動物實驗graduate課件

如何做好動物實驗——動物實驗與動物實驗技術(shù)2010.01“I’msoproud!Allofmykidsaregoingintoresearch”田楓2010.10.28主要內(nèi)容動物實驗中實驗動物的選擇實驗動物模型影響動物實驗的因素動物實驗基本技術(shù)如何做好動物實驗動物實驗是根據(jù)研究目的，恰當(dāng)?shù)剡x用標(biāo)準(zhǔn)的實驗動物品種、品系，進(jìn)行各種科學(xué)實驗，觀察和記錄動物的反應(yīng)過程或反應(yīng)結(jié)果，以探討或檢驗生命科學(xué)中未知因素的一種活動。是生物研究中的重要方法之一，也是從動物身上獲得有關(guān)情報資料的唯一手段。

關(guān)于動物實驗相似性原則

利用與人體某些機(jī)能、代謝、結(jié)構(gòu)及疾病特點(diǎn)的相似性選擇實驗動物組織結(jié)構(gòu)：豬的皮膚組織結(jié)構(gòu)與人類的相似系統(tǒng)機(jī)能：犬有發(fā)達(dá)的血液循環(huán)和神經(jīng)系統(tǒng)，毒理方面反應(yīng)和人也較接近繁殖特性：哺乳動物和人近似，性成熟、妊娠期和壽命一般是成比例的疾病特點(diǎn)：如旱獺肝炎病毒感染體液成分：鳥類糞尿混合排出；草食動物尿液呈堿性；肉食動物尿液呈酸性。選擇時要注意解剖特性：有些動物的解剖結(jié)構(gòu)與人類差別較大，要特別注意特殊性原則發(fā)熱、解熱和檢查致熱源實驗-----適宜選用兔做實驗；開胸和心臟實驗----適宜選用兔做實驗；觀察藥物對排卵的影響，進(jìn)行避孕藥研究-----適宜選用兔、貓；動脈粥樣硬化實驗-----適宜選用兔、豬、猴；肝外科實驗研究------適宜選用大鼠；膽囊功能研究------不能選用大鼠；充分利用不同品種品系實驗動物存在的某些特殊反應(yīng)供研究用近交系小鼠

實

驗

研

究

類

別

動

物

品

系心血管疾病DBA／2N自身免疫性疾病NZB／N、

腦積水 C57BL／KaLwN、D2／nSnN腎盂積水C57L／N、STR／N白內(nèi)障STAR／N牙周病DBA／2N(有抗力)、STR／N(易感)多尿癥STR／N、STR／1N白血病L615、L7212腭

裂A／HeN(自發(fā))、C57BL／6N(誘發(fā))放射線有抗力：C57BL／6N

敏感：BALB／cAnN，LACA．淀粉樣變A／HeN，NZW／N補(bǔ)體BALB／cAnN(活性高)．DBA／2N(活性低)標(biāo)準(zhǔn)化原則選擇與研究內(nèi)容相匹配的標(biāo)準(zhǔn)化實驗動物，以保證實驗的準(zhǔn)確性與可重復(fù)性。標(biāo)準(zhǔn)化動物系指經(jīng)遺傳學(xué)、微生物學(xué)、環(huán)境及營養(yǎng)控制而繁育的動物。規(guī)格化原則年齡----年齡不同，其生物學(xué)特性往往不同，一般選性成熟后的青壯年動物。太小的動物的生理功能未達(dá)到成年水平。太老的動物的各器官老化，代謝功能下降，只在老年醫(yī)學(xué)研究中使用；體重----在正常營養(yǎng)狀態(tài)和飼養(yǎng)條件下，體重與年齡有一定的相關(guān)性；性別----許多實驗證明，同一品種（系）不同性別的動物對外界刺激的反應(yīng)不一致。經(jīng)濟(jì)性原則無菌兔WhatistheAnimalModel?ananimalmodelinwhichnormativebiologyorbehaviorcanbestudied,orinwhichaspontaneousorinducedpathologicalprocesscanbeinvestigated,andinwhichthephenomenoninoneormorerespectsresemblesthesamephenomenoninhumansorotherspeciesofanimal.醫(yī)學(xué)研究中建立的具有人類疾病模擬表現(xiàn)的動物實驗對象和相關(guān)材料。ClassificationofAnimalModelsAccordingtocauseofthedevelopingSpontaneous(genetic)diseasemodels（自發(fā)）Induced(experimental)diseasemodels（誘發(fā)）Transgenicdiseasemodels（轉(zhuǎn)基因）Negativediseasemodels

（抗疾?。㏒pontaneous(genetic)DiseaseModels

Thesemodelsofhumandiseaseusenaturallyoccurringgeneticvariants(mutants).Manyhundredsofstrainsandstockswithinheriteddisordersmodelingsimilarconditionsinhumanshavebeencharacterizedandconserved.指實驗動物未經(jīng)任何人工處置，在自然條件下動物自然發(fā)生、或由于基因突變的異常表現(xiàn)通過遺傳育種保留下來的動物模型。血壓測定心電測定C3HMiceCoatColor:BlackAgoutiFeatures:TheC3Hiswidelyusedasamodelfordrugtreatmentsofneurologicdisorderswithapplicationsintoxicologyandoncology.Highincidencerateofbreastcancerinfemalemiceandlivercancerinmale.Non-ObeseDiabetic(NOD)MiceCoatColor:AlbinoFeatures:TheNODexhibitsdestructiveautoimmunepancreaticinsulitisasearlyasfourweeksofage.Insulin-dependentdiabetesisseeninfemalesbythreemonthsofage.SenescenceAcceleratedMouse

EachSAMPstrainshowsrelativelystrainspecificage-associatedpathologies.Thesecharacteristicpathologicalphenotypesaresimilartoage-associateddisordersoftenobservedinelderhumans.Theyincludesenileosteoporosis,osteoarthrosis,age-relateddeficitsinlearningandmemorywith/withoutforebrainatrophy,presbycusis,senileamyloidosis,age-relatedimpairmentoftheimmuneresponseandsoon.

SAMP8SAMR1MorisAssessmentofSpontaneousModelAdvantages

Spontaneouslydeveloping（自然發(fā)生）

Similartohumandiseases（與人類疾病有較好的相似性）DisadvantageLimitedquantityanddifficulttoapply

（數(shù)量有限，應(yīng)用有難度）InducedDiseaseModelsAsthenameimplies,inducedmodelsarehealthyanimalsinwhichtheconditiontobeinvestigatedisexperimentallyinduced.以物理的、化學(xué)的或生物的致病因素作用于動物，造成動物組織、器官或全身一定的損害，出現(xiàn)某些類似人類疾病時的功能、代謝或形態(tài)結(jié)構(gòu)方面的改變，以供研究用。Methods原位誘發(fā)：指將致癌物直接與動物靶組織或靶器官接觸而誘發(fā)該組織或器官發(fā)生腫瘤，接觸方法可通過涂抹、灌注、喂養(yǎng)或埋置等。異位誘發(fā)：將與致癌物接觸后的動物組織或器官埋置于該動物或另一正常動物皮下而產(chǎn)生的該組織或器官的腫瘤。異位誘發(fā)腫瘤具有易于觀察和取材的優(yōu)點(diǎn)。誘癌物

放射線局部照射、化學(xué)致癌物（烷化劑、亞硝胺類、芳香胺類）、生物毒素（黃曲酶毒素）、細(xì)菌（幽門螺桿菌）等。

InducedTumorAnimalModelMethods實體瘤移植

腫瘤細(xì)胞皮下接種——7-10d處死荷瘤動物——選擇生長良好、無壞死液化的瘤組織——2-3mm3+生理鹽水或其它營養(yǎng)液——無菌套管針抽吸——接種同種受體動物右前腋窩皮下。腹水瘤移植

腫瘤細(xì)胞皮下接種——7-10d處死荷瘤動物——取腹水——含葡萄糖平衡鹽水稀釋至適當(dāng)濃度——腹腔注射（腹水瘤）。TransplantTumorAnimalModelCardiovascularDiseasesAnimalModelAtherosclerosismodel：animalsfedbyhigh-fatandhighcholesteroldietornon-feedingmethodHypertensionmodel：kidneypacking、renalarterycoarctation、noisestimulusMyocardialischemiaandmyocardialinfarctionmodel：

electricstimulus、drugs、coronaryarteryblockageRespiratorySystemAnimalModelChronicbronchitisandpneumoniamodel：刺激性氣體刺激（二氧化硫、煙霧、甲醛蒸氣）Bronchialasthmamodel：

卵白蛋白激發(fā)：過敏原卵白蛋白注入豚鼠體內(nèi)，其可溶性抗原刺激機(jī)體產(chǎn)生IgE抗體，使機(jī)體處于致敏狀態(tài)。當(dāng)豚鼠再次接觸此抗原時，IgE介導(dǎo)發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，使細(xì)胞脫顆粒，釋放出活性化學(xué)物質(zhì)如組胺、嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子等，作用于支氣管引起氣道高反應(yīng)致哮喘。

血小板活性因子(PAF)誘發(fā)：目前已知的唯一能引起氣道高反應(yīng)性炎癥介質(zhì)。DiabetesModel

注射致高血糖因子，如生長激素、胰高糖素、糖皮質(zhì)激素以及兒茶酚胺類激素等。注射化學(xué)物質(zhì)引起胰島β細(xì)胞的損傷，如鏈脲佐菌素(STZ)、四氧嘧啶可造成胰島β細(xì)胞不可逆損傷；環(huán)丙庚哌、天門冬素酶等可引起β細(xì)胞可逆性損傷。注射生物及生物制品引起β細(xì)胞破壞，如鼠腦炎、心肌炎病毒M型變異可誘發(fā)若干品系的成年小鼠糖尿病。手術(shù)切除胰腺的大部分或全部，并給予高糖飲食刺激，引起繼發(fā)性永久性糖尿病。AssessmentofInducedModelQuantityenough（數(shù)量足夠）Conditionaccord（條件一致）和自然產(chǎn)生的疾病模型在某些方面存在一定差異。ImmunodeficiencyAnimalModelAnimalsiscertainorsomeimmunodeficiencybecauseofspontaneousorartificialmethods.由于先天遺傳突變或用人工方法造成免疫系統(tǒng)某種或多種成分缺陷的動物。ClassificationofImmunodeficiencyAnimal

CongenitalImmunodeficiencyanimal

（先天性）

T-lymphocytedeficiencyanimal：nudemice,nuderatsB-lymphocytedeficiencyanimal：CBA/NmiceNKcelldeficiencyanimal：Beigemice

Severecombinedimmunedeficiency：SCIDmiceAcquiredimmunodeficiencysyndrom（獲得性）

primate,miceandcatAIDSmodelHistoryofNudeMice1962年英國格拉斯哥醫(yī)院Grist在非近交系的小鼠中偶然發(fā)現(xiàn)有個別小鼠無毛。1966年證實是由于第11對染色體基因突變所致。1968年，Pantelouris解剖發(fā)現(xiàn)裸鼠失去了正常的胸腺。1969年Rygaard首先將人結(jié)腸腺癌移植裸小鼠獲得成功。

由于裸鼠原種抵抗力差，生育力低，壽命短，不能用于實際。和純系BALB/C，C3H，C57BL/6小鼠交配，不斷選育，獲得了三種近交系鼠（InbredNudeMice）新種。裸鼠自發(fā)現(xiàn)以來，廣泛應(yīng)用于腫瘤學(xué)、免疫學(xué)和病毒學(xué)等多個學(xué)科的研究。KMHairlessMiceA:Heterozygousmiceat10months.B,C:Homozygousmiceat10months.Themutantmouseiscoveredwithsparsehair,andcannotopenitseyesnormallyScd1ab-XymutationB-lymphocyteDeficiencyAnimalCBA/N

BcellfunctionislowSevereCombined

ImmuneDeficiencyAnimalSCIDmiceCoatColor:Albino

由于第16對染色體隱性基因突變，純合突變導(dǎo)致淋巴細(xì)胞抗原受體基因VDJ區(qū)域重排的重組酶活性異常，基因重排時斷裂無法正常連接，從而影響B(tài)、T細(xì)胞的正常功能分化。外觀體重與普通小鼠相同。對鼠肝炎，巴氏桿菌、卡氏肺囊蟲極易感染，感染后易發(fā)病死亡。SPF環(huán)境沒有B、T陽性標(biāo)志細(xì)胞，對外來抗原無細(xì)胞和體液免疫NK、LAK細(xì)胞功能正?；蛟龈?；FeatureofSCIDTheC.B-17-sciddoesexhibitextremelylowlevelsofIgin~20%ofthemiceat12weeksofage.TheincidenceofIgwillincreaseasthemiceage.Despitethis“l(fā)eakiness”（滲漏）C.B-17-scid'sdonotmountanantibodyresponsetochallengebyimmunogenicmaterial.

(部分小鼠出現(xiàn)低水平的功能性T和B細(xì)胞,血清中Ig含量明顯升高)。

SHO（SCIDHairlessOutbred）人們一直想讓SCID小鼠擁有裸鼠無毛的優(yōu)點(diǎn)CharlesRiverLab的研究人員自2007年開始就著手培育無毛的SCID小鼠，他們通過Crl:HA-Prkdcscid和Crl:SKH1-Hrhr這兩個品系雜交，最終在2008年得到了兩條染色體上均帶有SCID基因的無毛封閉群小鼠模型SHO（SCIDHairlessOutbred）.2008年6月，實驗人員通過對比的方法將人前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C-3分別接種到SCID和SHO身上，研究發(fā)現(xiàn)，SHO除去具有與SCID小鼠相同的腫瘤生長特性之外，還摒除了Nu/Nu裸鼠接種PC-3時出現(xiàn)的皮膚潰瘍現(xiàn)象。Other

ImmuneDeficiencyAnimalNZBWF1

野生色WBB6F1—W/WV

（WB—W/+♀XC5TBL/6—WV/+）F1Anaemia,gastriculcer，bonemarrowfailuremodelWhite,blackeye動物模型復(fù)制原則相似性可重復(fù)性可靠性適用性和可控性易行性和經(jīng)濟(jì)性疾病動物模型的注意事項沒有一種動物模型能完全復(fù)制人類疾病，模型實驗結(jié)論的正確性只是相對的，最終必須在人體身上得到驗證。盡可能使模型動物處于最小的變動和最少的干擾之中；動物進(jìn)化的高級程度并不意味著所有器官和功能接近于人的程度；不能盲目使用近交系動物；查找文獻(xiàn)并咨詢動物實驗所需動物和條件是否可行，了解前人所積累的經(jīng)驗，避免低水平的重復(fù)或缺乏科學(xué)依據(jù)的盲動所造成人力物力的浪費(fèi)。影響動物實驗的因素R=(A+B+C)×D+ER:實驗動物的總反應(yīng)A:動物種間的共同反應(yīng)B:動物品種，品系特有的反應(yīng)C:動物的個體反應(yīng)D:環(huán)境因素（包括實驗處理）E:實驗誤差A(yù),B,C是由實驗動物本身的遺傳因素決定的，被選擇的實驗動物，在嚴(yán)格控制環(huán)境因素D或改變其中某一條件后就可能得到一個理想的實驗結(jié)果R。動物對實驗處理的反應(yīng)可用以下公式表示：小鼠肝炎病毒感染裸鼠的肝臟病變wastesyndrome出現(xiàn)消耗性疾病，給腫瘤免疫學(xué)研究造成嚴(yán)重干擾仙臺病毒感染仙臺病毒感染肺病變對麻醉實驗和吸入毒理學(xué)研究等產(chǎn)生嚴(yán)重干擾最適宜溫度20-24℃，溫差：3或4℃溫度不同種類動物“熱平衡”區(qū)的范圍不同。在熱平衡區(qū)，動物呈基礎(chǔ)代謝率。如果環(huán)境溫度降至低于熱平衡區(qū)溫度的下限，動物的代謝率將呈線性增長。如果環(huán)境溫度高于熱平衡區(qū)溫度的上限，代謝率也將增長，這不是防御機(jī)制，而是由于環(huán)境溫度導(dǎo)致體溫升高，升高的體溫提高了代謝率。因此，環(huán)境溫度高于熱平衡區(qū)比低于它使動物的應(yīng)激反應(yīng)更強(qiáng)烈。

濕度Ringtail:

Lowenvironmentalhumidity,hightemperatures,anddraftspredisposeyoungratsandmicetodevelopannularconstrictionsofthetailandoccasionallyfeetordigits.Localizededemacanleadtodrygangreneandtissuesloughing.噪聲（Noise）噪音是實驗動物發(fā)生應(yīng)激反應(yīng)的常見原因。引起動物緊張，導(dǎo)致不安和騷動。國家標(biāo)準(zhǔn)≤60dB超過100dB的噪聲，能夠引起某些品系的小鼠、大鼠和倉鼠發(fā)生抽搐；能夠引起動物心跳、呼吸次數(shù)增加，引起大鼠血液甘油三酯水平升高和血壓升高，而血糖降低；我們難以使房間內(nèi)籠具的環(huán)境條件完全相等，因此，實驗動物應(yīng)在籠架中自由的分布，尤其對照組動物和給藥組動物在籠架的位置應(yīng)是自由分布的。此外，在塑料和金屬籠具中動物的反應(yīng)也會不同。籠具（Cages）

籠具必須易于清洗和足夠堅固。不透明籠具可能最適于動物生長，盡管這些籠具給實驗觀察帶來不便，而且觀察在不透明籠具中的動物可能會打擾它們。一個籠子中可以放多少只動物？經(jīng)驗告訴我們是每籠2-5只動物變異最低，動物單籠飼養(yǎng)變異高，當(dāng)每籠動物數(shù)量超過5只時變異同樣迅速攀升。飼養(yǎng)密度——每籠動物數(shù)（Numberofanimalspercage）飼養(yǎng)密度飼養(yǎng)密度身處狹小籠中，實驗小鼠精神失常。英國和瑞士的研究人員曾安裝一臺24小時監(jiān)控的攝像機(jī)，記錄了實驗小鼠的一舉一動。老鼠們反復(fù)地做著同一動作。其中有些老鼠沿著籠子的不銹鋼毫不費(fèi)力地爬到頂部，前腿掛在天花板上，嘴則咬住籠欄，而后又跳到籠子底部。而另一只老鼠則在不停地翻跟斗，每秒鐘一個，一口氣能翻40分鐘。它們每一個動作的目的就是為了不停地重復(fù)整套動作，而且做得那么認(rèn)真執(zhí)著，與精神病人的表現(xiàn)一模一樣，毫無二致。勢力范圍

Malemicewillfightwhenfirstco-mingledinacage,andtheyneedtobeobservedverycloselyduringthistimeofestablishingasocialdominancehierarchywithinthegroup.Weakandnon-aggressiveanimalsmightbeinjuredorkilledifnotremovedfromthecage.大多數(shù)動物已經(jīng)形成了對人類的不信任，傾向于逃離人類。經(jīng)過小心的捉拿操作和逐漸的適應(yīng)，動物能夠在某種程度上學(xué)會調(diào)整其逃走的本能。粗暴的捉拿操作和新的員工可再激活動物逃跑的本能，并可能影響到實驗結(jié)果。動物實驗基本技術(shù)主要內(nèi)容抓取與固定編號方法給藥方法采血方法麻醉方法處死方法職業(yè)安全無害化處理AnimalRestraintMouse-AvoidgraspingandpullingthetipofthetailRatTailshouldbeliftedonlyatthebaseandforshortperiod,tailskinmaytearRestrainerofMiceandRatGuineapigHoldwithtwohandsRabbitUsetwohandsforliftingandshouldnotberestrainedbytheearsRestrainerofRabbitDog性別鑒定Furcoloring-picricacid染色法：一般適用于短期實驗，大小鼠常用。原則：動物背部朝上頭頂1、右前肢2、右側(cè)腰部3、右后肢4、尾跟部5、左后肢6、左側(cè)腰部7、左前肢8、背部9、不標(biāo)號0或10

后面的數(shù)字永遠(yuǎn)大于前面的數(shù)字，如12、23、56、89、123、345等等；而沒有11、21、43、65等等。Earpunching152金屬耳號玻璃管動物標(biāo)記(微芯片microchip)）1、可以標(biāo)記的動物種類多2、體內(nèi)標(biāo)簽，不易破壞3、使用壽命長，達(dá)到20年,可循環(huán)使用4、準(zhǔn)確率高，讀錯率為10萬分之一5、可以準(zhǔn)確標(biāo)記每一個動物動物標(biāo)簽編碼規(guī)則3位國家代碼+3位地區(qū)代碼+12位動物標(biāo)簽編碼如：國碼：720區(qū)域：899序號：2玻璃管動物標(biāo)簽注射器注射（植入）標(biāo)簽前一定要保證消毒到位，以避免不必要的感染玻璃管動物標(biāo)簽閱讀器注射（植入）標(biāo)簽時應(yīng)15-45度角注射，方便閱讀器以之發(fā)生電磁感應(yīng)，敏捷地讀出數(shù)據(jù)。玻璃管動物標(biāo)簽閱讀器的最佳閱讀距離為7-12CM，不要太近或太遠(yuǎn)紋身皮下注射腹腔注射肌肉注射VeinInjectionofMouseVeinInjectionofRabbitVeinInjectionofDogGavagingMethodofMouseGavagingMethodofRabbitInjectionvolumeinmillilitersAnimalSCIMIVIPRat5-80.30.55-10Mouse2-30.20.052-3Hamster3-40.10.33-4G.P.5-100.50.55-8Rabbit30-500.5-11-550-100人與動物的給藥量換算方法人與動物對同一藥物的耐受性相差很大。一般情況下，動物的耐受性比人大，也就是單位體重動物的用藥量比人要大。一般可按下列比例換算：人用藥量為1；小鼠、大鼠為25-50；豚鼠、家兔為15-20；犬、貓為5-10。BleedingRequiringanesthesiaCardiacpunctureJugularveinPosteriorvenacavaLateralsaphenousvein(GP)NotrequiringanesthesiaOphthalmicvenousplexusTailveinEarveinCephalicvein(rabbit,dogs,cat)LateralsaphenousveinToe&tailclipingBleeding(cont.)Maximumamountofbloodthatcanbesafelyremovedforbloodcollection=1%ofbodyweight.Totalbloodvolumeisapproximately6%ofbodyweighte.g.5kgrabbitX1%=50mlbloodAnimalproduce0.75-1.0ml/kg/dayofblood5kgrabbit,1ml/kg=Xml/5kg,X=5ml/dayItwilltakes10daysfortheanimalstoreplacethe50mlthatwerewithdrawnOphthalmicvenousplexusCardiacpuncture實驗動物的采尿方法代謝籠法：能將尿液和糞便分開而達(dá)到收集動物尿液目的的特殊裝置。適用于大、小鼠。導(dǎo)尿法：適用于雄性兔、犬等。實驗動物的麻醉動物麻醉目的：消除動物手術(shù)疼痛，便于實驗操作，保證動物安全，為手術(shù)創(chuàng)造良好的條件。麻醉的意義：第一是善待動物，第二是提高動物實驗的效率。全身麻醉：

局部麻醉：（普魯卡因、利多卡因等）揮發(fā)性麻醉劑：吸入給藥——乙醚、氯仿等非揮發(fā)性麻醉劑：靜脈、皮下、肌肉、腹腔給藥——氯胺酮、戊巴比妥鈉等實驗動物的安樂死(euthanasia)

指以人道的方法處死動物的過程。處死過程中盡量減少其驚恐和焦慮，使其安靜地?zé)o痛苦的死亡。

安樂死必須符合的標(biāo)準(zhǔn)：1.死亡時盡可能減少驚恐、疼痛。2.使其在最短時間內(nèi)失去意識迅速死亡。3.方法可靠且可重復(fù)。4.對操作人員安全。5.采用的方法要與研究的要求和目的一致。6.對觀察者和操作者的情緒影響最小。7.對環(huán)境污染的影響最小。8.需要的機(jī)械設(shè)備簡單，價廉，易操作。9.處死動物的地點(diǎn)應(yīng)遠(yuǎn)離并與動物房分開。Euthanasia(cont.)-RodentsAcceptableInhalantanestheticoverdoseCOCO2BarbiturateoverdoseMicrowaveirraditationConditionallyacceptableN2(sedatedoranesthetized)ArgonCervicaldislocation(BW<200g)DecapitationEuthanasia(cont.)-UnacceptableHumaneconcernsDecompressionDrowningStrychnineForuseinconsciousanimalsExsanguinationRapidfreezingAirembolismSolemethodNicotineMagnesiumsulfatePotassiumchlorideAllcurariformagentsStunningHazardoustohumansChloroformCyanide常用脊椎動物安樂死方法小于125g嚙齒動物125g—1kg嚙齒動物/兔1-5kg嚙齒動物/兔狗貓非人靈長類反芻動物、馬、豬二氧化碳OOONNNNXBarbiturate注射液，靜脈注射OOOOOOOBarbiturate注射液，腹腔注射OOONONO先麻醉，之后放血致死OOOOOOO先麻醉，之后靜脈注射KCl(2mmol/kg)OOOOOOO先麻醉，之后斷頭OOMNNNN先麻醉，之后頸椎脫臼OONNNNN動物清醒中直接斷頭MMMNNNN動物清醒中直接頸椎脫臼MNNNNNN電昏后放血致死NNNNNNO說明：O:建議使用方法；N:不得使用方法；M:一般情況不推薦使用，除非實驗需要。OccupationalHealthandSafetyProgramforPersonnelwithLaboratoryAnimalContactRiskAssessment:AllergiesBitesandScratchesSharpsinjuries(punctures,cuts,etc.)ChemicalExposureZoonoticDiseaseSHARPSIfneedlesareused,needlesarenottobepurposelybentorbrokenbyhand,removedfromdisposablesyringesorotherwisemanipulatedbyhand.Needlesshouldnotberecappedunlessabsolutelynecessary.Ifneedlesmustberecapped,asingle-handedtechniqueshouldbeused.SHARPSForsharpsthatposeadefinitepuncturepotential,anapprovedsharpscontainerisapunctureandleakresistantcontainer(i.e.,aredsharpscontainer).污物的無害化處理一次性口罩、帽子等使用后應(yīng)裝入專用垃圾袋回收焚燒處理。一次性使用的注射器、針頭、手套等物品使用后經(jīng)消毒劑浸泡清洗，毀形后按要求統(tǒng)一進(jìn)行無害化處理。絕不可自行處理和隨意扔掉。用過的廢墊料要裝入垃圾袋中或?qū)Ｓ玫膲|料容器內(nèi)，注意防蠅、防滲漏，并及時焚燒處理。進(jìn)行放射性實驗所產(chǎn)生的廢棄物，如果屬于短半衰期且放射性較低的物品，放置6-10個半衰期后可以焚化處理。其他放射性廢棄物，應(yīng)進(jìn)行中、長期安全包裝后送放射性廢物處理站處理。如何做好動物實驗？1、明確目的及必要性

首先要弄清其目的是什么,動物實驗也不例外。只有明確動物實驗的目的,才能避免實驗的盲目性,真正做到有的放矢,少走彎路,節(jié)約經(jīng)費(fèi)和時間,從而達(dá)到科學(xué)、節(jié)儉和高效。2、確認(rèn)必要性“3R”原則動物實驗倫理和動物福利3、作好實驗設(shè)計對照原則

隨機(jī)化原則

重復(fù)原則均衡性原則如何做好動物實驗？4、選擇適宜的實驗動物

實驗動物遺傳特性的選擇實驗動物微生物等級的選擇