檢查方法與消毒滅菌

檢查方法與消毒滅菌第1頁/共31頁

一、細菌形態(tài)檢查法一）不染色標(biāo)本檢查法活菌輪廓動力第2頁/共31頁

單染色法復(fù)染色法鑒別染色法革蘭染色抗酸染色莢膜染色鞭毛染色芽胞染色特殊染色法二）染色標(biāo)本檢查法第3頁/共31頁原理：細胞壁結(jié)構(gòu)學(xué)說等電點學(xué)說化學(xué)結(jié)構(gòu)學(xué)說

革蘭染色法（GramStain）由丹麥醫(yī)生HansChristianGram于1884年創(chuàng)立。第4頁/共31頁涂片干燥固定染色水洗、吸干鏡檢一、制備涂片標(biāo)本步驟第5頁/共31頁二、染色結(jié)晶紫初染碘液媒染乙醇脫色復(fù)紅復(fù)染涂片固定第6頁/共31頁紫色——革蘭陽性（G+）菌紅色——革蘭陰性（G-）菌（1）鑒別細菌（2）選擇藥物（3）與致病性有關(guān)意義結(jié)果第7頁/共31頁

細菌學(xué)診斷二、病原菌的檢查原則標(biāo)本的采集和運送避免雜菌污染運送注意保存不同期不同標(biāo)本抗菌素使用前采集病變明顯部位標(biāo)本必須新鮮第8頁/共31頁病原菌的檢查程序藥物敏感試驗標(biāo)本直接涂片鏡檢分離培養(yǎng)生化試驗血清學(xué)鑒定動物試驗明確診斷初步診斷分子生物學(xué)技術(shù)其他檢測技術(shù)觀察菌落形態(tài)染色鏡檢第9頁/共31頁原理

雙份血清標(biāo)本，恢復(fù)期血清中抗體效價比急性期血清中抗體效價升高≥4倍者方有意義結(jié)果判斷血清學(xué)的診斷

--已知抗原檢測未知抗體

--效價高低

--動態(tài)觀察第10頁/共31頁種類凝集試驗--

肥達試驗、外斐試驗、顯微鏡凝集試驗等中和試驗--梅毒VDRL、RPR試驗等沉淀試驗--

抗“O”試驗等補體結(jié)合試驗--

Q熱柯克斯體抗體檢測等第11頁/共31頁殺死物體上病原微生物的方法,并不一定能殺死含芽胞的細菌或非病原微生物

第十二章消毒與滅菌消毒disinfection滅菌sterilization無菌asepsis防腐antisepsis防止或抑制體外細菌生長繁殖不含活菌殺死物體上的所有微生物無菌操作第12頁/共31頁抹布上的細菌菜板上的細菌第13頁/共31頁

熱力滅菌法一、物理消毒滅菌法焚燒----最徹底的滅菌方法燒灼----直接用火焰滅菌方法干烤----加熱160-180℃2小時干熱(dryheat)滅菌法殺菌機理：高溫使菌體蛋白凝固變性紅外線----熱效應(yīng)只在照射表面產(chǎn)生微波----熱效應(yīng)具有一定的穿透性第14頁/共31頁濕熱(moistheat)滅菌法加壓蒸汽滅菌法最有效的滅菌方法121℃煮沸消毒法水煮100℃5分鐘(繁殖體)-2小時(芽胞)流通蒸汽消毒法巴氏消毒法間歇蒸汽滅菌法水蒸汽100℃15-30分鐘(繁殖體)反復(fù)多次流動蒸汽間歇加熱滅菌較低的溫度（61℃30分鐘）殺滅致病菌20-30分鐘第15頁/共31頁濕熱滅菌與干熱滅菌的比較同一溫度下，濕熱比干熱滅菌效果好原因1、濕熱中細菌菌體蛋白較易凝固2、濕熱的穿透力比干熱大3、濕熱的蒸汽有潛熱第16頁/共31頁輻射殺菌法紫外線殺菌機理：波長200-300nm的紫外線具有殺菌作用干擾DNA的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄紫外線穿透力較弱特點：應(yīng)用范圍：空氣及不耐熱物品的表面消毒光復(fù)活作用及光復(fù)活酶第17頁/共31頁殺菌機理：應(yīng)用范圍：電離輻射包括高速電子、X射線和γ射線產(chǎn)生游離基,破壞DNA。一次性醫(yī)用塑料制品的消毒食品的消毒不破壞其營養(yǎng)成分

第18頁/共31頁超聲波殺菌法

超聲波殺菌機理：頻率高于20kHz/s而不被人耳感覺到的聲波過水時的空化作用（空穴效應(yīng)）特點：應(yīng)用范圍：粉碎細胞，提取細胞組分革蘭陰性菌較為敏感第19頁/共31頁濾過除菌法用機械性阻擋除去液體或空氣中的細菌濾菌器

含有微細小孔<0.22微米,只允許液體或氣體通過,而大于孔徑的細菌等顆粒不能通過

適用范圍血清、毒素、抗生素以及空氣等的除菌

第20頁/共31頁濾菌過程第21頁/共31頁低溫與干燥在低溫狀態(tài)下真空抽去水分用途：保存菌種冷凍真空干燥法：第22頁/共31頁二、化學(xué)消毒滅菌法殺菌機理－－使菌體蛋白凝固變性－－使細胞內(nèi)酶失活，干擾細菌的正常代謝－－破壞細菌細胞壁、膜等結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致內(nèi)含物逸出第23頁/共31頁按殺菌能力分類－－可殺死包括芽胞在內(nèi)的所有微生物1、高效消毒劑－－適用于不耐熱力，但要進入體內(nèi)的物品－－包括含氯消毒劑、過氧化物消毒劑醛類消毒劑、環(huán)氧乙烷等第24頁/共31頁2、中效消毒劑－－適用于纖維內(nèi)窺鏡、喉鏡、麻醉器材等－－包括含碘消毒劑、醇類消毒劑等－－不能殺死包括芽胞，可殺死繁殖體（包括結(jié)核分枝桿菌）、真菌、多數(shù)病毒第25頁/共31頁－－可殺死多數(shù)細菌繁殖體，不能殺死芽胞、結(jié)核分枝桿菌、某些抵抗力強的真菌和病毒3、低效消毒劑－－適用于皮膚、粘膜、物體表面和地面等－－包括季胺鹽類消毒劑、氯乙定、高錳酸鉀等第26頁/共31頁龍膽紫干擾氧化、抑制繁殖染料新潔而滅蛋白變性，細胞膜損傷表面活性劑過氧乙酸、碘酒氧化、蛋白沉淀氧化劑紅汞、硫柳汞氧化、蛋白酶變性重金屬鹽高錳酸甲氧化、蛋白沉淀氧化劑乙醇蛋白變性醇類石炭酸蛋白變性，細胞膜損傷酚類常用種類作用機制類別常用消毒劑種類第27頁/共31頁各種消毒劑的應(yīng)用消毒劑常用濃度

適用范圍含氯消毒劑有效氯量4g/L飲水過氧乙酸0.2%-1%皮膚、物體表面、空氣戊二醛2%醫(yī)療器械碘酒2.5%皮膚、黏膜、物體表面碘伏2%皮膚、黏膜、物體表面乙醇75%醫(yī)療器械、皮膚新潔爾滅0.4%-1.6%皮膚、黏膜、物體表面高錳酸鉀1-10g/L皮膚、黏膜、食具、蔬菜等第28頁/共31頁影響消毒劑作用的因素消毒劑細菌

環(huán)境種類濃度作用時間菌齡種類有機物溫度酸鹼度第29頁/共31頁1