臨床醫(yī)學檢驗主管技師考試《臨床免疫學和免疫檢驗》考點串講匯編及真題詳解

第一章概述

考試科目：

1.基礎(chǔ)知識

2.相關(guān)專業(yè)知識

3.專業(yè)知識

4.專業(yè)實踐能力

考試題型：

1.A1型題（最佳選擇題）

2.A2型題（病歷摘要型最佳選擇題）

3.A3型題（病歷組摘要型最佳選擇題）

4.B型題（配伍題）

輔導重點

1.找出重點即考點

2.360度掌握考點

3.結(jié)合題型攻破考點

花最少的時間，收獲最多的知識和能力

通過考試是硬道理

第一章概述

第一節(jié)免疫學簡介

第二節(jié)臨床免疫學

第三節(jié)臨床免疫學與臨床檢驗

第一節(jié)免疫學簡介

一、免疫學概念與免疫應答

二、免疫組織與器官

三、免疫細胞

四、免疫分子

一、免疫學概念與免疫應答的基本概念

（-）免疫是機體識別和排斥抗原性異物的一種生理功能

（二）免疫應答是指機體免疫系統(tǒng)接受抗原刺激發(fā)生一系列反應，并以排出或分解該抗原為目的的反

應過程

1.識別階段

是巨噬細胞等抗原遞呈細胞對外來抗原或自身變性抗原進行識別、攝取、降解和遞呈抗原信息給T輔

助細胞（THc）及相關(guān)淋巴細胞的階段。

2.活化階段

是T、B淋巴細胞在接受抗原信號后，在一系列免疫分子的參與下，發(fā)生活化、增殖、分化的階段。由

于T細胞和B細胞表面表達的細胞膜受體不同，所以對抗原的識別具有嚴格的特異性。B細胞接受抗原刺激

后活化、增殖、分化為漿細胞，T細胞在接受抗原刺激和協(xié)同刺激雙信號后活化、增殖、分化為效應細胞。

3.效應階段

是漿細胞分泌特異性抗體，執(zhí)行體液免疫功能。T細胞中的Th細胞分泌細胞因子等效應分子，T殺傷

細胞執(zhí)行細胞毒效應功能。另有少量T細胞和B細胞在增殖分化后，不直接執(zhí)行效應功能，而作為記憶細

胞。當其再次遇到相同抗原時，迅速活化、增殖、分化為效應細胞，執(zhí)行高效而持久的特異性免疫效應功

能。

(三)免疫系統(tǒng)的三大功能

1.免疫防御

2.免疫目穩(wěn)

3.免疫監(jiān)視

二、免疫組織與器官

(-)中樞免疫器官

1.骨髓

骨髓是重要的造血器官，是成年人和動物所有血細胞及淋巴細胞的發(fā)源地，多能造血干細胞(HSC)在

骨髓中增殖，生成更多的HSC。HSC分化、發(fā)育、成熟為各種血細胞，骨髓是從HSC分化發(fā)育為功能性B細

胞的唯一器官。淋巴樣干細胞(LSC)及淋巴樣祖細胞也是由HSC分化而來，它們隨血流進入胸腺，發(fā)育為

功能性T細胞。

2.胸腺

胸腺是一級淋巴上皮組織，是T細胞發(fā)育的重要中樞器官，胸腺山胸腺基質(zhì)細胞(TSC)與胸腺細胞組

成。TSC主要由來源于胚胎期的第三咽囊和咽裂的上皮細胞、骨髓來源的單核-吞噬細胞和胸腺樹突狀細胞

(TDCs)及結(jié)締組織來源的成纖維細胞組成。

(-)外周免疫器官

1.淋巴結(jié)

淋巴結(jié)主要有以下三種功能：①是供淋巴細胞棲息和增殖的場所；②是適宜淋巴細胞增殖分化發(fā)揮免

疫應答的基地；③是淋巴液運行中監(jiān)視清除病原體異物的過濾監(jiān)控站。

2.脾臟：是富含血管的最大外周淋巴器官。脾臟富含T細胞、B細胞、樹突狀細胞和巨噬細胞，這些細

胞所在的淋巴鞘有諸多間隙，隨血流運輸而來的抗原異物進入這些間隙后，由樹突狀細胞及巨噬細胞加工

遞呈抗原信息，并刺激T、B淋巴細胞活化，產(chǎn)生免疫應答效應。這些T、B淋巴細胞又可隨血液運出脾臟

分布于全身進行再循環(huán)，淋巴細胞經(jīng)血液循環(huán)清除外來抗原物質(zhì)及激活T、B淋巴細胞，T、B細胞間的相互

協(xié)同作用對執(zhí)行特異性免疫應答均具有重要作用。

3.黏膜相關(guān)淋巴組織：伴隨的淋巴組織在呼吸道、腸道及泌尿生殖道的黏膜上皮細胞下，均聚集著

無包膜的淋巴組織，這些淋巴組織較為彌散地分布于肺、小腸黏膜固有層或形成完整的淋巴濾泡，如扁桃

體、小腸的派氏集合淋巴結(jié)及闌尾。這些淋巴組織內(nèi)有B細胞、漿細胞、巨噬細胞及T細胞，受局部侵入

的病原體激活執(zhí)行固有和適應性的免疫應答，使B淋巴細胞活化，分化為漿細胞，產(chǎn)生多種Ig類別的抗體,

其中最主要的是IgA及分泌型IgA,執(zhí)行體液免疫及局部特異免疫作用。

三、免疫細胞

(―)淋巴細胞

1.B細胞

通過識別膜免疫球蛋白來結(jié)合抗原，介導體液免疫

B細胞受體=8d?

2.T細胞

T細胞的共同表面標志是CD3

T細胞和NK細胞的共同表面標志是CD2

輔助T細胞的標志是CD4

殺傷T細胞的標志是CD8

介導細胞免疫

T細胞受體=式口

3.NK細胞

具有細胞介導的細胞毒作用

直接殺傷靶細胞,主要是腫瘤細胞和病毒感染的細胞

（二）免疫輔助細胞

1.單核-吞噬細胞系統(tǒng)

2.樹突狀細胞

吞噬+抗原呈遞功能

在免疫應答過程中，淋巴細胞尤其是T細胞的活化需要非淋巴細胞的參與，凡能夠通過一系列作用輔

助淋巴細胞活化的細胞稱為輔佐細胞。輔佐細胞主要包括單核-吞噬細胞系統(tǒng)、樹突狀細胞兩類。

吞噬細胞包括單核-吞噬細胞系統(tǒng)（包括血液中的單核細胞和組織中的巨噬細胞）和中性粒細胞，其共

同特性是表達MHCII類分子及具有吞噬作用。

四、免疫分子

免疫分子指的是由一些免疫活性細胞或相關(guān)細胞分泌的參與機體免疫反應或免疫調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)及多肽

物質(zhì)。免疫分子通常指免疫球蛋白、補體、細胞因子、細胞黏附分子、人類白細胞分化抗原等。

免疫分子指的是由?些免疫活性細胞或相關(guān)細胞分泌的參與機體免疫反應或免疫調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)及多肽

物質(zhì)。免疫分子通常指免疫球蛋白、補體、細胞因子、細胞黏附分子、人類白細胞分化抗原等。

（-）免疫球蛋白

免疫球蛋白（1g）是B細胞經(jīng)抗原刺激后增殖分化為漿細胞后產(chǎn)生的、存在于血液和體液中能與相應

抗原特異性結(jié)合、執(zhí)行體液免疫功能的一組球蛋白

免疫球蛋白可分為分泌型（sig）及膜型（mlg）,前者主要存在于體液中，具有抗體的各種功能，后者

作為抗原受體表達于B細胞表面,稱為膜表面免疫球蛋白

抗體是機體在抗原刺激下，由漿細胞合成分泌產(chǎn)生的具有免疫功能的球蛋白

抗體是生物學功能上的概念，免疫球蛋白是化學結(jié)構(gòu)上的概念

所有的抗體均是免疫球蛋白，但并非所有免疫球蛋白都是抗體

免疫球蛋白的結(jié)構(gòu)

Ig分子由4條肽鏈借鏈間二硫鍵連接組成，即2條相同的重鏈（H）和2條相同的輕鏈（L）以及幾對

二硫鍵連接成四肽結(jié)構(gòu)，構(gòu)成Ig一個基本單位，稱為單體

V：可變區(qū)；C：恒定區(qū)

免疫球蛋白按重鏈恒定區(qū)抗原性（CH）將免疫球蛋白分為IgG、IgA、IgM、IgD、IgE五類（按多少排

序）

Ig的輕鏈分K型或入型，一個天然Ig分子的兩條輕鏈型相同，每類Ig中都有K鏈和人鏈

免疫球蛋白的同種型抗原決定簇位于恒定區(qū)（CH,CL）

IgG是血清中含量最高的免疫球蛋白

IgG是再次免疫應答的主要抗體

IgG是唯一能通過胎盤的抗體

大多數(shù)抗菌抗體、抗病毒抗體是IgG

某些自身抗體及超敏II型抗體是IgG

免疫學檢測中第二抗體也以IgG為主

IgA分血清型及分泌型

大部分血清型IgA為單體，其他為雙聚體或多聚體

分泌型IgA（slgA）為二聚體，每一slgA分子含一個J鏈和一個分泌片。slgA性能穩(wěn)定，主要存在于

胃腸道、支氣管分泌液、初乳、唾液、淚液中，局部濃度高，是參與黏膜局部免疫的主要抗體。

IgM為五聚體，主要存在于血液中，是Ig中分子量最大的。個體發(fā)育最早合成的抗體。

抗原刺激后體液免疫應答中最先產(chǎn)生的抗體，感染過程中血清IgM水平升高，說明近期感染。新生兒

臍血中若IgM增高，提示有宮內(nèi)感染。IgE為單體結(jié)構(gòu)，正常人血清中IgE水平在五類Ig中最低。IgE為

親細胞抗體，介導I型超敏反應。特異性過敏反應和寄生蟲早期感染患者血清中可升高。

（-）補體系統(tǒng)

補體是存在于人和脊椎動物正常新鮮血清及組織液中的一組具有酶樣活性的球蛋白，包括30余種可溶

性蛋白和膜結(jié)合蛋白，故稱補體系統(tǒng)。

補體的大多數(shù)組分都是糖蛋白，且多屬于B球蛋白

正常血清中含量最高的補體成分為C3、C4

iE常血清中含量最低的補體成分為C2

補體性質(zhì)不穩(wěn)定，易受各種理化因素影響，如加熱、機械振蕩、酸堿、乙醇等均可使其失活。在0?10C

下活性只保持3?4天，冷凍干燥可較長時間保持其活性。加熱56℃30分鐘可使血清中絕大部分補體組分

喪失活性，稱為滅活或滅能。

補體的激活途徑主要有三種：

經(jīng)典途徑

替代途徑

MBL途徑

經(jīng)典途徑是以結(jié)合抗原后的IgG或IgM類抗體為主要激活劑，補體C1-C9共11種成分全部參與了激

活途徑。非特異性凝集的Ig、細菌脂多糖、一些RNA腫瘤病毒、雙鏈DNA也可激活經(jīng)典途徑。

替代途徑又稱旁路途徑。由病原微生物等細胞壁成分提供接觸面直接激活補體C3,然后完成C5??9的

激活過程。

替代途徑的激活物主要是細胞壁成分,如脂多糖、肽糖昔及酵母多糖等

MBL途徑由急性炎癥期產(chǎn)生的甘露糖結(jié)合凝集素（MBL）與病原體結(jié)合后啟動激活

三種激活途徑形成的C5轉(zhuǎn)化酶均可裂解C5,完成補體聯(lián)級反應最后的酶促反應步驟。

補體不論何種途徑激活，均會通過共同的末端通路，形成有嗜細胞作用的攻膜復合物，參與機體的特

異性和非特異性免疫效應。

補體系統(tǒng)對機體的作用既可參與機體的防御效應和自身穩(wěn)定，亦可引起免疫損傷。

（三）細胞因子

細胞因子是山免疫細胞分泌的一大類具有生物活性的多肽或小分子蛋白質(zhì)的總稱，介導多種免疫細胞

間的相互作用。

細胞因子大都為低分子量的蛋白或糖蛋白，細胞因子可以旁分泌、自分泌或內(nèi)分泌的方式發(fā)揮作用。

一種細胞可產(chǎn)生多種細胞因子，不同類型的細胞可產(chǎn)生一種或幾種相同的細胞因子，通過作用靶細胞

的特異性受體而表現(xiàn)出生物活性，其生物活性常表現(xiàn)為多效性、重疊性、拮抗效應和協(xié)同效應。

細胞因子按其生物學功能可分為白細胞介素、干擾素、生長因子、趨化因子家族、腫瘤壞死因子、集

落刺激因子等六大類。

細胞因子受體分為免疫球蛋白基因超家族、I型細胞因子受體家族、H型細胞因子受體家族、III型細胞

因子受體家族、趨化性細胞因子受體家族五個家族。

大部分細胞因子受體存在于血液及組織液中。

細胞因子利細胞因子受體的檢測目前主要用于了解機體的免疫狀態(tài)及免疫細胞功能。

（四）粘附分子

細胞黏附分子（CAM）是介導細胞間或細胞與細胞外基質(zhì)間相互結(jié)合和黏附作用的小分子多肽或糖蛋白

的總稱。

黏附分子以受體配體的結(jié)合形式發(fā)揮作用，與細胞的識別、活化與信號傳導、增殖與分化、伸展與運

動密切相關(guān)，是參與機體免疫應答、炎癥發(fā)生、凝血、創(chuàng)傷愈合和腫瘤轉(zhuǎn)移等一系列重要的病理生理過程

的分子基礎(chǔ)。

細胞黏附分子的配體有膜分子、細胞外基質(zhì)、血清和體液中的可溶性因子和補體C3片段。

細胞黏附分子因其廣泛參與機體的免疫應答調(diào)節(jié).、炎癥發(fā)生、自身免疫性疾病的免疫炎性損傷和引導

淋巴細胞歸巢等一系列生理病理過程，檢測其在血清及組織液中濃度水平，對臨床了解機體免疫狀況、免

疫病理研究和免疫治療具有重要的指導意義。

（五）CD抗原

采用單克隆抗體鑒定識別的白細胞分化抗原稱CD抗原。

檢測CD抗原是實驗室識別細胞及不同分化階段細胞或細胞亞群最主要的方法。

人類白細胞分化抗原（HLA）是指血細胞在分化成熟為不同譜系、分化的不同階段及細胞活化過程中，

出現(xiàn)或消失的細胞表面標記分子。

白細胞分化抗原大都是跨膜的蛋白或糖蛋白，含有胞膜外區(qū)、跨膜區(qū)和胞質(zhì)區(qū)。

有些白細胞分化抗原是以糖基磷脂猷肌醉連接方式錨定在細胞膜上，有少量白細胞分化抗原是碳水化

合物。

第二節(jié)臨床免疫學

臨床免疫學是將免疫學基礎(chǔ)理論、臨床醫(yī)學疾病與免疫學技術(shù)相結(jié)合，用于研究疾病的免疫病理機制、

診斷與鑒別診斷、評價治療效果和判斷預后的多個分支學科的總稱。臨床免疫學發(fā)展的主要方向是將基礎(chǔ)

免疫學研究所取得的理論成果應用于臨床疾病的診治，探討新的免疫現(xiàn)象與臨床疾病的關(guān)系，進一步推動

臨床免疫學與各相關(guān)學科的發(fā)展，為人類的生命健康作出重要貢獻。

一、免疫病理與免疫性疾病

免疫病理學是研究免疫相關(guān)疾病的發(fā)生、發(fā)展及機制的分支學科，是溝通基礎(chǔ)免疫研究與臨床醫(yī)學研

究的橋梁。

通過對免疫細胞、炎性細胞、免疫分子的研究，了解這些細胞或分子的功能失衡或缺陷與導致自身免

疫性疾病、免疫缺陷病、免疫增殖病之間的相互關(guān)系，免疫應答的異常在造成組織器官病理損傷中的重要

作用。

二、移植免疫學

移植免疫學是通過組織、細胞或器官移植，以替代機體喪失功能的組織器官或細胞，移植后保證移植

物存活，不發(fā)生排斥反應的一門科學，是現(xiàn)代醫(yī)學中臨床治療的一項重要手段。

移植包括自體移植、同種同基因移植、同種異基因移植和異種移植四種類型。

自體移植和同種同基因移植不發(fā)生排斥反應。

影響同種異基因移植和異種移植時移植物存活的關(guān)鍵因素是受者對移植物排斥反應的強弱，排斥反應

是影響移植成功的主要障礙。

通過檢測HLA抗原及組織配型來選擇移植物,采用免疫學實驗方法監(jiān)測排斥反應，利用免疫抑制劑調(diào)節(jié)

免疫細胞信號傳導抑制排斥反應，保障移植物的存活是移植免疫學研究的主要目的。

三、腫瘤免疫學

腫瘤免疫學是研究腫瘤相關(guān)抗原和腫瘤的免疫診斷、腫瘤的發(fā)生發(fā)展與機體的免疫狀況、機體對腫瘤

的免疫應答和抗腫瘤免疫效應機制的一門分支學科。

探討腫瘤相關(guān)抗原在診斷和早期診斷各類腫瘤中的價值,細胞免疫功能及殺傷性T細胞和NK細胞在腫

瘤免疫中的免疫監(jiān)視和免疫防衛(wèi)效應。

許多腫瘤相關(guān)抗原均可用自動化免疫檢測系統(tǒng)進行微量、快速分析，為臨床早期診斷和動態(tài)監(jiān)測腫瘤

治療后的療效提供了有力的手段和實驗室數(shù)據(jù)。

流式細胞術(shù)的臨床運用對監(jiān)視腫瘤患者細胞免疫狀況提供了參考指標。

四、感染免疫學

感染免疫學是研究病原生物與宿主相互關(guān)系從而控制感染的學科，是傳統(tǒng)免疫學的基礎(chǔ)與核心.

現(xiàn)代的感染免疫研究將機體的固有免疫與獲得性免疫有機的結(jié)合，認識到在針對外來病原生物的免疫

防護過程中，固有免疫不僅具有快速反應的能力，而且對隨即將發(fā)生的獲得性免疫應答反應類型起決定性

作用，獲得性免疫應答承擔著清除大多數(shù)病原微生物的重任。

雖然固有免疫系統(tǒng)不能識別不同的病原微生物，但它能精確區(qū)分異源性入侵者與宿主自身細胞，確保

具有高度攻擊性的獲得性免疫應答不會對宿主自身產(chǎn)生傷害。

免疫系統(tǒng)在殺傷被病原體感染的宿主細胞時對宿主的損傷程度，在免疫應答過程中激活或抑制的效應

細胞當病原體被清除后所發(fā)揮的作用，固有性免疫與獲得性免疫的相互調(diào)節(jié)。

第三節(jié)臨床免疫學與免疫檢驗

一、免疫學技術(shù)的發(fā)展

免疫學檢驗是研究免疫學技術(shù)及其在醫(yī)學檢驗領(lǐng)域應用的一門學科，是醫(yī)學檢驗專業(yè)的重要學科之一。

但是，免疫學檢驗的發(fā)展是隨著各種免疫物質(zhì)的發(fā)現(xiàn)而逐步發(fā)展起來的。早在1883年，俄國動物學家

E.Metchnikoff發(fā)現(xiàn)了吞噬細胞的吞噬作用并提出了原始的細胞免疫學說，1894年，波蘭細菌學家

R.Pfeiffer等發(fā)現(xiàn)了溶血素，同年比利時血清學家J.Bordet發(fā)現(xiàn)了補體，這些發(fā)現(xiàn)提出了最早的體液免疫

學說。與此同時，研究抗原抗體體外反應的血清學(serolOgy)也逐漸形成和發(fā)展起來。1896年H.Durham

等人發(fā)現(xiàn)了凝集反應，1898年R.Kraus發(fā)現(xiàn)了沉淀反應，1900年J.Bordet發(fā)現(xiàn)了補體結(jié)合反應。這些實

驗被應用于臨床檢驗，并逐漸成為臨床免疫學檢驗的標準項目，也是臨床免疫學檢驗教學實驗中的經(jīng)典實

驗。在免疫學理論與生物學技術(shù)的長期發(fā)展過程中，許多經(jīng)典技術(shù)又被加以革新與放大而派生出許多新的

技術(shù)與方法，這些方法和技術(shù)在醫(yī)學研究與臨床診斷的運用中發(fā)揮了不可估量的作用。

二、臨床免疫學與免疫檢驗

免疫檢驗可分為兩部分：

1.利用免疫檢測原理與技術(shù)檢測免疫活性細胞、抗原、抗體、補體、細胞因子、細胞黏附分子等免疫

相關(guān)物質(zhì)。

2.利用免疫檢測原理與技術(shù)檢測體液中微量物質(zhì)如激素、酶、血漿微量蛋白、血液藥物濃度、微量元

素。

第二章抗原抗體反應

第一節(jié)抗原抗體反應的原理

第二節(jié)抗原抗體反應的特點

第三節(jié)影響抗原抗體反應的因素

第四節(jié)免疫學檢測技術(shù)的類型

第一節(jié)抗原抗體反應的原理

抗原與抗體能夠特異性結(jié)合是基是抗原決定簇(表位)和抗體超變區(qū)分子間的結(jié)構(gòu)互補性與親和性。

抗原決定簇=表位。

這種特性是由抗原、抗體分子空間構(gòu)型所決定的。

抗原表位和抗體超變區(qū)必須密切接觸。

完全抗原=反應原性+免疫原性

半抗原=反應原性

一、抗原抗體結(jié)合力

抗原抗體是一種非共價的結(jié)合，不形成共價鍵，需要四種分子間引力參與。

1.靜電引力又稱庫倫引力，是因抗原、抗體帶有相反電荷的氨基與竣基基團間相互吸引的能力，這

種吸引力的大小和兩個電荷間的距離平方成反比。兩個電荷距離越近，靜電引力越大。

2.范德華引力這是原子與原子、分子與分子相互接近時分子極化作用發(fā)生的種吸引力，是抗原、

抗體兩個大分子外層軌道上電子相互作用時，兩者電子云中的偶極擺動而產(chǎn)生的引力。這種引力的能量小

于靜電引力。

3.卷鍵結(jié)合力是供氫體上的氫原子與受氫體上氫原子間的引力。其結(jié)合力較強于范德華引力。

4.疏水作用力（最強）水溶液中兩個疏水基團相互接觸，由于對水分子的排斥而趨向聚集的力。當

抗原表位和抗體超變區(qū)靠近時，相互間正負極性消失，周圍親水層也立即消失，從而排斥兩者間的水分子,

使抗原抗體進一步吸引和結(jié)合。疏水作用力是這些結(jié)合力中最強的，因而對維系抗原抗體結(jié)合作用最大。

二、抗原抗體親和力

親和力指抗體分子上一個抗原結(jié)合點與對應的抗原決定簇之間相適應而存在的引力，它是抗原抗體間

固有的結(jié)合力。

親和力用平衡常數(shù)K來表示，K值越大，親和性越強，與抗原結(jié)合也越牢固。

抗體的親合力指抗體結(jié)合部位與抗原表位間結(jié)合的強度，與抗體結(jié)合價相關(guān)，即所謂多價優(yōu)勢.

抗體親合力強，與抗原結(jié)合牢固，不易解離。

三、親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體

抗體是球蛋白，大多數(shù)抗原亦為蛋白質(zhì)，它們?nèi)芙庠谒薪詾槟z體溶液，不會發(fā)生自然沉淀。

親水膠體形成機制是因蛋白質(zhì)含有大量的氨基和竣基殘基，這些殘基在溶液中帶有電荷，由于靜電作

用，在蛋白質(zhì)分子周圍出現(xiàn)了帶相反電荷的電子云。

如果溶液pH偏高，蛋白質(zhì)分子帶負電荷，周圍出現(xiàn)極化的水分子，形成水化層。

當抗原抗體的結(jié)合，使表面電荷減少或消失，電子云也消失，水化層變薄，蛋白質(zhì)由親水膠體轉(zhuǎn)化為

疏水膠體。

加入電解質(zhì)，如NaCl,使疏水膠體物相互靠攏，形成可見的抗原抗體復合物。

第二節(jié)抗原抗體反應的特點

抗原抗體反應的四大特點：

特異性

可逆性

比例性

階段性

一、特異性

抗原抗體結(jié)合特異性是指抗原表位辛抗體超變區(qū)結(jié)合的特異性。

1.兩者在化學結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)型上呈互補關(guān)系所決定的。

2.多數(shù)天然抗原具有不止一種抗原決定簇，可另一物質(zhì)可能有共同抗原，對檢驗結(jié)果產(chǎn)生交叉反應，

但這種交叉反應仍是抗原抗體特異性結(jié)合，對臨床診斷可能產(chǎn)生干擾。

二、可逆性

可逆性指抗原抗體結(jié)合后形成的復合物在一定條件下可發(fā)生解離，恢復抗原抗體的游離狀態(tài)。

1.非共價鍵結(jié)合，結(jié)合雖穩(wěn)定但可逆。

2.抗原抗體復合物的解離取決于抗體對相應抗原的親和力及反應條件（如離子強度、pH等）。

3.免疫學技術(shù)中的親和層析法就是利用這個原理來純化抗原或抗體。

三、比例性

在抗原抗體特異性反應時，生成結(jié)合物的量與反應物的濃度有關(guān)。

1.只有雪抗原抗體分體比例合適時抗原抗體充分結(jié)合，沉淀物形成快而多，稱為抗原抗體反應的等價。

2.若抗原或抗體極度過剩則無沉淀形成，稱為帶現(xiàn)象。

3.抗體過量時，稱為前帶。

4.抗原過量時，稱為后帶。

四、階段性

1.抗原抗體反應可分為兩個階段。

2.第一階段為抗原與抗體發(fā)生特異性結(jié)合的階段，此階段反應快，僅需幾秒至幾分鐘，但不出現(xiàn)可見

反應。

3.第二階段為可見反應階段，此階段反應慢，往往需要數(shù)分鐘至數(shù)小時二

4.在血清學反應中，以上兩階段往往不能嚴格分開，往往受反應條件（如溫度、pH、電解質(zhì)、抗原抗

體比例等）的影響。

第三節(jié)影響抗原抗體反應的因素

抗原抗體反應的兩大影響因素：

反應物自身因素

環(huán)境因素

一、反應物自身因素

1.抗體因素

不同來源的抗體，反應性各有差異，抗體的濃度、特異性和親和力都影響抗原抗體反應，為提高試驗

的可靠性，應選擇高特異性、高親和力的抗體作為診斷試劑。

等價帶的寬窄也影響抗原抗體復合物的形成，單克隆抗體不適用于沉淀反應。

2.抗原因素

抗原的理化性狀、分子量、抗原決定簇的種類及數(shù)目均可影響反應結(jié)果。

顆粒性抗原出現(xiàn)凝集反應。

可溶性抗原出現(xiàn)沉淀反應。

單價抗原與相應抗體結(jié)合不出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象。

二、環(huán)境因素

1.電解質(zhì)

抗原與抗體發(fā)生特異性結(jié)合后，雖由親水膠體變?yōu)槭杷z體，若溶液中無電解質(zhì)參加，仍不出現(xiàn)可見

反應。為了促成沉淀物或凝集物的形成，常用0.859ZaCl或各種緩沖液作為抗原及抗體的稀釋液。

2.酸堿度

抗原抗體反應必須在合適的pH環(huán)境中進行，蛋白質(zhì)具有兩性電離性質(zhì)，因此每種蛋白質(zhì)都有固定的等

電點。

抗原抗體反應-一般在pH6~9之間進行。

有補體參與的反應pH為7.2?7.4。

3.溫度

在一定范圍內(nèi)，溫度升高可加速分子運動，抗原與抗體碰撞機會增多，使反應加速。

一般為15~40℃。

常用的抗原抗體反應溫度為迎。。

溫度如高于建，可導致已結(jié)合的抗原抗體再解離。

適當振蕩也可促進抗原抗體分子的接觸，加速反應。

第四節(jié)免疫學檢測技術(shù)的類型

免疫學檢測技術(shù)的基礎(chǔ)是抗原抗體反應。

早期建立的免疫學檢測技術(shù)通常直接用抗原抗體反應產(chǎn)生的現(xiàn)象判斷實驗結(jié)果。

顆粒性抗原所形成的凝集現(xiàn)象。

可溶性抗原所形成的沉淀現(xiàn)象。

補體系統(tǒng)參與的溶血現(xiàn)象。

現(xiàn)在的標記免疫技術(shù)是用高度敏感的示蹤物質(zhì)（如熒光物質(zhì)、放射性核素、酶或化學發(fā)光物質(zhì)等）標

記抗原或抗體，進行抗原抗體反應后，通過檢測標志物對抗原或抗體進行定性、定位或定量分析。

標記免疫技術(shù)具有及敏度高、快速、可定?性、定量、定位等優(yōu)點，拓寬了免疫學檢測技術(shù)的應用范圍,

是目前應用最廣泛的免疫學檢測技術(shù)。

按實際用途分為兩種：

定位測定組織或細胞中固定成分的免疫組織化學技術(shù)。

檢測液體標本中抗原或抗體含量的免疫測定。一

按測定反應體系的物理狀態(tài)分為兩種：

均相免疫測定：

非均相免疫測定。

檢測現(xiàn)象不同可分為五種：

放射免疫技術(shù)；

熒光免疫技術(shù)；

醐免疫技術(shù)；

化學發(fā)光免疫技術(shù)；

金免疫技術(shù)。

第三章免疫原和抗血清的制備

第一節(jié)免疫原的制備

免疫原指能誘導機體產(chǎn)生抗體或致敏淋巴細胞，并能在體內(nèi)外與抗體或致敏淋巴細胞發(fā)生特異性反應

的物質(zhì)。免疫原相當于抗原。

一、顆粒性抗原的制備

顆粒性抗原：各種細胞、細菌、寄生蟲。

1.細胞抗原(如綿羊紅細胞)?般情況下經(jīng)生理鹽水或其他溶液洗凈，配制一定濃度即可。

2.細菌抗原多用液體或固體培養(yǎng)物，經(jīng)集菌后處理。

顆粒性抗原大多用靜脈內(nèi)注射免疫法，較少加佐劑作皮內(nèi)注射

二、可溶性抗原的制備和純化

(一)可溶性抗原的制備

蛋白質(zhì)、糖蛋白、脂蛋白、酶、補體、細菌毒素、免疫球蛋白片段、核酸等皆為良好的可溶性抗原，

免疫前常需提取和純化。

1.組織細胞抗原的制備

細胞破碎方法有：

(1)高速組織搗碎機法

(2)研磨法，可用組織勻漿器或乳缽

2.組織細胞或培養(yǎng)細胞可溶性抗原制備

第一步單個細胞獲得的方法

(1)機械搗碎

(2)酶處理法，常用胃蛋白酶或胰酶

第二步細胞破碎方法有：

(1)反復凍融法：一般—20℃反復凍融。

(2)超聲破碎法：利用超聲波機械振動原理使細胞破碎。

(3)自溶法：利用組織、細菌自身酶系統(tǒng)使之裂解。

(4)酶處理法，常用溶菌酶、蝸牛酶、纖維素酶

(5)表面活性劑處理法：常用十二烷基硫酸鈉等表面活性劑處理。

3.免疫球蛋白片段的制備

五種免疫球蛋白都具抗原性，皆可提取及純化，但如分解成片段(如Fab片段、Fc片段、輕鏈片段等)

作為免疫原可制備出分辨力更高的特異性抗血清

(1)非共價鍵解離法：溫和條件下離析亞單位，如改變pH；用鹽酸服或胭等強變性劑將亞單位分開。

(2)共價鍵解離法：用還原法或氧化法解離二硫鍵。

(3)澳化鼠裂解法：用澳化氟裂解蛋白質(zhì)肽鏈。

(4)酶解法

1)木瓜酶可將IgG裂解成2個Fab片段及1個Fc片段

2)胃蛋白酶可將IgG裂解成F(ab')2片段及數(shù)個小片段

3)胰蛋白酶可將IgG切成不規(guī)則的肽鏈

(二)可溶性抗原的純化

1.超速離心法僅適用于少數(shù)大分子抗原及一些比重較輕的抗原，而不適用于大多數(shù)中小分子抗原。

2.選擇性沉淀法

(1)核酸去除法

可采用氯化鎰、硫酸提取魚精蛋白等核酸提取沉淀劑

核糖核酸降解法更簡便(采用DNA或RNA酶)

(2)鹽析法常采用硫酸鍍使蛋白抗原進行粗篩、提取丙種球蛋白及抗原濃縮

(3)有機溶劑沉淀法常采用乙醇或丙酮

(4)聚合物沉淀法常用非離子型聚合物，如分子量為2000?6000的聚乙二醇(PEG)

3.凝膠過濾法

又叫分子篩層析。通過凝膠分子篩作用，可將大、中、小三類分子分開，選擇凝膠柱時應注意選用適

于分離范圍內(nèi)的凝膠。

4.離子交換層析法

離子交換層析是利用一些帶電離子基團的凝膠或纖維素，吸附帶有相反電荷的蛋白質(zhì)抗原。常用的離

子交換劑有離子交換纖維素、離子交換凝膠、離子交換樹脂

5.親和層析法

親和層析是利用生物分子間所具有的專一性親和力而設計的層析技術(shù)。如抗原和抗體、酚和酶抑制物、

酣蛋白和輔醐、激素和受體、DNA和RNA等之間有特殊親和力，?定條件下，兩者可緊密結(jié)合成復合物，如

將復合物的一方固定于固相載體上，則可從溶液中分離和提純另一方。

(1)親和層析支持物的選擇

常用的有瓊脂糖珠(sepharose2B、4B、6B)、瓊脂糖、聚丙乙烯酰胺、多孔玻璃球等

(2)配體的選擇

良好配體必須具備抗原和抗體單一特異性；抗原和抗體間有較強親和力；配體有一適宜的化學基團。

(3)抗原或抗體與支持物的結(jié)合

(4)親和層析條件的選擇

6.電泳法

(三)純化抗原的鑒定

1.蛋白含量測定采用紫外光吸收法、雙縮胭法、酚試劑法等，常用的是紫外光吸收法，該法測定280nm

和260nm的吸光度值，并根據(jù)公式計算蛋白含量

2.分子量測定采用聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS)法、凝膠過濾法等

3.純度鑒定采用醋酸纖維膜電泳、SDS,毛細管電泳、等電聚焦、高效液相層析法

4.免疫活性鑒定采用雙向免疫擴散法、免疫電泳法或ELISA法等

三、半抗原性免疫原的制備

半抗原指某物質(zhì)在獨立存在時只具有抗原性而無免疫原性，這些物質(zhì)稱為半抗原。半抗原與蛋白質(zhì)載

體或高分子聚合物結(jié)合后才有免疫原性。

(―)載體

1.蛋白質(zhì)類

以牛血白蛋白最常用

2.多肽聚合物常用多聚賴氨酸

3.大分子聚合物和某些顆粒聚乙烯毗咯烷酮、藥用炭、峻甲基纖維素等皆常用

(-)半抗原與載體的連接方法

1.物理方法

物理方法是用通過電荷和微孔吸附半抗原，吸附的載體有淀粉、聚乙烯毗咯烷酮、硫酸葡聚糖、竣甲

基纖維素

2.化學方法

化學方法是利用某些功能基團將半抗原連接到載體上

(三)半抗原性免疫原的鑒定

1.吸收光譜分析法

2.放射性核素標記半抗原滲入法

第二節(jié)免疫佐劑

一、佐劑的種類

（-）化合物包括氫氧化鋁、明磯、礦物油、吐溫-80、弗氏不完全佐劑（羊毛脂與液狀石蠟的混合

物）以及人工合成的多聚肌甘酸：胞甘酸、脂質(zhì)體等

（-）生物制劑

1.經(jīng)處理改造的細菌及其代謝產(chǎn)物，如卡介苗

2.細胞因子及熱休克蛋白

最常用于免疫動物的佐劑是弗氏佐劑，弗氏佐劑分為弗氏完全佐劑（弗氏不完全佐劑加卡介苗）和弗

氏不完全佐劑兩種。使用時加入水溶性抗原并充分乳化，使抗原與佐劑形成油包水乳劑。佐劑和抗原的比

例為1：1。乳化的方法有兩種：①研磨法②攪拌混合法

二、佐劑的作用機制

（-）改變抗原的物理性狀，延緩抗原降解和排除，從而更有效地刺激免疫系統(tǒng)

（二）刺激單核-吞噬細胞系統(tǒng)，增強其處理和提呈抗原的能力

（三）刺激淋巴細胞增殖和分化

三、免疫佐劑的概念

免疫佐劑：與抗原同時或預先注射于機體能增強機體免疫應答或改變免疫應答類型的輔助物質(zhì)。

第三節(jié)抗血清的制備

一、抗血清的概念

含有抗體的血清，就是抗血清。將免疫原接種給動物，該動物在抗原刺激下，體內(nèi)多個B細胞激活并

產(chǎn)生針對某一抗原的抗體，其混合物為多克隆抗體。采集動物血液，分離血清，即得到抗血清。

二、免疫動物的選擇

能用于制備抗血清的動物主要是哺乳類和禽類，常用的有家兔、綿羊、豚鼠、雞、山羊和馬

（-）抗原來源與動物種屬的關(guān)系

一般來說，抗原來源與動物種屬差異越大，免疫原性越強，免疫效果越好。同種系或親緣關(guān)系越近，

免疫效果越差（如雞與鴨、兔與大鼠）。

（二）動物個體的選擇

動物個體必須適齡、健康、體重合適

抗體需求量大時，可選用馬、綿羊等大動物

抗血清需求量少時，可選用家兔、豚鼠和雞等小動物

（三）抗血清的分為R型和H型

R型抗血清是用家兔及其他動物免疫產(chǎn)生的抗體，抗原抗體反應比例合適范圍較寬，適于作診斷試劑。

H型抗血清是用馬等大動物免疫獲得的抗體，抗原抗體反應比例合適范圍較窄，一般用作免疫治療。

（四）抗原的性質(zhì)

對于蛋白質(zhì)抗原大部分動物皆適合，常用的是山羊和家兔。某些動物體內(nèi)有類似物質(zhì)時，蛋白質(zhì)抗原

對這些動物免疫原性極差，如IgE對綿羊、胰島素對家兔、多種酶類對山羊，免疫后均不易產(chǎn)生抗體。

三、免疫程序

（-）免疫原的劑量

免疫原劑量過大或過小都可使動物產(chǎn)生免疫耐受，在一定劑量范圍內(nèi)，免疫原劑量越大，產(chǎn)生的抗體

效價越高

（-）免疫途徑

有皮內(nèi)、皮下、肌內(nèi)、靜脈、腹腔、淋巴結(jié)等途徑皮內(nèi)或皮下免疫時一般采用多點注射初次免疫一般

選擇皮內(nèi)接種，加強免疫和顆粒性抗原般選擇靜脈注射。寶貴抗原可選擇淋巴結(jié)內(nèi)微量注射法。

（三）免疫間隔時間

首次免疫后，因機體正處于識別抗原和進行B細胞活化增殖階段，如果很快進行第2次注入抗原，極

易造成免疫抑制

若間隔時間太長，則刺激減弱，抗體效價不高

第1次與第2次免疫間隔時間以10~20天為好

第3次及以后的間隔一般為7?10天

四、動物采血法

（一）頸動脈采血法該法最常用，適用于家兔、綿羊、山羊等動物。用頸動脈采血最多可獲70?80m],

一般有50ml左右。

（二）心臟采血法此法多用于家兔、豚鼠、大鼠和雞等動物。1只家兔1次可取血20?30mL

（三）靜脈采血法家兔可用耳中心靜脈采血，山羊和綿羊可用頸靜脈采血。

動物采血后，應盡快分離血清，分離血清的方法常采用室溫自然凝固，然后置37℃或4℃使血塊收縮

后，收集血清。

五、血清收集

動物采血后，應盡快分離血清，分離血清的方法常采用室溫自然凝固，然后置37℃或4c使血塊收縮

后，收集血清。

第四節(jié)抗血清的鑒定和保存

一、抗血清的鑒定

（一）抗體特異性的鑒定

常用雙向免疫擴散法。進行雙擴散18?24小時后，觀察上下兩排孔之間出現(xiàn)的沉淀線

若粗抗原及純抗原之間皆出現(xiàn)一條沉淀線，且兩者互相融合，則證明該動物已產(chǎn)生單價特異性抗體。

若純化抗原出現(xiàn)一條，而粗抗原出現(xiàn)多條線，且其中一條沉淀線與純抗原沉淀線相連接，也是成功的免疫,

若不出現(xiàn)沉淀線，表示免疫失敗。

（二）抗體效價的測定

顆粒性抗原采用凝集試驗?？扇苄钥乖捎秒p向免疫擴散試驗、ELISA。

測定抗體效價有兩種稀釋方法：

一種是將經(jīng)過系列稀釋的抗血清分別與一個濃度的抗原反應。另一種是同時稀釋抗原和抗血清，分別

與不同濃度的抗血清進行雙向免疫擴散試驗（稱為棋盤滴定）。

（三）抗體純度的測定

采用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDSPAGE）、雙向免疫擴散試驗、免疫電泳等方法。若只出現(xiàn)一條蛋白

電泳區(qū)帶說明抗體純化已達到要求。若出現(xiàn)多條蛋白區(qū)帶則表明抗血清中混有雜蛋白，須進一步純化。

（四）抗體親和力的測定

抗體親和力大小常以親和常數(shù)表示，采用平衡透析法、ELISA或RIA競爭結(jié)合試驗。

二、抗血清的保存

（-）2?80c保存：用于短期保存。

（二）冷凍保存：是常用的抗體保存方法。將抗體分為小包裝，在-80?-20℃保存，一般可保存5年,

效價不會明顯下降，但應避免反復凍融。

（三）真空干燥保存：用真空凍干機進行干燥，封裝后可長期保存，般在冰箱中可保存5?10年。

第五節(jié)抗血清的純化

抗原免疫動物制備的抗血清是成分復雜的混合物，除含有特異性抗體外，還存在與目的抗體不相關(guān)的

成分。最常見的是提取抗血清中的特異性IgG或單價抗體。

一、特異性IgG抗體

1.鹽析法多采用硫酸鍍鹽析法或硫酸鈉鹽析法

2.凝膠過濾法

血清蛋白的分級分離常用凝膠過濾法，按分子大小可分為3組：第1組包括IgM和一些脂蛋白；第2

組主要是IgG和較少量的IgA、IgD、IgE等；第3組主要是白蛋白、血清黏蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白等。

3.離子交換層析法

常用的離子交換劑是DEAE纖維素、QAE-sephadex、QAE纖維素。該法可獲得較純的IgG,且不影響抗

體活性。

4.親和層析法

將純化抗原或SPA交聯(lián)Sepharose4B制成親和層析柱，抗血清通過層析柱時，IgG被層析柱吸附，其

余成分則未能結(jié)合被洗脫去除。然后改變洗脫條件，使IgG從層析柱上解離，從而達到純化的目的。

二、單價特異性抗血清

單價特異性是指血清只與其特異性抗原發(fā)生反應。免疫得到的抗血清總是有抗白蛋白等雜抗體存在。

雜抗體的去除有兩種方法：

1.親和層析法

2.吸附劑方法

第四章單克隆抗體與基因工程抗體的制備

第一節(jié)雜交瘤技術(shù)的基本原理

第二節(jié)單克隆抗體的制備

第三節(jié)基因工程抗體制備

第四節(jié)單克隆抗體的應用

將單個B細胞分離出來加以增殖形成一個克隆群落，該B細胞克隆產(chǎn)生出針對單一表位、結(jié)構(gòu)相同、

功能均一的抗體，稱為單克隆抗體。

第一節(jié)雜交瘤技術(shù)的基本原理

雜交瘤技術(shù)的原理是使免疫的小鼠脾細胞可具有體外長期繁殖能力的小鼠骨髓瘤細胞融為一體，成為

雜交瘤細胞,最終獲得既能產(chǎn)生所需單克隆抗體，又能長期繁殖的雜交瘤細胞系。

將這種雜交瘤細胞擴大培養(yǎng)，接種于小鼠腹腔，在小鼠腹腔積液中即可得到高效價的單克隆抗體。

一、雜交瘤技術(shù)

包括兩種親本細胞的選擇與制備，細胞融合，雜交瘤細胞的篩選與克隆化。

（-）小鼠骨髓瘤細胞

細胞株穩(wěn)定，易于傳代培養(yǎng)。

細胞株自身不會產(chǎn)生免疫球蛋白或細胞因子。

該細胞是次黃喋吟磷酸核酸核糖轉(zhuǎn)化酶（HGPRT）的缺陷株。

（二）免疫脾細胞

免疫用抗原盡量提高其純度和活性，免疫途徑多用腹腔內(nèi)或皮內(nèi)多點注射法。

如為珍貴微量抗原，可用脾臟內(nèi)直接注射法進行免疫。

（三）細胞融合

PEG（聚乙：醛）可能導致細胞膜上脂類物質(zhì)的物理結(jié)構(gòu)重排,使細胞膜容易打開而有助于細胞融合。

（四）雜交瘤細胞的選擇性培養(yǎng)

HAT培養(yǎng)液,是在基礎(chǔ)細胞培養(yǎng)液內(nèi)添加次黃培吟、甲氨蝶次和胸腺一甲核蝶。

1.脾細胞（指B細胞）在一般培養(yǎng)基中不能生長繁殖。

2.骨髓瘤細胞

因缺乏HGPRT而合成DNA,骨髓瘤細胞在HAT培養(yǎng)基中不能增殖而死亡。

3.雜交瘤細胞

由骨髓瘤細胞和脾細胞融合形成的雜交瘤細胞。

由于與脾細胞融合，可獲得其HGPRT,可以合成DNA。因此，雜交瘤細胞在選擇性培養(yǎng)得以生存而被篩

選出來。

二、陽性雜交瘤細胞的克隆化培養(yǎng)

單個細胞培養(yǎng)又稱克隆化。

細胞克隆化有以下幾種方法：

1.有限稀釋法；

2.顯微操作法；

3.熒光激活細胞公選儀；

4.軟瓊脂平板法。

三、陽性雜交瘤細胞的凍存

目前均采用液氮保存細胞。

細胞放入液氮前，需要逐步降溫。

復蘇細胞時，從液氮罐內(nèi)取出凍存管:，立即浸入37℃水浴。

第二節(jié)單克隆抗體的制備

一、單克隆抗體的兩大產(chǎn)生方法

（―）動物體內(nèi)誘生法

先在小鼠腹腔注射液體石蠟或弗氏不完全佐劑，?周后將雜交瘤細胞懸液注射腹腔，1?2周后，無菌

抽取腹水，離心取上清液即可。

（-）體外培養(yǎng)法

將雜交瘤細胞置培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，待培養(yǎng)液顏色改變或細胞過多開始死亡時，收集上清液，離心去掉碎

片及細胞即可。

二、單克隆抗體的純化

從培養(yǎng)液或腹腔積液獲得的單克隆抗體，不需要純化即可應用于日常診斷或定性研究。

由于其中含有大量來自培養(yǎng)基、宿主或克隆細胞本身的一些無關(guān)蛋白，如果用于免疫標記測定，如放

射性核素、的、熒光素或生物素標記等，必須進一步分離和純化。

三、單克隆抗體的性質(zhì)鑒定

（-）1g類型測定

通常以兔抗小鼠1g類及亞類抗體與培養(yǎng)液中單克隆抗體按雙向瓊脂擴散法進行測定，確定其1g類型

或者Ig亞類型別。

（二）特異性測定

把與相應抗原有關(guān)的物質(zhì)通McAb進行多種免疫學檢測，鑒定McAb的特異性。這直接關(guān)系到McAb應用

的可靠性。

（三）抗體效價測定

效價以腹腔積液或培養(yǎng)液的稀釋度表示，稀釋度越高，則抗體效價也越高。

（四）表位測定

通過雙向瓊脂擴散法，把兩種McAb混合，加入于同一孔中，對孔放相應的抗原，如出現(xiàn)兩條沉淀線可

證明兩者為抗不同表位的McAbo

利用ELISA雙抗夾心法，將一種McAb作為包被抗體，另一作為酶標記，其中加入抗原，如顯色，則證

明兩者抗不同的表位。

（五）親和力測定

只有當抗原與抗體結(jié)合部位結(jié)構(gòu)完全吻合時，抗體的親和力最大。

這種結(jié)合力以抗原抗體反應平衡時，抗原與抗體濃度的乘積與抗原抗體復合物濃度之比表示.

（六）染色體分析

雜交瘤細胞的染色體數(shù)目接近兩親本細胞染色體數(shù)目的總和，在結(jié)構(gòu)上多數(shù)為端著絲粒染色體外，還

應出現(xiàn)少數(shù)標志染色體。

四、單克隆抗體的特性

（）單克隆抗體的特性

1.高度特異性；

2.高度的均一性和可重復性；

3.弱凝集反應和不呈現(xiàn)沉淀反應；

4.對環(huán)境敏感性。

（二）單克隆抗體的優(yōu)點

1.雜交瘤可以在體外“永久”地存活并傳代，只要不發(fā)生細胞株的基因突變，就可以不斷地生產(chǎn)高特

異性、高均?性的抗體。

2.可以用相對不純的抗原，獲得大量高度特異的、均一的抗體。

3.由于可能得到“無限量”的均一性抗體，所以適用于以標記抗體為特點的免疫學分析方法，如IRMA

和ELISA等。

4.由于單克隆抗體的高特異性和單一生物學功能，可用于體內(nèi)的放射免疫顯像和免疫導向治療。

（三）單克隆抗體的局限性

1.由于單克隆抗體不能進行沉淀和凝集反應，所以很多檢測方法不能用單克隆抗體完成。

2.單克隆抗體的反應強度不如多克隆抗體。

3.制備技術(shù)復雜，而且費時費工，所以單克隆抗體的價格也較高。

第三節(jié)基因工程抗體的制備

一、基因工程抗體的概念

應用DNA重組及蛋臼工程技術(shù)對編碼抗體基因按不同需要進行改造和裝配，經(jīng)導入適當?shù)氖荏w細胞后?

重新衣達的抗體，稱為基因工程抗體。

二、基因工程抗體的優(yōu)點

1.通過基因工程技術(shù)的改造，可以降低甚至消除人體對抗體的排斥反應。

2.基因工程抗體的分子量較小，可以部分降低抗體的鼠源性，更有利于穿透血管壁，進入病灶的核心

部位.

3.根據(jù)治療的需要，制備新型抗體。

4.可以采用原核細胞、真核細胞和植物等多種表達形式，大量表達抗體分子，大大降低了生產(chǎn)成本。

三、人源化抗體

制備人源化抗體的主要目的是減少抗體的異源性。

（―）嵌合抗體

1.從雜交瘤細胞中分離出功能性可變區(qū)基因，與人Ig恒定區(qū)的基因連接，插入適當質(zhì)粒，構(gòu)建鼠-人

嵌合的重鏈和輕鏈基因質(zhì)粒載體，共同轉(zhuǎn)染宿主細胞（如骨髓瘤細胞），表達鼠-人嵌合抗體。

2.人源化抗體的特點：

大大減少鼠源性單克隆抗體的免疫原性，同時又保留了親本抗體的特異性和親和力。

（-）改形抗體

1.改形抗體的定義

利用基因工程技術(shù)，將人抗體可變區(qū)（V）中互補決定簇（CDR）序列改換成鼠源單抗CDR序列。

2.改形抗體的特點

重構(gòu)成既具有鼠源性單抗的特異性，又保持抗體親和力的人源化抗體。

四、小分子抗體

小分子抗體包括抗原結(jié)合片段（Fv）、單鏈可變區(qū)片段（ScFv）和單區(qū)抗體（SdAb）。

分子量小，可在大腸桿菌等原核細胞表達，在人體內(nèi)穿透力強，有利于疾病的治療。

五、抗體融合蛋白

抗體融合蛋白是利用基因工程技術(shù)將抗體片段與其他生物活性蛋白融合所得的產(chǎn)物。

抗體融合蛋白具有多種生物學功能，并且表達的重組蛋白既不影響單鏈抗體的抗原結(jié)合能力，也不影

響與之融合的蛋白質(zhì)的生物學特性。

六、雙特異性抗體

雙特異性抗體（BsAb）又稱雙功能抗體（BFA）,它的兩個抗原結(jié)合位點具有不同的特異性，應用于結(jié)

合兩種不同的抗原分子，在生物醫(yī)學中有著重要的意義。

（-）化學交聯(lián)BsAb

兩種不同的McAb通過化學試劑交聯(lián)起來。

缺點是容易導致抗體失去活性，產(chǎn)物均一性不佳。

(二)細胞工程BsAb

將兩種分泌不同特異性單抗的雜交瘤細胞進行再次融合，產(chǎn)生四源雜交瘤細胞。

穩(wěn)定性差，BsAb的產(chǎn)量少且活性低，費時費力，不適用于臨床。

(三)基因工程BsAb

多采用抗體分子片段，如Fab,Fv或ScFv,經(jīng)基因操作修飾后，或體外組裝為BsAb,或直接表達分泌

型的BsAb,

七、噬菌體抗體庫技術(shù)

是將體外克隆的抗體基因片段插入噬菌體載體，轉(zhuǎn)染工程細菌進行表達，然后用抗原篩選即可獲得特

異的單克隆噬菌體抗體。

利用這一技術(shù)可以得到完全人源性的抗體，在HIV等病毒感染和腫瘤的診斷與治療方面有其獨特的優(yōu)

越性。

(-)基本原理

用PCR技術(shù)從人免疫細胞中擴增出整套的抗體重鏈可變區(qū)(VH)和輕鏈可變區(qū)(VL)基因，克隆到噬

菌體載體上并以融合蛋白的形式表達在其外殼表面。

(-)程序

1.從外周血或脾、淋巴結(jié)等組織中分離B淋巴細胞，提取mRNA并反轉(zhuǎn)錄為cDNA。

2.應用抗體輕鏈和重鏈引物，根據(jù)建庫的需要通過PCR技術(shù)擴增不同的Ig基因片段。

3.構(gòu)建噬菌體載體。

4.表達載體轉(zhuǎn)化細菌，構(gòu)建全套抗體庫。

(三)噬菌體抗體庫技術(shù)的特點

1.模擬天然全套抗體庫。

2.避免使用人工免疫和雜交瘤技術(shù)。

3.可獲得高親和力的人源化抗體廠

第四節(jié)單克隆抗體的應用

單克隆抗體問世以來，由予其獨有的特征已迅速應用于醫(yī)學很多領(lǐng)域。主要表現(xiàn)在以下幾個方面：

一、檢驗醫(yī)學診斷試劑

作為檢驗醫(yī)學實驗室的診斷試劑，單克隆抗體以其特異性強、純度高、均一性好等優(yōu)點，廣泛應用子

酶聯(lián)免疫吸附試驗、放射免疫分析、免疫組化和流式細胞儀等技術(shù)，并且單克隆抗體的應用很大程度上促

進了商品化試劑盒的發(fā)展。目前，應用單克隆抗體制作的商品化試劑盒廣泛應用于：①病原微生物抗原、

抗體的檢測；②腫瘤抗原的檢測；③免疫細胞及其亞群的檢測；④激素測定；⑤細胞因子的測定。

二、蛋白質(zhì)的提純

單克隆抗體是親和層析中重要的配體。將單克隆抗體吸附在一個惰性的固相基質(zhì)(如Separose2B,4B,

6B等)上，并制備成層析柱。當樣品流經(jīng)層析柱時，待分離的抗原可與固相的單克隆抗體發(fā)生特異性結(jié)合,

其余成分不能與之結(jié)合。將層析柱充分洗脫后，改變洗脫液的離子強度或pH,欲分離的抗原與抗體解離，

收集洗脫液便可得到欲純化的抗原。

三、小分子抗體的應用

將針對某一腫瘤抗原的單克隆抗體與化療藥物或放療物質(zhì)連接，利用單克隆抗體的導向作用，將化療

藥物或放療物質(zhì)攜帶至靶器官，直接殺傷靶細胞，稱為腫瘤導向治療。

將放射性標志物與單克隆抗體連接，注入患者體內(nèi)可進行放射免疫顯像，協(xié)助腫瘤的診斷。

四、抗體融合蛋白的應用

腫瘤的體內(nèi)顯像診斷

病毒的診斷和抗病毒感染

血液性疾病的診斷

五、雙特異抗體的應用

1.在體外免疫檢測中的應用假如雙特異抗體的一只臂結(jié)合靶抗原，一只臂結(jié)合紅細胞，可用于建立自

身紅細胞凝集試驗，快速檢測HBV和HIV病原體等；假如雙特異抗體的一只臂結(jié)合靶抗原，一只臂結(jié)合酶

（HRP或ALP）,抗體的標記只要加入前即可，避免化學交聯(lián)減低兩者的活性，從而提高醵免疫檢測的敏感

性。

2.在體內(nèi)腫瘤放射免疫顯像診斷中的應用假如雙特異抗體的一只臂結(jié)合靶抗原，一只臂結(jié)合半抗原螯

合劑，后者可選擇性地與放射性核素結(jié)合，利用二次導向系統(tǒng)顯示，比常規(guī)法具有更高的靈敏度和清晰度。

3.在體內(nèi)免疫治療中的應用抗體分子可與多種分子相融合，這些分子在抗體結(jié)合靶分子后可提供重要

輔助功能。這些分子包括前面提到的放射性核素、細胞毒藥物、毒素、小肽、蛋白、酶和用于基因治療的

病毒。

六、抗體庫技術(shù)的應用和前景

在腫瘤體外診斷中的應用

在腫瘤診斷中的應用

在腫瘤治療中的應用

第五章凝集反應

第一節(jié)凝集反應的特點

細菌、紅細胞等顆粒抗原，或可溶性抗原（或抗體）與載體顆粒結(jié)合成致敏顆粒后，它們與相應抗體

（或抗原）在適當電解質(zhì)存在下，形成肉眼可見的凝集現(xiàn)象，稱為凝集反應。

可以進行半定量檢測，即將抗體作一系列稀釋，與抗原結(jié)合產(chǎn)生凝集的最高稀釋倍數(shù)作為其效價或滴

度。

凝集試驗是個定性的檢測方法，即根據(jù)凝集現(xiàn)象的出現(xiàn)與否判定結(jié)果陰性或陽性。

凝集反應分為兩個階段：①抗原抗體的特異性結(jié)合；②出現(xiàn)可見的顆粒凝聚。

第二節(jié)直接凝集反應

直接凝集反應的原理是細菌、螺旋體和紅細胞等顆粒性抗原，在適當?shù)碾娊赓|(zhì)參與下可直接與相應抗

體結(jié)合出現(xiàn)凝集。

參加凝集反應的抗原稱凝集原，抗體則稱為凝集素。

（-）玻片凝集試驗

主要用于抗原的定性分析，短時間便能觀察結(jié)果，?般用來鑒定菌種或分型；也用于人類ABO血型的

測定0

（-）試管凝集試驗

用定量抗原懸液與一系列梯度倍比稀釋的待檢血清混合，保溫靜置后，根據(jù)每管內(nèi)顆粒凝集的程度，

以判斷待檢血清中有無相應抗體及其效價，可以用來協(xié)助臨床診斷或流行病原調(diào)查研究。

例如肥達試驗、外斐試驗、輸血時也常用于受體和供體兩者間的交叉配血試驗。

第三節(jié)間接凝集反應

間接凝集反應是將可溶性抗原（或抗體）先吸附于適當大小的顆粒性載體表面，然后與相應抗體（或

抗原）作用，在適宜電解質(zhì)存在的條件下，出現(xiàn)特異性凝集現(xiàn)象。

一、間接凝集反應的類型

（-）正向間接凝集反應

紅細胞包被抗原，用以檢測抗體的血凝反應，稱為正向間接血凝反應（PHA）。

（-）反向間接凝集反應

紅細胞包被抗體，用以檢測抗原的血凝反應，稱為反向間接血凝反應（RPHA）o

（三）間接凝集抑制反應

先將可溶性抗原（或抗體）與相應的抗體（或抗原）混合，然后再加入抗原（或抗體）致敏的紅細胞,

則能抑制原先的血凝現(xiàn)象，稱為正向（或反向）間接血凝抑制試驗。

間接血凝抑制試驗可用于檢測抗體、自身抗體、變態(tài)反應性抗體，也可測定抗原。

（四）協(xié)同凝集反應

協(xié)同凝集反應與間接凝集反應的原理相類似，但所用載體既非天然的紅細胞，也非人工合成的聚合物

顆粒，而是一種金黃色葡萄球菌A蛋白（SPA）。SPA具有與IgG的Fc段結(jié)合的特性，因此當這種葡萄球菌

與IgG抗體連接時，就成為抗體致敏的顆粒載體。如與相應抗原接觸，即出現(xiàn)反向間接凝集反應。

間接凝集反應適用于各種抗體和可溶性抗原的檢測。以載體來分，常用的為紅細胞、膠乳顆粒及明膠

顆粒等。

二、間接血凝試驗

間接血凝試驗其原理是將抗原（或抗體）包被于紅細胞表面，成為致敏載體，然后與相應的抗體（或

抗原）結(jié)合，從而使紅細胞被動的凝聚在一起，出現(xiàn)可見的凝集現(xiàn)象。

（一）載體

紅細胞是大小均一的載體顆粒，最常用的為綿羊、家兔、雞的紅細胞及0型人紅細胞。

（二）致敏

致敏用的抗原或抗體要求純度高，并保持良好的免疫活性。用蛋白質(zhì)致敏紅細胞的方法有直