總則+實(shí)驗(yàn)1微生物形態(tài)觀察課件

環(huán)境生物學(xué)實(shí)驗(yàn)如何進(jìn)行環(huán)境生物學(xué)實(shí)驗(yàn)嚴(yán)肅認(rèn)真科學(xué)態(tài)度分析問題搞清原理實(shí)驗(yàn)安排與考核預(yù)習(xí)情況+實(shí)驗(yàn)操作+總結(jié)報(bào)告微生物形態(tài)觀察水中細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定濁度的測(cè)定

實(shí)驗(yàn)一微生物形態(tài)觀察

實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)在油鏡下觀察生物個(gè)體形態(tài)。了解革蘭氏染色法的原理并熟練掌握操作步驟。實(shí)驗(yàn)原理革蘭氏染色原理由于細(xì)菌細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)和化學(xué)組成不同，經(jīng)染色后，呈現(xiàn)不同的染色反應(yīng)，將所有細(xì)菌區(qū)分為兩大類，即革蘭氏陽性菌（G+）和革蘭氏陰性菌（G-）碘作為媒染劑，它能與結(jié)晶紫結(jié)合成結(jié)晶紫-碘的復(fù)合物，從而增強(qiáng)了染料與細(xì)菌的結(jié)合力染色關(guān)鍵在于脫水溶劑的脫色作用G+細(xì)胞壁通透性低，結(jié)晶紫-碘的復(fù)合物不易被洗脫而保留在細(xì)胞內(nèi)，經(jīng)脫色和復(fù)染后仍保留初染劑的藍(lán)紫色G-

細(xì)胞壁通透性高，結(jié)晶紫-碘的復(fù)合物易被洗脫出來，用復(fù)染劑復(fù)染后，細(xì)胞被染上復(fù)染劑的紅色1、菌種：培養(yǎng)12-16h的枯草桿菌（Bacillussubtilis），培養(yǎng)24小時(shí)的大腸桿菌（Escherichiacoli）

2、染色液和試劑：草酸銨結(jié)晶紫染液、盧哥氏碘液、95%酒精、番紅染液、二甲苯溶液、香柏油、無菌水3、器材：廢液缸、洗瓶、載玻片、接種杯、酒精燈、擦鏡紙、顯微鏡等。實(shí)驗(yàn)器材實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1.涂片：取少量菌放在載玻片上，在酒精燈上烤一下，固定細(xì)菌。（火焰固定不宜過熱，以玻片不燙手為宜）2.染色：實(shí)驗(yàn)內(nèi)容注意事項(xiàng)：①涂片不宜過厚②火焰固定不宜過熱③滴加染色液與酒精時(shí)一定要覆蓋整個(gè)菌膜④乙醇脫色是革蘭氏染色操作的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。2、革蘭氏染色技術(shù)涂片干燥固定草酸銨結(jié)晶紫初染碘液媒染95%乙醇脫色沙黃復(fù)染鏡檢1min1min1min水洗水洗水洗水洗30s濾紙吸干1234？結(jié)晶紫碘液酒精復(fù)紅（2）染色：將固定過的涂片放在廢液缸上的擱架上，加復(fù)紅染色1-2min。（3）水洗：用水洗去涂片上的染色液。（4）干燥：將洗過的涂片放在空氣中晾干或用吸水紙吸干。（5）鏡檢：先低倍觀察，再高倍觀察，并找出適當(dāng)?shù)囊曇昂螅瑢⒏弑剁R轉(zhuǎn)出，在涂片上加香柏油一滴，將油鏡頭浸入油滴中仔細(xì)調(diào)焦觀察細(xì)菌的形態(tài)。crystalvioletstainwashwithwater

Stainwithgram'siodinesolution

Decolorizebyadding95%alcohol

革蘭氏陰性桿菌革蘭氏陽性桿菌

CounterstainwithSafranin

1、載玻片要潔凈無油跡。涂片時(shí)，滴水不要過多，挑菌量宜少，涂片要均勻，菌膜宜薄。2、革蘭氏染色成敗的關(guān)鍵是酒精脫色。？（五）注意事項(xiàng)3、染色過程中勿使染色液干涸。4、選用幼齡的細(xì)菌。不經(jīng)復(fù)染這一步，能否區(qū)別革蘭氏陽性菌和陰性菌？哪些環(huán)節(jié)會(huì)影響革蘭氏染色結(jié)果的正確性?其中最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)是什么?

實(shí)驗(yàn)報(bào)告顯微鏡的使用顯微鏡的構(gòu)造：分機(jī)械裝置和光學(xué)系統(tǒng)1.物鏡轉(zhuǎn)換器；2.物鏡；3.游標(biāo)卡尺；4.載物臺(tái)；5.聚光器；6.虹彩光圈；7.光源；8.鏡座；9.電源開關(guān)；10.光源滑動(dòng)變阻器；11.粗調(diào)螺旋；12.微調(diào)螺旋；13.鏡臂；14.鏡筒；15.目鏡；16.標(biāo)本移動(dòng)螺旋1.不準(zhǔn)擅自拆卸顯微鏡的任何部件,以免損壞。2.鏡面只能用擦鏡紙擦，不能用手指或粗布，以保證光潔度3.觀察標(biāo)本時(shí)，必須依次用低、中、高倍鏡，最后用油鏡。當(dāng)目視接目鏡時(shí)，特別在使用油鏡時(shí)，切不可使用粗調(diào)節(jié)器，以免壓碎玻片或損傷鏡面。4.觀察時(shí)，兩眼睜開，養(yǎng)成兩眼能夠輪換觀察的習(xí)慣，以免眼睛疲勞，并且能夠在左眼觀察時(shí)，右眼注視繪圖。5.拿顯微鏡時(shí)，一定要右手拿鏡臂，左手托鏡座，不可單