消化系統(tǒng)疾病動物模型

消化系統(tǒng)疾病動物模型第1頁/共95頁講授內(nèi)容胃炎動物模型消化性潰瘍模型病毒性肝炎模型（乙型肝炎）脂肪肝、肝硬化模型胰腺炎模型2023/4/162第2頁/共95頁2023/4/163第一節(jié)

急性胃炎動物模型

第3頁/共95頁2023/4/164Gastritis胃黏膜層的炎癥（上皮細胞、固有層、黏膜?。┥掀ぜ毎逃袑羽つぜ〖毙怨逃袑又行粤＜毎櫭訝€出血慢性淺表性：淋巴細胞、漿細胞浸潤萎縮性：炎性細胞浸潤，固有層腺

體減少，細胞增生損傷與修復交替進行，病程遷延第4頁/共95頁胃炎模型的種類2023/4/1651、HP法2、藥物、乙醇、應激法3、非甾體抗炎藥法4、復合法5、酸制劑法第5頁/共95頁2023/4/166HP法Helicobacterpylori

Spiral-shapedGram-negative,oxidaseandcatalase-positivemotilebacteriumwith4-6flagella(Thrusterandanchor)Microaerophilic,i.e.itrequiresoxygenbutatlowerlevelsthanthosecontainedintheatmosphere(5-8%)Withitsflagellaanditsspiralshape,thebacteriumdrillsintothemucuslayerofthestomach,andcaneitherbefoundsuspendedinthegastricmucosaorattachedtoepithelialcellsBarryJ.MarshallandJ.RobinWarrengottheNobelPrizein20052005諾貝爾醫(yī)學獎，Warren和Marshall第6頁/共95頁2023/4/167Producesadhesinswhichbindtomembrane-

associatedlipidsandcarbohydratesandhelpits

adhesiontoepithelialcellsBreaksdownurea(NH2CONH2)toNH3andHCO-3Stomachacidity

ChassaingB.Gastroenterology,2011,140(6):1720–8第7頁/共95頁2023/4/168實驗動物小鼠（18-22g），蒙古沙鼠（55-60g），仔犬、仔豬操作方法HP標準菌株灌胃（109-1010CFU/ml）法實驗前12小時禁食禁水實驗前1小時，0.1mol/L碳酸氫鈉0.5ml灌胃0.5ml/只/次每兩天一次（隔天灌胃）8周時模型成功率90%保證HP活性及濃度第8頁/共95頁2023/4/169INFLAMMATIONGASTRITISMAP3KINASESmuropeptideNaumannM,TrendsinMicrobiology,2004,12(1):29–36H.Pyloriinducesinflammation第9頁/共95頁2023/4/1610體重300g左右雄性Wistar大鼠。酸制劑法急性胃炎動物模型實驗動物第10頁/共95頁

大鼠禁食24h，在清醒狀態(tài)下，用下述試劑或物質(zhì)灌胃：（1）水楊酸制劑（如20mmol/L阿司匹林或水楊酸溶液）按100mg/kg體重灌胃；（2）10mmol/L的醋酸；（3）不同濃度的鹽酸（1，10，100mmol/L）；（4）同種動物膽汁；（5）2mmol/L的?；悄懰?；（6）15%的乙醇；

（2）-（6）可單獨或幾種合用（2ml左右）灌胃；

急性胃炎動物模型操作方法第11頁/共95頁2023/4/1612

4h后處死動物，剖檢可見胃內(nèi)發(fā)生急性彌漫性炎癥改變。

胃黏膜表面有淺表糜爛、出血，粘膜層內(nèi)見中性粒細胞浸潤。急性胃炎動物模型結(jié)果病變第12頁/共95頁2023/4/1613第13頁/共95頁2023/4/1614觀察指標：？組織：HE，免疫熒光，干濕重比等NOS，PGE2等PCR：特定基因或炎癥因子Western：特定激酶或信號分子，特定基因等……第14頁/共95頁2023/4/1615第二節(jié)

急性胃潰瘍動物模型

第15頁/共95頁2023/4/1616潰瘍病的病因致潰瘍因素:胃酸、胃蛋白酶、非甾體抗炎藥不合理應用、幽門螺桿菌感染等。防御因素：粘液-碳酸氫鹽屏障、粘膜屏障、粘膜血流量、胃上皮細胞的更新、表皮生長因子和內(nèi)生性前列腺素等。潰瘍的形成主要由于防御因素和致潰瘍因素的平衡失調(diào)所致。第16頁/共95頁2023/4/1617

①

應激法②幽門結(jié)扎法③藥物法④醋酸法常用的方法急性胃潰瘍動物模型

在抗?jié)兯幬锼幮W試驗中，應激法、幽門結(jié)扎法和醋酸法制備的胃潰瘍模型為必做實驗，利血平法和乙醇法可任選其一。乙醇組胺促胃液素腎上腺類固醇水楊酸鹽血清素利血平保泰松……第17頁/共95頁2023/4/1618

①應激法②幽門結(jié)扎法③藥物法④醋酸法常用的方法急性胃潰瘍動物模型治療性給藥——醋酸法復制的模型預防性給藥——其他模型乙醇組胺促胃液素腎上腺類固醇水楊酸鹽血清素利血平保泰松……第18頁/共95頁2023/4/1619

①應激法②幽門結(jié)扎法③藥物法④醋酸法常用的方法急性胃潰瘍動物模型陽性對照藥：H2受體拮抗藥——西咪替丁，雷尼替丁，法莫替丁等加強胃黏膜防御功能——甘珀酸，果膠鉍，硫糖鋁乙醇組胺促胃液素腎上腺類固醇水楊酸鹽血清素利血平保泰松……第19頁/共95頁2023/4/1620研究抗胃潰瘍藥物

胃黏膜形態(tài)觀察胃分泌試驗胃黏膜血流量測量胃粘液測定抗炎鎮(zhèn)痛試驗抑制幽門螺桿菌試驗等

第20頁/共95頁2023/4/1621幽門結(jié)扎法胃潰瘍模型

第21頁/共95頁2023/4/1622

幽門結(jié)扎后，可刺激胃液分泌并使高酸度胃液在胃中潴留，損傷胃黏膜造成胃潰瘍。

成年大鼠，雄雌均可。幽門結(jié)扎法胃潰瘍模型造模機制實驗動物第22頁/共95頁2023/4/16231.給藥3天。實驗前大鼠禁食(24h)不禁水。2.自胸骨劍突下沿腹中線切開腹壁，切口約2~3cm。在左側(cè)肋緣部位用手指輕輕上推暴露胃。3.在胃幽門與十二指腸連接處用結(jié)扎線將幽門結(jié)扎，注意勿將鄰近的其他器官、血管結(jié)扎。同時經(jīng)十二指腸給予受試藥。縫合腹壁切口，用紗布包扎切口。幽門結(jié)扎法胃潰瘍模型操作方法第23頁/共95頁2023/4/16244.幽門結(jié)扎后，停止供水供食，術后18h處死大鼠，取胃固定、剖檢。5.沿胃大彎剪開胃壁，洗凈胃內(nèi)容物，將胃壁展開，胃黏膜面向上用大頭釘固定在蠟板上。6.用肉眼或放大鏡觀察胃黏膜面，記錄每只動物產(chǎn)生的潰瘍數(shù)、潰瘍程度、潰瘍面積（或潰瘍指數(shù)）及病變的情況。幽門結(jié)扎法胃潰瘍模型第24頁/共95頁2023/4/1625病變程度的評價1—潰瘍面積

通過潰瘍中心量取的最大縱徑和橫徑

S=π（d1/2）（d2/2）

式中S為潰瘍面積，d1為通過潰瘍中心量取的最大縱徑，d2為通過潰瘍中心量取的最大橫徑。

幽門結(jié)扎法胃潰瘍模型第25頁/共95頁2023/4/1626病變程度的評價2—潰瘍指數(shù)

可計數(shù)前胃部潰瘍面積，以其總和作為潰瘍指數(shù)。幽門結(jié)扎法胃潰瘍模型第26頁/共95頁2023/4/1627病變程度的評價3—潰瘍程度（Okabe法）

在解剖顯微鏡下測量潰瘍面積，將每只鼠潰瘍面積的總合分為5個等級作為潰瘍指數(shù)：潰瘍面積(mm2)：

1-1213-2526-3738-50≥50mm2或穿孔潰瘍指數(shù):1級2級3級4級5級幽門結(jié)扎法胃潰瘍模型第27頁/共95頁2023/4/1628

模型組潰瘍指數(shù)－給藥組潰瘍指數(shù)潰瘍抑制百分率＝×100%

模型組潰瘍指數(shù)

發(fā)生潰瘍的動物數(shù)潰瘍發(fā)生百分率＝×100%

實驗動物數(shù)病變程度的評價3—潰瘍程度（Okabe法）幽門結(jié)扎法胃潰瘍模型第28頁/共95頁2023/4/1629

形成的潰瘍主要發(fā)生在對胃液抵抗力較弱的前胃部（瘤胃），多為圓形或橢圓形。但病變較表淺，屬于胃黏膜急性出血性糜爛，與人類胃潰瘍的典型病變差距較大。結(jié)果幽門結(jié)扎法胃潰瘍模型第29頁/共95頁2023/4/1630

1.該模型是Shay等創(chuàng)立的模型，方法簡單，潰瘍發(fā)生快，發(fā)生率達97%，主要用于觀察藥物對潰瘍形成的預防作用。幽門結(jié)扎法胃潰瘍模型模型評價與注意事項

2.原法規(guī)定大鼠禁食48~72h。一般經(jīng)驗是：體重小于180g，禁食24~48h，這樣動物可以耐受手術；體重超過180g，禁食48~72h，可提高潰瘍發(fā)生率。3.對籠具的要求。第30頁/共95頁2023/4/16314.術中要求。幽門結(jié)扎法胃潰瘍模型模型評價與注意事項5.觀察藥物對潰瘍的影響時，動物應預先給藥或同時給藥，若粗制劑可采用灌胃給藥，應確認胃內(nèi)已排空后方能結(jié)扎幽門。粗制劑可在幽門結(jié)扎的同時采用十二指腸內(nèi)注入給藥較好。

6.陽性對照藥:灌胃給予西咪替丁（甲氰咪胍）1.0g/kg體重雷尼替丁0.135g/kg體重第31頁/共95頁2023/4/1632大鼠胃的解剖及幽門結(jié)扎法所致胃潰瘍圖第32頁/共95頁2023/4/1633第33頁/共95頁大鼠慢性胃潰瘍模型第34頁/共95頁第35頁/共95頁2023/4/1636第三節(jié)

急性和慢性肝損傷動物模型

第36頁/共95頁2023/4/1637常用的肝損傷物質(zhì)四氯化碳D-半乳糖胺硫代乙酰胺刀豆蛋白A

第37頁/共95頁2023/4/1638一、四氯化碳急性肝損傷模型第38頁/共95頁

CCl4在肝內(nèi)經(jīng)NADPH和肝微粒體細胞色素P450混合功能氧化酶的作用，生成活潑的三氯甲基自由基（CCl3?）和氯自由基（Cl3?）。這些自由基能與細胞內(nèi)和細胞膜上大分子發(fā)生共價結(jié)合，引起富含不飽和脂肪酸的生物膜發(fā)生脂質(zhì)過氧化，導致膜結(jié)構(gòu)和功能完整性的破壞，肝細胞損傷壞死；三氯甲基自由基還能抑制細胞膜和微粒體膜上鈣泵的活性，使Ca2+內(nèi)流增加，從而引起細胞中毒死亡；三氯甲基自由基能與蛋白質(zhì)形成共價鍵，損害線粒體使NADH及ATP在肝內(nèi)生成減少，脂肪酸氧化受抑制，影響肝臟能量生成障礙，并使三酰甘油和脂肪酸在肝細胞內(nèi)蓄積。造模機制CCl4急性肝損傷模型第39頁/共95頁常用實驗動物CCl4致急性肝損傷所需劑量和用法動物(CCl4)劑量用法形成肝損傷

(ml/kg體重)所需時間

0.5%10頸背部皮下注射1次約24h小鼠0.1%10腹腔注射1次約24h0.2%10于1、4、7日各灌胃1次末次后12~24h25%5皮下注射1次1~8d

大鼠25%5皮下注射2次,間隔4日1~8d

15%1每隔3日灌胃1次，共3次末次后16h

家兔50%0.5皮下注射1次，共3次

4~7d

33%1.5隔日灌胃1次，共2次7d

CCl4急性肝損傷模型第40頁/共95頁2023/4/16411.根據(jù)所用CCl4劑量和時間的不同，肝臟的損傷程度不同；2.一般在給予CCl4后16~24h血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）和天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）活性升高，并能反映肝損傷的程度；3.形態(tài)學上表現(xiàn)為肝小葉中央?yún)^(qū)壞死和脂肪變性。結(jié)果CCl4急性肝損傷模型第41頁/共95頁2023/4/16421.根據(jù)所用CCl4劑量和時間的不同，肝臟的損傷程度不同；2.一般在給予CCl4后16~24h血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）和天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）活性升高，并能反映肝損傷的程度；3.形態(tài)學上表現(xiàn)為肝小葉中央?yún)^(qū)壞死和脂肪變性。結(jié)果CCl4急性肝損傷模型第42頁/共95頁第43頁/共95頁2023/4/1644第44頁/共95頁2023/4/1645CCl4急性肝損傷模型第45頁/共95頁2023/4/16461．CCl4肝損傷模型是最常用的急性肝損傷模型，造模方法簡單，成功率高，重復性好，價格低廉。2．CCl4劑量不宜過大，以免造成動物中毒死亡。3．CCl4是無色澄清的有毒液體，難溶于水，一般用花生油、橄欖油、豆油等植物油混合成所需濃度。模型評價與注意事項CCl4急性肝損傷模型第46頁/共95頁2023/4/1647四氯化碳的配制

CCl4常配成乳劑使用，如需配成10%乳劑，可取5ml植物油和5g阿拉伯膠，放在乳缽中研勻，再加純CCl410ml研勻，然后加蒸餾水10～15ml調(diào)成乳狀，最后加蒸餾水使體積至100ml，用前搖勻。第47頁/共95頁2023/4/16484．用CCl4復制肝損傷模型的主要缺點是，不同動物個體肝損傷的程度差異較大。小鼠接受CCl4后肝臟病理學改變與血清ALT等生化指標改變的相關性不如大鼠好。5．CCl4可從呼吸道、皮膚吸收，對人體有毒性，注意防護。模型評價與注意事項CCl4急性肝損傷模型第48頁/共95頁病毒性肝炎模型（HBV）2023/4/1649全球因乙肝死亡100萬/年，居第7位。我國30萬第49頁/共95頁2023/4/1650第50頁/共95頁乙肝病毒（HBV）的特性

2023/4/1651（1）HBV具有頑強的抵抗力：對熱、對低溫、對干燥、對紫外線及一般濃度的化學消毒劑，都能耐受；在零下20度時可存活20年；在37度時可存活7天。（2）HBV的嗜肝性：PreS1和S2特異識別肝細胞表面受體（3）嚴格的種屬特性：到目前為止，只有人、黑猩猩、長臂猿、狒狒對HBV易于感染第51頁/共95頁2023/4/1652structuralmaintenanceofchromosomes，Smc5/6DecorsièreAetal.Nature.2016Mar17;531(7594):386-9.HepatitisBvirusencodestheregulatoryHBxproteinwhoseprimaryroleistopromotetranscriptionoftheviralgenome,whichpersistsasanextrachromosomalDNAcircleininfectedcells.第52頁/共95頁2023/4/1653目前唯一的HBV自然感染動物模型HLA-I分子和HBV的CTL多肽表位與人類有重疊，可用于研究HBV感染的CTL應答價格昂貴，存在倫理學限制大猩猩（Gorilla）第53頁/共95頁樹鼩（Treeshrew/Tupaiabelangeri）2023/4/1654與松鼠大小相近，與靈長類動物親緣關系較近可被HBV感染，但感染率極低。將HBsAg和HBeAg陽性患者血清0.5ml經(jīng)股靜脈接種。幼年和圍生期樹鼩感染率較高成本低、操作方便、倫理限制弱2012年樹鼩肝細胞發(fā)現(xiàn)有HBV和丁肝病毒的共受體：鈉離子-牛磺膽酸共轉(zhuǎn)運多肽（sodiumtaurocholatecotransportingpeptide，NTCP）YanH,.JVirol.2013Jul;87(14):7977-91.第54頁/共95頁鴨（Duck）2023/4/1655采用肌肉注射、靜脈注射、腹腔甚至肝內(nèi)注射、鴨胚靜脈注射等方式將DHBV注射到鴨體內(nèi)，感染率比較高。可用來研究HBV表面受體、病毒復制和基因突變；研究病毒持續(xù)存在和清除機制，藥物篩選等成本低、操作方便、倫理限制弱，與人的親源關系遠，研究成果的實際轉(zhuǎn)化受限ZhangYY,FrontMed.2014Jun;8(2):129-34.MasonWS.ColdSpringHarbPerspectMed.2015Apr1;5(4).第55頁/共95頁2023/4/1656旱獺（Woodchuck）第56頁/共95頁小鼠（mouse）2023/4/1657采用高壓水動力法向小鼠尾靜脈注射HBV質(zhì)粒DNA，適合研究HBV變異株的生物學特性研究針對HBV的免疫應答，免疫調(diào)節(jié)、天然免疫等；建立可持續(xù)感染模型++IannaconeM,ColdSpringHarbPerspectMed.2015Aug20;5(11).第57頁/共95頁2023/4/1658第四節(jié)

脂肪肝和肝硬化動物模型第58頁/共95頁脂肪肝模型2023/4/1659NAFLD（nonalcoholicfattyliverdisease）特殊品系動物1、ADK（－/－）小鼠：

2002年美國蘇黎士大學Boison所發(fā)現(xiàn)建立。胚胎期發(fā)育正常，于出生后4天即發(fā)生肝細胞小泡性脂肪變性，并于14天內(nèi)死于脂肪肝。2、FLS小鼠模型：1999年日本Soga等利用近親繁殖的方法建立。自發(fā)形成脂肪肝，不伴有肥胖和糖尿病。3、JVS小鼠模型：1996年KuwajimaM等發(fā)現(xiàn)幼年內(nèi)臟脂肪變小鼠（juvenilevisceralsteatosismouse，JVS小鼠）存在原發(fā)性肉毒堿缺乏，使脂肪酸轉(zhuǎn)運入線粒體的過程受阻，脂肪酸在肝細胞漿內(nèi)積聚。4、ArKO小鼠：

Australia亨利醫(yī)學研究院Robert等建立。芳香酶Cyp9（摧化C19類固醇轉(zhuǎn)化為C18雌激素）基因敲除小鼠不能合成內(nèi)源性雌激素，無論雌性或雄性鼠，腹腔內(nèi)脂肪細胞的體積和數(shù)量增加。ArKO小鼠肝臟具有特征性的大量脂肪滴積累。

第59頁/共95頁2023/4/16605、BHE大鼠：BerdanierCD1991年發(fā)現(xiàn)的一種生后300天自發(fā)形成糖耐量異常，導致高脂血癥、脂肪肝，但無肥胖的特殊種系。6、PBB/Ld小鼠：HuntCE1976年發(fā)現(xiàn)，隨成熟期的成長自發(fā)形成特征性的脂肪組織細胞結(jié)構(gòu)增加、血清免疫反應性胰島素增加、糖耐量減低、脂肪肝和高脂血癥。為研究成年起始肥胖的一個代表小鼠品系。7、Zucker大鼠（fa/farat）和ob/ob小鼠（ob/obmice）：遺傳性食欲抑制激素leptin的基因缺乏鼠，可發(fā)生高胰島素血癥、胰島素抵抗而自發(fā)形成糖尿病、肥胖和脂肪肝。第60頁/共95頁2023/4/1661肝纖維化

肝纖維化是指各種致肝臟損傷因素長期反復作用于肝臟，引起肝細胞變性、壞死和炎癥，在修復過程中導致ECM異常增多和過度沉積的病理過程。肝纖維化的形成，主要是由于肝星狀細胞激活，ECM成分生成過多，降解相對不足，膠原等ECM在肝內(nèi)大量沉積所致。第61頁/共95頁2023/4/1662病因與分類病毒性肝纖維化血吸蟲性肝纖維化酒精性肝纖維化膽汁性肝纖維化代謝性肝纖維化中毒性肝纖維化營養(yǎng)不良性肝纖維化心源性肝纖維化四氯化碳誘發(fā)第62頁/共95頁2023/4/1663肝纖維化與肝硬化的區(qū)別？第63頁/共95頁2023/4/1664肝纖維化與肝硬化的區(qū)別？

肝細胞彌漫性變性、壞死

肝內(nèi)纖維組織增生

肝細胞結(jié)節(jié)狀再生這三種病變反復交錯進行肝內(nèi)血循環(huán)改建假小葉形成肝硬化第64頁/共95頁2023/4/1665四氯化碳肝纖維化肝硬化模型

如果長期反復多次給予CCl4

，可導致肝內(nèi)纖維增生，逐漸形成肝硬化。

造模機制第65頁/共95頁2023/4/16661．皮下注射40%~50%CCl4植物油溶液，首次5ml/kg體重，以后2ml/kg體重，每周2次，共10周。動物自由飲水進食。2．制備肝臟組織石蠟切片，HE和膠原纖維染色，進行病理學檢查。操作方法CCl4肝纖維化肝硬化模型第66頁/共95頁2023/4/1667

該模型較為可靠，復制時間較短，肝纖維化進展穩(wěn)定，適合于肝纖維化發(fā)生、發(fā)展過程的動態(tài)觀察和研究，是目前國內(nèi)外常采用的動物模型。

模型評價CCl4肝纖維化肝硬化模型第67頁/共95頁2023/4/1668第2周：肝小葉中央?yún)^(qū)出現(xiàn)片狀肝細胞變性壞死，未見明顯纖維組織增生。第4周：除肝細胞變性壞死外，肝內(nèi)開始形成較薄的纖維間隔。第6周：肝臟纖維間隔進一步增厚，有假小葉形成。第8周：肝組織正常結(jié)構(gòu)破壞，形成厚的纖維間隔，并分割形成假小葉。實驗中大鼠成活率在60%左右。結(jié)果CCl4肝纖維化肝硬化模型第68頁/共95頁2023/4/1669參與肝纖維化的細胞???肝星狀細胞庫普弗細胞內(nèi)皮細胞Pit細胞肝細胞第69頁/共95頁2023/4/1670形態(tài)學觀察：可使用各種膠原纖維染 色，并可做圖象分析；血清膠原代謝指標檢測

如PIIIP、HA、FN等。檢測指標CCl4復合因素模型肝組織中相關基因表達，如膠原等第70頁/共95頁2023/4/1671壞死后性肝硬化第71頁/共95頁2023/4/1672A：正常肝小葉

(Mallory染色)；B，C：肝硬化(Massontrichrome)第72頁/共95頁2023/4/1673第五節(jié)

胰腺炎動物模型第73頁/共95頁2023/4/1674

引起胰腺自身消化其他酶反應引起胰蛋白酶被激活的原因：（1）膽汁反流；（2）胰液分泌亢進；（3）病毒感染、外傷、藥物等造成腺泡的損傷。膽汁和腸液中的腸激酶激活發(fā)病機制胰蛋白酶原胰蛋白酶第74頁/共95頁2023/4/1675急性胰腺炎模型

急性胰腺炎的主要表現(xiàn)為胰腺呈炎癥水腫、出血和壞死。

臨床表現(xiàn)為突然發(fā)作的上腹部劇烈疼痛并可出現(xiàn)休克。急性胰腺炎第75頁/共95頁2023/4/1676急性胰腺炎模型?；悄懰徕c膽胰管逆行注射法急性胰腺炎第76頁/共95頁2023/4/1677早期?；悄懰徕c可直接導致胰腺腺泡細胞或小導管壁的細胞溶解，進一步的損害可能是膽鹽激活胰酶，如胰蛋白酶、磷脂酶等，產(chǎn)生腺泡自身消化。采用胰管逆行注射法誘發(fā)動物急性胰腺炎，是根據(jù)胰管、膽管共同通路和膽汁反流理論，模擬人類膽源性胰腺炎的發(fā)病機制造模機制急性胰腺炎第77頁/共95頁2023/4/1678正常情況下主胰管的壓力高于總膽管，膽汁不會進入胰管。但當膽總管阻塞時，膽道內(nèi)的膽汁可被壓入主胰管，引起急性胰腺炎。大鼠的膽管和胰管為共同開口的管道，解剖上稱為膽胰管，從膽胰管上分出6~8支胰管的分支進入胰腺實質(zhì)。生理解剖特點急性胰腺炎第78頁/共95頁2023/4/1679大鼠實驗前禁食不禁水12h，3%戊巴比妥鈉（40mg/kg）腹腔注射麻醉。上腹正中切口進入腹腔，提起胃和十二指腸，顯露出胰腺，辨認膽胰管走向，于肝門處用微型無損傷動脈夾夾閉膽總管，以防藥液逆流進入肝臟。用4號鈍針頭朝胰腺方向穿刺十二指腸前壁，在其漿膜下潛行通過十二指腸乳頭穿入膽胰管，用手指固定針頭，緩慢（約2min）注入3.5%或5%牛磺膽酸鈉溶液1ml/kg體重。300~350gWistar或SD大鼠操作方法3.5%或5%?；悄懰徕c急性胰腺炎第79頁/共95頁2023/4/16804.另一種穿刺方法是，用4號針頭緊貼膽胰管匯入十二指腸處，自腸外穿刺膽胰管。5.注射完畢拔除針頭后繼續(xù)按住穿刺處約1min。檢查無漏膽，逐層關腹。6.假手術組僅翻動胰腺和十二指腸后關腹。7.術后15h處死動物，解剖時肉眼觀察胰腺大體變化。取胰腺等組織，10%中性緩沖甲醛液固定，常規(guī)制備石蠟切片，在光鏡下觀察胰腺等臟器的改變。取血測定血清淀粉酶水平。操作方法急性胰腺炎第80頁/共95頁2023/4/1681術后15h血清淀粉酶水平明顯升高。肉眼觀察，胰腺充血腫脹，包膜緊張，出現(xiàn)不同程度出血壞死，腹腔內(nèi)可見血性腹水，胰腺周圍大網(wǎng)膜和腸系膜出現(xiàn)淡黃色的皂化斑。胃腸道明顯水腫，腎臟明顯增大，顏色晦暗。光鏡檢查，于術后15h可見胰腺組織大片出血、凝固性壞死及脂肪壞死，壞死區(qū)之間有大量中性粒細胞和單核細胞浸潤，表現(xiàn)為急性出血壞死性胰腺炎。結(jié)果急性胰腺炎第81頁/共95頁2023/4/1682本模型在病因、發(fā)病機制及胰腺病變等方面與人類急性胰腺炎相似，是目前被公認的、比較常用的復制急性胰腺炎的方法。通過改變注射速度、注射持續(xù)時間、所用牛磺膽酸鈉的濃度或劑量可控制胰腺病變的程度，操作簡單，造模成功率較高，重復性較好，適合于評價藥物對急性胰腺炎的防治效果。胰腺病變程度及動物死亡率與所用牛磺膽酸鈉的濃度呈正相關，隨著所用?；悄懰徕c濃