生物藥物的微生物限度檢查NO專家講座

第一節(jié)生物藥品被微生物污染后引發(fā)質(zhì)量改變藥品質(zhì)量改變?cè)騼?nèi)因----沉淀,水解,氧化等外因----被微生物污染污染源：制藥原料,廠房設(shè)備,空氣,操作人員,包裝材料等生產(chǎn)步驟生物藥物的微生物限度檢查NO專家講座第1頁(yè)一、生物藥品染菌范圍與原因1.范圍包括全部劑型，各種藥品2.原因

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微生物特征個(gè)體小，種類多，繁殖快

@生產(chǎn)過(guò)程和設(shè)備“死角”

@制藥原料和藥品本身性質(zhì)植物性原料：土壤微生物，植物病原菌，人獸糞便動(dòng)物性原料：寄生微生物，病原微生物生物藥物的微生物限度檢查NO專家講座第2頁(yè)二生物藥品被微生物污染后引發(fā)質(zhì)量改變藥品理化性質(zhì)改變表現(xiàn)為外觀、氣味、染色、稠度、PH、產(chǎn)生氣體等藥品含微生物毒性代謝物黃曲霉藥效改變藥品失活生物藥物的微生物限度檢查NO專家講座第3頁(yè)三意義確保藥品質(zhì)量檢測(cè)藥品生產(chǎn)工藝科學(xué)性,合理性和管理水平生物藥物的微生物限度檢查NO專家講座第4頁(yè)第二節(jié)微生物程度檢驗(yàn)法

微生物程度檢驗(yàn)法系檢驗(yàn)非要求滅菌制劑及其原料、輔料受微生物污染程度方法。檢驗(yàn)項(xiàng)目包含細(xì)菌數(shù)、霉菌數(shù)、酵菌數(shù)及控制菌(致病菌)檢驗(yàn)。生物藥物的微生物限度檢查NO專家講座第5頁(yè)滅菌制劑：系指采取某一物理、化學(xué)方法殺滅或除去全部活微生物繁殖體和芽孢一類藥品制劑。①注射用制劑②眼用制劑③植入型制劑④創(chuàng)面用制劑⑤手術(shù)用制劑

無(wú)菌檢驗(yàn)生物藥物的微生物限度檢查NO專家講座第6頁(yè)生物藥物的微生物限度檢查NO專家講座第7頁(yè)操作環(huán)境

微生物程度檢驗(yàn)應(yīng)在環(huán)境潔凈度10000級(jí)下局部潔凈度100級(jí)單向流空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行。檢驗(yàn)全過(guò)程必須嚴(yán)格恪守?zé)o菌操作，預(yù)防再污染。單向流空氣區(qū)域、工作臺(tái)面及環(huán)境應(yīng)定時(shí)按《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌測(cè)試方法》現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行潔凈驗(yàn)證。培養(yǎng)溫度和時(shí)間

本檢驗(yàn)法中細(xì)菌培養(yǎng)溫度為30~35oC；時(shí)間為48小時(shí)。霉菌、酵母菌培養(yǎng)溫度為23~28oC；時(shí)間為72小時(shí)?？刂凭囵B(yǎng)溫度為35~37oC；時(shí)間為48小時(shí)。眼用制劑微生物程度檢驗(yàn)用薄膜過(guò)濾法，培養(yǎng)時(shí)間為7天。生物藥物的微生物限度檢查NO專家講座第8頁(yè)三微生物程度檢驗(yàn)步驟1.供試品制備2.程度檢驗(yàn)方法

①、常規(guī)法②、稀釋法③、離心沉淀集菌法④、薄膜過(guò)濾法⑤、中和法⑥、離心和培養(yǎng)基稀釋法⑦、離心和薄膜過(guò)濾法

生物藥物的微生物限度檢查NO專家講座第9頁(yè)微生物程度檢驗(yàn)慣用檢驗(yàn)設(shè)備及器材

恒溫培養(yǎng)箱30～35℃36±1℃霉菌培養(yǎng)箱25～28℃恒溫水浴箱45±1℃凈化工作臺(tái)生物顯微鏡1500X體視顯微鏡或放大鏡電冰箱電熱干燥箱250～300℃高壓蒸汽消毒器電子天平或藥品天平感量0.1g勻漿儀或研缽錐形瓶100ml，250ml，500ml，1000ml生物藥物的微生物限度檢查NO專家講座第10頁(yè)直形吸管1ml，10ml量杯10ml試管18x180mm，13x200mm，30x200mm試管筒培養(yǎng)皿9cm培養(yǎng)皿筒陶瓦蓋12cm量筒100ml，500ml，1000ml濾器及微孔濾膜孔徑0.45±0.02um注射器1ml，5ml，10ml，30ml載玻片及蓋玻片接種針及接種環(huán)試管架生物藥物的微生物限度檢查NO專家講座第11頁(yè)乙醇燈康氏振蕩器離心機(jī)500～4000／min紫外燈365nm玻璃或搪瓷消毒缸（帶蓋）大、小橡皮乳頭乙醇棉球或碘伏棉球滅菌剪刀、鑷子、鋼錐滅菌稱樣紙滅菌不銹鋼藥匙火柴、記號(hào)筆（玻璃鉛筆）白瓷盤、洗手盆試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)紙生物藥物的微生物限度檢查NO專家講座第12頁(yè)1、含抑菌藥品為何會(huì)染菌？2、怎樣確定含抑菌成份？3、含抑菌成份供試液制備方法有那些？生物藥物的微生物限度檢查NO專家講座第13頁(yè)

4．含抑菌成份供試品凡含防腐劑或抑菌成份且影響檢驗(yàn)（供試品按常規(guī)檢驗(yàn)法，加入要求量對(duì)照菌，不能檢出時(shí)）供試品，可依據(jù)供試品性質(zhì)，控制菌特征及檢驗(yàn)條件等按以下方法之一或兩種以上方法聯(lián)合應(yīng)用處理后，依法檢驗(yàn)。同時(shí)做陽(yáng)性和陰性對(duì)照。①稀釋法：將供試品種入較大量培養(yǎng)基中，使該供試液稀釋至不具抑菌作用濃度（使該供試液稀釋至陽(yáng)性對(duì)照菌能生長(zhǎng)濃度）。此法用作控制菌檢驗(yàn)和程度檢驗(yàn)。本法適合用于抑菌作用不強(qiáng)中藥、化學(xué)藥品檢驗(yàn)。生物藥物的微生物限度檢查NO專家講座第14頁(yè)②離心沉淀集菌法：取要求量供試液于無(wú)菌刻度離心管中，離心（每分鐘3000轉(zhuǎn)）30分鐘，棄去上清液，留底部集菌液約2ml，再稀釋成原要求供試液。如有不溶性藥渣，可先離心（每分鐘500轉(zhuǎn)）5分鐘，取全部上層液，再行集菌處理。本法適合用于一些抑菌作用不強(qiáng)中、西藥品，如蜜丸、水丸、片劑、散劑、顆粒劑、膠囊劑及液體制劑。③薄膜過(guò)濾法：取要求量供試液，置稀釋劑100ml中，搖勻，以無(wú)菌操作加入裝有直徑約50mm、孔徑小于0.45um±0.02um微孔濾膜過(guò)濾器中，減壓抽干后，用稀釋劑沖洗濾膜3次，每次50～100ml，取出濾膜備檢。沖洗時(shí)每次最好不少于100ml，能夠?qū)⑴囵B(yǎng)基加入濾器或取出濾膜，加入增菌培養(yǎng)基中，能夠用加入濾器中供試品量來(lái)控制檢驗(yàn)量，也能夠把濾膜取出來(lái)剪成2～4片，使每片相當(dāng)于供試品1g或1ml，放入增菌培養(yǎng)基中，作控制菌檢驗(yàn)。生物藥物的微生物限度檢查NO專家講座第15頁(yè)本法適合用于水溶性抑菌成份中、西藥品和滴眼劑等制劑“滅活”處理。安放濾膜時(shí)，注意濾膜與濾器應(yīng)密合，預(yù)防濾膜破損、漏液。本法所用濾膜孔徑0.45um±0.02um。④（鈍化）中和法：凡含磺胺、汞、砷類或防腐劑供試品，可用對(duì)應(yīng)試劑鈍化活性因子，中和毒性后制成供試液。磺胺類藥品中和法取要求量含磺胺類供試品，于100ml增菌液中加入含1％對(duì)氨基苯甲酸約1～5ml（以前講