梅毒螺旋體抗體的模板

梅毒螺旋體抗體的模板第1頁/共56頁梅毒螺旋體抗體的

檢測原理和臨床意義裴娟第2頁/共56頁問題及概述實(shí)驗(yàn)室檢測注意事項(xiàng)及臨床意義?梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測策略探討第3頁/共56頁問題-1下列哪些說法是錯(cuò)的？①一旦感染梅毒，TPPA常終身陽性②TPPA可用于療效判斷③梅毒孕婦所生嬰兒RPR和TPPA檢測結(jié)果陽性可診斷為胎傳梅毒④RPR只能用于梅毒初篩

第4頁/共56頁問題-1（續(xù)）下列哪些說法是錯(cuò)的？⑤ELISA法不能用于初篩⑥核酸檢測方法可以用于梅毒的血液標(biāo)本檢測⑦二期梅毒時(shí)，TPPA和RPR兩種血清學(xué)試驗(yàn)敏感性均可達(dá)100％第5頁/共56頁問題-2開展RPR/TRUST試驗(yàn)時(shí)應(yīng)采用下面哪種儀器或方法進(jìn)行抗原抗體凝集反應(yīng)：①水平旋轉(zhuǎn)儀②振蕩器③手工水平搖動(dòng)④混懸器第6頁/共56頁問題-3下列描述正確嗎？“TRUST法對(duì)早期、晚期梅毒檢測的敏感性低及治療后梅毒不敏感。例如一組272例抗-TP確認(rèn)陽性樣本，而其只檢測到105例，敏感性為38.2%””，這樣的說法對(duì)嗎？第7頁/共56頁梅毒概述第8頁/共56頁梅毒概述

梅毒是由梅毒螺旋體引起的一種慢性、系統(tǒng)性的全身性傳播疾病。人受感染后，螺旋體很快傳播全身，幾乎可以侵犯全身各個(gè)組織和器官，臨床表現(xiàn)多樣，且時(shí)顯時(shí)隱，病程較長。第9頁/共56頁梅毒概述梅毒病人是唯一的傳染源。性接觸傳染占95%。主要通過性交由破損處傳染，梅毒螺旋體大量存在于皮膚粘膜損害表面，也見于唾液、乳汁、精液、尿液、陰道分泌物。梅毒孕婦可通過胎盤使胎兒在宮內(nèi)感染或出生時(shí)接觸母親有病損的產(chǎn)道受染。未經(jīng)治療的病人在感染一年內(nèi)最具傳染性，隨病期延長，傳染性越來越小，病期超過4年者，通過性接觸無傳染性。第10頁/共56頁梅毒概述臨床上分三期：Ⅰ期（初期）梅毒：感染后3周左右局部出現(xiàn)無痛性硬下疳。4-8周后，硬下疳自愈。Ⅱ期（中期）梅毒：發(fā)生于硬下疳出現(xiàn)后2-8周。Ⅲ期（晚期）梅毒：發(fā)生于感染后2年后，亦可長達(dá)10-15年。Ⅰ、Ⅱ期傳染性強(qiáng)，但破壞性較小。Ⅲ期螺旋體少但破壞性大，若侵害中樞神經(jīng)系統(tǒng)和心血管，可危及生命。第11頁/共56頁梅毒概述

螺旋體抵抗力極弱，對(duì)溫度和干燥特別敏感，離體后在干燥環(huán)境中1-2小時(shí)即死亡，在50℃5分鐘死亡，在4℃置3天后可死亡，因此4℃血庫存放3天以上的血液無傳染梅毒的危險(xiǎn)。對(duì)常用化學(xué)消毒劑亦敏感。第12頁/共56頁梅毒是一個(gè)可以治愈的傳染病病史癥狀實(shí)驗(yàn)室依據(jù)

實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果對(duì)梅毒診斷及判愈有決定性意義！第13頁/共56頁常用實(shí)驗(yàn)室檢查方法病原學(xué)方法血清學(xué)方法第14頁/共56頁病原學(xué)檢測原理：一期、二期梅毒時(shí)，取硬下疳、扁平濕疣、黏膜斑等皮損部位組織液或淋巴結(jié)穿刺術(shù)得到的組織液，在暗視野顯微鏡下，光線從聚光器的邊緣斜射到涂片上的梅毒螺旋體而發(fā)出亮光，從而可根據(jù)其特殊形態(tài)和運(yùn)動(dòng)方式進(jìn)行檢測。方法：（1）暗視顯微鏡檢查（2）鍍銀染色法（3）核酸檢測（血液標(biāo)本？）注：梅毒螺旋體目前體外人工培養(yǎng)還沒有獲得成功，僅能通過接種兔睪丸等部位進(jìn)行有限增殖。第15頁/共56頁病原學(xué)檢查

病原學(xué)檢查的臨床意義：螺旋體檢查是診斷早期梅毒的最佳方法，對(duì)于患者的早期診斷、及時(shí)治療、預(yù)后和盡早切斷傳染源都有十分重要的意義。如未見到梅毒螺旋體，并不能排除患梅毒的可能性。第16頁/共56頁血清學(xué)方法(1)非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)（非特異性梅毒抗體）

(2)梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)（特異性梅毒抗體）問題：為什么梅毒診斷需要上述兩類血清學(xué)檢測方法？第17頁/共56頁非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)原理

梅毒螺旋體一旦感染人體，宿主可對(duì)螺旋體表面的脂質(zhì)作出免疫應(yīng)答，產(chǎn)生抗類脂抗原的抗體（非特異性抗體）。未經(jīng)治療的病人，其血清內(nèi)的非特異性抗體可長期存在。經(jīng)正規(guī)治療后，非特異性抗體可以逐漸減少滴度至轉(zhuǎn)為陰性。問題：臨床上非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)為什么需要做定性和定量兩種檢測方法？第18頁/共56頁非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)原理

方法包括：（1）快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)(RPR)（2）甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（TRUST）（3）性病研究實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)(VDRL)等?；境煞质切牧字蚜字湍懝檀伎乖贵w結(jié)合形成復(fù)合物，凝集成網(wǎng)狀沉淀顆粒被肉眼所見上述方法的敏感性和特異性都基本相似

第19頁/共56頁非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)操作要點(diǎn)1、儀器：水平旋轉(zhuǎn)儀，調(diào)轉(zhuǎn)速（100轉(zhuǎn)/分），調(diào)轉(zhuǎn)幅（18mm）。

2、定性試驗(yàn)加樣：吸取0.05mL血清(漿)放在卡片圈中，并均勻地涂布在整個(gè)圈內(nèi)加抗原：將抗原輕輕搖勻，用9號(hào)針頭加1滴抗原反應(yīng)：水平旋轉(zhuǎn)儀旋轉(zhuǎn)8分鐘(23℃-29℃），亮光下觀察結(jié)果

(60滴/mL，1滴=17ul)第20頁/共56頁非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)操作要點(diǎn)3、定量試驗(yàn)血清稀釋度:1:21:41:81:161:321:641:1281:2561:512第21頁/共56頁非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)臨床意義早期梅毒（一期、二期）經(jīng)足量規(guī)則抗梅毒治療后：一期梅毒1年后轉(zhuǎn)為陰性。二期梅毒2年后轉(zhuǎn)為陰性。晚期梅毒治療后血清滴度下降緩慢，2年后約50%病人血清反應(yīng)仍為陽性。第22頁/共56頁非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)

臨床意義

非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)方法簡單、快速、敏感性和特異性較好。適用于大量人群的篩查。因治療后血清滴度可下降并陰性，故可作為療效觀察、判愈、復(fù)發(fā)或再感染的指征。VDRL試驗(yàn)用于神經(jīng)梅毒腦脊液檢測特異性高，檢測陽性可以作為神經(jīng)梅毒確診依據(jù)，但敏感性較低，即檢測陰性不能排除晚期神經(jīng)梅毒。第23頁/共56頁非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)特點(diǎn)

假陽性反應(yīng)技術(shù)性假陽性反應(yīng)一般是由于操作錯(cuò)誤引起的假陽性反應(yīng)，經(jīng)過重復(fù)試驗(yàn)即可排除。生物學(xué)假陽性反應(yīng)(一般滴度小于1:8），應(yīng)采用梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)如TPPA等進(jìn)行排除。第24頁/共56頁非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)特點(diǎn)

由于感染梅毒后反應(yīng)素的出現(xiàn)晚于特異性梅毒螺旋體抗體，晚期梅毒反應(yīng)素又可能轉(zhuǎn)陰，對(duì)隱性梅毒和神經(jīng)梅毒也不敏感。因此，做梅毒初篩時(shí)，存在一定數(shù)量的漏檢。第25頁/共56頁梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)原理

抗原為梅毒螺旋體特異蛋白（包括螺旋體重組特異抗原），檢測梅毒患者血中特異性抗梅毒螺旋體抗原的抗體。感染梅毒螺旋體后，一旦梅毒螺旋體抗體試驗(yàn)呈陽性，則患者終身陽性。問題：梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)的定量試驗(yàn)在梅毒診療中有意義嗎？第26頁/共56頁梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)方法

梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)(TPPA)梅毒螺旋體血球凝集試驗(yàn)(TPHA)

梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA）梅毒免疫層析法-梅毒快速檢測(RT)熒光螺旋體抗體吸收試驗(yàn)（FTA-ABS）梅毒螺旋體蛋白印跡試驗(yàn)（WB）第27頁/共56頁TPPA

TPPA試驗(yàn)用梅毒螺旋體致敏明膠顆粒人血清中的抗梅毒螺旋體抗體結(jié)合，產(chǎn)生可見的凝集反應(yīng)，具有較高的敏感性和特異性。TPPA是目前WHO公認(rèn)的梅毒抗原血清學(xué)試驗(yàn)的“金標(biāo)準(zhǔn)”，常用于新方法、新試劑的參照標(biāo)準(zhǔn)。第28頁/共56頁TPPA試驗(yàn)原理示意圖明膠顆粒+梅毒抗原=抗原致敏顆粒+血液中抗體=抗原抗體凝集

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明膠顆粒+梅毒抗原=抗原致敏顆粒

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抗原致敏顆粒+血液中抗體=抗原抗體凝集第29頁/共56頁TPPA試驗(yàn)結(jié)果判讀敏感性4+：粒子光滑覆蓋整個(gè)孔底，有時(shí)邊緣有折疊3+：粒子光滑覆蓋大部分底2+：粒子光滑聚集覆蓋孔底，周圍有一細(xì)胞環(huán)病期1+：粒子光滑集聚覆概孔底，周圍有一明顯細(xì)胞環(huán)±：粒子沉集孔底，中央形成一小點(diǎn)–：粒子緊密沉積孔底中央第30頁/共56頁ELISA/CLIA

ELISA試驗(yàn)是用重組梅毒螺旋體抗原包被固相板條，加上梅毒血清和單克隆抗體酶標(biāo)記物，形成抗原抗體復(fù)合物與酶標(biāo)記物結(jié)合，用酶聯(lián)檢測儀判定試驗(yàn)陽性反應(yīng)。本法可用于大樣本血清檢測。化學(xué)發(fā)光法的臨床應(yīng)用意義基本同ELISA化學(xué)發(fā)光法的敏感性？第31頁/共56頁梅毒免疫層析快速檢測方法

梅毒免疫層析快速檢測方法（血清、血漿法）第32頁/共56頁梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)臨床意義

作為非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)(如RPR、TRUST等)初篩陽性標(biāo)本的確證試驗(yàn)，排除RPR、TRUS假陽性。不能區(qū)分既往感染和現(xiàn)癥感染，應(yīng)結(jié)合非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行診斷。

TPPA等梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)不能作為療效觀察的指標(biāo)。第33頁/共56頁梅毒血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果解釋試驗(yàn)結(jié)果

參考結(jié)果解釋梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)陽性陽性可能為現(xiàn)癥梅毒陰性陽性非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)假陽性陽性陰性臨床治愈的早期梅毒（既往感染者）陰性陰性排除梅毒感染或極早期感染第34頁/共56頁問題：此結(jié)果解釋適用于先天（胎傳）梅毒嗎？第35頁/共56頁先天（胎傳）梅毒的實(shí)驗(yàn)室診斷依據(jù)

查到螺旋體。其抗心磷脂抗體滴度持續(xù)上升，可用RPR半定量試驗(yàn)每月檢測1次，連續(xù)6個(gè)月，檢測效價(jià)，效價(jià)增高或穩(wěn)定在高水平，表明是先天梅毒。如抗體來自母體IgG，通常在2-3月內(nèi)消失。其抗心磷脂抗體滴度高于其母親四倍（2個(gè)稀釋滴度）。檢測抗梅毒的IgM特異性抗體陽性。隨訪18個(gè)月觀察抗體的變化（哪一類抗體？）第36頁/共56頁梅毒IgM抗體（TP-IgM）IgM抗體的產(chǎn)生是感染后的早期體液免疫應(yīng)答反應(yīng)。IgM分子比IgG較大，所以IgM抗體不能通過胎盤屏障。而母親的IgG抗體可以通過胎盤屏障傳給胎兒。因此若在新生兒血中檢測到IgG抗體不能作為先天梅毒的診斷依據(jù)，而IgM抗體可為先天梅毒的診斷依據(jù)。

IgM抗體檢測其特異性較高，但敏感性較低。因此，IgM抗體檢測陰性，不能排除先天梅毒感染。第37頁/共56頁先天（胎傳）梅毒的實(shí)驗(yàn)室診斷依據(jù)

查到螺旋體其抗心磷脂抗體滴度持續(xù)上升（TRUST,RPR）其抗心磷脂抗體滴度高于其母親四倍（2個(gè)稀釋滴度）檢測抗梅毒的IgM特異性抗體陽性隨訪18個(gè)月觀察抗體的變化（特異性抗體）第38頁/共56頁規(guī)范化梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測基本要求一、根據(jù)目的選擇檢測方法及檢測策略。二、人員檢測技術(shù)人員需經(jīng)過上崗培訓(xùn)。接受上崗培訓(xùn)內(nèi)容應(yīng)包括：梅毒檢測相關(guān)基礎(chǔ)知識(shí)、梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)基本實(shí)驗(yàn)操作要求、結(jié)果解讀及臨床意義、質(zhì)量保證與生物安全等。三、試劑常規(guī)血清學(xué)檢測應(yīng)采用經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊(cè)批準(zhǔn)的試劑。因不同廠家生產(chǎn)的同一種試劑的敏感性和特異性存在一定的差異，建議選擇臨床質(zhì)量評(píng)估敏感性和特異性高的試劑。所有試劑須嚴(yán)格按要求妥善保存，并控制在有效期內(nèi)使用。第39頁/共56頁血清學(xué)檢測試劑的種類非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)：快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)(RPR)甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（TRUST）性病研究實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)(VDRL)梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)：梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)(TPPA)梅毒螺旋體血球凝集試驗(yàn)(TPHA)梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）梅毒免疫層析法-梅毒快速檢測(RT)熒光螺旋體抗體吸收試驗(yàn)（FTA-ABS）化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA）梅毒IgM抗體檢測（IgM）梅毒螺旋體蛋白印跡試驗(yàn)（WB）第40頁/共56頁P(yáng)CR技術(shù)應(yīng)用于檢測梅毒螺旋體DNA

特異性強(qiáng)，敏感性高，是目前診斷梅毒螺旋體的先進(jìn)方法。

(1)標(biāo)本采集和處理：可采集局部分泌物、淋巴結(jié)液、羊求、血清、腦脊液等標(biāo)本，用煮沸或低速離心或堿裂解等方法從標(biāo)本中提取DNA模板。

(2)診斷意義及評(píng)價(jià)

1)敏感性和特異性較高：尤其對(duì)無臨床表現(xiàn)、血清學(xué)為陰性的可疑梅毒、神經(jīng)性梅毒、胎傳梅毒等具有較好的輔助診斷價(jià)值。

2)不能區(qū)分活的和死的螺旋體，一般不用于梅毒治療后的復(fù)查。但死亡的梅毒螺旋體經(jīng)15～30天即從機(jī)體內(nèi)清除，故治療數(shù)周后PCR陽性意昧著持續(xù)感染的可能。

第41頁/共56頁問題1下列哪些說法是錯(cuò)的？①一旦感染梅毒，TPPA常終身陽性②TPPA可用于療效判斷③梅毒孕婦所生嬰兒RPR和TPPA檢測結(jié)果陽性可診斷為胎傳梅毒④RPR只能用于梅毒初篩第42頁/共56頁問題-1下列哪些說法是錯(cuò)的？⑤ELISA法不能用于初篩.⑥核酸檢測方法可以用于梅毒的血液標(biāo)本檢測⑦二期梅毒時(shí)，TPPA和RPR兩種血清學(xué)試驗(yàn)敏感性均可達(dá)100％第43頁/共56頁問題-2

開展RPR/TRUST試驗(yàn)時(shí)應(yīng)采用下面哪種儀器或方法進(jìn)行抗原抗體凝集反應(yīng)：①水平旋轉(zhuǎn)儀（√）②振蕩器③手工水平搖動(dòng)④混懸器第44頁/共56頁問題-3下列描述正確嗎？“TRUST法對(duì)早期、晚期梅毒檢測的敏感性低及治療后梅毒不敏感，如本組272例抗-TP確認(rèn)陽性樣本，而其只檢測到105例，敏感性為38.2%””。第45頁/共56頁一期梅毒實(shí)驗(yàn)室檢查1.暗視野顯微鏡檢查：皮膚粘膜損害或淋巴結(jié)穿刺液可查見梅毒螺旋體。2.非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)實(shí)驗(yàn)：

VDRLRPRTRUST

梅毒病灶出現(xiàn)1-2周時(shí)，血清中反應(yīng)素(抗體)陽性率為53%-83%，如感染不足2-3周，也可為陰性，應(yīng)于感染后4周復(fù)查。

3.梅毒螺旋體抗原血清學(xué)實(shí)驗(yàn)：

FTA-ABS:在第一期梅毒的頭幾天就可測出特異性抗體，尤其適用于與早期梅毒的診斷。

FTA-ABS-DSTPHATPPA:TP-ELISA:此法可用于各期梅毒診斷,對(duì)感染血清靈敏度為95%.

極早期少數(shù)可為陰性。第46頁/共56頁二期梅毒實(shí)驗(yàn)室檢查暗視野顯微鏡檢查：二期皮損的尤其是扁濕平疣，濕丘疹及黏膜斑，可查見梅毒螺旋體。非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)實(shí)驗(yàn)：陽性梅毒螺旋體抗原血清學(xué)實(shí)驗(yàn)：陽性第47頁/共56頁三期梅毒（晚期）實(shí)驗(yàn)室檢查非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)實(shí)驗(yàn)：大多陽性，也可陰性。梅毒螺旋體抗原血清學(xué)實(shí)驗(yàn)：陽性第48頁/共56頁前帶現(xiàn)象

非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)實(shí)驗(yàn)（如RPR,TRUST）中，有時(shí)由于血清抗體水平太高，抗原抗體比例不合適，而出行弱陽性，不典型或陰性的結(jié)果，但臨床上又有典型的二期梅毒癥狀，將血清稀釋后再做血清學(xué)試驗(yàn)，出現(xiàn)了陽性結(jié)果，稱為前帶現(xiàn)象。第49頁/共56頁引起梅毒免疫學(xué)檢測假陽性的因素1.內(nèi)源性：RF因子，補(bǔ)體，高濃度的非特異性免疫球蛋白，異嗜性抗體，某些自身抗體，在ELISA測定中，可與其固相上包被的特異性抗體IgG以及隨后加入的酶標(biāo)抗體結(jié)合，出現(xiàn)假陽性。第50頁/共56頁引起梅毒免疫學(xué)檢測假陽性的因素2.外源性：標(biāo)本溶血，被細(xì)菌污染，儲(chǔ)存時(shí)間過長，標(biāo)本凝固不全等。（1）血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán)，有類似過氧化物的活性，在以HRP為標(biāo)志酶的ELISA測定中，若溶血，血紅蛋白很容易在溫育過程中吸附于固相，從而與后加入的HRP底物反應(yīng)顯色。（2）標(biāo)本被細(xì)菌污染，則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶本身會(huì)對(duì)相應(yīng)酶標(biāo)記的測定方法產(chǎn)生非特異性干擾。第51頁/共56頁引起梅毒免疫學(xué)檢測假陽性的因素（3）血液凝固不全，血清中仍然殘留部分纖維蛋白原，若將其加入微孔中，在溫育過程中仍可形成肉眼可見的纖維蛋白快，易造成假陽性。第52頁/共56頁引起梅