動(dòng)物源性食品中多種β受體激動(dòng)劑殘留量的測(cè)定液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法專家講座

GB/T22286-動(dòng)物源性食品中各種

β-受體激動(dòng)劑殘留量測(cè)定（液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法LC/MS/MS-ESI)動(dòng)物源性食品中多種β受體激動(dòng)劑殘留量的測(cè)定液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法專家講座第1頁(yè)背景介紹（特性及藥理作用、危害、檢測(cè)方法以及相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)）GB/T22286-2008檢測(cè)原理及適用范圍檢測(cè)流程（酶解、提取、凈化）儀器條件注意事項(xiàng)主要內(nèi)容動(dòng)物源性食品中多種β受體激動(dòng)劑殘留量的測(cè)定液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法專家講座第2頁(yè)一、背景介紹

Β-受體激動(dòng)劑是一類化學(xué)合成苯乙醇胺類物質(zhì)，早期主要用于防治人、動(dòng)物支氣管哮喘和支氣管痙攣，以后發(fā)覺在飼料中添加該類藥品后含有營(yíng)養(yǎng)再分配作用，可顯著提升動(dòng)物瘦肉率（提升10%），所以曾被作為促生長(zhǎng)添加劑被廣泛關(guān)注，不過人們食用了該類藥品殘留畜禽產(chǎn)品后會(huì)出現(xiàn)面色潮紅、頭痛、頭暈、胸悶、心悸、四肢麻木等不良反應(yīng)，嚴(yán)重可危及生命。所以歐盟、美國(guó)等都先后立法禁止在養(yǎng)殖業(yè)中使用該類藥品，我國(guó)政府也明令禁止其使用。1.“瘦肉精”危害動(dòng)物源性食品中多種β受體激動(dòng)劑殘留量的測(cè)定液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法專家講座第3頁(yè)鹽酸克倫特羅在動(dòng)物體內(nèi)主要發(fā)生氧化作用，也發(fā)生硫酸化反應(yīng)和葡萄糖醛酸絡(luò)合反應(yīng)(存在形式為結(jié)合態(tài)和游離態(tài))。其主要代謝場(chǎng)所是肝臟，最終大部分隨尿液排出，試驗(yàn)證實(shí)，鹽酸克倫特羅在動(dòng)物體內(nèi)代謝周期長(zhǎng)，易富集和殘留，耐熱性較高，在100℃沸水中很穩(wěn)定。2.“瘦肉精”體內(nèi)代謝動(dòng)物源性食品中多種β受體激動(dòng)劑殘留量的測(cè)定液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法專家講座第4頁(yè)當(dāng)前，針對(duì)β-興奮劑有效檢測(cè)方法主要集中在膠體金快速檢測(cè)卡法、酶聯(lián)免疫法（ELISA）、高效液相色譜法（HPLC）、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)、氣相色譜-質(zhì)譜法(GC-MS)3.檢測(cè)方法及對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物源性食品中多種β受體激動(dòng)劑殘留量的測(cè)定液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法專家講座第5頁(yè)二、GB/T22286-適用范圍及原理范圍：本標(biāo)準(zhǔn)要求了動(dòng)物源性食品中（適合用于豬肝和豬肉）克倫特羅、沙丁胺醇、特布他林、萊克多巴胺、塞曼特羅、塞布特羅、溴布特羅、苯氧丙酚胺、馬布特羅、溴代克倫特羅殘留量檢測(cè)方法，檢出限均為0.5μg/kg。試驗(yàn)室還針對(duì)鰻魚及烤鰻等動(dòng)物源性食品進(jìn)行了方法驗(yàn)證動(dòng)物源性食品中多種β受體激動(dòng)劑殘留量的測(cè)定液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法專家講座第6頁(yè)檢測(cè)原理原理：試樣中殘留物經(jīng)酶解，用高氯酸調(diào)整pH值，沉淀蛋白后離心，上清液用異丙醇-乙酸乙酯提取，再用陽(yáng)離子交換柱凈化，液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定，內(nèi)標(biāo)法定量（沙丁胺醇-D3作為沙丁胺醇、特布他林和萊克多巴胺內(nèi)標(biāo)物，克倫特羅-D9作為其余β-受體激動(dòng)劑內(nèi)標(biāo)物質(zhì)）克倫特羅沙丁胺醇特布他林萊克多巴胺賽曼特羅-NH-+H20-NH2-+OH+-水解作用動(dòng)物源性食品中多種β受體激動(dòng)劑殘留量的測(cè)定液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法專家講座第7頁(yè)三、檢測(cè)流程檢測(cè)流程：-NH-+H20-NH2-+OH+-水解作用

酶解

提取

凈化1.酶最適pH2.在酸性條件下溶于水，易提取動(dòng)物源性食品中多種β受體激動(dòng)劑殘留量的測(cè)定液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法專家講座第8頁(yè)四、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜條件動(dòng)物源性食品中多種β受體激動(dòng)劑殘留量的測(cè)定液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法專家講座第9頁(yè)五、注意事項(xiàng)1、每批檢測(cè)樣做樣次序?yàn)樵噭┛瞻?、樣品空白、空白樣品加?biāo)曲線、樣品。2、加標(biāo)回收：取0.25mL10.0ng/mL四種興奮劑混標(biāo)到5g樣品中，相當(dāng)于0.5μg/kg添加水平

3、初測(cè)加標(biāo)選取同等基質(zhì)任一樣品，復(fù)測(cè)時(shí)做平行樣，初測(cè)濃度較高樣品復(fù)測(cè)時(shí)應(yīng)先將樣品稀釋一定倍數(shù)后過固相萃取柱，確保最終濃度在曲線范圍之內(nèi)，且最終對(duì)應(yīng)內(nèi)標(biāo)濃度應(yīng)與曲線保持一致4、