LC的使用維護和應(yīng)用

LC-5500的使用、維護及應(yīng)用——液相色譜培訓(xùn)（五）現(xiàn)在是1頁\一共有71頁\編輯于星期一主要內(nèi)容LC-5500高效液液相色譜儀的使用和維護液相色譜常見問題及其對策高效液相色譜的應(yīng)用現(xiàn)在是2頁\一共有71頁\編輯于星期一LC-5500高效液相色譜的使用與維護現(xiàn)在是3頁\一共有71頁\編輯于星期一高液相色譜儀

——開機前的準(zhǔn)備工作

●流動相和樣品的前處理★過濾★脫氣

現(xiàn)在是4頁\一共有71頁\編輯于星期一流動相的前處理：過濾設(shè)備和材料：溶劑過濾器、真空泵、

0.45μm或更細的水性濾膜和有機濾膜過濾的方法：用加了濾膜的溶劑過濾器和真空泵抽濾過濾的目的：除去溶劑中的微小顆粒，

避免堵塞色譜柱和液路，

尤其是使用無機鹽配制

的緩沖液現(xiàn)在是5頁\一共有71頁\編輯于星期一儲液瓶一個存放流動相的容器儲液瓶的材料應(yīng)耐腐蝕，可為玻璃、不銹鋼、氟塑料（聚四氟乙烯），一般常用有機溶劑的原裝瓶作為儲液瓶用棕色玻璃瓶作為儲液瓶，可避免藻類的生長為保持流動相的純凈，應(yīng)經(jīng)常清洗或更換儲液瓶現(xiàn)在是6頁\一共有71頁\編輯于星期一流動相的前處理：脫氣脫氣的目的：使色譜泵的輸液準(zhǔn)確

輸液均勻準(zhǔn)確，且脈動減小。保留時間及色譜峰面積的重現(xiàn)性提高

提高檢測的性能

防止氣泡引起的尖峰基線穩(wěn)定，信噪比增加溶劑的紫外吸收本底降低

保護色譜柱減少死體積防止填料的氧化現(xiàn)在是7頁\一共有71頁\編輯于星期一常用的脫氣方法氦氣脫氣法加熱回流法抽真空脫氣法超聲脫氣法在線真空脫氣法現(xiàn)在是8頁\一共有71頁\編輯于星期一脫氣機超聲波清洗器現(xiàn)在是9頁\一共有71頁\編輯于星期一樣品的前處理◆使用流動相溶解樣品

--減少溶劑峰，尤其是組分峰靠近溶劑峰時由為重要

--保證樣品在流動相中的溶解度，避免樣品在系統(tǒng)中尤其在柱中產(chǎn)生沉淀◆

樣品需要過濾◆如果樣品中有氣泡，也要超聲脫氣現(xiàn)在是10頁\一共有71頁\編輯于星期一LC-5500液相色譜儀組成簡圖現(xiàn)在是11頁\一共有71頁\編輯于星期一P101泵鍵盤現(xiàn)在是12頁\一共有71頁\編輯于星期一單向閥結(jié)構(gòu)拋光面透明塑料墊片寶石球單向閥原理吸液沖程排液沖程出口單向閥進口單向閥泵頭泵工作原理現(xiàn)在是13頁\一共有71頁\編輯于星期一泵使用注意事項泵不能在沒有溶劑時空轉(zhuǎn)，否則活塞與泵缸的密封之間磨損會造成泄漏泵不能用具有腐蝕性的物質(zhì)，pH使用范圍為2～8.5含鹽流動相使用后不能長期存放在泵中，隨著液體的蒸發(fā)，留下的少量鹽的晶體會磨損高壓密封圈和泵塞，所以在應(yīng)用含鹽流動相后，一定要用純水徹底清洗泵絕對不允許在大于最大允許壓力限定值（40MPa）下操作現(xiàn)在是14頁\一共有71頁\編輯于星期一LC-5500主機進樣閥檢測器電源柱箱電源調(diào)零旋鈕柱溫箱液晶顯示屏現(xiàn)在是15頁\一共有71頁\編輯于星期一進樣方法1.在INJECT（進樣）狀態(tài)下清洗閥口

2.在LOAD（裝填）狀態(tài)下插入微量注射器

3.注入樣品

4.切到INJECT（進樣）狀態(tài)現(xiàn)在是16頁\一共有71頁\編輯于星期一進樣注意事項●用注射器吸取樣品后，一定要排除氣泡后方可進樣●將注射器針頭插入進樣口，直到針頭頂住進樣閥體平面為止，且不可用力過大，以免損傷閥體密封面●緩慢推進注射針，使定量管完全充滿樣液●旋轉(zhuǎn)手柄時一定要快，否則對泵和柱子都會產(chǎn)生不良影響現(xiàn)在是17頁\一共有71頁\編輯于星期一進樣量和檢測器響應(yīng)的關(guān)系示意圖進樣體積檢測器響應(yīng)值定量環(huán)體積的一半2倍定量環(huán)體積全量注入部分注入現(xiàn)在是18頁\一共有71頁\編輯于星期一進樣閥的沖洗進完樣后一定要及時沖洗進樣閥，特別是用含鹽緩沖液作流動相，由于這些溶液會形成結(jié)晶從而磨損墊圈將進樣閥轉(zhuǎn)至INJECT（進樣）位置，利用液相泵沖洗定量環(huán)及溝槽，利用注射器沖洗進樣閥的閥口；或?qū)⑦M樣閥轉(zhuǎn)至LOAD（裝填）位置，利用注射器同時沖洗進樣閥的閥口和定量環(huán)經(jīng)常用濕潤的軟布清潔進樣閥，特別是進樣口周圍現(xiàn)在是19頁\一共有71頁\編輯于星期一進樣閥使用注意事項閥應(yīng)該保持在LOAD或INJECT中的一個位置。如果閥處在兩者中間的位置，系統(tǒng)內(nèi)的高壓可能會破壞其密封表面

只允許用平端的沖洗注射器和樣品注射器，絕對禁止用尖端（GC）注射器，以防劃傷閥的密封面?，F(xiàn)在是20頁\一共有71頁\編輯于星期一柱溫箱結(jié)構(gòu)圖柱箱門保護柱色譜柱接檢測器現(xiàn)在是21頁\一共有71頁\編輯于星期一柱溫箱的使用注意事項打開柱溫箱電源開關(guān)，通過工作站軟件設(shè)定柱箱溫度使用柱恒溫箱時，應(yīng)先輸入流動相然后再升溫；關(guān)機時則相反，即先關(guān)閉升溫電源，待色譜柱溫度降至室溫后方可停泵在常溫下操作時，則不必打開柱溫箱電源現(xiàn)在是22頁\一共有71頁\編輯于星期一色譜柱日常使用注意事項過濾所有的溶劑和樣品使用保護柱不要把柱接頭上得太緊，損壞接頭螺紋易滲液開機時，流速和柱壓要逐漸增加注意色譜柱的pH值使用范圍不要高壓沖洗柱子不能讓緩沖鹽溶液留存在色譜柱中，關(guān)機前要先用含低濃度有機溶劑的水溶液沖洗，然后再用純有機溶劑來保存柱子現(xiàn)在是23頁\一共有71頁\編輯于星期一色譜柱的更換對于反相色譜柱的更換：拆卸色譜柱時，必須先關(guān)斷柱箱電源。待色譜柱柱溫降到室溫后，繼續(xù)用溶劑如甲醇沖洗色譜柱約20min；先卸下色譜柱出口端接頭，待有甲醇流出后再擰上螺帽；然后擰下色譜柱進口端接頭，繼續(xù)使甲醇滴入色譜柱，當(dāng)柱進口端有甲醇溢出，且沒有氣泡時，表明色譜柱已被甲醇充滿，此時可再擰上保護性螺帽。換新色譜柱的程序相反。現(xiàn)在是24頁\一共有71頁\編輯于星期一色譜柱更換、保存注意事項沖洗或活化色譜柱時，流出液應(yīng)放入廢液瓶中，千萬不可接到檢測器上，以免污染流通池按柱子進出口方向接入系統(tǒng)，不可更改色譜柱內(nèi)應(yīng)充滿溶劑，絕不可干燥放置。正相柱用正己烷或乙腈，反相柱用甲醇用原配的柱端堵頭封緊柱兩端色譜柱存放時防止震動，以免損壞柱床現(xiàn)在是25頁\一共有71頁\編輯于星期一檢測器的使用注意檢測器的波長通過工作站的軟件設(shè)定氘燈通電后在一分鐘內(nèi)起輝，然后進入工作狀態(tài)，一般氘燈穩(wěn)定需要0.5~1h，穩(wěn)定后就可以進樣分析，所以要等儀器達到穩(wěn)定狀態(tài)，也即基線走穩(wěn)后方可進行樣品分析注意液晶顯示屏所顯示的數(shù)字要為正，通過調(diào)零旋鈕調(diào)節(jié)基線與零點的位置，使基線在零點的上方現(xiàn)在是26頁\一共有71頁\編輯于星期一工作站界面現(xiàn)在是27頁\一共有71頁\編輯于星期一整套液相色譜儀的維護1、在使用過含鹽緩沖液后，用甲醇-水溶液（甲醇：水=1：9）沖洗整個系統(tǒng)，時間為30min，流量1mL/min。本步驟主要是沖洗干凈系統(tǒng)內(nèi)含鹽緩沖液。2、用純的強溶劑（甲醇或乙腈）沖洗整個系統(tǒng)，時間為30min以上，流量為1mL/min。本步驟主要是保護色譜柱。3、如果未使用緩沖液，上面步驟1可免去，直接用純的強溶劑沖洗整個系統(tǒng)，時間為30min以上，流量為1mL/min每次用過儀器后必須做!現(xiàn)在是28頁\一共有71頁\編輯于星期一注意事項流動相的選擇：對樣品易溶，且溶解度盡可能大化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，不損壞柱子不妨礙檢測器檢測，所選波長處無吸收黏度低，流動性好無毒或低毒，易于操作易于制成高純度，即色譜純廢液易處理，不污染環(huán)境現(xiàn)在是29頁\一共有71頁\編輯于星期一注意事項緩沖液的使用：使用前必須過濾使用后一定要進行清洗，以免造成腐蝕、磨損、阻塞:

用甲醇-水溶液（甲醇：水=1：9）沖洗30min（1ml/min），再用甲醇沖洗30min易受到細菌和霉菌的影響，最好是現(xiàn)用現(xiàn)配

不能直接用有機溶劑沖洗現(xiàn)在是30頁\一共有71頁\編輯于星期一液相色譜常見問題及其對策現(xiàn)在是31頁\一共有71頁\編輯于星期一液相色譜常見問題類型A.壓力異常（偏高、波動）

B.漏液

C.保留時間漂移

D.基線問題（漂移、噪聲）

E.峰形異常現(xiàn)在是32頁\一共有71頁\編輯于星期一現(xiàn)象：無壓力，流動相不流動可能原因：

1、柱塞桿折斷

2、泵頭內(nèi)有空氣或流動相不足

3、單向閥堵塞

4、漏液

5、壓力傳感器損壞(流動相流動正常，但無壓力)壓力異?，F(xiàn)在是33頁\一共有71頁\編輯于星期一現(xiàn)象：壓力持續(xù)偏高或不斷上升可能原因：

1、流速設(shè)定過高

2、保護柱或柱子篩板堵塞

3、流動相使用不當(dāng)或有緩沖鹽析出

4、色譜柱選擇不當(dāng)

5、進樣閥損壞壓力異?，F(xiàn)在是34頁\一共有71頁\編輯于星期一現(xiàn)象：壓力持續(xù)偏低可能原因：

1、流速設(shè)定過低

2、色譜柱選擇不當(dāng)

3、柱溫過高

4、系統(tǒng)漏液壓力異?，F(xiàn)在是35頁\一共有71頁\編輯于星期一壓力異常現(xiàn)象：壓力波動可能原因：

1、泵頭中有氣泡

2、單向閥損壞

3、柱塞密封圈損壞

4、脫氣不充分

5、系統(tǒng)漏液

6、使用了梯度洗脫現(xiàn)在是36頁\一共有71頁\編輯于星期一漏液接頭處漏液

可能原因：

1、接頭處松動

2、接頭磨損

3、接頭被污染

4、部件不匹配

現(xiàn)在是37頁\一共有71頁\編輯于星期一漏液泵漏液

可能原因：

1、單向閥松動

2、泵密封圈損壞

3、接頭松動（不要擰的太緊）現(xiàn)在是38頁\一共有71頁\編輯于星期一進樣閥漏液

可能原因：

1、轉(zhuǎn)子密封損壞

2、定量環(huán)堵塞

3、進樣口密封松動

4、進樣針尺寸不合適

5、廢液管產(chǎn)生虹吸

6、廢液管堵塞漏液現(xiàn)在是39頁\一共有71頁\編輯于星期一檢測器漏液

可能原因：

1、流通池破碎

2、廢液管堵塞

3、流通池堵塞漏液現(xiàn)在是40頁\一共有71頁\編輯于星期一保留時間漂移

可能原因：

1、柱溫變化

2、流動相組分變化

3、色譜柱沒有平衡好

4、流速變化

5、泵中有氣泡

6、流動相選擇不當(dāng)

7、鍵合相流失保留時間漂移現(xiàn)在是41頁\一共有71頁\編輯于星期一基線漂移

可能原因：

1、溫度波動

2、流動相不均勻(脫氣，使用純度更高的溶劑)3、流通池被污染或有氣泡

4、流通池窗口破裂

5、流動相配比不當(dāng)或流速變化

6、色譜柱沒有平衡

7、流動相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成

8、樣品中有強保留的物質(zhì)以饅頭樣峰被洗出

9、檢測器沒有設(shè)定在最大吸收波長處基線問題現(xiàn)在是42頁\一共有71頁\編輯于星期一基線噪聲（規(guī)則的）

可能原因：

1、流動相、泵、檢測器中有氣泡

2、有地方漏液

3、流動相混和不均勻

4、溫度影響（檢測器和柱溫差別太大）

5、其他電子設(shè)備的影響

基線問題現(xiàn)在是43頁\一共有71頁\編輯于星期一基線噪聲（不規(guī)則的）

可能原因：

1、流動相污染、變質(zhì)或由低質(zhì)溶劑配成

2、有地方漏液

3、流動相各溶劑不相溶或混和不均勻

4、流通池污染

5、系統(tǒng)內(nèi)有氣泡基線問題現(xiàn)在是44頁\一共有71頁\編輯于星期一前沿峰、拖尾峰

可能原因：

1、柱塞板堵塞

2、色譜柱塌陷

3、柱外效應(yīng)

4、干擾峰

5、重金屬污染

6、樣品溶劑選擇不當(dāng)

7、樣品過載

8、柱溫過低峰形異?，F(xiàn)在是45頁\一共有71頁\編輯于星期一峰分叉

可能原因：

1、保護柱或分析柱污染

2、樣品溶劑不溶于流動相峰形異?，F(xiàn)在是46頁\一共有71頁\編輯于星期一峰展寬可能原因：1、進樣體積過大2、流動相粘度過高3、保留時間過長4、柱外體積過大5、樣品過載峰形異常現(xiàn)在是47頁\一共有71頁\編輯于星期一峰變形

可能原因：

1、樣品過載

2、樣品溶劑選擇不當(dāng)峰形異常現(xiàn)在是48頁\一共有71頁\編輯于星期一峰形異常鬼峰可能原因：1、進樣閥殘余峰2、樣品中未知物3、柱未平衡4、水污染現(xiàn)在是49頁\一共有71頁\編輯于星期一高效液相色譜的應(yīng)用現(xiàn)在是50頁\一共有71頁\編輯于星期一在食品分析中的應(yīng)用食品營養(yǎng)成分分析：氨基酸、色素、維生素、有機酸（鄰苯二甲酸、檸檬酸、蘋果酸等）等食品添加劑分析：甜味劑（安塞蜜、糖精鈉）、防腐劑（山梨酸、苯甲酸）、合成著色劑（合成色素如檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、亮藍等）、抗氧化劑等食品中控制使用或禁止使用添加物的分析：過氧化苯甲酰、蘇丹紅、三聚氰胺現(xiàn)在是51頁\一共有71頁\編輯于星期一食品中苯甲酸、山梨酸的測定

—GB/T5009.29-2003色譜條件：色譜柱：C18柱，4.6mm×250mm，10μm不銹鋼柱或性能相當(dāng)者流動相：甲醇：0.02mol/L乙酸銨溶液＝5：95流速：1mL/min進樣量：20μL柱溫：室溫檢測波長：230nm現(xiàn)在是52頁\一共有71頁\編輯于星期一苯甲酸、山梨酸和糖精鈉色譜圖現(xiàn)在是53頁\一共有71頁\編輯于星期一食品中合成著色劑的測定

－GB/T5009.35-2003色譜條件：色譜柱：C18柱，4.6mm×250mm，10μm不銹鋼柱或性能相當(dāng)者流動相：A：甲醇；B：0.02mol/L乙酸銨溶液梯度洗脫：甲醇：20％～35％，3％/min；35％～98％，9％/min；98％繼續(xù)6min流速：1mL/min進樣量：20μL柱溫：室溫檢測波長：254nm現(xiàn)在是54頁\一共有71頁\編輯于星期一檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃和亮藍色譜圖現(xiàn)在是55頁\一共有71頁\編輯于星期一小麥粉中過氧化苯甲酰的測定

高效液相色譜法

－GB/T22325-2008色譜條件：色譜柱：C18反相柱（4.6mm×250mm，5μm）或性能相當(dāng)者流動相：甲醇：0.02mol/L乙酸銨溶液＝10：90流速：1mL/min進樣量：20μL柱溫：室溫檢測波長：230nm現(xiàn)在是56頁\一共有71頁\編輯于星期一過氧化苯甲酰色譜圖現(xiàn)在是57頁\一共有71頁\編輯于星期一食品中蘇丹紅染料的檢測方法

高效液相色譜法

－GB/T19681-2005色譜條件：色譜柱：C18反相柱（4.6mm×250mm，5μm）或性能相當(dāng)者流動相：A：0.1％甲酸的水溶液：乙腈＝85：15B：0.1％甲酸的乙腈溶液：丙酮＝80：20梯度洗脫：見表流速：1mL/min進樣量：20μL柱溫：30℃檢測波長：蘇丹紅Ⅰ478nm，蘇丹紅Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ520nm現(xiàn)在是58頁\一共有71頁\編輯于星期一梯度洗脫表現(xiàn)在是59頁\一共有71頁\編輯于星期一蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ色譜圖現(xiàn)在是60頁\一共有71頁\編輯于星期一原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測

－GB/T22388-2008色譜條件：色譜柱：C8反相柱（4.6mm×250mm，5μm）或性能相當(dāng)者流動相：緩沖液：乙腈＝85：15（緩沖液為：2.10g檸檬酸和2.16g辛烷磺酸鈉，加入約980mL水溶解，調(diào)pH至3.0后，定容為1L）流速：1mL/min進樣量：20μL柱溫：30℃檢測波長：240nm現(xiàn)在是61頁\一共有71頁\編輯于星期一三聚氰胺色譜圖現(xiàn)在是62頁\一共有71頁\編輯于星期一原料乳中三聚氰胺快速檢測液相色譜法

——GB/T22400-2008色譜條件：色譜柱：強陽離子交換柱，SCX（4.6mm×250mm，5μm）或性能相當(dāng)者流動相：磷酸鹽緩沖液：乙腈＝70：30（緩沖液為：6.8g磷酸二氫鉀，加入約800mL水溶解，用磷酸調(diào)pH至3.0后，定容為1L）流速：1.5mL/min進樣量：20μL柱溫：室溫檢測波長：240nm現(xiàn)在是63頁\一共有