微生物的分離純化和觀察

一試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)1、了解微生物分離和純化原理2、掌握倒平板方法和幾個(gè)慣用分離純化接種培養(yǎng)基本操作技術(shù)，掌握微生物無菌操作技術(shù)微生物的分離純化和觀察第1頁二試驗(yàn)原理為了生產(chǎn)和科學(xué)研究需要，往往需要從自然界混雜微生物群中分離單一菌種，這種取得單一菌株純培養(yǎng)方法稱為微生物分離。為了取得某種微生物純培養(yǎng)，可采取以下兩種方法：一個(gè)是提供有利于該微生物生長繁殖最適培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件。如要從土壤中分離自生固氮菌，則其培養(yǎng)基中是不能含有N源，這種培養(yǎng)基就比較適于能利用空氣中N2微生物。另一個(gè)方法是在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制人們所不需要微生物生長繁殖。分離土壤中真菌，往往在分離真菌PDA培養(yǎng)基中加入適當(dāng)孟加拉紅，鏈霉素和金霉素等化學(xué)藥品，目標(biāo)在于抑制細(xì)菌生長，這么更有利于取得其純培養(yǎng)。微生物的分離純化和觀察第2頁平板分離方法主要有：

1、平板劃線分離法；

2、稀釋涂布平板法。除能有效分離純化微生物外，還可用于測定樣品中活菌數(shù)量。微生物的分離純化和觀察第3頁土壤中微生物數(shù)量眾多，在肥沃土壤中固氮菌數(shù)量也很多，自然界中多數(shù)氮素養(yǎng)料是由微生物固氮結(jié)果，固氮菌普通可分為自生固氮菌和共生固氮菌兩類。要分離自生固氮菌，慣用阿斯畢無氮培養(yǎng)基這種選擇培養(yǎng)基，控制其適宜環(huán)境條件，使它在培養(yǎng)基上大量繁殖，然后經(jīng)過稀釋法和劃線分離純化法，使它在培養(yǎng)基上形成單菌落，如分離所得不純，需要深入純化，直到得到純種.微生物的分離純化和觀察第4頁三試驗(yàn)材料1、培養(yǎng)基：阿斯畢無氮培養(yǎng)基。2、菜園土。3、滅菌培養(yǎng)皿、鑷子、剪刀、接種針、酒精燈等。微生物的分離純化和觀察第5頁四方法與步驟（一）富集培養(yǎng)：1、用已滅菌后冷卻至50oC左右阿斯畢培養(yǎng)基倒成平板。2、用已滅菌鑷子將黃豆粒大菜園土擺入已冷凝平板培養(yǎng)基上。3、正面放置培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，28oC培養(yǎng)3~4天后，在土粒周圍有混濁半透明膠狀菌落出現(xiàn)，有在后期會(huì)產(chǎn)生褐色色素。微生物的分離純化和觀察第6頁（二）劃線分離純化:(下次試驗(yàn))1、用已溶化至50oC阿斯畢培養(yǎng)基倒入平板。2、用接種環(huán)挑取上述菌落少許，在冷凝平板上進(jìn)行劃線分離，而后置28oC培養(yǎng)4天。劃線方法如圖：1234微生物的分離純化和觀察第7頁微生物的分離純化和觀察第8頁（三）純化、鏡檢，得到純種培養(yǎng)（下次試驗(yàn)）1、平板上出現(xiàn)單菌落，按無菌操作移入阿斯畢培養(yǎng)基斜面試管中，28oC培養(yǎng)4天。2、鏡檢：將斜面菌株進(jìn)行涂片、染色、鏡檢。如是粗短桿狀或球狀單一形態(tài)菌體細(xì)胞較大，常呈單個(gè)或“8”字排列，在細(xì)胞表面有較厚莢膜者，即為自生固氮菌。如有雜菌，需要深入劃線純化。3、將得到純化菌株，移接到另一阿斯畢培養(yǎng)基斜面管，28oC培養(yǎng)3~4天，即取得純培養(yǎng)菌，可冷凍保留，備用。微生物的分離純化和觀察第9頁五注意事項(xiàng)在微生物分離、純化每一操作步驟，要嚴(yán)格按照無菌操作進(jìn)行。平