中期考核匯報(bào)課件

中期考核匯報(bào)

張婧導(dǎo)師：羅深秋教授時(shí)間：2006-03-234/18/20231中期考核匯報(bào)AMP激活蛋白激酶（AMPK）靶向治療肝纖維化作用機(jī)理的研究

課題名稱4/18/20232中期考核匯報(bào)肝臟疾病嚴(yán)重危害著人們的健康。衛(wèi)生部2005年的統(tǒng)計(jì)資料顯示：我國(guó)約有1.2億人攜帶乙肝病毒，慢性乙肝患者約3000萬；慢性丙肝患者3800萬；脂肪肝患者約5000萬；藥物、中毒、自身免疫性肝病患者1000萬人。每年約有50萬人死于慢性乙肝相關(guān)疾病。4/18/20233中期考核匯報(bào)肝臟星形細(xì)胞(hepaticstellatecells,HSC)又稱貯脂細(xì)胞(fat－storingcell,FSC),具有貯存脂肪供肝細(xì)胞能量、貯存及代謝維生素A、合成細(xì)胞外基質(zhì)的功能。在炎癥、化學(xué)物質(zhì)等致病因素刺激下HSCs可活化、增殖并產(chǎn)生大量的膠原,是形成肝纖維化的中心環(huán)節(jié)。4/18/20235中期考核匯報(bào)抗纖維化的治療策略去除病因，減少炎癥;抑制HSCs激活和細(xì)胞外基質(zhì)合成;促進(jìn)基質(zhì)降解；肝細(xì)胞再生；促進(jìn)HSCs的凋亡。4/18/20236中期考核匯報(bào)近來的研究表明，AMP激活的蛋白激酶（AMPK）持續(xù)性的激活可以引發(fā)細(xì)胞的凋亡。有實(shí)驗(yàn)證明持續(xù)的AMPK的活性可以誘導(dǎo)MIN6、原代的β－cell、Jurkat等細(xì)胞的凋亡。香港大學(xué)徐愛民教授與倫敦MRC研究中心的DavidCarling博士的合作課題中，對(duì)AMPK在激活的大鼠HSCs細(xì)胞的功能作用進(jìn)行了初步的探討。他們發(fā)現(xiàn)腺病毒介導(dǎo)的組成性激活的AMPK的過表達(dá)能明顯的誘導(dǎo)激活的大鼠HSCs細(xì)胞產(chǎn)生凋亡。4/18/20237中期考核匯報(bào)技術(shù)路線

HSCs的分離

HSCs的鑒定和培養(yǎng)

外源基因表達(dá)的檢測(cè)細(xì)胞凋亡的檢測(cè)人肝星狀細(xì)胞株LX-2的培養(yǎng)鑒定

腺病毒轉(zhuǎn)染動(dòng)物實(shí)驗(yàn)4/18/20238中期考核匯報(bào)Thankyou！4/18/202310中期考核匯報(bào)HSCs的分離CL2MDP質(zhì)脂體的制備質(zhì)脂體尾靜脈注射3d灌注、分離肝臟紗網(wǎng)過濾、密度梯度離心培養(yǎng)4/18/202311中期考核匯報(bào)腺病毒的轉(zhuǎn)染設(shè)置不同的病毒的梯度感染細(xì)胞：0、10、20、40、80、100pfu，分別在18h和、30h、48h提取蛋白，進(jìn)行目的蛋白表達(dá)的檢測(cè)，以確定病毒的用量和收獲細(xì)胞的時(shí)間。4/18/202313中期考核匯報(bào)外源基因表達(dá)的檢測(cè)1.westernblotting檢測(cè)外源基因的表達(dá)：用抗Myc-標(biāo)簽的抗體作為一抗檢測(cè)。2.免疫組化檢測(cè)4/18/202314中期考核匯報(bào)細(xì)胞凋亡的檢測(cè)形態(tài)學(xué)的觀察流式細(xì)胞儀的檢測(cè)DNAladder分析JNK表達(dá)的變化Caspase3表