癌基因與抑癌基因研究進(jìn)展

癌基因與抑癌基因研究進(jìn)展第1頁/共65頁癌基因與抑癌基因研究進(jìn)展第2頁/共65頁

最新統(tǒng)計資料顯示，中國每年癌癥新發(fā)病例為220萬人，因癌癥死亡人數(shù)為160萬人。近20年來，中國每4-5個死亡者中就有一個死于癌癥，居死亡原因之首。第3頁/共65頁第一節(jié)腫瘤的發(fā)生機(jī)制一、腫瘤細(xì)胞的基本生物學(xué)特征（一）腫瘤細(xì)胞增殖失控（二）腫瘤細(xì)胞分化障礙（三）腫瘤細(xì)胞凋亡受阻第4頁/共65頁二、癌基因

是指存在于致癌病毒、動物和人體中可引起細(xì)胞癌變的基因。第5頁/共65頁（一）病毒癌基因virusoncogene（v-onc）

1968年Duesberg等首次發(fā)現(xiàn)Rous肉瘤病毒基因組編碼酪氨酸蛋白激酶基因，證實它在細(xì)胞轉(zhuǎn)化中起關(guān)鍵作用，來自病毒，因而被命名為病毒癌基因第6頁/共65頁1、RNA腫瘤病毒（逆轉(zhuǎn)錄病毒）

（1）RNA腫瘤病毒的分類根據(jù)感染宿主后腫瘤發(fā)生快慢分類：

1、急性轉(zhuǎn)化病毒

RouseSarcomaVirus（Rouse肉瘤病毒）潛伏期短（數(shù)周）、可以使培養(yǎng)的細(xì)胞癌變。

2、慢性轉(zhuǎn)化病毒

AvianLeukosisVirus（禽白血病病毒

）潛伏期長、不能使培養(yǎng)細(xì)胞發(fā)生癌變。第7頁/共65頁RNA腫瘤病毒是通過激活細(xì)胞的原癌基因來起作用的。（2）機(jī)制第8頁/共65頁①逆轉(zhuǎn)錄病毒與細(xì)胞癌基因活化RNA病毒原癌基因結(jié)構(gòu)異常癌變隨機(jī)插入protein1protein2第9頁/共65頁LTRgagpolenvLTRVirusDNAVirusproteinLTRgagLTRV-oncTransformingVirusDNAVirusprotein②逆轉(zhuǎn)錄病毒和攜帶細(xì)胞基因序列病毒基因組比較第10頁/共65頁2、DNA腫瘤病毒

如SV40、HPV、EB、乙肝病毒等其引起細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的機(jī)理可能在于：①存在于細(xì)胞中部分整合的或整個的DNA病毒引起細(xì)胞的癌基因功能紊亂②DNA病毒表達(dá)癌基因樣蛋白產(chǎn)物③DNA病毒蛋白產(chǎn)物與某些細(xì)胞癌基因蛋白產(chǎn)物之間相互作用。

第11頁/共65頁（二）細(xì)胞癌基因（又稱原癌基因）

原癌基因（oncogene）是細(xì)胞內(nèi)與細(xì)胞增殖相關(guān)的基因，是維持機(jī)體正常生命活動所必須的，在進(jìn)化上高度保守。當(dāng)原癌基因的結(jié)構(gòu)或調(diào)控區(qū)發(fā)生變異，基因產(chǎn)物增多或活性增強(qiáng)時，使細(xì)胞過度增殖，從而形成腫瘤。第12頁/共65頁（三）原癌基因的分類①生長因子:如sis②生長因子受體:如fms、erbB③蛋白激酶及其它信號轉(zhuǎn)導(dǎo)組分:

如src、ras、raf④細(xì)胞周期蛋白:如bcl-1⑤細(xì)胞凋亡調(diào)控因子:如bcl-2⑥轉(zhuǎn)錄因子:如myc、fos、jun

按原癌基因的結(jié)構(gòu)、產(chǎn)物的功能、所在的位置分為下列幾類：第13頁/共65頁一些原癌基因的功能原癌基因功能相關(guān)腫瘤sis生長因子Erwing網(wǎng)瘤erb-B受體酪氨酸激酶，EGF受體星形細(xì)胞瘤、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、胃癌、唾腺癌fms受體酪氨酸激酶，CSF-1受體髓性白血病rasG-蛋白肺癌、結(jié)腸癌、膀胱癌、直腸癌src非受體酪氨酸激酶魯斯氏肉瘤Abl-1非受體酪氨酸激酶慢性髓性白血病rafMAPKKK，絲氨酸/蘇氨酸激酶腮腺腫瘤vav信號轉(zhuǎn)導(dǎo)連接蛋白白血病myc轉(zhuǎn)錄因子Burkitt淋巴瘤、肺癌、早幼粒白血病myb轉(zhuǎn)錄因子結(jié)腸癌fos轉(zhuǎn)錄因子骨肉瘤jun轉(zhuǎn)錄因子

erb-A轉(zhuǎn)錄因子急性非淋巴細(xì)胞白血病bcl-1cyclinD1B細(xì)胞淋巴瘤第14頁/共65頁（四）原癌基因的活化機(jī)制1.基因重排

2.基因擴(kuò)增

3.點突變

4.其它調(diào)控的異常第15頁/共65頁1、基因重排(1)插入具有高活性的啟動子或增強(qiáng)子，使原癌基因持久、過量地表達(dá)(2)負(fù)調(diào)控區(qū)的失活或丟失

第16頁/共65頁插入具有高活性的啟動子或增強(qiáng)子，

使原癌基因持久、過量地表達(dá)插入的啟動子或增強(qiáng)子來自細(xì)胞外（外源性）如：雞B淋巴細(xì)胞瘤由于ALV的LTR插入c-myc的旁側(cè)（5’或3’端），使c-myc過量表達(dá)插入的啟動子或增強(qiáng)子來自細(xì)胞內(nèi)（內(nèi)源性）如：內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒的LTR第17頁/共65頁染色體易位是原癌基因DNA重排的典型例子

人B淋巴瘤中免疫球蛋白基因與c-myc的重排，使c-myc激活:c-myc基因定位于8q24，

Ig、Ig、Igλ鏈的基因位點分別定位在14q32、2p13和22q11c-myc易位到Ig位點的高活性轉(zhuǎn)錄區(qū)，從而組成一個高轉(zhuǎn)活性的重排基因，啟動c-myc轉(zhuǎn)錄，使c-myc表達(dá)增強(qiáng)，促進(jìn)細(xì)胞惡變，最后導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生第18頁/共65頁第19頁/共65頁(2)負(fù)調(diào)控區(qū)的失活或丟失小鼠c-myc，c-fos，c-mos等原癌基因在旁側(cè)順序具有抑制轉(zhuǎn)錄啟動的負(fù)調(diào)控區(qū)人c-myc的負(fù)調(diào)控區(qū)在5’端428-1188bp處，而在B淋巴瘤中，該區(qū)有多點突變或部分丟失雖然這一結(jié)論還有待更多實驗證實；但是，原癌基因上游或下游旁側(cè)順序存在負(fù)調(diào)控區(qū)（并不是個別現(xiàn)象），因而使原癌基因被激活的可能性大為減少第20頁/共65頁2、點突變

在ras基因族，在人體腫瘤中已從膀胱、小細(xì)胞肺癌（Ha-ras，Kit-ras），胃（N-ras），乳腺（Ha-ras）等證明在12或61號編碼子出現(xiàn)點突變所導(dǎo)致一個氨基酸的置換突變（一個氨基酸置換）可使其編碼產(chǎn)物蛋白p21的GTPase活性明顯下降，從而影響p21的生物學(xué)活性第21頁/共65頁3、基因擴(kuò)增

基因擴(kuò)增，可導(dǎo)致基因過量表達(dá)基因擴(kuò)增一般被認(rèn)為與惡性演進(jìn)有關(guān)，未必是惡性早期的改變在人體腫瘤中，如：人肝癌中出現(xiàn)N-ras重排及其基因擴(kuò)增小細(xì)胞肺癌中c-myc及L-myc基因擴(kuò)增與癌轉(zhuǎn)移可能有關(guān)神經(jīng)母細(xì)胞瘤中N-myc基因擴(kuò)增明顯與病程發(fā)展有關(guān)第22頁/共65頁4、其它調(diào)控的異常

反式（Trans）調(diào)控系統(tǒng)轉(zhuǎn)錄后的調(diào)控異常第23頁/共65頁反式（Trans）調(diào)控系統(tǒng)已證明某些基因產(chǎn)物可影響其它基因的轉(zhuǎn)錄，如：病毒HTLV-Ⅰ，Ⅱ中TAT（LOR）區(qū)SV40中的某些片段RSV的gag區(qū)原癌基因很可能會接受其它基因（包括病毒的基因產(chǎn)物）的控制或影響如：v-myc進(jìn)入細(xì)胞后，可關(guān)閉細(xì)胞本身c-myc的表達(dá)，同時，c-myc激活后亦可使另一個正常表達(dá)的c-myc等位基因關(guān)閉，提示：myc產(chǎn)物或由myc誘導(dǎo)產(chǎn)生的物質(zhì)對c-myc的轉(zhuǎn)錄發(fā)生Trans的負(fù)控制第24頁/共65頁轉(zhuǎn)錄后的調(diào)控異常

成纖維細(xì)胞經(jīng)生長因子處理后，結(jié)果：c-myc的mRNA量增高轉(zhuǎn)錄水平并不改變說明：mRNA轉(zhuǎn)錄后加工或穩(wěn)定性的改變基因的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控：當(dāng)前了解甚少，原癌基因的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的異常了解的更少第25頁/共65頁ras癌基因家族1982年活化的H-ras基因在人膀胱癌細(xì)胞系中首先被發(fā)現(xiàn)，ras基因在人類腫瘤發(fā)生發(fā)展中所起的作用引起了極大關(guān)注。

ras基因家族中與人類腫瘤相關(guān)的特征性基因有：

H-ras

定位于11號染色體

K-ras

定位于12號染色體

N-ras

定位于1號染色體

作用：參與細(xì)胞生長和分化的調(diào)控；參與多種腫瘤的形成與發(fā)展舉例第26頁/共65頁（一）ras家族的基因所共有的特征為：1.基因組中有5個外顯子：

4個編碼的外顯子和1個5’端非編碼外顯子

2.3類ras基因被翻譯成4種Ras蛋白：H-Ras、N-Ras、K-RasA和

K-RasB。除K-RasB(含189個氨基酸)外，其他Ras蛋白均含有

188個氨基酸；分子量為21kD（p21蛋白）。這些蛋白具有高度特異性和同源性，尤其在氨基酸序列的前

80個氨基酸殘基中，幾乎無種屬間差別，具有高度保守性。第27頁/共65頁正常ras蛋白具有以下特點：p21（ras蛋白）位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)面，以軟脂酸共價鍵形式固定于脂質(zhì)雙層膜的內(nèi)表面。ras蛋白是一種信號傳遞蛋白，其功能是調(diào)節(jié)細(xì)胞的分化增殖；正常情況下為與GDP結(jié)合的非活化狀態(tài)，與GTP結(jié)合后則變成活化狀態(tài)。

ras蛋白的信號傳遞過程如下：外源性增殖信號如表皮生長因子(EGF)結(jié)合細(xì)胞膜上的受體(her2)→受體胞膜內(nèi)側(cè)的酪氨酸殘基發(fā)生磷酸化→結(jié)合于適配蛋白如Grb2的SH2區(qū)→Grb2分子的SH3區(qū)與SOS蛋白相合→SOS蛋白促進(jìn)p21與GDP分離然后與GTP結(jié)合而活化→活化的p21又激活下游的效應(yīng)子：如絲氨酸-蘇氨酸激酶(raf-1)、磷酸肌醇3激酶(PI3K)、磷酸脂酶C(PLC)→啟動相應(yīng)的效應(yīng)鏈，從而導(dǎo)致細(xì)胞的增殖。第28頁/共65頁第29頁/共65頁（二）ras基因異常與細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化

正常情況下Ras信號鏈只有短暫的活性：GTP酶激活蛋白(GAP)激活GTP酶，及時降解與p21結(jié)合的GTP；p21Ras自身也有低度GTP酶活性，能夠降解與其結(jié)合的GTP；→從而Ras蛋白轉(zhuǎn)變成與GDP結(jié)合的非活性狀態(tài)。第30頁/共65頁ras蛋白信號通路出現(xiàn)異常導(dǎo)致細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化(1)ras基因突變---最顯著大約30％的人類腫瘤中出現(xiàn)ras基因點突變，最常見是K-ras的點突變(大約占85％)，其次是N-ras(約15％)，再次是H-ras(小于1％)。點突變的ras蛋白失去GTP酶活性，阻止GTP酶激活蛋白對ras蛋白活性形式的水解，從而導(dǎo)致ras蛋白以活性結(jié)合形式存在。在人類腫瘤中，幾乎所有的ras蛋白活化是由編碼子12、13和61的突變所致。第31頁/共65頁(2)ras蛋白過表達(dá)常見于乳腺癌、膀胱癌、基底細(xì)細(xì)胞癌、鱗狀細(xì)胞癌、皮脂腺癌、B細(xì)胞淋巴瘤，在乳腺癌、膀胱癌、鱗狀細(xì)胞癌前驅(qū)病變中也發(fā)現(xiàn)ras蛋白過表達(dá)。(3)GTP酶激活蛋白缺失在腫瘤內(nèi)ras蛋白也可能由于GTP酶激活蛋白的缺失而活化。最典型的例子就是由NF1基因編碼的神經(jīng)纖維素的缺失，NF1基因具有腫瘤抑制因子的所有特點。I型神經(jīng)纖維瘤病的患者伴有NF1基因的一個等位基因的缺失，而NF1基因的2個等位基因缺失引起ras蛋白的持續(xù)活化從而導(dǎo)致惡性腫瘤的發(fā)生。第32頁/共65頁(4)生長因子受體的活化

ras蛋白信號通路經(jīng)常由于生長因子受體酪氨酸激酶的過表達(dá)而活化。最常見的例子是EGFR和ERBB2，在許多人類腫瘤包括乳腺癌、卵巢癌和胃癌中ras信號通路由于EGFR和ERBB2的過表達(dá)而活化。(5)ras下游效應(yīng)子的突變或擴(kuò)增在人類腫瘤特別是黑色素瘤(約70％)和結(jié)腸癌(約15％)中BRAF經(jīng)常由于突變而活化；在少部分卵巢腫瘤中磷酸肌醇3激酶通路由于P110α基因的擴(kuò)增而活化，同時在卵巢癌和乳腺癌中，磷酸肌醇3激酶通路由于PDK的下游靶標(biāo)AKT2的擴(kuò)增而活化；而且在腫瘤組織中，磷酸肌醇3激酶通路的直接激活是由腫瘤抑制基因PTEN的缺失所致。第33頁/共65頁（三）ras基因與人類腫瘤

在所有人類腫瘤細(xì)胞的基因突變中，ras突變約占10％。

其突變頻率因腫瘤細(xì)胞類型而異：胰腺癌為75％-90％、結(jié)腸癌為40％-50％、肺癌為30％、急性白血病約為25％。然而在甲狀腺腫瘤、皮膚癌、膀胱癌、子宮癌以及肝癌中卻較少有ras的突變。突變ras基因的種類與某些腫病類型密切相關(guān)，即有優(yōu)勢激活現(xiàn)象。如胰腺癌、結(jié)腸癌、肺癌等以K-ras突變?yōu)橹?，造血系統(tǒng)腫瘤多發(fā)現(xiàn)N-ras的突變，泌尿系腫瘤則以H-ras突變?yōu)橹?。檢測ras突變對了解腫瘤的發(fā)生發(fā)展，以及監(jiān)測惡性腫瘤的治療效果具有重大意義。第34頁/共65頁三、抑癌基因（抗癌基因）最早由A.KnudsonJr.提出細(xì)胞內(nèi)一類抑制腫瘤發(fā)生、生長的基因，最近又發(fā)展為指能對抗癌基因作用的基因。在生物體內(nèi)與癌基因功能相抵抗，共同保持生物體內(nèi)正負(fù)信號相互作用的相對穩(wěn)定。腫瘤抑制基因的失活和癌基因的激活都是癌化過程的一部分。第35頁/共65頁①轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子：如Rb、p53②負(fù)調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子：如WT③周期蛋白依賴性激酶抑制因子（CKI）：如p15、p16、p21④信號通路的抑制因子：如rasGTP酶活化蛋白（NF-1）、磷脂酶（PTEN）⑤DNA修復(fù)因子：如BRCA1、BRCA2⑥與發(fā)育和干細(xì)胞增殖相關(guān)的信號途徑組分：如APC、Axin抑癌基因分類第36頁/共65頁一些抑癌基因的功能抑癌基因功能相關(guān)腫瘤Rb轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子RB、成骨肉瘤、胃癌、SCLC、乳癌、結(jié)腸癌p53轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子星狀細(xì)胞瘤、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、結(jié)腸癌、乳癌、成骨肉瘤、SCLC、胃癌、磷狀細(xì)胞肺癌WT負(fù)調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子WT、橫紋肌肉瘤、肺癌、膀胱癌、乳癌、肝母細(xì)胞瘤NF-1GAP，rasGTP酶激活因子神經(jīng)纖維瘤、嗜鉻細(xì)胞瘤、雪旺氏細(xì)胞瘤、神經(jīng)纖維瘤DCC細(xì)胞粘附分子直腸癌、胃癌p21CDK抑制因子前列腺癌p15CDK4、CDK6抑制因子成膠質(zhì)細(xì)胞瘤BRCA1DNA修復(fù)因子，與RAD51作用乳腺癌、卵巢癌BRCA2DNA修復(fù)因子，與RAD51作用乳腺癌、胰腺癌PTEN磷酯酶成膠質(zhì)細(xì)胞瘤APCWNT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)組分結(jié)腸腺瘤性息肉，結(jié)/直腸癌

第37頁/共65頁確定抑癌基因在理論上需要滿足的三個基本條件1、在惡性腫瘤相應(yīng)的正常組織該基因必須正常表達(dá)。2、在惡性腫瘤中，該基因有功能失活或結(jié)構(gòu)改變或表達(dá)缺陷。3、將這種基因的野生型導(dǎo)入基因異常的腫瘤細(xì)胞中，可部分或完全改變其惡性表現(xiàn)。第38頁/共65頁

1、Rb基因（視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤基因）

Rb（retinoblastomagene）是第一個被克隆的抑癌基因。

1986年，美國的三個實驗室分別獨立的克隆了該基因。

Rb基因，全長約200kb，含27個外顯子，26個內(nèi)含子，外顯子大小不同短的31bp，長的有19kb，轉(zhuǎn)錄的mRNA有4.7kb,編碼928個氨基酸，分子量是105-110kD的核內(nèi)磷酸化蛋白。

Rb具有DNA結(jié)合活性，表明其能夠參與某些基因的調(diào)節(jié)。（一）幾種重要的抑癌基因第39頁/共65頁

Rb基因的磷酸化狀態(tài)是Rb基因調(diào)節(jié)細(xì)胞生長分化的主要形式。調(diào)節(jié)Rb功能最主要的磷酸化事件在G1和S期交界處。磷酸化的Rb與細(xì)胞內(nèi)蛋白結(jié)合形成復(fù)合物的能力喪失。

如，Rb在非磷酸化狀態(tài)下可以與E2F結(jié)合，并抑制其活化基因表達(dá)的功能。磷酸化的Rb不能與E2F結(jié)合。E2F與DP1蛋白形成異二聚體活化一系列由G1期進(jìn)入S期所必需的基因的表達(dá)。（1）Rb基因的生物學(xué)活性第40頁/共65頁G2G1SMCellcycleDPE2FDNAsynthesis-relatedgenesE2FRbPE2FCyclinD1CDK4RbPPPPPRbPPPPPE2FE2FE2FE2FDPE2FDNAsynthesis-relatedgenes第41頁/共65頁（二）Rb基因異常與腫瘤

Rb基因異常主要表現(xiàn)為等位基因缺失和基因突變。最初，在視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤中發(fā)現(xiàn)，后來在多種腫瘤中均發(fā)現(xiàn)該基因的異常。其基因異常多發(fā)生在13-17外顯子上。在小細(xì)胞肺癌中異常為50%，骨肉瘤47%，乳腺癌32%.第42頁/共65頁

二次突變假說

1971年，Knudson在研究視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤時提出了“二次突變”假說。假說認(rèn)為，在有遺傳傾向的的病人體內(nèi)所有干細(xì)胞和體細(xì)胞都存在一種突變，在此基礎(chǔ)上，任一視網(wǎng)膜母細(xì)胞若再出現(xiàn)第二次突變，即可導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。第43頁/共65頁（a）散發(fā)性Rb發(fā)生較晚，一般只危及一眼；（b）遺傳性Rb往往危及雙眼，3歲左右發(fā)病形成多個腫瘤第44頁/共65頁2、p53基因1979年，發(fā)現(xiàn)SV40轉(zhuǎn)化的細(xì)胞中p53與SV40-largeT抗原結(jié)合，而被誤認(rèn)為癌基因，直到1989年，才被證實為抑癌基因P53基因于1979年被發(fā)現(xiàn)；1993年被Science雜志評為明星分子。截至2010.11.16，PubMed上以p53作為關(guān)鍵詞檢索到的文獻(xiàn)已經(jīng)多達(dá)55713篇.臨床上，超過50%的腫瘤其p53有異常。第45頁/共65頁NC100-300AADNA結(jié)合域調(diào)節(jié)domain301-3931-99p53protein

p53基因全長20kb，定位于人類染色體17p13.1，由11個外顯子組成，編碼393個氨基酸組成的53kd的核內(nèi)磷酸化蛋白，具有蛋白質(zhì)-DNA和蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)結(jié)合的功能。（1）p53基因的結(jié)構(gòu)第46頁/共65頁（2）p53基因生物學(xué)特性p53蛋白是細(xì)胞生長周期中的負(fù)調(diào)節(jié)因子，在G1/S期起作用，在細(xì)胞周期調(diào)控、DNA修復(fù)和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡等方面均具有關(guān)鍵性作用。第47頁/共65頁p53BaxP21（細(xì)胞周期素依賴激酶抑制劑-1A）Cellcyclearrest細(xì)胞周期停滯ApoptosisMDM2（小鼠雙微體擴(kuò)增基因2）

P14arf(p14可變閱讀框基因)Manyfactors(主要是造成基因組完整性的損傷)GADD45（生長阻滯和DNA損傷誘導(dǎo)蛋白45）Morethan100proteins+++--+第48頁/共65頁（3）p53基因分型p53

基因分為野生型和突變型，它的表達(dá)產(chǎn)物也分為野生型和突變型野生型p53極不穩(wěn)定，半衰期僅為數(shù)分鐘，并具有反式激活功能和光譜的抑制腫瘤的功能。突變型p53具有癌基因的功能，促進(jìn)癌細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化。第49頁/共65頁（4）p53基因異常與腫瘤

p53基因缺失或突變已被證實是絕大多數(shù)腫瘤發(fā)生的原因之一

腫瘤中p53的突變形式：點突變、缺失突變、插入突變、移碼突變、基因重排。

絕大多數(shù)突變集中在第5-8外顯子處，即“熱點突變”(以175、248、249、273、282位點突變最高，不同種類腫瘤不同）。少數(shù)突變存在于其它外顯子或內(nèi)含子的剪切位點上。p53大多數(shù)點突變是引起蛋白功能改變的錯義突變，少數(shù)是無義突變或終止碼突變。第50頁/共65頁3、NF1基因(多發(fā)性神經(jīng)纖維瘤基因1型)4、WT1基因（腎母細(xì)胞瘤基因1型）第51頁/共65頁四、癌基因與抑癌基因協(xié)同致癌作用

由于惡性變是多步驟的過程，惡性腫瘤形成以后癌細(xì)胞經(jīng)過不斷的突變和選擇，其惡性行為逐步升級即演進(jìn)（progression）（包括侵潤、轉(zhuǎn)移及治療過程中發(fā)生的抗放射性、抗藥性），理應(yīng)涉及許多基因的的激活并參與作用，但目前僅變惡性變而言，需要多少個腫瘤基因參與，還不夠清楚。至于惡性腫瘤形成以后，哪些基因產(chǎn)物與惡性腫瘤的演進(jìn)過程有關(guān)更是基本上空白的領(lǐng)域。第52頁/共65頁

單個腫瘤基因的致癌作用，僅僅在動物體建株細(xì)胞中得到證明，以具有突變的ras基因為例，僅在小鼠NIH3T3，大鼠RAT-1，中國倉鼠（CHEF）等成纖維細(xì)胞中能致使惡變，最近有報道用小鼠乳腺上皮細(xì)胞株同樣可作為受體細(xì)胞。必須指出：過去不少人指責(zé)NIH3T3是已經(jīng)超越惡性變最早期階段、染色體核型不正常的細(xì)胞，因而用于分離腫瘤基因不可靠。實際上，這種看法還不全面，應(yīng)該說所有上述列舉的細(xì)胞，均屬建株的細(xì)胞，已具有永生化（immoutalization）的特征，演化到惡性變的第一個臺階，因此用它的作為受體細(xì)胞，可以說明某些原瘤基因已被激活，但是并不等于人體腫瘤中激活腫瘤基因僅限于這幾種。根本的原因是，除上述細(xì)胞均非“正常”細(xì)胞以外，DNA轉(zhuǎn)染技術(shù)本身也有很大局限性。(一)單個腫瘤基因的作用第53頁/共65頁

兩類腫瘤基因的協(xié)同作用，僅在嚙齒類原代培養(yǎng)細(xì)胞系統(tǒng)得到了證明。在原代培養(yǎng)成纖維細(xì)胞（大鼠、金倉鼠）中，細(xì)胞惡變需要兩大類腫瘤基因參與作用，一類是促使細(xì)胞永生化，包括c-myc，N-myc，p53AdEla、EBV的EBVA-2，SV40T等；第二類是促使細(xì)胞形態(tài)學(xué)出現(xiàn)惡變特征，及軟瓊脂中生長等，包括Ha-ras，Ki-ras，AdElb，PomT（多瘤病毒中T基因）等。上述腫瘤基因包括某些細(xì)胞本身的腫瘤基因和外源性病毒的某些片段。只有兩類腫瘤基因協(xié)同作用，才能使細(xì)胞完全惡變，不僅在體外顯示惡性特征，而且能在裸鼠體內(nèi)形成腫瘤。(二)兩類腫瘤基因的協(xié)同作用第54頁/共65頁(三)人體細(xì)胞系統(tǒng)腫瘤基因的作用在人體細(xì)胞中，上述兩類腫瘤基因的協(xié)同作用，仍不足以引起細(xì)胞惡變。例如，突變的ras基因和myc基因并不能使人成纖維細(xì)胞或造血細(xì)胞惡變，這提示，應(yīng)考慮到幾種可能性：

1.可能尚需其他腫瘤基因的參與使人體細(xì)胞惡變，除上述兩類腫瘤基因，還需要其它腫瘤基因的參與，包括生長因子或受體基因的改變等。

2.可能尚需抗癌基因的失活或丟失，要使人體細(xì)胞惡變，激發(fā)的腫瘤基因需要在另一類基因（抗癌基因）發(fā)生失活或丟失的條件下才能發(fā)揮作用。

3.可能尚需細(xì)胞內(nèi)基因組遺傳穩(wěn)定性受破壞，要使激活的腫瘤基因在人體細(xì)胞惡變中發(fā)揮作用，需要一個前提，即細(xì)胞內(nèi)基因組的遺傳穩(wěn)定性受到破壞，這種情況可能由化學(xué)致癌物或病毒所引起。

第55頁/共65頁對癌基因與抗癌基因的評論如果說癌基因是一個涵義混亂不確切的命名，抗癌基因是同樣的模糊不清所謂癌基因與抗癌基因都是一大類控制細(xì)胞生長和分化的基因，對其單個基因來說，它的產(chǎn)物所具有的功能因細(xì)胞種類甚至細(xì)胞發(fā)育階段而異第56頁/共65頁1．癌基因與抗癌基因的相對意義:

同一種癌基因及其產(chǎn)物，在不同細(xì)胞中可起完全

相反的作用最典型的例子是ras基因及其產(chǎn)物p21。在成纖維細(xì)胞中已有充分證據(jù)說明，微量注入p21蛋白能使細(xì)胞迅速進(jìn)入S期和開始分裂。人ras基因可使成纖維細(xì)胞和某些上皮細(xì)胞惡變。但對點突變的嗜鉻細(xì)胞瘤pc12細(xì)胞，將ras基因引入或微量注射p21使惡性細(xì)胞停止分裂并開始分化。src基因?qū)﹄u成纖維細(xì)胞中的致癌作用是確定無疑的，但在胚胎發(fā)育過程中，src基因的表