實驗二革蘭氏染色及細菌特殊結(jié)構(gòu)觀察課件

實驗二細菌的染色細菌的單染色法細菌的革蘭氏染色芽孢染色莢膜的染色王海英汪文俊程國軍620963031、掌握細菌的簡單染色法，初步認識細菌的形態(tài)特征2、學習細菌的革蘭氏染色原理和方法

3、了解細菌的特殊形態(tài)結(jié)構(gòu)：芽孢和莢膜

5、學習訓練無菌操作技術(shù)。實驗目的

細菌細胞微小，透明，不易觀察，需染上顏色。利用單一染料對細菌進行染色，使經(jīng)染色后的菌體與背景形成明顯的色差，從而能更清楚地觀察到其形態(tài)和結(jié)構(gòu)。簡單染色是利用單一染料對細菌進行染色的一種方法，適用于菌體一般形狀和細菌排列的觀察。實驗原理1細菌的簡單染色1、菌種枯草芽孢桿菌12～18h培養(yǎng)物金黃色葡萄球菌24h培養(yǎng)物2、染色劑石碳酸復紅染液實驗材料

菌懸液滴加無菌水取菌苔操作步驟涂片固定干燥染色水洗干燥鏡檢1、涂片

取兩塊載玻片，各滴一小滴（或用接種環(huán)沾?。┥睇}水（或無菌水）于玻片中央，用接種環(huán)以無菌操作分別從枯草桿菌和金黃色葡萄球菌斜面上挑取少許菌苔于水滴中，混合并涂成薄膜。如用菌懸液或液體培養(yǎng)物，可用接種環(huán)挑取1-2環(huán)直接涂于載玻片上。Notes:1）載玻片要潔凈無油跡2）滴生理鹽水和取菌不宜過多3）涂片要涂抹均勻，不宜過厚。操作步驟（continued）4、染色

將玻片平放于桌面上，滴加染液于涂片上（染液剛好覆蓋涂片薄膜為宜）。

石碳酸復紅染色約1min。操作步驟（continued）5、水洗倒去染液，用洗瓶（或自來水）輕輕沖洗，直至涂片上流下來的水無色為止。Note:水洗時，不要直接沖洗涂面，而應(yīng)使水從載玻片的一端流下，水流不宜過急，以免涂片薄膜脫落。7、鏡檢一般使用油鏡（100倍）觀察細菌個體形態(tài)。操作步驟（continued）6、干燥自然干燥或用電吹風吹干，也可用吸水紙吸干。Notes:必須等涂片完全干后才可滴加香柏油油鏡使用完畢，切記按規(guī)定步驟擦干凈，否則可能損害鏡頭3）擦油鏡鏡頭方法：A）先用擦鏡紙揩去鏡頭上的香柏油B）用擦鏡紙沾少許乙醚酒精（二甲苯），擦拭鏡頭；C）再用一小片擦鏡紙擦去鏡頭上可能殘留的乙醚酒精。操作步驟（continued）

單染色法只能觀察微生物的大小、形狀、和細胞排列狀況，但不能鑒別微生物以及它的特殊構(gòu)造等。

復染色法：用兩種或兩種以上染色液進行染色，有協(xié)助鑒別微生物的作用，故也稱鑒別染色法。2、革蘭氏染色常用的有：

革蘭氏染色法、芽孢染色法、抗酸染色法等。G＋細菌細胞壁G-細菌細胞壁細菌細胞壁的結(jié)構(gòu)革蘭氏染色的實驗原理結(jié)晶紫初染碘液媒染乙醇脫色番紅復染涂片固定革蘭氏染色的步驟1.涂片2.初染：滴加草酸銨結(jié)晶紫染液，染1分鐘，傾去染液，流水沖洗至無紫色。3.媒染：先用新配的路哥氏碘液沖去殘水，而后用其覆蓋涂面1分鐘，后水洗。4.脫色：除去殘水后，滴加95%酒精進行脫色約15－20秒后，立即用流水沖洗。5.復染：滴加番紅染色液，染3－5分鐘，水洗后用吸水紙吸干。6.鏡檢：觀察染色結(jié)果并繪圖。大腸桿菌、金黃色葡萄球菌Figure1-AGramstainofGram+Staphylococcuscells.Figure2-GramstainofGram–E.colicells4細菌莢膜的染色莢膜負染色法：膠質(zhì)芽胞桿菌1、制片：取潔凈的載玻片一塊，加一滴黑墨水，取少量的菌體放入墨水滴中混勻并涂片。（也可用刮片法：另取一載玻片，以三十度角將其邊緣浸入黑素中向右端拖動，將黑素涂成一薄層。）2、鏡檢：10x，40x物鏡觀察（注意物鏡不要接觸黑素，不要用油鏡觀察）實驗報告1、細菌簡單染色、革蘭氏染色的原理、方法和步驟。2記錄所觀察到的染色結(jié)果，并繪圖2、思考題1）制備細菌染色標本時應(yīng)注意哪些環(huán)節(jié)？2）如果你的涂片未經(jīng)熱固定，將會出現(xiàn)什么問題？如果加熱溫度過高、時間過長，又會怎樣？3）為什么要等制片完全干燥后才能用