2015動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本操作

2015-動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本操作動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本操作一（固定、性別判定、標(biāo)識(shí)）【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹吭谧鰟?dòng)物試驗(yàn)時(shí)，為確保給藥、實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行，防止被動(dòng)物咬傷、準(zhǔn)確辨別動(dòng)物性別、準(zhǔn)確標(biāo)識(shí)動(dòng)物，要學(xué)會(huì)用正確方法捉拿實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、掌握辨別動(dòng)物性別的方法以及掌握標(biāo)識(shí)動(dòng)物的方法?！緦?shí)驗(yàn)對(duì)象】SD大鼠，KM小鼠，雌雄各半，體重180-250g?！緦?shí)驗(yàn)器材和藥品】器材：鼠籠、大小鼠固定器、方木板、美式圖釘、細(xì)繩、防護(hù)手套藥品：苦味酸80%?90%酒精飽和溶液、20%烏拉坦【實(shí)驗(yàn)步驟】一、小鼠的捉拿1、徒手固定：用右手提起尾巴中部，放在鼠籠蓋或其他粗糙面上。向后上方輕拉，此時(shí)，小鼠前肢緊緊抓住粗糙表面。左手拇指和食指迅速捏住小鼠頸背部皮膚，再置小鼠于左手心，并以左手掌心和中指夾住小鼠背部皮膚，無(wú)名指壓住小鼠尾根部，將其固定于手中。右手可行注射或其它操作。2、固定器固定：尾靜脈注射或給藥時(shí)，將小鼠放進(jìn)固定器中或者大小和重量適當(dāng)?shù)娜萜鳎ㄈ鐭?，只露出尾巴，該類容器能夠壓住尾部，避免其活?dòng)。勿固定過(guò)緊造成窒息死亡。進(jìn)行腹腔手術(shù)或心臟采血時(shí)，先準(zhǔn)備一個(gè)15-20cm的方木板，邊緣釘入五顆釘子。將小鼠四肢分別用20-30cm的線繩捆綁，線的另一頭分別綁在方木板的釘子上，并且在頭部上顎切齒牽引一根線繩，也固定在釘子上，達(dá)到完全固定。二、大鼠的捉拿4-5周內(nèi)的大鼠，方法同小鼠。周齡較大的，則：1、首先戴好防護(hù)手套。2、用右手拇指和食指抓住大鼠尾巴中部將大鼠提起，放在大鼠飼養(yǎng)盒的面罩上。3、左手順勢(shì)按、卡在大鼠軀干背部，稍加壓力向頭頸部滑行。4、以左手拇指和食指捏住大鼠兩耳后部的頭頸皮膚，其余三指和手掌握住大鼠背部皮膚，完成抓取保定。三、性別判定小鼠、大鼠性別判定(1)幼鼠外生殖器與肛門間隔短的是聿，外生殖器與肛門間隔長(zhǎng)的是6。(2)成年動(dòng)物可直接肉眼辨認(rèn)，雄性有膨起的陰囊和陰莖，雌性動(dòng)物有陰道口。四、動(dòng)物的標(biāo)記小鼠的短期標(biāo)記法：苦味酸80%?90%酒精飽和溶液(黃色)，標(biāo)出屬于自己的編號(hào)【注意事項(xiàng)】1、實(shí)驗(yàn)人員要有精神準(zhǔn)備：掌握方法，膽大心細(xì)，做好防護(hù)。2、動(dòng)物興奮的時(shí)候不要抓取，待其安靜下來(lái)。3、根據(jù)受試動(dòng)物的給藥部位或采血方法的不同，事先選擇徒手固定還是固定器固定。4、固定時(shí)把握好力度，過(guò)分用力會(huì)使小鼠頸椎脫臼或窒息死亡，若用力過(guò)輕頭部能反轉(zhuǎn)過(guò)來(lái)咬傷實(shí)驗(yàn)者的手?！舅伎碱}】1.在固定實(shí)驗(yàn)動(dòng)物時(shí)如何才能快、準(zhǔn)、穩(wěn)？動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本操作二（給藥途徑、采血）【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹吭谧鰟?dòng)物試驗(yàn)時(shí)，為確保給藥、采血實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行，要掌握根據(jù)不同的情況進(jìn)行動(dòng)物給藥以及采血的正確方法?！緦?shí)驗(yàn)對(duì)象】SD大鼠（180-250g），KM小鼠（18-22g），雌雄各半?！緦?shí)驗(yàn)器材和藥品】器材：鼠籠、大小鼠固定器、方木板、長(zhǎng)釘、細(xì)繩、防護(hù)手套,灌胃針，注射器（1ml,5ml）、棉球，剪毛剪、手術(shù)剪、手術(shù)刀、采血管、彎頭鑷子藥品：生理鹽水、75%酒精棉球，一次性采血管，一次性EP管【實(shí)驗(yàn)步驟】一、給藥途徑1、大、小鼠的灌胃法用左手固定鼠，右手持灌胃器（安好灌胃針并已吸好藥物），將灌胃針從鼠的嘴角插入口腔，壓迫鼠的頭部，使口腔和食管成一直線，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)針頭刺激鼠的吞咽，將灌胃針沿咽后壁慢慢插入食管，如果動(dòng)物掙扎厲害，退出灌胃針，待動(dòng)物安靜下來(lái)，重新插入。灌胃針前端達(dá)到膈肌水平，即可慢慢推灌藥液，如很通暢，則說(shuō)明已進(jìn)入胃內(nèi)。如不通暢，且動(dòng)物掙扎厲害，須拔出重新操作。2、皮下注射左手拇指和食指輕輕提起動(dòng)物皮膚，右手持注射器，將注射針刺入皮下，若針頭容易擺動(dòng)則證明針頭已在皮下，推送藥液，緩慢拔出注射針，稍微用手指壓片刻針刺部位，以防藥物外漏。3、肌肉注射選用肌肉發(fā)達(dá)，無(wú)大血管經(jīng)過(guò)的部位，如臀部或股部。（肌肉注射比皮下和腹腔注射用得較少，但當(dāng)給動(dòng)物注射不溶于水而混懸于油或其他溶劑中的藥物時(shí)，常采用肌肉注射）4、腹腔注射A、左手抓取并固定好動(dòng)物，將腹部朝上。B、右手持注射器將針頭在下腹部腹白線稍左或偏右的位置，從下腹部朝頭方向幾乎平行地刺入皮下，進(jìn)針3-5mm。C、再使針頭與皮膚呈45°角斜穿過(guò)腹肌，當(dāng)針尖穿過(guò)腹肌進(jìn)入腹腔時(shí)，有落空感，然后固定針頭，保持針尖不動(dòng)，回抽，無(wú)回血，無(wú)腸液、尿液，便可緩緩?fù)迫胨幰骸?、靜脈注射（尾靜脈注射）A、大、小鼠尾靜脈共有3根（左、中、右），一般常選用兩側(cè)的靜脈。注射前，先把動(dòng)物固定在暴露尾部的鼠尾固定器內(nèi)（可用燒杯、鐵絲罩或粗試管等物代替）.B、拔去尾部靜脈走向的毛，用75%酒精棉球反復(fù)擦拭鼠尾，以達(dá)到消毒、血管擴(kuò)張及軟化表皮角質(zhì)的目的。C、盡量從靜脈的遠(yuǎn)心端刺入血管，回一下血，將藥液緩慢注入。D、注射完畢，用棉球壓住針眼，拔去針頭，繼續(xù)壓迫數(shù)分鐘。二、采血1、心臟采血將動(dòng)物仰臥固定在鼠板上，剪去胸前區(qū)部位的被毛，消毒。在左側(cè)第3-4肋間，用左手食指摸到心搏處，右手持注射器選擇心搏最強(qiáng)處穿刺。當(dāng)針穿刺入心臟時(shí)，血液由于心臟搏動(dòng)的力量自動(dòng)進(jìn)入注射器。如不需保留動(dòng)物存活時(shí)，也可麻醉后切開(kāi)動(dòng)物胸膛，直接用注射器刺入心臟內(nèi)采血，也可剪破心臟直接用注射器或吸管吸血。2、摘眼球采血用左手抓住動(dòng)物頸部皮膚，并將動(dòng)物輕壓在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，稍微側(cè)臥，左手拇指盡量將動(dòng)物眼周圍皮膚往眼后壓，使動(dòng)物眼球突出并充血，用彎頭鑷子迅速摘除眼球，眼眶內(nèi)很快流出血液。3、眶靜脈叢（竇）采血將動(dòng)物麻醉，采用側(cè)眼向上固定體位，用左手拇指和食指從背部較緊地握住大（?。┦箢i部。取血時(shí)，左手拇指及食指輕輕壓迫動(dòng)物的頸部?jī)蓚?cè)，是頭部靜脈血液回流困難，眼球充分外突，眶靜脈叢充血?！咀⒁馐马?xiàng)】1、掌握方法，膽大心細(xì)，做好防護(hù)。2、常用灌胃量：小鼠：0.2?1ml,大鼠1?4ml3、摘取眼球采血法一般可取約為小鼠體重4-5%的血液量。【思考題】1.如何熟練掌握大小鼠的給藥途徑和采血方法？動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本操作三（安樂(lè)死）【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹吭诳茖W(xué)應(yīng)用和教學(xué)實(shí)驗(yàn)中，因?qū)嶒?yàn)終結(jié)、研究所需提供血液或其他組織臟器、不適合繁殖或者是當(dāng)動(dòng)物的疼痛與窘迫程度超過(guò)預(yù)期等情況下，需要我們以人道的方式使動(dòng)物死亡，使動(dòng)物在最低程度的疼痛、恐懼，并在最短的時(shí)間內(nèi)失去知覺(jué)和痛覺(jué)?！緦?shí)驗(yàn)對(duì)象】KM小鼠，雌雄各半，體重18—22g?！緦?shí)驗(yàn)器材和藥品】器材：鼠籠、大小鼠固定器、注射器（1ml）、棉球，剪毛剪、手術(shù)剪、手術(shù)刀、采血管、彎頭鑷子、燒杯100ml、方木板藥品：吸入性麻醉劑、注射型麻醉劑、75％酒精棉球

【實(shí)驗(yàn)步驟】1、頸椎脫臼法用拇指和食指用力往下按住鼠頭，另一只手抓住鼠尾（鼠尾根部），用力往后上方一拉，使頸椎脫臼，造成脊髓與腦髓斷離，動(dòng)物立即死亡。2、放血法麻醉動(dòng)物后，將動(dòng)物股、頸動(dòng)脈、靜脈全切斷，血液立即噴出；用一塊濕紗布不斷擦去股動(dòng)脈切周圍處的血液和血凝塊，同時(shí)不斷的用自來(lái)水沖洗流血，使股動(dòng)脈切口處保持暢通，動(dòng)物3?5分鐘內(nèi)即可致死。3、藥物致死法A、藥物吸入藥物吸入是將有毒氣體或揮發(fā)性麻醉劑，被動(dòng)物經(jīng)呼吸道吸入體內(nèi)而致死，將KM小鼠放入含有乙醚的密封燒杯中，3-5分鐘后可死亡B、藥物注射將藥物（腹腔注射硫酸鎂）通過(guò)注射的方式注入動(dòng)物體內(nèi)，使動(dòng)物死亡【注意事項(xiàng)】1、實(shí)驗(yàn)人員要有精神準(zhǔn)備：掌握方法，膽大心細(xì)，做好防護(hù)、克服心理緊張等因素【思考題】1.安樂(lè)死的意義是什么？實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)二家兔的氣管及動(dòng)脈插管實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)二家兔的氣管及動(dòng)脈插管.學(xué)習(xí)捉拿家兔的正確方法和固定。.掌握常用手術(shù)器械的正確使用方法。.學(xué)習(xí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的基本操作技術(shù)，包括麻醉、切口與止血、氣管插管術(shù)、頸動(dòng)脈插管術(shù)實(shí)驗(yàn)對(duì)象健康家兔，雌雄均可，體重2.0?2.5Kg實(shí)驗(yàn)內(nèi)容.家兔的捉拿、麻醉與固定.頸總動(dòng)脈、神經(jīng)等的分離技術(shù).氣管插管.動(dòng)脈插管器材與藥品器材：兔手術(shù)臺(tái)、哺乳類動(dòng)物手術(shù)器械一套、三通、動(dòng)脈夾、動(dòng)脈插管、氣管插管、紗布、棉線、注射器、綁腿帶、污物杯。20%氨基甲酸乙酯溶液（烏拉坦，4-5ml/kg體重，麻醉用）步驟和方法一、家兔的捉拿與稱重1、家兔的捉拿：右手抓住家兔頸背部皮膚，輕輕將家兔提起，迅速以左手托住其臀部，使家兔體重主要落左掌心上，以免損傷動(dòng)物頸部。注意點(diǎn)：家兔一般不咬人，但腳爪銳利，在掙扎易抓傷捕捉者，所以捕捉時(shí)要特別注意其四肢。2、家兔的稱重：將家兔放在嬰兒秤上，待家兔安靜的時(shí)候觀察體重并記錄。注意點(diǎn)：(1)調(diào)零(2)切勿使勁按壓稱面二、家兔的麻醉1、麻醉藥的注射如圖1：助手的一側(cè)上肢彎曲與同側(cè)的軀干夾住家兔的后半部位，同時(shí)該側(cè)的手托住家兔的腹部，另一只向上抓住家兔的頸背部，充分暴露耳背外緣耳緣靜脈。實(shí)驗(yàn)者的左食指、中指輕夾耳根部使靜脈充盈，從遠(yuǎn)心端以30℃角度進(jìn)針刺入靜脈后順血管平行方向深入1。山，左手拇指、食指在刺入部位將針頭與兔耳固定，即可注入麻醉藥。2、麻醉效果判定：可以通過(guò)觀察動(dòng)物呼吸平穩(wěn)深慢、角膜反射遲鈍或消失、肢體肌肉松弛、皮膚夾捏反射消失四方面來(lái)判定是否達(dá)到理想的麻醉效果三、家兔的氣管與動(dòng)脈插管1、仰臥固定：頭部用一根粗棉線拉住兔的兩只門齒后栓在兔板的鐵柱或固定于鉤上。兩前肢平直放在胸腰部?jī)蓚?cè)，用粗棉繩的一端縛扎腕關(guān)節(jié)以上部位，縛繩從背后左右交叉穿過(guò),壓在對(duì)側(cè)前肢的前臂上，再緊扎于兔板兩側(cè)的木鉤上，兩后肢左右分開(kāi)，縛繩扎踝關(guān)節(jié)以上部位，另一端分別固定于兔板后兩側(cè)的木鉤上，如下圖2。2、氣管插管操作要點(diǎn)1）用手術(shù)刀時(shí)，先用手或器械使兩側(cè)組織牽拉緊張情況下，以刀刃作垂直的輕巧的切開(kāi)，不要作刮削的動(dòng)作。2）氣管插管術(shù)操作要點(diǎn)（）：①頸部正中切開(kāi)皮膚，鈍性分離暴露氣管、穿線備用。②于氣管中段第三或第四軟骨環(huán)上向頭端作一縱向倒“T”形切口。③將氣管導(dǎo)管由切口向胸部方向插入氣管腔內(nèi)。④在氣管軟骨環(huán)之間進(jìn)行結(jié)扎，并將棉線固定于插管分叉處。3、動(dòng)脈插管操作要點(diǎn)①于氣管一側(cè)小心分離頸總動(dòng)脈約3cm穿兩線備用。②遠(yuǎn)心端結(jié)扎、近心端用動(dòng)脈夾夾緊。③用眼科剪與血管呈45℃的角度從遠(yuǎn)心端開(kāi)始在向心一側(cè)剪開(kāi)管壁的1/3。④插管前導(dǎo)管和壓力換能器的肝素化。⑤插管后結(jié)扎固定。注意事項(xiàng)1、麻醉動(dòng)物時(shí)，注射速度先快后慢，邊注射邊觀察動(dòng)物麻醉指征。如麻醉過(guò)淺，動(dòng)物掙扎時(shí)可適量追加麻醉藥，切忌麻醉過(guò)深引起家兔死亡；2、手術(shù)過(guò)程中操作應(yīng)輕柔，盡量避免不必要的損傷和出血；3、手術(shù)時(shí)，切開(kāi)頸部皮膚后，盡量鈍性分離,以免損傷血管；4、氣管插管前，應(yīng)注意止血，并將氣管分泌物清理干凈；5、動(dòng)脈導(dǎo)管的插入端要光滑，不能過(guò)尖，以防刺破動(dòng)脈壁，引起大出血。6、未扎緊動(dòng)脈插管前不要松動(dòng)動(dòng)脈夾。實(shí)驗(yàn)三、實(shí)驗(yàn)性肺水腫【實(shí)驗(yàn)原理與目的】肺水腫是臨床上常見(jiàn)的危重癥之一，肺水腫是指過(guò)多的液體積聚在肺間質(zhì)或溢入肺泡腔內(nèi)的病理狀態(tài)。當(dāng)肺毛細(xì)血管流體靜脈壓增高、血漿膠體滲透壓降低，肺微細(xì)管壁通透性增高、肺淋巴回流障礙等因素的某個(gè)或多個(gè)同時(shí)或相繼作用，一般水腫液先在組織間隙中積聚，形成間質(zhì)性肺水腫，然后發(fā)展為肺泡性肺水腫。肺水腫發(fā)生后，可引起氣體彌散障礙以及肺泡通氣與血流比例失調(diào)（如果氣道內(nèi)存在水腫液，還會(huì)引起通氣障礙），最終導(dǎo)致呼吸功能不全。大劑量腎上腺素可引起機(jī)體血液重新分布，外周血管廣泛收縮，血液由體循環(huán)急速轉(zhuǎn)移到肺循環(huán)，使左心房壓力和肺毛細(xì)血管有效濾過(guò)壓增高，液體流入肺間質(zhì)增多而出現(xiàn)肺水腫。本實(shí)驗(yàn)的目的是用大劑量腎上腺素復(fù)制肺水腫模型，觀察急性肺水腫的表現(xiàn)，分析發(fā)病機(jī)理?！緦?shí)驗(yàn)對(duì)象】SD大鼠，雌雄不限，體重180-250g?！緦?shí)驗(yàn)器材和藥品】器材：彈簧磅秤，電子天平，手術(shù)器械1套，2ml,5ml注射器，聽(tīng)診器1具，濾紙。藥品：生理鹽水，0.1%鹽酸腎上腺素注射液，20%氨基甲酸乙酯溶液（烏拉坦，4-5ml/kg體重，麻醉用）?！緦?shí)驗(yàn)步驟和觀察指標(biāo)】1.取180-250g左右體重相近的大鼠兩只，做好標(biāo)記（甲鼠、乙鼠），稱重，觀察動(dòng)物的一般情