯卡因和鹽酸普魯卡因胺及其制劑可直接采用本法；醋氨苯砜及注射液水解后用本法。第三十三頁，共68頁。第三十四頁，共68頁。原理：條件：1、加入適量溴化鉀加快反應(yīng)2、加入過量鹽酸1:2.5~63、室溫10℃～30℃4、滴定管尖端插入液面下滴定終點(diǎn)指示方法：1、永停法2、外指示劑法（碘化鉀－淀粉）第三十五頁，共68頁。測定主要條件：(1)加KBr增加反應(yīng)速度重氮化的反應(yīng)歷程為：NaNO2+HClHNO2+NaClHNO2+HClNOCl+H2OKHCl第三十六頁，共68頁。第三十七頁，共68頁。KBr+HClHBr+KClHNO2+HClNOBr+H2OKKBr∵

KHBr比KHCl大300倍∴生成NOBr量大得多∴加快反應(yīng)速度第三十八頁，共68頁。

(2)加過量HCl加速反應(yīng)：

①重氮化速度加快；

②重氮鹽在酸性介質(zhì)中穩(wěn)定；

③防止生成氨基偶氮化合物。

Ar-N2+Cl-+H2N-Ar

Ar-N=N-NH-Ar+HCl

一般摩爾比為Ar-NH2:HCl=1:2.5~6。第三十九頁，共68頁。(3)室溫條件下滴定:溫度高反應(yīng)速度快；每升高10℃加快2.5倍太高,可使Ar-N2+Cl-+H2OAr-OH+N2+HCl(4)滴定管尖端插入液面下滴定第四十頁，共68頁。

3.指示終點(diǎn)的方法

(1)用停滴定法

溶液檢流計(jì)

終點(diǎn)前：

無過量無電流

HNO2

終點(diǎn)時(shí)：有過量有電流（使指針偏離零

HNO2永停在某一位置）

(2)外指示劑法

用KI-淀粉指示劑指示終點(diǎn)的原理：

2NaO2+2KI+4HCl

2NO+I2+2KCl+2NaCl+2H2OGVVR1R2+V第四十一頁，共68頁。鹽酸丁卡因鹽酸利多卡因側(cè)鏈烴胺的叔胺氮側(cè)鏈哌啶環(huán)的叔胺氮弱堿性高氯酸非水滴定注：滴定前滴加醋酸汞溶液，以除去氫鹵酸的干擾鹽酸丁卡因－加醋酐以突出終點(diǎn)；例：鹽酸利多卡因的非水滴定反應(yīng)過程：指示劑：結(jié)晶紫指示劑：萘酚苯甲醇鹽酸布比卡因(二）非水溶液滴定法第四十二頁，共68頁。

1.對乙?；釉系暮繙y定在0.4%NaOH介質(zhì)中；257nm

D%＝［E1%1cm]樣／［E1%1cm]標(biāo)×100％；E1%1cm＝715

2.對乙酰基酚片溶出度測定（測定條件同上）1片＋稀HCl24ml+H2O1000ml精密量取5ml+0.4%NaOH10ml+H2O100mlλ257nm測定A。W×1／1000×5／100×100＝C（g/100ml)

W(g)=200×C;C=A/715∴溶出度＝W／標(biāo)示量×100％＞80％為合格（三）分光光度法第四十三頁，共68頁。中性條件下的重氮化反應(yīng)（四）比色法鹽酸普魯卡因+1,2-蒽醌-4-磺酸鈉pH4-9棕紅色化合物，max482nm處測定A第四十四頁，共68頁。（五）鹽酸普魯卡因胺的快速熒光測定λex400nm（激發(fā)波長）、λem485nm（發(fā)射波長）處測定熒光強(qiáng)度，標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。鹽酸普魯卡因胺+熒胺pH7.5熒光物第四十五頁，共68頁。

以苯甲酸為內(nèi)標(biāo)，可以同時(shí)測定鹽酸普魯卡因注射液中的普魯卡因及其降解產(chǎn)物對氨基苯甲酸（PABA），不需分離提取，準(zhǔn)確簡便。

色譜條件（色譜柱、流動(dòng)相、檢測器）

測定方法（供試品溶液、對照品溶液的制備，進(jìn)樣量，計(jì)算方法）（六）HPLC法第四十六頁，共68頁。第二節(jié)苯乙胺類藥物的分析一、苯乙胺類藥物的基本結(jié)構(gòu)與主要化學(xué)性質(zhì)（一）基本結(jié)構(gòu)與典型藥物*第四十七頁，共68頁。擬腎上腺素類藥物，分子結(jié)構(gòu)中具有苯乙胺基本結(jié)構(gòu)腎上腺素(adrenaline)鹽酸克倫特羅(clenbuterolhydrochloride)硫酸沙丁胺醇(salbutamolsulfate)鹽酸麻黃堿(ephedrinehydrochloride)

R1

R2

R3HX常見的苯乙胺類藥物第四十八頁，共68頁。

（二）主要化學(xué)性質(zhì)

1.弱堿性本類藥物結(jié)構(gòu)中有烴氨基側(cè)鏈，為仲胺氮顯弱堿性。

2.酚羥基特性本類藥物結(jié)構(gòu)中有酚羥基，可與FeCl3;發(fā)生氧化。

3.光學(xué)活性多數(shù)藥物結(jié)構(gòu)中有手性碳原子，具有旋光性。

4.苯環(huán)取代基特性如鹽酸克倫特羅芳伯氨基；

紫外、紅外吸收特性進(jìn)行定性、定量分析。第四十九頁，共68頁。與三氯化鐵反應(yīng)、與甲醛－硫酸反應(yīng)藥物三氯化鐵甲醛－硫酸腎上腺素Adrenaline0.1mol/L鹽酸液中顯翠綠色，加氨試液顯紫色，紫紅色紅色重酒石酸去甲腎上腺素Noradrenalinebitartrate翠綠色，加碳酸氫鈉試液顯藍(lán)色，紅色淡紅色鹽酸去氧腎上腺素Phenylephrinehydrochloride紫色玫瑰紅，橙紅，深棕紅鹽酸異丙腎上腺素Isoprenalinehydrochloride深綠色，滴加新制5%碳酸氫鈉液，顯藍(lán)紫色，紅色棕色，暗紫色鹽酸多巴胺Dopaminehydrochloride墨綠色，滴加1%氨溶液，顯紫紅色二、鑒別試驗(yàn)第五十頁，共68頁。氧化反應(yīng)（酚羥基，易被碘、過氧化氫、鐵氰化鉀氧化呈現(xiàn)不同顏色）腎上腺素碘或過氧化氫中性或酸性腎上腺素紅放置棕紅色多聚體鹽酸異丙腎上腺素偏酸性條件碘異丙腎上腺素紅硫代硫酸鈉重酒石酸去甲腎上腺素酒石酸氫鉀飽和液pH3.56碘試液放置5min硫代硫酸鈉溶液為無色或僅顯微紅色或淡紫色腎上腺素或鹽酸異丙腎上腺素明顯的紅棕色或紫色淡紅色溶液第五十一頁，共68頁。(四）紫外特征吸收與紅外吸收光譜例如：

鹽酸異丙腎上腺素0.05mg/mlλmax=280nmA=0.50這一類藥物均可采用紅外吸收光譜進(jìn)行鑒別第五十二頁，共68頁。(五）與亞硝基鐵氰化鈉(Rimini試驗(yàn)）是鑒別脂肪伯氨基的特殊反應(yīng)；可用于重酒石酸間羥胺鑒別。D＋亞硝基鐵氰化鈉＋丙酮＋Na2CO3紅紫色第五十三頁，共68頁。(六)雙縮脲反應(yīng)

是鑒別芳環(huán)氨基醇的特殊反應(yīng)；可用于鹽酸麻黃堿，鹽酸偽麻黃堿鑒別：D＋CuSO4+NaOH顯藍(lán)紫色＋乙醚，醚層(紫紅色)水層(藍(lán)色)第五十四頁，共68頁。

(一)酮體檢查

本類藥物在生產(chǎn)過程中多采用酮體氫化制得，若氫化不完全，易引入酮體雜質(zhì)。

采用UV法檢查：

利用酮體在310nm有吸收，本類藥物無吸收。例如：腎上腺素本項(xiàng)檢查配2.0mg/mlλ=310nmA＜0.05

鹽酸去氧腎上腺素配2.0mg/mlλ=310nmA＜0.02鹽酸異丙腎上腺素配2.0mg/mlλ=310nmA＜0.15

三、特殊雜質(zhì)檢查第五十五頁，共68頁。(二)有關(guān)物質(zhì)的檢查

采用TLC法中的高低濃度對比法進(jìn)行檢查。

(三)鹽酸苯乙雙胍中有關(guān)雙胍的檢查

采用PC法中的雜質(zhì)對照法進(jìn)行檢查。第五十六頁，共68頁。原料：非水溶液滴定法、溴量法制劑：比色法提取容量法紫外分光光度法高效液相色譜法四、含量測定第五十七頁，共68頁。1、非水溶液滴定法－弱堿性冰醋酸為溶劑醋酸汞消除氫鹵酸的干擾結(jié)晶紫為指示劑（鹽酸甲氧明的指示劑為萘酚苯甲醇，也可電位法指示終點(diǎn)）若堿性較弱則加醋酐使突躍明顯例：重酒石酸去甲腎上腺素－－直接滴定鹽酸克倫特羅－－加醋酸汞消除氫鹵酸干擾；由于堿性較弱，電位法指示終點(diǎn)硫酸沙丁胺醇－－加入醋酐以增大突躍，結(jié)晶紫為指示劑注：加入醋酐注意防止氨基被乙?；?，所以在冰醋酸溶解樣品后應(yīng)放冷后再加醋酐。第五十八頁，共68頁。(二)溴量法本類藥物重酒石酸間羥胺、鹽酸去氧腎上腺素及其注射液用此法?；驹恚旱谖迨彭?，共68頁。(三)比色法

利用藥物分子結(jié)構(gòu)中的Ar-OH與Fe3＋絡(luò)合顯色，進(jìn)行比色測定；也可利用藥物分子結(jié)構(gòu)中的Ar-NH2重氮化偶合顯色，進(jìn)行比色。第六十頁，共68頁。例如：鹽酸克倫特羅栓的含量測定

上述偶合劑可與HNO2顯色，干擾比色測定，可先加氨基磺酸銨分解過量的HNO2。HNO2＋2H2NSO3NH42N2+(NH4)2SO4+H2SO4+H2O第六十一頁，共68頁。

(四)提取酸堿滴定法硫酸苯丙胺的含量測定：［B］H2SO4+NaOH+NaCl乙醚提取［B］+H2SO4蒸去乙醚NaOH標(biāo)準(zhǔn)液滴定終點(diǎn)第六十二頁，共68頁。(五)熒光分光光度法腎上腺素測定：λex410nm、λem520nm處測定熒光強(qiáng)度，對照法定量。腎上腺素+I2

腎上腺紅一定條件下N-甲基-3,5,6-三羥基吲哚第六十三頁，共68頁。(六)HPLC法

例一、重酒石酸去甲腎上腺素注射液的測定采用