化妝品微生物檢驗(yàn)及安全技術(shù)規(guī)范比較詳解

（優(yōu)選）化妝品微生物檢驗(yàn)及安全技術(shù)規(guī)范比較目前一頁\總數(shù)四十一頁\編于四點(diǎn)化妝品因含有水分，油脂，蛋白質(zhì)，多元醇等，為微生物的生長創(chuàng)造了良好的條件，造成產(chǎn)品變質(zhì)。為了抑制微生物的繁殖和消費(fèi)者使用過程中的產(chǎn)品污染，往往在化妝品中加入防腐劑(尼珀?duì)柦鸺字?、乙酯、丙脂及苯氧乙醇?，但不能過量。因此，化妝品一方面為微生物的生長繁殖提供了良好的環(huán)境；另一方面由于防腐劑的應(yīng)用又可抑制微生物的生長。為了避免測試結(jié)果可能出現(xiàn)假陰性（實(shí)際應(yīng)該生長或是污染了，由于防腐劑的存在而導(dǎo)致結(jié)果不生長或是結(jié)果偏?。枰砑又泻蛣?。目前二頁\總數(shù)四十一頁\編于四點(diǎn)化妝品中常用的中和劑樣品中：國際方法：尼泊金酯類防腐劑的中和劑：吐溫80（30g/L）和卵磷脂(3g/L)+普通肉湯?；瘖y品安全技術(shù)規(guī)范：培養(yǎng)基成分中直接有卵磷脂（1g）吐溫80（7g）。（稀釋法也能同步起到中和的效果）生產(chǎn)用水中的余氯：每125ml水樣中加入0.1mg硫代硫酸鈉。（注意添加方式和使用范圍）目前三頁\總數(shù)四十一頁\編于四點(diǎn)化妝品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)目前四頁\總數(shù)四十一頁\編于四點(diǎn)微生物檢驗(yàn)方法（2015版化妝品安全技術(shù)規(guī)范）GB/T7918.1-1987化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法總則菌落總數(shù)（2015版化妝品安全技術(shù)規(guī)范）GB/T7918.2-1987化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法耐熱大腸菌群（2015版化妝品安全技術(shù)規(guī)范）糞大腸菌群：GB/T7918.3-1987化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法銅綠假單胞菌（2015版化妝品安全技術(shù)規(guī)范）GB/T7918.4-1987化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法綠膿桿菌金黃色葡萄球菌（2015版化妝品安全技術(shù)規(guī)范）GB/T7918.5-1987化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法金黃色葡萄球菌霉菌和酵母菌：（2015版化妝品安全技術(shù)規(guī)范）

目前五頁\總數(shù)四十一頁\編于四點(diǎn)方法比較側(cè)重點(diǎn)2007版化妝品衛(wèi)生規(guī)范2015版化妝品安全技術(shù)規(guī)范儀器和設(shè)備規(guī)格沒有規(guī)定有：天平/培養(yǎng)箱樣品采集全部操作應(yīng)在無菌室內(nèi)進(jìn)行，或在相應(yīng)條件下，按無菌操作規(guī)定進(jìn)行。全部操作應(yīng)在符合生物安全要求的實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行如檢出糞大腸菌群或其它致病菌，自報(bào)告發(fā)出之日起該菌種及被檢樣品應(yīng)保存一個(gè)月。直接刪除如為5mL則加到45mL滅菌生理鹽水，混勻后，制成1：10檢液。直接刪除2007版化妝品衛(wèi)生規(guī)范與2015版化妝品安全技術(shù)規(guī)范對比：總則目前六頁\總數(shù)四十一頁\編于四點(diǎn)目前七頁\總數(shù)四十一頁\編于四點(diǎn)總則重點(diǎn)1.具有代表性。2.不少于2個(gè)包裝單位的取樣中共取10g或10mL。3.供檢樣品，應(yīng)嚴(yán)格保持原有的包裝狀態(tài)。容器不應(yīng)有破裂，在檢驗(yàn)前不得打開，防止樣品被污染。4.應(yīng)置于室溫陰涼干燥處，不要冷藏或冷凍。4.宜先取出部分樣品做微生物檢驗(yàn)。5.嚴(yán)格上微生物無復(fù)測一說。（可能的因素多），因此對微生物檢驗(yàn)人員要求嚴(yán)格。6.生物安全開始重視。目前八頁\總數(shù)四十一頁\編于四點(diǎn)詳細(xì)操作步驟側(cè)重點(diǎn)2007版化妝品衛(wèi)生規(guī)范2015版化妝品安全技術(shù)規(guī)范菌落總數(shù)定義嗜中溫的需氧性菌落總數(shù)需氧性和兼性厭氧菌落總數(shù)TTC121℃/20min高壓滅菌溶解后過濾除菌，或115℃高壓滅菌20minWHO更改糞大腸菌群（Fecalcoliforms）耐熱大腸菌群Thermotolerantcoliformbacteria大腸培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間置44℃±0.5℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h～48h置44.5℃±0.5℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，如既不產(chǎn)酸也不產(chǎn)氣，繼續(xù)培養(yǎng)至48h霉菌和酵母菌置28℃±2℃培養(yǎng)72h置28℃±2℃培養(yǎng)5d（讀數(shù)時(shí)間靈活）目前九頁\總數(shù)四十一頁\編于四點(diǎn)詳細(xì)操作步驟重點(diǎn)1.所配制培養(yǎng)基可冷藏和冷卻備用為分步驟檢測提供基礎(chǔ)。2.菌落總數(shù)和霉菌酵母菌總數(shù)a.單位CFU/g或CFU/ml。b.二位有效數(shù)字，在二位有效數(shù)字后面的數(shù)值，應(yīng)以四舍五入法計(jì)算。c.“不可計(jì)”注明稀釋度。ColonyFormingUnitsd.特有的形態(tài)和培養(yǎng)特性（霉菌和酵母菌）。目前十頁\總數(shù)四十一頁\編于四點(diǎn)樣品的制備液體樣品膏、霜、乳劑半固體狀樣品固體樣品樣品的制備注意事項(xiàng)無菌容器、材料及操作樣品的均一性玻璃珠磁力攪拌均質(zhì)器目前十一頁\總數(shù)四十一頁\編于四點(diǎn)樣品的檢驗(yàn)及保管

及時(shí)檢驗(yàn)樣品應(yīng)放在室溫陰涼干燥處樣品先進(jìn)行微生物檢驗(yàn)(原料)，再做其他指標(biāo)須防止微生物的再污染和擴(kuò)散測試方法：目前十二頁\總數(shù)四十一頁\編于四點(diǎn)菌落總數(shù)檢驗(yàn)菌落總數(shù)（Aerobicbacterialcount）：化妝品檢樣經(jīng)過處理，在一定條件下培養(yǎng)后（如培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間、pH值、需氧性質(zhì)等），1g（1mL）檢樣中所含菌落的總數(shù)。所得結(jié)果只包括一群本方法規(guī)定的條件下生長的嗜中溫的需氧性和兼性厭氧菌落總數(shù)。測定菌落總數(shù)便于判明樣品被細(xì)菌污染的程度，是對樣品進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)總評價(jià)的綜合依據(jù)。目前十三頁\總數(shù)四十一頁\編于四點(diǎn)測試流程48小時(shí)出結(jié)果（30-300）：數(shù)據(jù)處理混合平板的制備細(xì)菌的培養(yǎng)檢查結(jié)果、觀察與計(jì)數(shù)供試液的制備書寫檢驗(yàn)記錄單目前十四頁\總數(shù)四十一頁\編于四點(diǎn)TTC亦不可多加會抑制菌落生長為便于區(qū)別化妝品中的顆粒與菌落，可在每100mL卵磷脂吐溫80營養(yǎng)瓊脂中加入1mL0.5％的TTC溶液，如有細(xì)菌存在，培養(yǎng)后菌落呈紅色，而化妝品的顆粒顏色無變化。目前十五頁\總數(shù)四十一頁\編于四點(diǎn)接種陽性菌計(jì)算回收率推薦了解：人員培訓(xùn)能力掌握的檢驗(yàn)重要指標(biāo)。有條件可做視具體樣品測試結(jié)果。在膏霜類化妝品中,微生物都是吸附或附著于顆粒狀的原料中,檢測時(shí)不易洗脫下來,因此,需要驗(yàn)證檢測方法的有效性。目前十六頁\總數(shù)四十一頁\編于四點(diǎn)耐熱大腸菌群未檢出2天，檢出3-4天耐熱大腸菌群Thermotolerantcoliformbacteria系一群需氧及兼性厭氧革蘭氏陰性無芽胞桿菌，在44.5℃培養(yǎng)24h—48h能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸并產(chǎn)氣。該菌主要來自人和溫血動物糞便，可作為糞便污染指標(biāo)來評價(jià)化妝品的衛(wèi)生質(zhì)量,推斷化妝品中有否污染腸道致病菌的可能。目前十七頁\總數(shù)四十一頁\編于四點(diǎn)產(chǎn)酸：黃色產(chǎn)氣：氣泡產(chǎn)酸產(chǎn)氣書寫檢驗(yàn)記錄單不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣增菌培養(yǎng)供試液的制備配培養(yǎng)基和稀釋液檢查結(jié)果判斷44.5±0.5℃24-48h分離培養(yǎng)蛋白胨水培養(yǎng)最終結(jié)果判斷44.5±0.5℃24±2h靛基質(zhì)特征菌落36±1℃18~24h雙倍膽鹽乳糖EMB瓊脂液面玫瑰紅色紫黑色★糞大腸菌群檢查流程圖鏡檢目前十八頁\總數(shù)四十一頁\編于四點(diǎn)結(jié)果報(bào)告根據(jù)發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，平板上有典型菌落，并經(jīng)證實(shí)為革蘭氏陰性短桿菌，靛基質(zhì)試驗(yàn)陽性，則可報(bào)告被檢樣品中檢出耐熱大腸菌群。目前十九頁\總數(shù)四十一頁\編于四點(diǎn)銅綠假單胞菌未檢出2天，檢出4天銅綠假單胞菌（Pseudomonasaeruginosa）屬于假單胞菌屬，為革蘭氏陰性桿菌，氧化酶陽性，能產(chǎn)生綠膿菌素。此外還能液化明膠，還原硝酸鹽為亞硝酸鹽，在42℃±1℃條件下能生長。該菌對人有致病力，可使傷處化膿，引起敗血癥等。在自然界中分布甚廣，空氣、水、土壤目前二十頁\總數(shù)四十一頁\編于四點(diǎn)最終結(jié)果判斷增菌培養(yǎng)供試液的制備書寫檢驗(yàn)記錄單分離純化無菌落或無特征菌落配培養(yǎng)基和稀釋液革蘭染色、鏡檢→氧化酶試驗(yàn)綠膿菌素試驗(yàn)生化試驗(yàn)硝酸鹽還原試驗(yàn)

42℃生長試驗(yàn)明膠液化試驗(yàn)★銅綠假單胞菌檢查流程圖SCDLP培養(yǎng)基十六烷三甲基溴化銨瓊脂36±1℃18~24h36±1℃18~24h特征菌落灰白色、扁平、周圍有水溶性藍(lán)綠色素鏡檢目前二十一頁\總數(shù)四十一頁\編于四點(diǎn)十六烷三甲基溴化銨平板SCDLP培養(yǎng)基黃綠色菌膜灰白色濕潤氧化酶試驗(yàn)粉紅/紫紅色目前二十二頁\總數(shù)四十一頁\編于四點(diǎn)綠膿菌素試驗(yàn)鹽酸層呈粉紫色氯仿層呈藍(lán)綠色硝酸鹽還原產(chǎn)氣試驗(yàn)N2明膠液化試驗(yàn)明膠培養(yǎng)基（高層）明膠液化目前二十三頁\總數(shù)四十一頁\編于四點(diǎn)結(jié)果報(bào)告被檢樣品經(jīng)增菌分離培養(yǎng)后，經(jīng)證實(shí)為革蘭氏陰性桿菌，氧化酶及綠膿菌素試驗(yàn)皆為陽性者，即可報(bào)告被檢樣品中檢出銅綠假單胞菌；如綠膿菌素試驗(yàn)陰性而液化明膠、硝酸鹽還原產(chǎn)氣和42℃生長試驗(yàn)三者皆為陽性時(shí)，仍可報(bào)告被檢樣品中檢出銅綠假單胞菌。目前二十四頁\總數(shù)四十一頁\編于四點(diǎn)金黃色葡萄球菌未檢出2天，檢出3天金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）為革蘭氏陽性球菌，呈葡萄狀排列，無芽胞，無莢膜，能分解甘露醇，血漿凝固酶陽性。該菌是葡萄球菌中對人類致病力最強(qiáng)的一種，能引起人體局部化膿性病灶，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致敗血癥。目前二十五頁\總數(shù)四十一頁\編于四點(diǎn)革蘭染色、鏡檢→生化試驗(yàn):血漿凝固酶試驗(yàn)甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)最終結(jié)果判斷增菌培養(yǎng)供試品的處理書寫檢驗(yàn)記錄單分離純化無菌落或無特征菌落配培養(yǎng)基和稀釋液36±1℃36±1℃SCDLP培養(yǎng)基或7.5%NaCl肉湯24±2hBairdParker’s或血瓊脂24~48h特征菌落★金黃色葡萄球菌檢查流程圖鏡檢耐鹽分目前二十六頁\總數(shù)四十一頁\編于四點(diǎn)BairdParker’s平板灰/黑色血漿凝固酶試驗(yàn)血漿凝塊液態(tài)血漿甘露醇高鹽瓊脂目前二十七頁\總數(shù)四十一頁\編于四點(diǎn)結(jié)果報(bào)告凡在上述選擇平板上有可疑菌落生長，經(jīng)染色鏡檢，證明為革蘭氏陽性葡萄球菌，并能發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸，血漿凝固酶試驗(yàn)陽性者，可報(bào)告被檢樣品檢出金黃色葡萄球菌。目前二十八頁\總數(shù)四十一頁\編于四點(diǎn)霉菌和酵母菌霉菌和酵母菌數(shù)測定（Determinationofmoldsandyeastcount）化妝品檢樣在一定條件下培養(yǎng)后，1g或1mL化妝品中所污染的活的霉菌和酵母菌數(shù)量，藉以判明化妝品被霉菌和酵母菌污染程度及其一般衛(wèi)生狀況。本方法根據(jù)霉菌和酵母菌特有的形態(tài)和培養(yǎng)特性，在虎紅培養(yǎng)基上，置28℃±2℃培養(yǎng)5d，計(jì)算所生長的霉菌和酵母菌數(shù)。（5-50）目前二十九頁\總數(shù)四十一頁\編于四點(diǎn)革蘭氏染色目前三十頁\總數(shù)四十一頁\編于四點(diǎn)檢驗(yàn)結(jié)果正確的保證設(shè)備方面：恒溫培養(yǎng)設(shè)備高壓滅菌器（驗(yàn)證）超凈工作臺（生物安全柜）均質(zhì)器(旋渦混合器)天平（0.1g）顯微鏡（可要可不要無硬性要求）目前三十一頁\總數(shù)四十一頁\編于四點(diǎn)壓力滅菌器的檢定（強(qiáng)檢）出廠合格證：只是表示該儀器設(shè)備符合出廠標(biāo)準(zhǔn)。安全需要強(qiáng)檢（安全閥和壓力表）。至于溫度性能緊急時(shí)可以用廠家校準(zhǔn)證書替代。問題1：量值得傳遞過程？結(jié)論？量值溯源過程？目前三十二頁\總數(shù)四十一頁\編于四點(diǎn)常規(guī)潔凈工作臺？目前三十三頁\總數(shù)四十一頁\編于四點(diǎn)試劑要求：無菌容器（？）及溶液；試劑充足；空間充分（10平方米2人操作）；

培養(yǎng)基的制備（有效期的確認(rèn)）與質(zhì)量控制（促生長與回收率的驗(yàn)證）推薦項(xiàng)；目前三十四頁\總數(shù)四十一頁\編于四點(diǎn)目前大部分微生物實(shí)驗(yàn)室目前三十五頁\總數(shù)四十一頁\編于四點(diǎn)人員操作方面：無菌操作，避免污染；一定專業(yè)技術(shù)或工作經(jīng)驗(yàn)（招聘與外部審核時(shí)）相互協(xié)作；測試結(jié)果的證明。目前三十六頁\總數(shù)四十一頁\編于四點(diǎn)日常維護(hù)：設(shè)備的計(jì)量與保證；超凈臺及時(shí)清潔與殺菌（操作前后半小時(shí)）；檢驗(yàn)后材料的及時(shí)處理；環(huán)境衛(wèi)生（沉降菌的檢測每周）。目前三十七頁\總數(shù)四十一頁\編于四點(diǎn)油性樣品如何處理稀釋液生理鹽水-極性溶劑、液體石蠟-非極性溶劑、吐溫80-非離子型表面活性劑，分子一端是親水基團(tuán)，一端是親油基團(tuán)，常用作增溶劑和油/水乳化劑。決定了加入的順序。問題2目前三十八頁\總數(shù)四十一頁\編于四點(diǎn)微生物許可檢驗(yàn)項(xiàng)目問題3檢驗(yàn)項(xiàng)目非特殊用途化妝品特殊用途化妝品育發(fā)類染發(fā)類燙發(fā)類脫毛類美乳類健美類除臭類祛斑類防曬類菌落總數(shù)○○

○○

○○耐熱大腸菌群○○

○○

○○金黃色葡萄球菌○○

○○

○○銅綠假單胞菌○○

○○

○○霉菌和酵母菌○○

○○