機(jī)能實(shí)驗(yàn)學(xué)自主設(shè)計(jì)之花青素與高尿酸血癥分析

機(jī)能實(shí)驗(yàn)學(xué)自主設(shè)計(jì)之花青素與高尿酸血癥分析第1頁/共35頁花青素對(duì)治療小鼠高尿酸血癥的研究第2頁/共35頁目錄CONTENTS01020304研究背景與設(shè)計(jì)思想研究目的和主要研究?jī)?nèi)容技術(shù)路線、研究方案和預(yù)期結(jié)果創(chuàng)新性和可行性第3頁/共35頁P(yáng)ART1研究背景與設(shè)計(jì)思想第4頁/共35頁ADDYOURTITLEHERE1研究背景第5頁/共35頁1.研究背景3456NYC,StreetAvenue21近年來，隨著營(yíng)養(yǎng)條件改善，人們?cè)陲嬍撤矫娓右蠖嘣?，但與此同時(shí)也出現(xiàn)了很多營(yíng)養(yǎng)過剩的現(xiàn)象。過多的攝入某些食物對(duì)機(jī)體可能造成很大的傷害。研究表明，在日常飲食中攝入過多的高嘌呤食物，將導(dǎo)致體內(nèi)尿酸含量升高，從而引發(fā)高尿酸血癥。即高尿酸血癥的致病原因之一為高嘌呤飲食。第6頁/共35頁1.研究背景3456NYC,StreetAvenue21@rianda_ilham調(diào)查顯示，此病的發(fā)病率日趨升高，但是很多人在體檢中發(fā)現(xiàn)尿酸異常升高（高尿酸血癥），因?yàn)闆]有任何自覺癥狀而未加重視。除此之外很多醫(yī)生也未對(duì)高尿酸血癥引起足夠重視。因?yàn)閷?shí)踐表明，只有約10%的高尿酸血癥者會(huì)發(fā)展為“痛風(fēng)”。高尿酸血癥(HUA)定義為血尿酸水平男性大于6.5或7.0mg／dl，女性大于6.0或6.5mg／dl。它是以體內(nèi)嘌呤代謝紊亂、尿酸增高為特征的疾病。HuA可誘發(fā)痛風(fēng)、尿石癥等疾病，并且血尿酸升高與肥胖、高血壓、高血糖和血脂紊亂等代謝綜合征的組成成分關(guān)系密切。第7頁/共35頁1.研究背景3456NYC,StreetAvenue21@rianda_ilham體內(nèi)尿酸形成來源于嘌呤代謝，次黃嘌呤在黃嘌呤氧化酶的催化條件下轉(zhuǎn)化為黃嘌呤，再使黃嘌呤轉(zhuǎn)化為尿酸與氧自由基等。臨床上常用別嘌呤醇治療高尿酸血癥，別嘌呤醇可被體內(nèi)黃嘌呤氧化酶催化成為別黃嘌呤，別黃嘌呤與別嘌呤醇對(duì)黃嘌呤氧化酶有抑制作用。由于黃嘌呤氧化酶對(duì)別黃嘌呤的親和力比對(duì)黃嘌呤和次黃嘌呤大，因而使黃嘌呤和次黃嘌呤不能利用該酶轉(zhuǎn)化為尿酸。使血中尿酸含量降低。缺點(diǎn)：但它在治療高尿酸血癥的初期可誘發(fā)急性痛風(fēng)，增加急性痛風(fēng)的發(fā)作頻率與嚴(yán)重程度，具有一定的副作用。次黃嘌呤黃嘌呤尿酸+氧自由基別嘌呤醇別黃嘌呤黃嘌呤氧化酶黃嘌呤氧化酶黃嘌呤氧化酶第8頁/共35頁1.研究背景3456NYC,StreetAvenue21@rianda_ilham花青素是自然界一類廣泛存在于植物中的水溶性天然色素，屬類黃酮化合物?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，花青素具有抗氧化、抗腫瘤、防治心腦血管疾病、降血糖、抗炎、促進(jìn)視力等多種藥理作用，受到國(guó)內(nèi)外醫(yī)藥和食品界的廣泛重視。第9頁/共35頁1.研究背景3456NYC,StreetAvenue21@rianda_ilham張曉暉等在2004年發(fā)表的名為《原花青素對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用》觀察了從蓮房、藕節(jié)中提取的蓮房原花青素（LSPC）對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用。給予動(dòng)物L(fēng)SPC并且再灌注后，冠脈流量和心率恢復(fù)明顯，XOD（黃嘌呤氧化酶）活性受到抑制，猜測(cè)LSPC有可能通過抑制XOD的活性，阻斷氧自由基的來源而起到保護(hù)心肌的作用。

在一篇2013年徐春陽等發(fā)表的《花青素的生理活性研究進(jìn)展》中，我們發(fā)現(xiàn)花青素確實(shí)具有抑制黃嘌呤氧化酶的作用。因此，基于上述資料查找獲得的信息，我們提出了探究花青素對(duì)治療小鼠高尿酸血癥的影響的研究。第10頁/共35頁ADDYOURTITLEHERE2設(shè)計(jì)思想第11頁/共35頁2.設(shè)計(jì)思想3456NYC,StreetAvenue21@rianda_ilham本實(shí)驗(yàn)為探究型實(shí)驗(yàn)，旨在探究花青素對(duì)小鼠血清中尿酸含量的影響。本實(shí)驗(yàn)的基本思想就是對(duì)照和控制變量。準(zhǔn)備四組小鼠，一組為對(duì)照組，其余三組分別為陰性對(duì)照組，陽性對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組。除此之外，為了防止偶然誤差出現(xiàn)，遵循重復(fù)原則，每一組都應(yīng)準(zhǔn)備多只小鼠，進(jìn)行平行實(shí)驗(yàn)。第12頁/共35頁P(yáng)ART2研究目的和主要研究?jī)?nèi)容第13頁/共35頁研究目的和主要研究?jī)?nèi)容研究目的第14頁/共35頁1.研究目的3456NYC,StreetAvenue21@rianda_ilham1）探究花青素對(duì)治療高尿酸血癥的作用；2）比較其與別嘌呤醇的作用效果；3）為臨床治療高尿酸血癥開發(fā)新的藥物。第15頁/共35頁ADDYOURTITLEHERE主要研究?jī)?nèi)容第16頁/共35頁2.主要研究?jī)?nèi)容3456NYC,StreetAvenue21@rianda_ilham1）花青素對(duì)治療小鼠高尿酸血癥的作用；2）花青素與別嘌呤醇治療高尿酸血癥效果比較。第17頁/共35頁P(yáng)ART3主要路線、研究方案和預(yù)期結(jié)果第18頁/共35頁主要路線，研究方案，預(yù)期結(jié)果主要路線研究方案預(yù)期結(jié)果。第19頁/共35頁1.主要路線@rianda_ilhamD組：空白對(duì)照組（10只健康小鼠，普通飼料飼養(yǎng)）注：1）實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物為清潔級(jí)18至22ｇ雄性ICR小鼠80只，生命狀態(tài)也基本相同。2）ABC三組的普通飼料的量是一樣的，用于保證小鼠的正常生命活動(dòng)實(shí)驗(yàn)中的飼料用的是全價(jià)營(yíng)養(yǎng)顆粒飼料。隨飼料一起給予的還有充分的水，因?yàn)樾∈蟮乃x相當(dāng)快，并且飲水是經(jīng)過滅菌的第20頁/共35頁ADDYOURTITLEHEE主要路線研究方案預(yù)期結(jié)果。主要路線，研究方案，預(yù)期結(jié)果第21頁/共35頁2.研究方案3456NYC,StreetAvenue21@rianda_ilham1）提取藍(lán)莓果中的花青素：乙醇浸提法：藍(lán)莓果

粉碎

乙醇浸提

過濾

回收乙醇花青素粗提液HP20樹脂吸附40％乙醇洗脫

回收乙醇

凍干

稱重

注明：乙醇浸提法提取花青素的最佳條件為：pH3.0，浸提溫度40°C，浸提時(shí)間2h，浸提乙醇體積分?jǐn)?shù)70%，提取次數(shù)2次，料液比1:10，在此條件下提取率為4.49mg/g。第22頁/共35頁2.研究方案3456NYC,StreetAvenue212）小鼠高尿酸血癥模型的建立：

以１％羧甲基纖維素鈉水溶液分別配制50mg/mL次黃嘌呤混懸液40mg/mL氧嗪酸鉀混懸液。采用次黃嘌呤混懸液10mL/kg灌胃同時(shí)皮下注射氧嗪酸鉀混懸液10mL/kg的方法建立次黃嘌呤和氧嗪酸鉀誘導(dǎo)的小鼠高尿酸血癥模型。第23頁/共35頁2.研究方案3456NYC,StreetAvenue21@rianda_ilham3）預(yù)實(shí)驗(yàn)：將40只高尿酸模型的小鼠隨機(jī)分成4組，每組10只小鼠。

測(cè)量小鼠血清中的尿酸含量并紀(jì)律。分別用同量的普通飼料喂養(yǎng)，隨飼料給予充分的水。四組編號(hào)為a、b、c、d，分別用50mg/kg、100mg/kg、150mg/kg、200mg/kg的花青素提取液灌胃。再測(cè)量灌胃60分鐘后小鼠血清中的尿酸含量。由此確定出花青素是否具有降血清中尿酸的濃度以及降血尿酸的最好效果的最適宜濃度。第24頁/共35頁2.研究方案3456NYC,StreetAvenue21@rianda_ilham4）將高尿酸血癥的小鼠隨機(jī)分成A、B、C三組，每組10只小鼠，實(shí)驗(yàn)前測(cè)定每組小鼠的血尿酸含量。D組小鼠10只，為正常的小鼠，測(cè)定其血清中的尿酸含量。將四組測(cè)量結(jié)果記錄下來。按照上述技術(shù)路線進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。四組小鼠用相同種類和相同重量的飼料喂養(yǎng)，A組灌入純凈水，B組灌入80mg/kg別嘌呤醇，C組灌入預(yù)實(shí)驗(yàn)中測(cè)得的最適濃度的花青素提取液。在經(jīng)過（時(shí)間）以后測(cè)量血清中的尿酸含量。將4組的數(shù)據(jù)記錄下來，與實(shí)驗(yàn)前的數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)比，得出結(jié)論。第25頁/共35頁主要路線研究方案預(yù)期結(jié)果主要路線，研究方案，預(yù)期結(jié)果第26頁/共35頁3.預(yù)期結(jié)果3456NYC,StreetAvenue21@rianda_ilham

A組：前后兩次測(cè)量的血尿酸含量基本一致，高尿酸的癥狀沒有緩解；B組：前后兩次測(cè)量的血尿酸含量差異較大，第二次測(cè)量的值低于第一次的值，高尿酸血癥得到緩解；C組：前后兩次測(cè)量的血尿酸含量差異較大，并且前后的差值大于B組，高尿酸血癥得到緩解；D組：前后兩次測(cè)量的血尿酸含量基本一致，小鼠的的血尿酸的含量低于其余三組。第27頁/共35頁P(yáng)ART4創(chuàng)新性與可行性第28頁/共35頁ADDYOURTITLEHEREf創(chuàng)新性單擊編輯標(biāo)題單擊此處可編輯內(nèi)容，根據(jù)您的需要自由拉伸文本框大小第29頁/共35頁1.創(chuàng)新性3456NYC,StreetAvenue21@rianda_ilham

已知花青素是一類廣泛存在于植物中的水溶性天然色素，屬黃酮類化合物。

黃嘌呤氧化酶是體內(nèi)核酸代謝中重要的酶，廣泛分布于人體心、肺、肝等組織細(xì)胞血漿內(nèi)。XOD能催化黃嘌呤和次黃嘌呤的氧化生成尿酸，并產(chǎn)生過氧化物自由基，尿酸過高會(huì)導(dǎo)致高尿酸血癥。文獻(xiàn)表明在心肌缺血再灌注的過程中，蓮房華花青素具有治療的效果，因此推斷花青素可能具有抑制黃嘌呤氧化酶活性的作用，我們用遷移的思維，將花青素可能擁有的這種作用用于治療高尿酸血癥。第30頁/共35頁ADDYOURTITLEHEREf可行性單擊編輯標(biāo)題單擊此處可編輯內(nèi)容，根據(jù)您的需要自由拉伸文本框大小第31頁/共35頁2.可行性3456NYC,StreetAvenue21@rianda_ilham1）小鼠高尿酸血癥模型的建立已有文獻(xiàn)可以查找到；2）花青素的提取方式已有文獻(xiàn)可以查找到；3）花青素可以直接用灌胃的方式注入小鼠體內(nèi)；4）小鼠血清中的尿酸含量可以直接抽血化驗(yàn)測(cè)得。第32頁/共35頁參考文獻(xiàn)1、 單海麗，單瑞平，傅旭春穿山龍醇提取物對(duì)高尿酸血癥小鼠的治療作用2015（1）2、 劉強(qiáng)藍(lán)莓果中花青素的提取2013（5）3、 施善芬，黎良達(dá)，單愛琴，何永平，周美央，潘翠萍藥用炭治療高尿酸血癥合并慢性腎功能不全患者的臨床研究2013（8）

4、王曙光，李成建別嘌呤醇不良反應(yīng)2004（6）

5、徐春明，龐高陽，李婷花青素的生理活性研究進(jìn)展2013（3）

6、劉學(xué)銘，廖森泰，肖更生，陳衛(wèi)東花青素的吸收與代謝研究進(jìn)展

2007（6）第33頁/共35頁7.張曉暉1，張斌2，龔培力1，曾繁典1蓮房原花青素對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用2004（6）8.王紅珊1，曹毅敏1，楊晉1，吳琳1，李國(guó)豪1，臧林泉2葡萄籽原花青素對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用2012（3）9.蘇友新,陳偉宏,鄭良樸