基因工程試題

名詞解釋問題：Genemanipulation答案：基因操作。將在細(xì)胞外產(chǎn)生的核酸（物質(zhì)）分子插入到病毒，質(zhì)?；蚱渌d體系統(tǒng)中，再整合到特定的宿主中，從而形成一種新的可連續(xù)繁殖的有機(jī)體。名詞解釋問題：Interruptedgenes參考答案：間斷基因。序列中間插入有與氨基酸編碼無關(guān)的DNA間隔區(qū)，使一個(gè)基因分隔成不連續(xù)的若干區(qū)段。我們稱這種編碼序列不連續(xù)的基因?yàn)殚g斷基因。名詞解釋問題：Promotor參考答案：?jiǎn)?dòng)子。DNA分子可以與RNA聚合酶特異結(jié)合的部位，也就是使轉(zhuǎn)錄開始的部位。名詞解釋問題：Subcloning參考答案：亞克隆。當(dāng)初始克隆中的外源DNA片段較長，含有許多目的基因以外的DNA片段時(shí)，在諸如表達(dá)、序列分析和突變等操作中不便進(jìn)行，將目的基因所對(duì)應(yīng)的一小段DNA找出來，這個(gè)過程叫“亞克隆”。填空題問題：基因操作（Genemanipulation）的核心部分是基因克?。╣enecloning），genecloning的基本要點(diǎn)有（），（）和（）。參考答案：克隆基因的類型；受體的選擇；載體的選擇填空題問題：（）是遺傳物質(zhì)的基本單位，也是作為遺傳物質(zhì)的核酸分子上的一段片段。它可以是連續(xù)的，也可以是（）；可以是（），也可以是RNA；可以存在于染色體上，也可以（）參考答案：基因；連續(xù)；DNA；存在于染色體之外（如質(zhì)粒，噬菌體等）填空題問題：基因操作并不是一個(gè)法律概念，除了包括基因克隆外，還包括基因的（）、（）、（）和（）等與基因研究相關(guān)的內(nèi)容。參考答案：表達(dá)；調(diào)控；檢測(cè)；改造填空題問題：?jiǎn)?dòng)子（Promotor）是指（）。通常一個(gè)Gene是否表達(dá)，（）是關(guān)鍵的一步，是起決定作用的。在轉(zhuǎn)錄過程中，Promoter還是（）的結(jié)合位點(diǎn)。參考答案：基因轉(zhuǎn)錄過程中控制起始的部位；轉(zhuǎn)錄起始；RNA聚合酶填空題問題：原核生物的RNApolymerase主要由兩部分組成：（）和（），其中。-因子并不參與RNA的合成，它的作用主要是（）。參考答案：核心酶；。因子；識(shí)別要轉(zhuǎn)錄的起始位點(diǎn)填空題問題：從（）到（）的這一段距離稱為一個(gè)轉(zhuǎn)錄單位，或者一個(gè)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，其中可包括一個(gè)或者多個(gè)Gene。參考答案：?jiǎn)?dòng)區(qū)；終止區(qū)填空題問題：轉(zhuǎn)錄終止子主要有兩種，一種是（），另一種是（）。參考答案：依賴P因子；不依賴P因子填空題問題：Gene的書寫方式，通常是寫出的DNA序列總是與（）相同的那條鏈，方向是從（）到（）。對(duì)于堿基的位置，一般自轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)向兩個(gè)方向編號(hào)，其中轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)定為（），（）定為-1。參考答案：mRNA；5'；3'；+1；在起始點(diǎn)上游第一個(gè)堿基填空題問題：重疊基因（Overlappinggene）是指（），間隔基因（Interruptedgene）是指（）參考答案：一個(gè)基因的序列中，單個(gè)DNA序列可編碼一個(gè)以上的蛋白質(zhì)；在編碼序列中間插入的一段無編碼作用的堿基序列簡(jiǎn)答題問題：簡(jiǎn)述基因克隆的兩個(gè)基本特征？參考答案：基因克隆的兩個(gè)基本特征是一是強(qiáng)調(diào)外源核酸分子（一般情況下都是DNA）在不同宿主中的繁殖，打破自然種的界限將來自于不相關(guān)物種的基因放入一個(gè)宿主中是基因操作的一個(gè)重要特征，基因操作的另一個(gè)重要特征是繁殖。簡(jiǎn)答題問題：談?wù)勀銓?duì)gene的認(rèn)識(shí)，并簡(jiǎn)要說說gene概念的發(fā)展情況？參考答案：能夠表達(dá)和產(chǎn)生基因產(chǎn)物（ProteinorRNA）的DNA序列（可自由發(fā)揮，發(fā)展情況請(qǐng)查找相關(guān)資料）基因概念的發(fā)展：基因作為遺傳學(xué)中的專用術(shù)語，其概念每發(fā)展一步都意味著遺傳學(xué)乃至整個(gè)生物學(xué)的一次革命和突破，其內(nèi)容的每次豐富和充實(shí)都凝聚著生物學(xué)家們的滴滴心血?！盎颉备拍畹奶岢觯哼z傳學(xué)的奠基人孟德爾在1866年發(fā)表的論文《植物雜交試驗(yàn)》指出生物每一個(gè)性狀都是通過遺傳因子來傳遞的，遺傳因子是一些獨(dú)立的遺傳單位。這樣把可觀察的遺傳性狀和控制它的內(nèi)在的遺傳因子區(qū)分開來了，遺傳因子作為基因的雛形名詞誕生了。1909年丹麥遺傳學(xué)家約翰遜在《精密遺傳學(xué)原理》一書中提出“基因”概念，以此來替代孟德爾假定的“遺傳因子”。從此，能夠表達(dá)和產(chǎn)生基因產(chǎn)物（proteinorRNA）的DNA序列（可自由發(fā)揮）“基因”一詞一直伴隨著遺傳學(xué)發(fā)展至今?；蚪Y(jié)構(gòu)和功能的探索：摩爾根和他的學(xué)生們利用果蠅作了大量的潛心研究，1926年他的巨著《基因論》出版，從而建立了著名的基因?qū)W說，首次完成了當(dāng)時(shí)最新的基因概念的描述，即基因以直線形式排列，它決定著一個(gè)特定的性狀，而且能發(fā)生突變并隨著染色體同源節(jié)段的互換而交換，它不僅是決定性狀的功能單位，而且是一個(gè)突變單位和交換單位。1941年比德爾和塔特姆提出一個(gè)基因一個(gè)酶說；1949年鮑林與合作者在研究鐮刀型細(xì)胞貧血癥時(shí)推論基因決定著多肽鏈的氨基酸順序；1944年艾弗里、麥卡蒂首次用實(shí)驗(yàn)明確證實(shí)：DNA是遺傳信息的載體；1952年赫爾希和蔡斯進(jìn)一步證明遺傳物質(zhì)是DNA而不是蛋白質(zhì)；1953年美國分子生物學(xué)家沃森和英國分子生物學(xué)家克里克通力協(xié)作，根據(jù)X射線衍射分析，提出了著名的DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)模型，進(jìn)一步說明基因成分就是DNA，它控制著蛋白質(zhì)的合成；1957年法國遺傳學(xué)家本滋爾以T4噬菌體作為研究材料分析了基因內(nèi)部的精細(xì)結(jié)構(gòu)，提出了順反子學(xué)說。這個(gè)學(xué)說打破了過去關(guān)于基因是突變、重組、決定遺傳性狀的“三位一體”概念及基因是最小的不可分割的遺傳單位的觀點(diǎn)，從而認(rèn)為基因?yàn)镈NA分子上一段核苷酸序列，負(fù)責(zé)著遺傳信息的傳遞，一個(gè)基因內(nèi)部仍可劃分為若干個(gè)起作用的小單位，即可區(qū)分成順反子、突變子和重組子。一個(gè)作用子通常決定一種多肽鏈合成，一個(gè)基因包含一個(gè)或幾個(gè)作用子。突變子指基因內(nèi)突變的最小單位，而重組子為最小的重組合單位，只包含一對(duì)核苷酸。所有這些均是基因概念的偉大突破。關(guān)于基因的本質(zhì)確定后，人們又把研究視線轉(zhuǎn)移到基因傳遞遺傳信息的過程上。1961年開始，尼倫伯格和科拉納等人逐步搞清了基因以核苷酸三聯(lián)為一組編碼氨基酸，并在1967年破譯了全部64個(gè)遺傳密碼，這樣把核酸密碼和蛋白質(zhì)合成聯(lián)系起來。然后，沃森和克里克等人提出的“中心法則”更加明確地揭示了生命活動(dòng)的基本過程。1970年特明以在勞斯肉瘤病毒內(nèi)發(fā)現(xiàn)逆轉(zhuǎn)錄酶這一成就進(jìn)步發(fā)展和完善了“中心法則”，至此，遺傳信息傳遞的過程已較清晰地展示在人們的眼前。過去人們對(duì)基因的功能理解是單一的即作為蛋白質(zhì)合成的模板。1961年法國雅各布和莫諾的研究成果，又大大擴(kuò)大了人們關(guān)于基因功能的視野。他們?cè)谘芯看竽c桿菌乳糖代謝的調(diào)節(jié)機(jī)制中發(fā)現(xiàn)了有些基因不起合成蛋白質(zhì)模板作用，只起調(diào)節(jié)或操縱作用，提出了操縱子學(xué)說。從此根據(jù)基因功能把基因分為結(jié)構(gòu)基因、調(diào)節(jié)基因和操縱基因?；蚋拍畹倪M(jìn)一步發(fā)展：70年代后，基因的概念隨著多學(xué)科滲透和實(shí)驗(yàn)手段日新月異又有突飛猛進(jìn)的發(fā)展，主要有以下幾個(gè)方面?；蚓咧丿B性、內(nèi)含子和外顯子、管家基因與奢侈基因和基因的游動(dòng)性。所有這些成果無疑給基因概念中注入鮮活科學(xué)的內(nèi)容，幫助人們揭開層層面紗去更加全面了解基因的真面目。時(shí)代在發(fā)展，科學(xué)在進(jìn)步，基因概念的深入發(fā)展，必將對(duì)人類的文明進(jìn)步產(chǎn)生強(qiáng)大的推動(dòng)作用。簡(jiǎn)答題問題：如何理解gene及其產(chǎn)物的共線性和非共線性？參考答案：基因決定蛋白質(zhì)的序列組成，是由密碼子對(duì)應(yīng)特定氨基酸所決定的。當(dāng)一個(gè)基因的核苷酸序列與其產(chǎn)物的氨基酸序列是一一對(duì)應(yīng)時(shí)，則表明它們是共線性的。在原核生物中，基因及其產(chǎn)物是共線性的。70年代以來，在真核生物中，發(fā)現(xiàn)了間斷基因，后來發(fā)現(xiàn)這種間斷基因在真核生物中普遍存在，也就是后來所說的基因間存在著內(nèi)含子。內(nèi)含子指真核生物基因中不能被翻譯成蛋白質(zhì)的DNA片斷，但可被轉(zhuǎn)錄，當(dāng)兩側(cè)序列的轉(zhuǎn)錄RNA被剪接在一起時(shí)，就將內(nèi)含子轉(zhuǎn)錄的RNA從整個(gè)轉(zhuǎn)錄物中除去。外顯子是指能夠翻譯成蛋白質(zhì)的任一間斷的基因片段，一個(gè)基因可有多個(gè)外顯子。內(nèi)含子并不是一成不變的，具有相對(duì)性，對(duì)一個(gè)DNA片斷來說，在某個(gè)基因中是內(nèi)含子，但在另一個(gè)基因中卻可以作為外顯子。您的答案：簡(jiǎn)答題問題：什么是genecloning？什么是亞克隆(subcloning)？參考答案：基因克?。阂欢ǔ潭壬系韧诨虻姆蛛x，即從復(fù)雜的生物體基因組中，經(jīng)過酶切，消化等步驟，分離帶有目的基因的DNA片段?；騺喛寺。撼醪娇寺≈械耐庠雌瓮^長，含有許多目的基因片段以外的DNA片段，在諸如表達(dá)、序列分析和突變等操作中不便進(jìn)行，因此必須將目的基因所對(duì)應(yīng)的一小段DNA找出來，這個(gè)過程叫“亞克隆”。您的答案：簡(jiǎn)答題問題：假如從一個(gè)原核生物中cloning某基因(1-2kb)，請(qǐng)談?wù)勊幕静襟E？參考答案：①對(duì)原核生物染色體DNA進(jìn)行不完全酶切，純化所得到的DNA片斷，并與載體連接，轉(zhuǎn)化大腸桿菌；②得到轉(zhuǎn)化子后，根據(jù)目標(biāo)基因兩側(cè)的已知序列設(shè)計(jì)探針，雜交，篩選轉(zhuǎn)化子；③所得到的轉(zhuǎn)化子中含有目標(biāo)基因，進(jìn)一步作亞克隆，一步步地向目標(biāo)基因逼近，最后可得到目標(biāo)基因簡(jiǎn)答題問題：什么叫基因工程(GeneEngineering)，試從理論和技術(shù)兩個(gè)方面談?wù)凣eneEngineering誕生的基礎(chǔ)？參考答案：基因工程(GeneEngineering)又稱基因操作(GeneManipulation)、重組DNA?；蚬こ淌且苑肿舆z傳學(xué)理論為基礎(chǔ)，以分子生物學(xué)和微生物學(xué)的現(xiàn)代方法為手段，將不同來源的基因(DNA分子)，按預(yù)先設(shè)計(jì)的藍(lán)圖，在體外構(gòu)建雜種DNA分子，然后導(dǎo)入活細(xì)胞，以改變生物原先的遺傳特性，獲得新品種，生產(chǎn)新產(chǎn)品，或是研究基因的結(jié)構(gòu)和功能。思考題問題：簡(jiǎn)述基因操作、基因重組和基因工程的關(guān)系。思考題問題：為什么說基因工程是生物學(xué)和遺傳學(xué)發(fā)展的必然產(chǎn)物？思考題問題：簡(jiǎn)述基因的結(jié)構(gòu)組成對(duì)基因操作的影響。第二章名詞解釋問題：Restrictionandmodification參考答案：限制和修飾。宿主特異性地降解外源遺傳物質(zhì)(DNA)的現(xiàn)象稱為限制。外源遺傳物質(zhì)通過甲基化等作用避免宿主的限制作用稱為修飾。名詞解釋問題：Matchedends參考答案：匹配末端。識(shí)別位點(diǎn)為回文對(duì)稱結(jié)構(gòu)的序列，經(jīng)限制酶切割后，產(chǎn)生的相同的，互補(bǔ)的末端稱為匹配粘端，亦即粘性末端(cohesiveend)。名詞解釋問題：Bluntends參考答案：平末端。在回文對(duì)稱軸上同時(shí)切割DNA的兩條鏈，產(chǎn)生的沒有堿基突出的末端稱為平末端。名詞解釋問題：Isoschizomer參考答案：同裂酶。識(shí)別相同序列的限制酶稱同裂酶，但它們的切割位點(diǎn)可能不同。名詞解釋問題：Isocaudiners參考答案：同尾酶。來源不同、識(shí)別序列不同，但產(chǎn)生相同粘性末端的酶。名詞解釋問題：Sitepreferences參考答案：位點(diǎn)偏愛。某些限制酶對(duì)同一介質(zhì)中的不同位置的同一個(gè)識(shí)別序列表現(xiàn)出不同的切割效率的現(xiàn)象稱為位點(diǎn)偏愛。名詞解釋問題：Staractivity參考答案：星星活性。在極端非標(biāo)準(zhǔn)條件下，限制酶能切割與識(shí)別序列相似的序列，這個(gè)改變的特殊性稱星星活性。名詞解釋問題：Nickingenzyme參考答案：切口酶。有些限制酶只切割雙鏈DNA中的一條鏈，產(chǎn)生單鏈缺口，這種酶稱為切口酶。名詞解釋問題：Klenowfragment參考答案：Klenow片段。KlenowDNA聚合酶是E.coliDNApolymerase經(jīng)蛋白酶（枯草桿菌蛋白酶）裂解而從全酶中除去5'—3'外切活性的多肽大片段，而聚合活性和3'--5'外切活性不受影響。名詞解釋問題：Sequenase參考答案：測(cè)序酶。是改造的T7噬菌體DNA聚合酶，切除了99%以上的3'--5'外切活性。SequenaseVersion2切除了所有的3'--5'外切活性，用于雙脫氧鏈終止法對(duì)長片段進(jìn)行測(cè)序。名詞解釋問題：Reversetranscriptase參考答案：反轉(zhuǎn)錄酶。即依賴于RNA的DNA聚合酶，它有5'--3'合成DNA活性，但是無3'--5'外切活性。它來自AMV（禽成髓細(xì)胞瘤病毒）或Mo-MLV（Moloney鼠白血病病毒，又稱M-MuLV）。名詞解釋問題：Terminaltransferase參考答案：末端轉(zhuǎn)移酶。來源于小牛胸腺，是存在于前淋巴細(xì)胞及分化早期的類淋巴樣細(xì)胞內(nèi)的一種不尋常的DNA聚合酶，在二價(jià)陽離子存在下，末端轉(zhuǎn)移酶催化dNTP加于DNA分子的3'羥基端。若dNTP為T或C，此二價(jià)陽離子首選鉆離子；若dNTP為A或G，此二價(jià)陽離子首選鎂離子。名詞解釋問題：Ligase參考答案：連接酶。催化DNA5'磷酸基與3'羥基之間形成磷酸二酯鍵，將兩段核酸連接起來的酶。名詞解釋問題：T4polynucleotidekinase參考答案：T4多核苷酸激酶。催化ATP的丫-磷酸基轉(zhuǎn)移至DNA或RNA的5'末端。名詞解釋問題：Alkalinephosphatase參考答案：堿性磷酸酶。主要來源于牛小腸（Calfintestinalalkalinephosphatase），簡(jiǎn)稱CIP或CIAP，也有來自細(xì)菌（BAP）。催化除去DNA或RNA5'磷酸。名詞解釋問題：S1nuclease參考答案：Sl核酸酶。來源于米曲霉（Aspergillusoryzae），可降解單鏈DNA或RNA，產(chǎn)生帶5'磷酸的單核苷酸或寡核苷酸雙鏈；對(duì)dsDNA，dsRNA，DNA:RNA雜交體不敏感。名詞解釋問題：Exonulease山參考答案：外切核酸酶山。來源于大腸桿菌，催化從dsDNA3'-OH逐一去除單核苷酸的反應(yīng)，底物為dsDNA或線狀和帶切口或缺口的環(huán)狀DNA，反應(yīng)結(jié)果是在dsDNA上產(chǎn)生長的單鏈區(qū)。名詞解釋問題：Singlestrandbindingprotein參考答案：?jiǎn)捂溄Y(jié)合蛋白。此蛋白能協(xié)同地與ssDNA結(jié)合而不與dsDNA結(jié)合，可以削弱鏈內(nèi)二級(jí)結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性，從而加速互補(bǔ)多核苷酸的重新退火，并通過消除阻礙DNA聚合酶前進(jìn)的鏈內(nèi)二級(jí)結(jié)構(gòu)，而提高這些聚合酶的持續(xù)作用能力。名詞解釋問題：ProteinaseK參考答案：蛋白酶K是具有高活性的絲氨酸蛋白酶，屬枯草桿菌蛋白酶，可以水解范圍廣泛的肽鍵，尤其適合水解羧基末端至芳香族氨基酸和中性氨基酸之間的肽鍵。K指該蛋白酶通過水解角蛋白（keratin）可以為該霉菌提供所有所需的碳源和氮源。名詞解釋問題：Lysozymes參考答案：溶菌酶。一類水解細(xì)菌細(xì)胞壁中肽聚糖的酶，常用的是卵清溶菌酶，用于破碎細(xì)胞。填空題問題：Ecok的一般分子組成為R2M2S，在這些亞基中，R亞基具有（）的作用，M亞基具有（）的作用，S亞基具有（）的作用，當(dāng)該該酶發(fā)生作用時(shí)，需用到的輔因子有：（）、（）、（）。參考答案：限制酶；甲基化；識(shí)別DNA序列；ATP；SAM；Mg2+填空題問題：限制性內(nèi)切核酸酶（Restrictionendonuclease）的命名是按屬名和種名相結(jié)合的原則的，通常第一個(gè)大寫字母取自（），第二、三個(gè)字母取自（），第四個(gè)字母則用（）表示。參考答案：屬名的第一個(gè)字母；種名的前兩個(gè)字母；菌株名填空題問題：II型限制酶識(shí)別回文對(duì)稱序列，在回文序列（）或（）切割DNA，產(chǎn)生帶3'-OH和5'-P基團(tuán)的DNA的產(chǎn)物，需（）的存在才能發(fā)揮活性，相應(yīng)的修飾酶只需SAM。參考答案：內(nèi)部；附近；Mg2+填空題問題：從因特網(wǎng)上可以找到限制酶的數(shù)據(jù)庫（），該網(wǎng)站由NewEnglandBiolabs公司維護(hù)（）。參考答案：REBASE填空題問題：識(shí)別相同序列的限制酶稱（）參考答案：同裂酶填空題問題：I-CeuI酶是衣滴蟲葉綠體大rRNA基因的內(nèi)含子編碼的產(chǎn)物，識(shí)別位點(diǎn)為（）bp,識(shí)別的核心部位為（）至（）位置的19bp,反應(yīng)溫度為37°C。參考答案：26；-12；+7填空題問題：位點(diǎn)偏愛是指：（）參考答案：限制酶對(duì)不同位置的同一個(gè)識(shí)別序列表現(xiàn)出不同的切割效率填空題問題：1單位NaeI或NarI的定義：（）參考答案：切割1pg腺病毒2DNA在50ul體系中1小時(shí)所需的酶量填空題問題：有些限制酶只切割雙鏈DNA中的一條鏈，產(chǎn)生單鏈缺口，即（）參考答案：切口酶填空題問題：個(gè)體間DNA限制性片段長度的差異叫（）參考答案：限制性片段長度多態(tài)性（RFLP）填空題問題：DNA載體經(jīng)Hindlll切割后產(chǎn)生粘性末端，能發(fā)生載體自連，影響載體與外源DNA的連接效率，常用的防止載體自連的方法有（）、（）。參考答案：去磷酸化；部分補(bǔ)平填空題問題：完全的回文序列應(yīng)具備兩個(gè)特點(diǎn)即（）和（）。參考答案：能夠在中間劃一個(gè)對(duì)稱軸，兩側(cè)的序列兩兩對(duì)稱互補(bǔ)配對(duì)；兩條互補(bǔ)鏈的5'—3'的序列組成相同，即將一條鏈旋轉(zhuǎn)180°，則兩條鏈重疊填空題問題：DcmMethylase（Dcm甲基化酶）的識(shí)別序列為（）和（），該酶的作用位點(diǎn)為（）。參考答案：CCTGG；CCAGG；第二個(gè)胞嘧啶C的C5位置填空題問題：大腸桿菌中至少有三種依賴于甲基化的限制系統(tǒng)（）、（）、（）。它們識(shí)別的序列各不相同，但只識(shí)別經(jīng)過甲基化的序列，都限制CpG甲基化酶作用的DNA。參考答案：mcrA；mcrBC；mrr您的答案：填空題問題：分別寫出以下限制性內(nèi)切核酸酶（Restrictionendonuclease）的識(shí)別序列EcoRl（）、Sau3AI（）、HindIII（）。參考答案：GAATTC；GATC；AAGCTT填空題問題：Weiss單位的定義為（）參考答案：在37C下20分鐘內(nèi)催化1nmol32P從焦磷酸根置換到[丫，&一32P]ATP所需的酶量填空題問題：限制性內(nèi)切核酸酶（Restrictionendonuclease）通常保存在（）濃度的甘油溶液中。參考答案：50%填空題問題：載體和外源DNA經(jīng)酶切，在進(jìn)行下一步操作前，需消除限制性內(nèi)切核酸酶（Restrictionendonuclease）的影響。常用的方法有（）、（）、（）、（）。參考答案：EDTA法；加熱法；苯酚抽提法；試劑盒除酶法填空題問題：對(duì)DNA進(jìn)行雙酶切時(shí)，酶切緩沖液的選擇原則有（1）（）、（2）（）、（3）（）參考答案：可選用都合適的緩沖液或通用緩沖液；若緩沖液不可替代則先用低濃度的，再加適量NaCl和第二種酶；先用低鹽緩沖液再用高鹽緩沖液填空題問題：Dnasel為內(nèi)切核酸酶，在不同的輔因子條件下，產(chǎn)生不同的酶切效果，當(dāng)Mg2+存在時(shí)（）；當(dāng)Mn2+存在時(shí)（）。參考答案：獨(dú)立作用于每條DNA鏈，且切割位點(diǎn)隨機(jī)；可在兩條鏈的大致同一位置切割dsDNA，產(chǎn)生平端或1到2個(gè)核甘酸突出的DNA片斷填空題問題：KlenowDNA聚合酶是E.coliDNApolymerase經(jīng)蛋白酶裂解而從全酶中除去（）活性的多肽大片斷，而其他活性保持不變。參考答案：5'--3'的外切活性填空題問題：T4phageDNApolymerase分子量為（）kDa，該酶的3'--5'的外切活性比Klenow酶強(qiáng)（）倍，由于它不從單鏈DNA模板上替換引物，故可用于（）。參考答案：114；200；提高誘變反應(yīng)填空題問題：反轉(zhuǎn)錄酶來自AMV或Mo-MLV，即依賴于RNA的DNA聚合酶，它有（）活性，但無（）活性。參考答案：5'--3'合成DNA的；3'--5'的外切填空題問題：末端轉(zhuǎn)移酶來源于（），是存在于前淋巴細(xì)胞及分化早期的類淋巴樣細(xì)胞內(nèi)的一種不尋常的DNA聚合酶，在（）存在下，末端轉(zhuǎn)移酶催化dNTP加于DNA分子的3'羥基端。參考答案：小牛胸腺；Mg2+填空題問題：T4DNA連接酶的分子量為68kDa，它可以催化DNA5'磷酸基與3'羥基之間形成磷酸二酯鍵。反應(yīng)底物為粘端、切口、平端的RNA或DNA。低濃度（）和（）可以提高平端連接效率。參考答案：聚乙二醇PEG；單價(jià)陽離子填空題問題：E.coliDNA連接酶與T4DNA連接酶相似，但需（）的參與，且其平端連接效率低常用于置換合成法。參考答案：煙酰胺一腺嘌吟二核苷酸（NAD+）填空題問題:T4多核苷酸激酶在高濃度的ATP時(shí)發(fā)揮最佳活性，（）是其強(qiáng)烈抑制劑。參考答案：NH4+填空題問題：BAL31核酸酶主要活性為3'外切核酸酶活性，可從線性DNA兩條鏈的3'端去除掉單核苷酸；還可從內(nèi)部切割核酸，作用于單鏈。BAL31發(fā)生作用依賴（），（）可抑制其活性。參考答案：Ca2+；EGTA填空題問題：綠豆核酸酶來源于綠豆芽，與S1酶相似，但比S1酶更溫和，在（）上才切割，可使DNA突出端變成平端。參考答案：大切口填空題問題：核糖核酸酶A來源于牛胰，為內(nèi)切核酸酶，可特異攻擊（）?？沙NA:RNA中未雜交的RNA區(qū)，可用來確定DNA或RNA中單堿基突變的位置。參考答案：RNA上嘧啶殘基的3'端填空題問題：用于構(gòu)建嵌套缺失體常用到的核酸酶有（）、（）、（）。參考答案：Dnasel；外切核酸酶III；BAL31填空題問題：瓊脂糖酶作用于低熔點(diǎn)瓊脂糖，它的活性是可切割瓊脂糖酶亞單位。由于此酶可分解瓊脂糖，因此應(yīng)用于（）。參考答案：分離大片段DNA選擇題問題：限制性內(nèi)切酶一般保存在（）濃度的甘油溶液中。參考答案：C50%點(diǎn)評(píng)：合適濃度的甘油和二甲基亞颯可以作為冰凍保護(hù)劑，保護(hù)生物大分子的活性。選擇題問題：限制性圖譜與限制性片段長度多態(tài)性（RFLP）圖譜的最顯著區(qū)別在于（）參考答案：A前者是物理圖譜后者是連鎖圖點(diǎn)評(píng)：詳細(xì)理解兩者的概念選擇題問題：迄今為止所發(fā)現(xiàn)的限制性內(nèi)切核酸酶可以作用于（）參考答案：C只能作用于雙鏈DNA點(diǎn)評(píng)：限制性內(nèi)切核酸酶的識(shí)別和切割序列有很強(qiáng)的特異性，特別是第II型的限制性內(nèi)切酶。選擇題問題：已知某一內(nèi)切酶在一個(gè)環(huán)狀DNA上有4個(gè)切點(diǎn)，當(dāng)用此酶切割該環(huán)狀DNA，可以得到（）個(gè)片段參考答案：B4點(diǎn)評(píng)：注意DNA分子的形狀，其它條件相同的時(shí)候，線狀比環(huán)狀產(chǎn)生的片段要多一個(gè)。選擇題問題：甘油會(huì)使許多限制性內(nèi)切核酸酶的特異性發(fā)生改變，是導(dǎo)致一些酶星星活性的主要原因之一，防止的辦法是在酶切反應(yīng)體系中，將甘油的濃度控制在（）以下參考答案：A5%點(diǎn)評(píng)：低溫下保存生物大分子時(shí)，甘油可以作為冰凍保護(hù)劑，但反應(yīng)體系中甘油濃度過高會(huì)導(dǎo)致星星活性。選擇題問題：在下列進(jìn)行DNA部分酶切的條件中，控制哪一項(xiàng)最好（）參考答案：D酶量點(diǎn)評(píng)：各種酶都有適合自己的反應(yīng)溫度；同時(shí)根據(jù)酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)，酶切反應(yīng)一定時(shí)間后酶的活性就會(huì)減弱或喪失，所以控制酶量是最合適的選擇題問題：下列試劑中，哪一種可以螯合Ca2+離子（）參考答案：DEGTA點(diǎn)評(píng)：EDTA螯合Mg2+等金屬離子，EGTA螯合Ca2+離子。選擇題問題：DNA被某種酶切割后，電泳得到的電泳帶有些擴(kuò)散，下列原因中，哪一項(xiàng)不太可能（）參考答案：C酶失活點(diǎn)評(píng)：理解限制性內(nèi)切酶酶切本質(zhì)和DNA電泳實(shí)驗(yàn)原理。選擇題問題：nick與gap的區(qū)別在于（）參考答案：A前者是斷開了一個(gè)磷酸二酯鍵，后者是指DNA的單鏈中有較小的缺失點(diǎn)評(píng)：注意理解專業(yè)詞匯。選擇題問題：可以在切口部位起作用的酶是（）參考答案：BS1核酸酶點(diǎn)評(píng)：BAL31核酸酶主要活性為3'外切核酸酶活性，可以從線性DNA兩條鏈的3'端去掉單核苷酸；S1核酸酶可降解單鏈DNA或RNA，產(chǎn)生帶5'磷酸的單核苷酸或寡核苷酸，中等濃度可在切口或小缺口處切割雙鏈；核糖核酸酶A可以特異攻擊RNA上的嘧啶殘基的3'端，可除去DNA:RNA中未雜交的RNA區(qū)；A外切核酸酶可以作用于dsDNA，持續(xù)逐一釋放5’單核苷酸。選擇題問題：Klenow酶與DNA聚合酶相比，前者喪失了（）活性參考答案：A5'--3'外切酶點(diǎn)評(píng):KlenowDNA聚合酶是E.coliDNApolymerase經(jīng)蛋白酶（枯草桿菌蛋白酶）裂解而從全酶中除去5'—3'外切活性的多肽大片段，而聚合活性和3'—5'外切活性不受影響。選擇題問題：限制酶的命名遵循一定的原則，涉及來源（宿主），菌株或生物型。命名時(shí)（）參考答案：A屬名第一字母，種名頭兩個(gè)字母，菌株號(hào)，然后再加上序號(hào)（羅馬字）點(diǎn)評(píng)：限制酶的命名遵循一定的原則，涉及來源（宿主），菌株或生物型。命名時(shí)，依次取屬名第一字母，種名頭兩個(gè)字母，菌株號(hào)，然后再加上序號(hào)（羅馬字）選擇題問題：以下對(duì)同裂酶的描述中，哪一項(xiàng)是正確的（）參考答案：A識(shí)別相同序列的限制酶稱同裂酶點(diǎn)評(píng)：識(shí)別相同序列的限制酶稱同裂酶，但它們的切割位點(diǎn)可能不同。具體可分為：同裂同切酶、同序異切酶、“同功多位”等選擇題問題：下列DNA聚合酶中，哪一種酶只切割雙鏈DNA中的一條鏈，產(chǎn)生單鏈切口，即切口酶（）參考答案：ADnasel點(diǎn)評(píng)：在Mg2+存在下，獨(dú)立作用于每條DNA鏈，且切割位點(diǎn)隨機(jī)。在Mn2+存在下，它可在兩條鏈的大致同一位置切割dsDNA，產(chǎn)生平端或1?2個(gè)核苷酸突出的DNA片段；KlenowDNA聚合酶是E.coliDNApolymerase經(jīng)蛋白酶（枯草桿菌蛋白酶）裂解而從全酶中除去5'—3'外切活性的多肽大片段，而聚合活性和3'--5'外切活性不受影響；T4噬菌體DNA聚合酶與KlenowDNA聚合酶相似，但3'—5'外切活性強(qiáng)200倍，且不從單鏈DNA模板上替換引物；T7噬菌體DNA聚合酶的活性功能與T4噬菌體DNA聚合酶和KlenowDNA聚合酶類似，但3'--5'外切活性為Klenow的1000倍。選擇題問題：BAP與CIAP的區(qū)別在于（）參考答案：BCIAP68°C時(shí)失活，而BAP68°C穩(wěn)定點(diǎn)評(píng)：CIAP來源于牛小腸堿性磷酸酶，而BAP來自細(xì)菌的堿性磷酸酶。BAP抗性強(qiáng)、抗高溫和去除污劑。CIAP可用蛋白酶K消化滅活，或在5mMEDTA下。65C或75C處理10分鐘，然后用酚、氯仿抽提，純化去磷酸化的DNA，從而除去CIAP的活性。選擇題問題：下列哪一種酶作用時(shí)需要引物（）參考答案：B反轉(zhuǎn)錄酶點(diǎn)評(píng)：其它三種酶均只需要DNA鏈即可選擇題問題：CIAP催化脫磷酸時(shí)有兩種最適溫度，37C和56C，二種溫度分別適用于（）端脫磷酸參考答案：A5'突出端；平末端和突出的3'端點(diǎn)評(píng)：3'端突出時(shí)，磷酸基團(tuán)是內(nèi)陷的，需要激烈一點(diǎn)的反應(yīng)條件。選擇題問題：關(guān)于宿主控制的限制修飾現(xiàn)象的本質(zhì)，下述描述中只有（）不恰當(dāng)參考答案：D這一系統(tǒng)的核酸酶都是II類限制性內(nèi)切核酸酶點(diǎn)評(píng)：根據(jù)酶的亞單位組成、識(shí)別序列的種類和是否需要輔助因子，限制與修飾系統(tǒng)至少可分為四類：11型、IIs型、I型、III型選擇題問題：限制性內(nèi)切核酸酶可以特異性地識(shí)別（）參考答案：C雙鏈DNA的特定堿基序列點(diǎn)評(píng)：了解限制性內(nèi)切酶的識(shí)別序列。選擇題問題：以下為同尾酶的是（）參考答案：BBamHl,Sau3AI,StyI點(diǎn)評(píng)：所謂同尾酶即他們可以產(chǎn)生相同的粘性突出末端。其中B選項(xiàng)中BamHl識(shí)別位點(diǎn)為GlGATCC，Sau3AI識(shí)別位點(diǎn)為|GATC，StyI識(shí)別位點(diǎn)為CCJWWGG°（W=AorT）選擇題問題：在長模板鏈的指導(dǎo)下引物延伸合成長的DNA互補(bǔ)鏈時(shí)應(yīng)選用（）參考答案：BT7DNA聚合酶您的答案：點(diǎn)評(píng)：T7DNA聚合酶是所有DNA聚合酶中持續(xù)合成能力最強(qiáng)的一個(gè)選擇題問題：在大腸桿菌中，大多數(shù)都有三個(gè)位點(diǎn)特異性的DNA甲基化酶，以下選項(xiàng)中哪一種酶不包括在內(nèi)（）參考答案：DSssl點(diǎn)評(píng)：SssI甲基化酶來自原核生物Spiroplasma選擇題問題：在大腸桿菌中，至少有3種依賴于甲基化的限制系統(tǒng)，以下選項(xiàng)中不屬于這3種的為（）參考答案：CmcrD點(diǎn)評(píng)：無mcrD選擇題問題：以下幾種核酸酶中，不能用于嵌套缺失的為（）參考答案：BS1核酸酶點(diǎn)評(píng)：S1核酸酶可降解單鏈DNA或RNA，酶濃度大時(shí)可完全消化雙鏈，中等濃度可在切口或小缺口處切割雙鏈。選擇題問題：下面有關(guān)限制酶的敘述哪個(gè)是錯(cuò)誤的（）參考答案：A限制酶是外切酶而不是內(nèi)切酶點(diǎn)評(píng)：了解限制性內(nèi)切酶的特性。選擇題問題：在下列酶中，催化反應(yīng)不需要ATP的是（）參考答案：DBamHl點(diǎn)評(píng)：I型和III型限制性內(nèi)切酶在發(fā)生限制作用時(shí)需要ATP，II型則不需要，而BamHl為II型限制性內(nèi)切酶，在催化反應(yīng)時(shí)不需要ATP選擇題問題：DNA連接酶在體內(nèi)的主要作用是在DNA復(fù)制、修復(fù)中封閉缺口，下列對(duì)DNA連接酶的描述中，那項(xiàng)是正確的（）參考答案：A將雙鏈DNA分子中的5'磷酸基團(tuán)同3'—OH末端重新形成磷酸二酯鍵點(diǎn)評(píng)：了解DNA連接酶的特性。選擇題問題：下列酶中，除（）外都具有磷酸酶的活性參考答案：ABamHl點(diǎn)評(píng)：磷酸酶活性包括磷酸化活性和去磷酸化活性。您做對(duì)了0個(gè)簡(jiǎn)答題問題：簡(jiǎn)述限制性內(nèi)切核酸酶（Restrictionendonuclease）的概念及其生物學(xué)功能？參考答案：定義：指識(shí)別DNA的特異序列，并在識(shí)別位點(diǎn)或其周圍切割雙鏈DNA的一類內(nèi)切酶。生物學(xué)功能：保護(hù)宿主不受外來DNA分子的感染，可降解外來的DNA分子，從而阻止其復(fù)制和整合到細(xì)胞中。簡(jiǎn)答題問題：PCR引物設(shè)計(jì)引入酶切位點(diǎn)時(shí)，為什么需在酶切位點(diǎn)后加上一些堿基？參考答案：限制酶切割DNA時(shí)對(duì)識(shí)別序列兩端的非識(shí)別序列有長度要求，也就是說在識(shí)別序列兩端必須要有一定數(shù)量的核苷酸，否則限制酶將難以發(fā)揮切割活性。因此，一般需在設(shè)計(jì)引物時(shí)在限制酶切位點(diǎn)外另加3?4個(gè)堿基。簡(jiǎn)答題問題：試回答影響限制性內(nèi)切核酸酶（Restrictionendonuclease）切割效率的因素？參考答案：外因：反應(yīng)條件、底物純度、反應(yīng)溫度和限制性內(nèi)切酶本身的活性；內(nèi)因：位點(diǎn)偏愛性；甲基化；底物的構(gòu)象。簡(jiǎn)答題問題：在酶切緩沖液中，一般需加入BSA，請(qǐng)問加入BSA的作用是什么？并簡(jiǎn)述其原理？參考答案：作用是提供一定的蛋白質(zhì)濃度，起保護(hù)限制性內(nèi)切酶的作用。限制性內(nèi)切酶在稀釋液中會(huì)迅速變性，BSA是一種很好的可加入酶反應(yīng)液中的中性蛋白質(zhì)。簡(jiǎn)答題問題：何謂Staractivity？簡(jiǎn)述Staractivity的影響因素及克服方法？參考答案：在極端非標(biāo)準(zhǔn)條件下，限制酶能切割與識(shí)別序列相似的序列，這個(gè)改變的特征稱為星星活性。引起星星活性的的因素：①高甘油濃度（＞5%）；②酶過量（＞100U/ml）；③低離子強(qiáng)度（＜25mM）；④高pH（＞8.0）；⑤有機(jī)溶劑如PMSD（二甲基亞颯）、乙醇、乙二醇、二甲基乙酰胺（dimethylacetamide）、二甲基甲酰胺（dimethylformamide）和sulphalane等；⑥用其它二價(jià)陽離子Mn2+、Cu2+、Co2+或Zn2+代替Mg2+。星星活性的抑制措施：①減少酶的用量，避免過量酶切，減少甘油濃度；②保證反應(yīng)體系中無有機(jī)溶劑或乙醇；③提高離子強(qiáng)度到100?150mM（在不抑制酶活性的前提下）；④降低反應(yīng)pH至7.0；⑤使用Mg2+作為二價(jià)陽離子。簡(jiǎn)答題問題：某DNA序列中存在DpnI酶切位點(diǎn)，以此DNA為模板，在體外合成DNA序列，當(dāng)用該酶進(jìn)行酶切時(shí)，發(fā)現(xiàn)切割不動(dòng)，試分析可能原因？參考答案：生物體內(nèi)的DNA序列可能是經(jīng)過甲基化修飾的，而在體外合成時(shí)，缺乏這種修飾作用。當(dāng)用依賴于甲基化的限制酶DpnI來切割非甲基化的序列時(shí)，就會(huì)出現(xiàn)不能切割的情況。簡(jiǎn)答題問題：天然的質(zhì)粒載體（plasmidvectors）通常需經(jīng)改造后才能應(yīng)用，包括去除不必要的片段，引入多克隆位點(diǎn)等。試問在此過程中如何增減酶切位點(diǎn)？參考答案：在酶切水平上，通過酶切和連接產(chǎn)生新的酶切位點(diǎn)。①將產(chǎn)生的5'突出端補(bǔ)平后，再連接以產(chǎn)生新的酶切位點(diǎn)；②同尾末端的連接，不同的同尾酶切割DNA產(chǎn)生的末端，再相互連接時(shí)，可產(chǎn)生新的酶切位點(diǎn)，同時(shí)原來的酶切位點(diǎn)卻消失；③平末端的連接簡(jiǎn)答題問題：雙脫氧終止法測(cè)定DNA序列的片段一般不能太長，如何運(yùn)用本章所學(xué)知識(shí)測(cè)定較長片段的DNA序列？參考答案：①將所需要測(cè)序的DNA片斷采用2種不同的限制性內(nèi)切酶切割，產(chǎn)生不同的酶切片段，將此酶切片段連接到載體上，測(cè)序后，拼接，即可得到全長的DNA序列；②用一種限制性內(nèi)切酶進(jìn)行部分酶切，酶切產(chǎn)物與載體連接后，測(cè)序，拼接，即可得到全長DNA片斷。采用以上任一方法均可，需要注意的是，在進(jìn)行部分酶切時(shí)，應(yīng)該控制好條件，要確保所得到的酶切片斷能覆蓋所需測(cè)序的DNA片斷。您的答案：簡(jiǎn)答題問題：大腸桿菌DNA聚合酶I，具有3'--5’外切活性和5'—3'的聚合酶活性以及5'—3'的外切活性，試根據(jù)此推測(cè)該聚合酶可能具有哪些用途？參考答案：①利用E.coliDNA聚合酶的5'--3'外切核酸酶活性，可用切口平移法標(biāo)記DNA，所有DNA聚合酶中只有此酶有此反應(yīng)；②用于cDNA克隆中的第二鏈，即單純的DNA聚合活性；③對(duì)3'突出端的DNA作末端標(biāo)記（交換或置換反應(yīng)）。簡(jiǎn)答題問題：用T4phageDNApolymerase可進(jìn)行末端標(biāo)記，試簡(jiǎn)述其原理？參考答案：T4phageDNA聚合酶具有3'—5'外切活性和5'—3'的聚合酶活性，3'—5'的外切活性可以被5'—3'的聚合活性所封閉，首先在反應(yīng)體系中加入一種dNTP，產(chǎn)生3'凹端，然后加入經(jīng)過標(biāo)記的dNTP，利用T4phageDNA聚合酶的聚合活性補(bǔ)平3'凹端，即可得到標(biāo)記了末端的DNA片斷。簡(jiǎn)答題問題：BAP和CIAP有何作用？為何一般采用CIAP而不采用BAP?參考答案：作用：催化除去DNA或RNA5'磷酸。BAP抗性強(qiáng)，抗高溫和去污劑。CIAP可用蛋白酶K消化滅活，或在5mMEDTA下，65°C處理或75°C處理10分鐘，然后用酚氯仿抽提，純化去磷酸化的DNA，從而去除CIAP的活性。相比之下，CIAP比BAP更易去除，因此，一般采用CIAP。簡(jiǎn)答題問題：依賴于DNA的RNA聚合酶包括SP6噬菌體RNA聚合酶和T4或T7噬菌體RNA聚合酶，這類聚合酶可用于表達(dá)外源基因，闡述常用的構(gòu)建策略？參考答案：①將T7RNA聚合酶基因置于E.colilacUV5啟動(dòng)子之下，插入到入噬菌體中，感染E.coli，建立穩(wěn)定的溶源菌。E.coliBL21（DE3）菌株即為將lacUV5啟動(dòng)子和T7聚合酶基因置于入噬菌體DE3區(qū)，該入噬菌體DNA整合于染色體的BL21處。若將T7噬菌體啟動(dòng)子控制的目的基因經(jīng)質(zhì)粒載體導(dǎo)入該宿主菌中，在IPTG誘導(dǎo)下，可啟動(dòng)外源基因的表達(dá)；②先導(dǎo)入帶T7噬菌體啟動(dòng)子控制的目的基因的質(zhì)粒，再用入噬菌體（帶T7RNA聚合酶基因）感染E.coli，激活目的基因的表達(dá)。簡(jiǎn)答題問題：簡(jiǎn)述T4多核苷酸激酶的活性和用途？參考答案：T4多核苷酸激酶的活性催化ATP的丫一磷酸基轉(zhuǎn)移到DNA或RNA的5'末端?？杀憩F(xiàn)為兩種反應(yīng)，正反應(yīng)指ATP的丫一磷酸基被轉(zhuǎn)移到去磷酸化的DNA5'端，用于對(duì)缺乏5'-磷酸的DNA進(jìn)行磷酸化。在交換反應(yīng)中，過量的ATP可使該激酶將磷酸化的5'端磷酸轉(zhuǎn)移給ADP，然后DNA從【丫一32P】ATP中獲得放射性標(biāo)記的Y—磷酸而重新磷酸化，因此可用于DNA的末端標(biāo)記。用途：該酶主要用于對(duì)缺乏5'-磷酸的DNA或合成接頭進(jìn)行磷酸化，同時(shí)可對(duì)末端進(jìn)行標(biāo)記。通過交換反應(yīng)，用于標(biāo)記5'末端，以供Maxam-Gilbert法測(cè)序、S1核酸酶分析以及其它須使用末端標(biāo)記DNA的步驟。您的答案：思考題問題：限制性內(nèi)切酶可劃分為哪幾個(gè)類型，各自有何特點(diǎn)？思考題問題：哪些酶可用于DNA片段的末端標(biāo)記？思考題問題：DNA聚合酶有哪些類型，各有什么活性？思考題問題：在分子克隆中所用的酶主要作用于哪些底物？第三章名詞解釋問題：Vehicle參考答案：載體。將外源DNA或基因攜帶入宿主細(xì)胞（hostcell）的工具稱為載體。具備以下三個(gè)必須元件：復(fù)制原點(diǎn)、多克隆位點(diǎn)和篩選標(biāo)記。名詞解釋問題：Geneclone參考答案：基因克隆。克隆作動(dòng)詞時(shí)，指從單一祖先產(chǎn)生同一的DNA分子群體或細(xì)胞群體的過程；作名詞時(shí)指從一個(gè)共同祖先無性繁殖下來的一群遺傳上同一的DNA分子、細(xì)胞或個(gè)體所組成的特殊的生命群體。利用重組DNA技術(shù)分離目的基因，稱之為基因克隆。名詞解釋問題：Genelibrary參考答案：基因文庫。由大量的含有基因組DNA（即某一生物的全部DNA順序）的不同DNA片段的克隆所構(gòu)成的群體，稱之為基因文庫。名詞解釋問題：Plasmidincompatibility參考答案：質(zhì)粒不相容性。利用同一復(fù)制系統(tǒng)的兩個(gè)質(zhì)粒在同一宿主中不能共存的現(xiàn)象稱質(zhì)粒的不相容性，它是指在第二個(gè)質(zhì)粒導(dǎo)入后，在不涉及DNA限制系統(tǒng)時(shí)出現(xiàn)的現(xiàn)象。名詞解釋問題：a-complementation參考答案：a-互補(bǔ)。指lacZ基因上缺失近操縱基因區(qū)段的突變體與帶有完整的近操縱基因區(qū)段的a-半乳糖苷酶陰性的突變體之間實(shí)現(xiàn)的互補(bǔ)。這兩個(gè)無酶學(xué)活性的產(chǎn)物混合在一起時(shí)，可恢復(fù)a-半乳糖苷酶的活性。名詞解釋問題：X-gal/IPTG參考答案：兩者都是乳糖的衍生物，X-gal：乳糖操縱子底物，可以作為生色劑，被a-半乳糖苷酶分解后可產(chǎn)生蘭色產(chǎn)物，可使菌落呈現(xiàn)蘭色；IPTG:乳糖操縱子誘導(dǎo)物。名詞解釋問題：lyticgrowth參考答案：裂解生長狀態(tài)。噬菌體侵染宿主細(xì)胞后，大量復(fù)制并組裝成子代噬菌體顆粒，導(dǎo)致宿主細(xì)胞裂解的現(xiàn)象稱裂解生長狀態(tài)。名詞解釋問題：lysogenicstate參考答案：溶源狀態(tài)。噬菌體侵染宿主細(xì)胞后，將A噬菌體基因組DNA通過位點(diǎn)專一性重組整合到宿主的染色體DNA中，并隨宿主的繁殖傳給子代細(xì)胞的現(xiàn)象稱溶源狀態(tài)。名詞解釋問題：Multiplicityofinfection參考答案：感染復(fù)數(shù)。指單個(gè)宿主細(xì)胞感染的噬菌體顆粒數(shù)，等于實(shí)驗(yàn)所用的噬菌體與細(xì)胞的數(shù)量之比。名詞解釋問題：Insertionvectors參考答案：插入型載體。通過特定的酶切位點(diǎn)允許外源DNA片段插入的載體稱為插入型載體。名詞解釋問題：Replacementvectors參考答案：置換型載體。而允許外源DNA片段替換載體的非必須DNA片段的載體，稱為置換型載體。名詞解釋問題：Cosmid參考答案：粘粒。帶有將DNA包裝到噬菌體顆粒中所需的cos序列的質(zhì)粒。包括質(zhì)粒復(fù)制起點(diǎn)，可以象質(zhì)粒一樣轉(zhuǎn)化并增殖；包括cos位點(diǎn)，可以象噬菌體顆粒一樣包裝、侵染。名詞解釋問題：ReplicativeformDNA參考答案：復(fù)制型DNA。在宿主細(xì)胞內(nèi)，感染性的單鏈?zhǔn)删wDNA（正鏈）在宿主酶的作用下轉(zhuǎn)變成環(huán)狀雙鏈DNA，用于DNA的復(fù)制，這種雙鏈DNA稱為復(fù)制型DNA。名詞解釋問題：Phagemid參考答案：噬菌粒。具有ColE1復(fù)制起點(diǎn)及單拷貝的絲狀體噬菌體主要基因間隔區(qū)的質(zhì)粒載體。此基因間隔區(qū)含病毒DNA合成的起始與終止及噬菌體顆粒形態(tài)發(fā)生所必須的全部順式作用序列。含phagemid的細(xì)菌被噬菌體感染后，基因II蛋白作用于間隔區(qū)，啟動(dòng)滾環(huán)復(fù)制產(chǎn)生ssDNA并進(jìn)行包裝。您的答案：名詞解釋問題：M13K07helpphage參考答案：M13KO7輔助噬菌體。M13單鏈絲狀噬菌體的衍生株，基因II帶有一個(gè)G--T的突變。M13KO7基因組雙鏈DNA可表達(dá)產(chǎn)生子代單鏈DNA所必需的所有蛋白。M13K07中突變的基因II產(chǎn)物與自身攜帶的噬菌體復(fù)制起點(diǎn)的作用尚不如它與克隆于噬菌粒pUCll8和pUCll9中的病毒復(fù)制起點(diǎn)的作用有效，可以確保在細(xì)胞所產(chǎn)生的病毒顆粒中來自噬菌粒的單鏈DNA能夠占據(jù)優(yōu)勢(shì)。名詞解釋問題：Yeastartificialchromosomes參考答案：酵母人工染色體載體。利用釀酒酵母（Saccharomycescerevisiae）染色體的復(fù)制元件來驅(qū)動(dòng)外源DNA片段復(fù)制的載體稱為酵母人工染色體載體。由自主復(fù)制序列、著絲粒、復(fù)制子及選擇標(biāo)記等元件組成。名詞解釋問題：Bacterialartificialchromosomes參考答案：細(xì)菌人工染色體。是基于大腸桿菌的F質(zhì)粒構(gòu)建的高通量低拷貝質(zhì)粒載體。包括嚴(yán)謹(jǐn)型控制的復(fù)制區(qū)oriS、啟動(dòng)DNA復(fù)制的由ATP驅(qū)動(dòng)的解旋酶（（RepE），以及三個(gè)確保低拷貝并使質(zhì)粒精確分配至子代細(xì)胞的基因座（parA,parB和parC）等元件）。名詞解釋問題：P1artificialchromosomes參考答案：P1人工染色體載體。結(jié)合了P1載體和BAC載體的特性，是P1噬菌體載體的改進(jìn)載體。重組分子不能通過體外包裝來感染宿主細(xì)胞，而只能通過電轉(zhuǎn)化來將重組分子導(dǎo)入宿主細(xì)胞。名詞解釋問題：Shuttlevector參考答案：穿梭載體。能夠在兩類不同的宿主中復(fù)制、增殖和選擇的載體稱為穿梭載體。填空題問題：載體（Vehicle）的類型有（），（），（），（）等。參考答案：質(zhì)粒載體；噬菌體載體；粘粒載體；噬菌粒載體填空題問題：Genecloning是指（），基因文庫（Genelibrary）是指（）。參考答案：利用重組DNA技術(shù)分離目的基因；由大量的含有基因DNA（即某一生物的全部DNA順序）的不同DNA片段的克隆所構(gòu)成的群體填空題問題：Plasmid的定義是（），Plasmid能進(jìn)行自我復(fù)制，大多數(shù)為（）鏈（）狀DNA分子，大小一般為（）kb。參考答案：染色體外的遺傳因子；雙；閉環(huán)；1?200您的答案：填空題問題：（）即為質(zhì)粒的拷貝數(shù)，按照質(zhì)?？截悢?shù)的多少，質(zhì)?？梢苑譃椋ǎ┖停ǎǎ┵|(zhì)粒多數(shù)是一些具有轉(zhuǎn)移能力的大質(zhì)粒；（）質(zhì)粒多數(shù)是一些不具有轉(zhuǎn)移能力的小質(zhì)粒。參考答案：?jiǎn)蝹€(gè)細(xì)胞中所含有的質(zhì)粒DNA分子數(shù)目；嚴(yán)謹(jǐn)型；松弛型；嚴(yán)謹(jǐn)型；松弛型填空題問題：松弛型質(zhì)粒和嚴(yán)謹(jǐn)型質(zhì)粒融合以后，雜合質(zhì)粒一般優(yōu)先使用（）的復(fù)制子。參考答案：松弛型參考答案：兩個(gè)質(zhì)粒在同一宿主中不能共存的現(xiàn)象；相同填空題問題：質(zhì)粒具有轉(zhuǎn)移性，它是指（），它需要（），（）和（）參考答案：在自然條件下，很多質(zhì)?？梢酝ㄟ^稱為細(xì)菌接合的作用轉(zhuǎn)移到新宿主內(nèi)；移動(dòng)基因mob；轉(zhuǎn)移基因tra；轉(zhuǎn)移起始位點(diǎn)填空題問題：根據(jù)質(zhì)粒的轉(zhuǎn)移性可以將質(zhì)粒分為（）和（），一般大質(zhì)粒都是（），（）一般都是小質(zhì)粒，其上沒有（）參考答案：接合型質(zhì)粒；非接合型質(zhì)粒；接合型質(zhì)粒；非接合型質(zhì)粒；編碼其DNA轉(zhuǎn)移的基因填空題問題：按其用途可將標(biāo)記基因分為選擇標(biāo)記和篩選標(biāo)記，選擇標(biāo)記一般用于（），篩選標(biāo)記一般用于（）參考答案：鑒別目的DNA（載體）的存在；將特殊表型的重組子挑選出來填空題問題：常用的用來鑒定重組質(zhì)粒的細(xì)菌菌落的方法有（），（），（）等。參考答案：a—互補(bǔ)；插入失活；原位雜交填空題問題：PBR322質(zhì)粒是基因工程最重要的人工質(zhì)粒之一，它的大小約為（）kb，用于其組建的三個(gè)親本質(zhì)粒是（），（），和（）。此質(zhì)粒具有一個(gè)colEl松弛型質(zhì)粒復(fù)制子，兩個(gè)篩選標(biāo)記氨芐青霉素抗性基因和四環(huán)素抗性基因，其中colEl松弛型質(zhì)粒復(fù)制子來源于（），氨芐青霉素抗性基因來源于（），四環(huán)素抗性基因來源于（）參考答案：4.3；pM131；pSC101；pSF2124；pM131；pSF2124；pSClOl填空題問題：pUC系列的質(zhì)粒載體是由（）和（）兩種質(zhì)粒構(gòu)建而來的，其中氨芐青霉素抗性基因來自于（），多克隆位點(diǎn)MCS來自于（）。pUC系列的質(zhì)粒載體一般是成對(duì)存在的如PUC18和pUC19，其主要區(qū)別是（）。參考答案：pBR322；M13mp18/19；pBR322；M13mp18/19；MCS方向不同填空題問題：質(zhì)粒載體的附加功能要素主要有（），（），（）等。參考答案：a—互補(bǔ)；ssDNAphageorigin，promotor填空題問題：入噬菌體Genome的長度約為（）kb，其DNA分子為（）（填單或雙）鏈。它的DNA分子既可以以（）狀存在也可以以環(huán)狀存在，而且可以自然成環(huán)，其原因是在入噬菌體的線性分子的兩端各有一個(gè)長度為（）個(gè)堿基的天然粘性末端，這種粘性末端可以自然成環(huán)，成環(huán)后的粘性末端就叫做（）。參考答案：50；雙；線；12；cos位點(diǎn)填空題問題：入噬菌體在感染大腸桿菌以后，可以進(jìn)入Lyticgrowth也可以進(jìn)入Lysogenicstate。如果其基因組DNA通過專一性重組整合到宿主染色體中，則其進(jìn)入（）；它也可以選擇進(jìn)入（），大量復(fù)制并組裝子代噬菌體顆粒。參考答案：Lysogenicstate；Lyticgrowth填空題問題：在入噬菌體載體中，常用的選擇標(biāo)記有（），cI基因失活，和（）等。參考答案：LacZ；spi篩選填空題問題：改造后的入噬菌體才可用作載體，按照改造方式的不同可將其分為兩種類型，即插入型載體（insertionvectors）和替代型載體（replacementvectors）。其中Insertionvectors是指（）；Replacementvectors是指（）參考答案：通過特定的酶切位點(diǎn)允許外源DNA片斷插入的載體；允許外源DNA片斷替換載體的非必須DNA片斷的載體填空題問題：入gt10是一個(gè)由入噬菌體衍生而來的insertionvectors，主要用于（）。它缺失了含有溶源整合的（）；入gt11載體也是一種insertionvectors，該載體的最大特點(diǎn)是在最左側(cè)可替代區(qū)置換了一段（）基因，可編碼&-半乳糖苷酶，在IPTG/X-gal平板上可形成（）色噬菌斑。參考答案：克隆小的cDNA；b257；lacZ；藍(lán)填空題問題：入噬菌體由于受到包裝的限制，插入外源DNA片段后，其總的DNA長度應(yīng)該在噬菌體genome的（）范圍內(nèi)。參考答案：78%?105%填空題問題：Cosmid實(shí)際上是由（）和（）構(gòu)成的雜合載體，也可以說是帶有（）序列的質(zhì)粒。參考答案：cos位點(diǎn)；質(zhì)粒；cos填空題問題：染色體步查指（）。參考答案：采用一段分離自某一重組體一端的非重復(fù)DNA片段作為探針以鑒定含有相鄰序列的重組克隆。填空題問題：Cosmid的組成包括三個(gè)部分：（），（）和（），其中復(fù)制子來源于（），cos序列來源于（）。參考答案：質(zhì)粒復(fù)制起點(diǎn)；cos位點(diǎn)；抗性標(biāo)記；質(zhì)粒；噬菌體您的答案：填空題問題：入噬菌體的最大克隆片段是（）kb，Cosmid的最大克隆片段可達(dá)到（）kb。參考答案：23；45填空題問題：利用入噬菌體載體構(gòu)建的genelibrary中，文庫是以（）的形式存在的；用質(zhì)粒載體構(gòu)建的genelibrary是以（）的形式存在的；粘粒載體構(gòu)建的genelibrary是以（）的形式存在的。參考答案：噬菌斑；菌落；菌落填空題問題：M13噬菌體顆粒是（）狀的，其基因組為（）（填單或雙）鏈DNA。它只感染（）性大腸桿菌，感染宿主以后，其噬菌體顆粒的釋放不像入噬菌體那樣要裂解宿主菌，而是（）。參考答案：絲；單；雄；從感染的細(xì)胞中分泌出噬菌體顆粒填空題問題：M13噬菌體僅有兩個(gè)大的基因間隔區(qū)，分別位于（）與（）之間以及（）和（）之間，這些基因間隔區(qū)內(nèi)含有（）的元件。其中，）稱為IG區(qū)，它有三個(gè)最重要的功能即（），（）和（）。參考答案：例；III；II；IV；調(diào)節(jié)基因表達(dá)和DNA合成；GeneII和GenelV之間的間隔區(qū)；含有可對(duì)包裝及DNA在病毒顆粒中的定向進(jìn)行調(diào)控的順式作用因子；正鏈與負(fù)鏈DNA合成起始和終止位點(diǎn)；不依賴與p因子的轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)填空題問題：RFDNA是指（）。參考答案：復(fù)制型DNA，感染性的單鏈?zhǔn)删wDNA（正鏈）在宿主酶的作用下轉(zhuǎn)變成環(huán)狀雙鏈DNA，用于DNA的復(fù)制。填空題問題：M13K07輔助噬菌體是（）的衍生株，它帶有一個(gè)來自（）的復(fù)制起點(diǎn)，還帶有一個(gè)來自（）的卡那霉素抗性基因，用作選擇標(biāo)記；基因II帶有一個(gè)（）的突變，導(dǎo)致基因蛋白質(zhì)第40位氨基酸由甲硫氨酸變?yōu)楫惲涟彼?。參考答案：M13phage；p15A；Tn903；G-T填空題問題：YAC載體基本組成元件有（），（），（），（）和（）。參考答案：復(fù)制起點(diǎn)；著絲粒；端粒；MCS；篩選標(biāo)記填空題問題：表達(dá)載體（Expressvector）是在常規(guī)載體的基礎(chǔ)上衍生而來的，其構(gòu)建的原理主要是增加一個(gè)（），以及有利于表達(dá)產(chǎn)物的分泌、分離或純化的元件；穿梭載體（Shuttlevector）是指（）參考答案：表達(dá)元件；能夠在兩類不同宿主中復(fù)制、增殖和選擇的載體選擇題問題：氨芐青霉素的工作原理為（）參考答案：A可以抑制細(xì)胞壁肽聚糖的合成點(diǎn)評(píng)：B、D為四環(huán)素的工作原理；C為氯霉素的工作原理選擇題問題：PUC18與pUC19的區(qū)別在于（）參考答案：B二者的多克隆位點(diǎn)方向相反點(diǎn)評(píng)：系列載體的區(qū)別一般不大，主要是克隆方向或讀碼框等方面的差別。選擇題問題：載體所具備的特點(diǎn)中，以下描述不恰當(dāng)?shù)氖牵ǎ﹨⒖即鸢福篋必須具有較高的拷貝數(shù)，便于制備點(diǎn)評(píng)：對(duì)于那些有劑量限制的基因克隆需要使用低拷貝的質(zhì)粒載體選擇題問題：復(fù)制子由三部分組成，以下不屬于的為（）參考答案：D啟動(dòng)子點(diǎn)評(píng)：了解質(zhì)粒的生物學(xué)性質(zhì)。選擇題問題：pBluescriptM13載體在多克隆位點(diǎn)的兩側(cè)引入了T7和T3兩個(gè)噬菌體的啟動(dòng)子，這樣增加了該載體的功能，以下4種功能哪一種是不正確的（）參考答案：D利用這兩個(gè)啟動(dòng)子進(jìn)行定點(diǎn)突變點(diǎn)評(píng)：了解pBluescriptM13載體的工作原理及特性。選擇題問題：以粘粒為載體轉(zhuǎn)染受體菌后，平板上生長的菌落會(huì)出現(xiàn)大小不一、生長速度不一的現(xiàn)象，其原因是（）參考答案：D重組體中插入片段的大小不同點(diǎn)評(píng)：插入片段本身的復(fù)制以及插入片段在宿主菌中的表達(dá)產(chǎn)物都會(huì)影響宿主的生長。選擇題問題：噬菌粒是由質(zhì)粒和噬菌體DNA共同構(gòu)成的，其中來自質(zhì)粒的主要結(jié)構(gòu)是（），而來自噬菌體的主要結(jié)構(gòu)是（）參考答案：A，A重組體中插入片段的大小不同點(diǎn)評(píng)：了解噬菌粒的生物學(xué)特性。選擇題問題：野生型的M13有10個(gè)基因，分為三個(gè)功能基團(tuán)，其中與復(fù)制有關(guān)的兩個(gè)基因是（）參考答案：A基因II；基因V點(diǎn)評(píng)：熟悉M13噬菌體的遺傳學(xué)性質(zhì)。選擇題問題：M13單鏈?zhǔn)删w的復(fù)制分為三個(gè)階段，以下哪一項(xiàng)不屬于此（）參考答案：DSS-SS點(diǎn)評(píng)：RFDNA特指M13單鏈?zhǔn)删w復(fù)制型雙鏈DNA選擇題問題：入噬菌體DNA和M13單鏈?zhǔn)删wDNA在成熟前的DNA復(fù)制類型為（）參考答案：A滾環(huán)復(fù)制模型點(diǎn)評(píng)：入噬菌體DNA和M13單鏈?zhǔn)删w侵染宿主后，都是先0復(fù)制模型，后轉(zhuǎn)為滾環(huán)復(fù)制模型。選擇題問題：以下對(duì)PUC18的描述中，錯(cuò)誤的為（）參考答案：C可以在輔助質(zhì)粒的幫助下合成單鏈DNA點(diǎn)評(píng)：pUC18沒有IG區(qū)，不可能形成單鏈。選擇題問題：以下對(duì)粘粒為載體的重組體的描述正確的是（）參考答案：B各重組體在平板上生長的速度不同，轉(zhuǎn)化子中插入片段的擴(kuò)增量也是不同的點(diǎn)評(píng)：理解粘粒載體的工作原理。選擇題問題：下列哪種克隆載體對(duì)外源DNA的裝載量最大（）參考答案：B酵母人工染色體（YAC點(diǎn)評(píng)：人工染色體包括YAC、BAC、PAC等，其特點(diǎn)是可以裝載大的（100kb以上）外源DNA片段。選擇題問題：同一種質(zhì)粒DNA，以三種不同的形式存在，電泳時(shí)，它們的遷移速率是（）參考答案：BSCDNA>LDNA>OCDNA點(diǎn)評(píng)：DNA分子結(jié)構(gòu)越緊湊，泳動(dòng)時(shí)受到的阻力越小，遷移速率越大。選擇題問題：關(guān)于穿梭質(zhì)粒載體，下面哪一種說法最正確（）參考答案：A在不同的宿主細(xì)胞中使用不同的復(fù)制起點(diǎn)點(diǎn)評(píng)：能夠在兩類不同的宿主中復(fù)制、增殖和選擇的載體稱為穿梭載體。選擇題問題：反向重復(fù)序列：（）參考答案：C可以回折形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)點(diǎn)評(píng)：理解什么是反向重復(fù)序列。選擇題問題：入噬菌體線性DNA分子的兩端各有一個(gè)（）個(gè)堿基組成的天然黏性末端參考答案：B12點(diǎn)評(píng)：入噬菌體線性DNA分子的兩端各有一個(gè)12個(gè)堿基組成的天然粘性末端，稱為cos位點(diǎn)。選擇題問題：下列關(guān)于細(xì)菌人工染色體（BAC）的特點(diǎn)描述，除（）以外都是正確的參考答案：BBAC載體在大腸桿菌中為高拷貝點(diǎn)評(píng):細(xì)菌人工染色體。是基于大腸桿菌的F質(zhì)粒構(gòu)建的高通量低拷貝質(zhì)粒載體。包括嚴(yán)謹(jǐn)型控制的復(fù)制區(qū)oriS、啟動(dòng)DNA復(fù)制的由ATP驅(qū)動(dòng)的解旋酶（RepE），以及三個(gè)確保低拷貝并使質(zhì)粒精確分配至子代細(xì)胞的基因座（parA，parB和parC）等元件。選擇題問題：粘粒（cosmid）是一種人工建造的載體，下列對(duì)它的描述中哪一項(xiàng)是不正確的（）參考答案：D進(jìn)入受體細(xì)胞后，可引起溶源化反應(yīng)點(diǎn)評(píng)：粘粒指帶有將DNA包裝到噬菌體顆粒中所需的cos序列的質(zhì)粒。包括質(zhì)粒復(fù)制起點(diǎn)，可以像質(zhì)粒一樣轉(zhuǎn)化并增殖；包括cos位點(diǎn)，可以像噬菌體顆粒一樣包裝、侵染。選擇題問題：松弛型質(zhì)粒：（）參考答案：A在寄主細(xì)胞中拷貝數(shù)較多點(diǎn)評(píng)：理解松弛型質(zhì)粒的概念。選擇題問題：關(guān)于質(zhì)粒的不相容性，下列哪一種說法正確（）參考答案：C如果兩個(gè)質(zhì)粒不相容，說明它們的復(fù)制機(jī)制相同點(diǎn)評(píng)：利用同一復(fù)制系統(tǒng)的兩個(gè)質(zhì)粒在同一宿主中不能共存的現(xiàn)象稱質(zhì)粒的不相容性，它是指在第二個(gè)質(zhì)粒導(dǎo)入后，在不涉及DNA限制系統(tǒng)時(shí)出現(xiàn)的現(xiàn)象。選擇題問題：一般情況下，質(zhì)粒的存在情況以下描述正確的是（）參考答案：A獨(dú)立存在點(diǎn)評(píng)：質(zhì)粒指細(xì)菌或某些低等生物里面存在的獨(dú)立于染色體外的雙鏈閉合環(huán)狀DNA分子（現(xiàn)在也發(fā)現(xiàn)有線狀的），它經(jīng)常攜帶一些不必需的遺傳信息。選擇題問題：轉(zhuǎn)座子不包括下列哪個(gè)部分（）參考答案：D重復(fù)序列點(diǎn)評(píng)：理解轉(zhuǎn)座子的概念。選擇題問題：下列哪一項(xiàng)不是質(zhì)粒載體必備的基本特征（）參考答案：D含lacZ點(diǎn)評(píng)：lacZ是一種篩選標(biāo)記，能夠使載體使用的更加方便，但不是載體的必需元件。選擇題問題：質(zhì)粒的消失和染色體的突變是不同的，表現(xiàn)在（）參考答案：A前者不能恢復(fù)，后者可以通過回復(fù)突變恢復(fù)該基因的性狀點(diǎn)評(píng)：理解回復(fù)突變。選擇題問題：以下的描述中，哪一項(xiàng)是正確的（）參考答案：C如果細(xì)菌的某種表型特征在UV處理下喪失后不再恢復(fù)，這種表型有可能是質(zhì)粒賦予的點(diǎn)評(píng)：了解質(zhì)粒的生物學(xué)性質(zhì)及質(zhì)粒載體的工作原理。選擇題問題：線性質(zhì)粒復(fù)制的引物來自于（）參考答案：D自身末端的端粒序列點(diǎn)評(píng)：參照染色體的復(fù)制。選擇題問題：下面關(guān)于松弛型質(zhì)粒的性質(zhì)描述中，（）是不正確的參考答案：A通常帶有抗性標(biāo)記點(diǎn)評(píng)：氯霉素可以增加質(zhì)粒的復(fù)制，而不影響染色體的復(fù)制。選擇題問題：ColEl是唯一用作遺傳工程載體的自然質(zhì)粒，以下對(duì)這種質(zhì)粒描述不正確的是（）參考答案：B具有四環(huán)素抗性點(diǎn)評(píng)：ColEl是自然質(zhì)粒，沒有四環(huán)素抗性基因，不能通過抗性篩選選擇題問題：以下不是表達(dá)載體所必須的條件是（）參考答案：C啟動(dòng)子不需要受控制點(diǎn)評(píng)：表達(dá)載體與克隆載體相比就是多了表達(dá)所必須的各種遺傳元件。您做對(duì)了0個(gè)簡(jiǎn)答題問題：何為載體？一個(gè)理想的載體應(yīng)具備那些特點(diǎn)？參考答案：將外源DNA或目的基因攜帶入宿主細(xì)胞的工具稱為載體。載體應(yīng)具備：①在宿主細(xì)胞內(nèi)必須能夠自主復(fù)制（具備復(fù)制原點(diǎn)）；②必須具備合適的酶切位點(diǎn)，供外源DNA片段插入，同時(shí)不影響其復(fù)制；③有一定的選擇標(biāo)記，用于篩選；④其它：有一定的拷貝數(shù)，便于制備。簡(jiǎn)答題問題：含pMBl或（ColEl）復(fù)制子的plasmid是如何復(fù)制的，其調(diào)節(jié)機(jī)制如何？參考答案：復(fù)制方式：在復(fù)制時(shí)，首先合成前RNAII，即前引物，并與DNA形成雜交體；而后RnaseH切割前RNAII，使之成為成熟的RNAII，并形成三葉草二級(jí)結(jié)構(gòu)。該引物引導(dǎo)質(zhì)粒的復(fù)制。調(diào)節(jié)機(jī)制：形成的RNAI可控制RNAII形成二級(jí)結(jié)構(gòu)，同時(shí)Rop增強(qiáng)RNAI的作用，從而控制質(zhì)粒的拷貝數(shù)。削弱RNAI和RNAII之間相互作用的突變，將增加帶有pMB1或（ColE1）復(fù)制子的拷貝數(shù)。簡(jiǎn)答題問題：當(dāng)向細(xì)菌培養(yǎng)基中加入氯霉素時(shí)，可以使細(xì)菌質(zhì)粒的拷貝數(shù)得到擴(kuò)增，試分析其原理？參考答案：PMB1質(zhì)粒的復(fù)制并不需要質(zhì)粒編碼的功能蛋白，而是完全依靠宿主提供的半衰期較長的酶（DNA聚合酶I，DNA聚合酶III），依賴于DNA的RNA聚合酶，以及宿主基因dnaB、dnaC、dnaD和danZ的產(chǎn)物。因此，即使存在抑制蛋白質(zhì)合成并阻斷細(xì)菌染色體復(fù)制的氯霉素或壯觀霉素等抗生素時(shí)，帶有pMB1（或ColE1）復(fù)制子的質(zhì)粒將繼續(xù)復(fù)制，最后每個(gè)細(xì)胞中可積聚2?3千個(gè)質(zhì)粒。簡(jiǎn)答題問題：抗性基因（Resistantgene）是目前使用的最廣泛的選擇標(biāo)記，常用的抗生素抗性有哪幾種？并舉兩例說明其原理？參考答案：氨芐青霉素抗性基因（ampr）、四環(huán)素抗性基因（tetr）、氯霉素抗性基因（Cmr）、卡那霉素和新霉素抗性基因（kanr,neor）以及琥珀突變抑制基因supF。青霉素抑制細(xì)胞壁肽聚糖的合成，與有關(guān)的酶結(jié)合，抑制轉(zhuǎn)肽反應(yīng)并抑制其活性。Ampr編碼一個(gè)酶，可分泌進(jìn)入細(xì)胞的周質(zhì)區(qū)，并催化&-內(nèi)酰胺環(huán)水解，從而解除氨芐青霉素的毒性。四環(huán)素與核糖體30S亞基的一種蛋白質(zhì)結(jié)合，從而抑制核糖體的轉(zhuǎn)位。Tetr編碼一個(gè)由399個(gè)氨基酸組成的膜結(jié)合蛋白，可阻止四環(huán)素進(jìn)入細(xì)胞。簡(jiǎn)答題問題：何為a-complement？如何利用a-complement來篩選插入了外源DNA的重組質(zhì)粒？參考答案：a-complementation指lacZ基因上缺失近操縱基因區(qū)段的突變體與帶有完整的近操縱基因區(qū)段的&-半乳糖苷酶陰性的突變體之間實(shí)現(xiàn)互補(bǔ)。a-complementation是基于在兩個(gè)不同的缺陷&—半乳糖苷酶之間可實(shí)現(xiàn)功能互補(bǔ)而建立的。實(shí)現(xiàn)a-complement主要有兩部分組成：LacZAM15，放在F質(zhì)?；蛉旧w上，隨宿主傳代；LacZ'，放在載體上，作為篩選標(biāo)記，當(dāng)在LacZ'中插入一個(gè)片斷后，將不可避免地導(dǎo)致產(chǎn)生無a-complement能力的&—半乳糖苷酶片斷。在誘導(dǎo)物IPTG和底物X-gal（同時(shí)可作為生色劑）的作用下，含重組質(zhì)粒的菌落不能產(chǎn)生有活性的P一半乳糖苷酶，不能分解X-gal，呈現(xiàn)白色，而含非重組質(zhì)粒的菌落則呈現(xiàn)蘭色。以此達(dá)到篩選的目的。簡(jiǎn)答題問題：為什么野生型的入噬菌體DNA不宜作為基因工程載體？參考答案：①野生型噬菌體DNA沒有容載能力，因?yàn)槭删w的頭部對(duì)DNA包裝的量是有限制的，不能大于基因組的105%，所以要將入噬菌體改造成載體，必須削減分子量；②野生型的入噬菌體對(duì)于一些常用的酶都有多個(gè)識(shí)別和切割位點(diǎn)，不便于克??；③沒有可供選擇的標(biāo)記；④野生型的入噬菌體具有感染性，因此不夠安全。簡(jiǎn)答題問題：試簡(jiǎn)述入噬菌體的Lyticgrowth和Lysogenicstate兩種循環(huán)的分化及其調(diào)節(jié)過程？參考答案：Lyticgrowth是入噬菌體在宿主中大量復(fù)制并組裝成子代入噬菌體顆粒，導(dǎo)致宿主細(xì)胞裂解。Lysogenicstate為入噬菌體基因組DNA通過位點(diǎn)專一性重組整合到宿主染色體DNA中隨宿主的繁殖傳到子代細(xì)胞。調(diào)節(jié)過程：由感染復(fù)數(shù)和細(xì)胞的營養(yǎng)狀態(tài)決定的，感染復(fù)數(shù)越高，營養(yǎng)狀態(tài)越差，則溶源化的頻率就越高。溶源現(xiàn)象的生化媒介可能是3'--5'cAMP，它在細(xì)胞內(nèi)的濃度會(huì)隨營養(yǎng)條件的變化而改變，當(dāng)細(xì)胞在富營養(yǎng)培養(yǎng)基中生長時(shí)，cAMP的濃度較低，有利于裂解生長；在缺乏cAMP的突變細(xì)胞中，更有利于裂解生長另外一個(gè)重要的調(diào)節(jié)因素是噬菌體的CII蛋白，它是噬菌體基因轉(zhuǎn)錄的激活子，抑制裂解功能基因的表達(dá)，催化噬菌體DNA整合到細(xì)菌的染色體中去。高濃度的CII蛋白促進(jìn)溶源化，而低濃度的CII蛋白促進(jìn)裂解生長。當(dāng)CII蛋白濃度足夠時(shí)，激活CI蛋白和基因int的表達(dá)，導(dǎo)致噬菌體DNA與染色體整合，朝著溶源態(tài)生長。您的答案：簡(jiǎn)答題問題：用入噬菌體載體進(jìn)行g(shù)enecloning時(shí)，主要利用入噬菌體的生物學(xué)特性作選擇標(biāo)記，其中有cI失活和Spi篩選，請(qǐng)問什么叫cI篩選？什么叫Spi篩選？參考答案：CI蛋白控制溶源態(tài)的形成，裂解生長受到抑制，當(dāng)外源基因片段插入cI中，cI蛋白失活，溶源態(tài)打破而進(jìn)入裂解生長而篩選出重組克隆，叫做cI篩選。野生型噬菌體在帶有P2原噬菌體的溶源性E.coli中的生長會(huì)受到限制的表型，稱作Spi+，即對(duì)P2噬菌體的干擾敏感(sensitivetoP2interference)。如果入噬菌體缺少兩個(gè)參與重組的基因red和gam，同時(shí)帶有chi位點(diǎn)，并且宿主菌為rec+，則可以在P2溶源性E.coli中生長良好，噬菌體的這種表型稱作Spi-。因此，通過入噬菌體載體DNA上的red和/或gam基因的缺失或替換，可在P2噬菌體溶源性細(xì)菌中鑒別重組和非重組入噬菌體。簡(jiǎn)答題問題：簡(jiǎn)述入噬菌體載體的克隆原理及一般步驟？參考答案：入噬菌體載體屬于克隆載體，主要用于克隆DNA片斷。工作原理：入噬菌體載體克隆外源DNA片斷的原理與質(zhì)粒載體的工作原理是類似的，只是在形式上有許多差別。載體和外源DNA片斷經(jīng)過酶切后，外源DNA片斷插入到載體的適當(dāng)位置，或置換載體的填充片段。這種連接后的重組DNA保留增殖性能，但由于分子量太大，不能象重組質(zhì)粒DNA那樣可通過轉(zhuǎn)化方法進(jìn)入大腸桿菌。通過提取入噬菌體的蛋白質(zhì)外殼，可在體外將重組噬菌體DNA進(jìn)行包裝，形成噬菌體顆粒。這樣的噬菌體顆粒保留對(duì)大腸桿菌的感染能力，可將被包裝的重組噬菌體DNA注射到宿主菌中。通過裂解生長，可增殖重組噬菌體?？寺〔襟E：①通過裂解過程增殖載體；②載體與外源DNA的酶切；③外源DNA與載體的連接；④重組噬菌體的體外包裝；⑤包裝噬菌體顆粒的感染；⑥篩選。簡(jiǎn)答題問題：Cosmid的工作原理是什么？參考答案：粘粒載體的主要原理類似入噬菌體載體。在外源片斷與載體連接時(shí)，粘粒載體相當(dāng)于入噬菌體載體的左右臂，cos位點(diǎn)通過粘端退火后，再與外源片斷相間連接成多聯(lián)體。當(dāng)多聯(lián)體與入噬菌體包裝蛋白混合時(shí)，入噬菌體A基因蛋白的terminase功能將切割兩個(gè)cos位點(diǎn)，并將兩個(gè)同方向cos位點(diǎn)之間的片斷包裝到入噬菌體顆粒中去。這些噬菌體顆粒感染大腸桿菌時(shí)，線狀的重組DNA就象入噬菌體DNA一樣，被注入細(xì)胞并通過cos位點(diǎn)環(huán)化。這樣形成的環(huán)化分子含有完整的粘粒載體，可象質(zhì)粒一樣復(fù)制并使其宿主獲得抗藥性。因而，帶有重組粘粒的細(xì)菌可用含適當(dāng)抗生素的培養(yǎng)基挑選。通過這種方式，就將外源DNA片斷通過粘粒載體克隆到大腸桿菌中去了。簡(jiǎn)答題問題：構(gòu)建粘粒文庫時(shí)會(huì)遇到哪些問題？你如何解決？參考答案：利用粘粒構(gòu)建基因文庫時(shí)會(huì)遇到許多困難：①載體分子會(huì)自身連接，從而導(dǎo)致效率大大降低甚至失敗。通過對(duì)載體作去磷酸化處理或使用雙cos位點(diǎn)載體或?qū)d體的酶切產(chǎn)物進(jìn)行部分補(bǔ)平可解決這一問題；②多個(gè)外源片斷插入載體中，會(huì)誤將兩個(gè)本來不相連的DNA片斷認(rèn)為是基因組中的連續(xù)DNA片斷。通過收集35?45kb的部分酶切外源DNA片斷與載體連接、使用雙cos位點(diǎn)載體或?qū)d體和外源片斷的酶切產(chǎn)物進(jìn)行部分補(bǔ)平，可解決這一問題。③提取的基因組DNA長度小于200kb，將使部分酶切后形成的35?45kb片斷只有少部分在其兩端帶有酶切位點(diǎn)，致使目標(biāo)DNA的可用性大大降低。在對(duì)外源DNA片斷作部分酶切之前，應(yīng)檢查其大小，如果小于200kb則不能用于構(gòu)建文庫；④提取的總DNA純度不高，可能由于出現(xiàn)酶解抑制物而得不到理想的酶切產(chǎn)物。因此，在制備總DNA時(shí)，應(yīng)小心避免混入的有機(jī)相和水相交界處的物質(zhì)。如果問題依舊出現(xiàn)，可用氯化銫梯度離心方法純化DNA或重新制備總DNA:⑤在構(gòu)建的文庫中常常出現(xiàn)不含外源片斷的克隆。這種“空”克隆的比例依載體的不同和操作的小心程度而不同一般而言，使用單cos位點(diǎn)的載體，約有5%的克隆是空的。使用雙cos位點(diǎn)的載體，產(chǎn)生空克隆的比例要低得多；⑥不同重組質(zhì)?？截悢?shù)可以有很大差異，導(dǎo)致收獲量相差懸殊。每當(dāng)對(duì)文庫作一次噬菌體的擴(kuò)增，這些差異將會(huì)被進(jìn)一步放大；⑦盡管文庫似乎全面，但也許不能獲得目的克隆。限制酶位點(diǎn)的非隨機(jī)分布、包裝蛋白污染限制酶、重組引起的序列缺失和擴(kuò)增時(shí)目的克隆可能被淘汰等都是產(chǎn)生這種現(xiàn)象的原因。簡(jiǎn)答題問題：絲狀噬菌體克隆中經(jīng)常會(huì)遇到哪兩類問題？可用何種方法來解決？參考答案：①外源DNA區(qū)段的部分缺失，克隆于絲狀噬菌體基因間隔區(qū)的外源基因趨于不穩(wěn)定。外源基因越大，缺失突變率越高，盡量避免帶有讓感染細(xì)菌在液體培養(yǎng)中連續(xù)生長，可以使這種現(xiàn)象減少到最低限度(盡管不能完全消除)。正確的做法是，用保存于一70笆的重組噬菌體原種轉(zhuǎn)染適當(dāng)?shù)乃拗骶伋善桨?，并從分隔良好的單個(gè)噬斑的中央挑取細(xì)菌進(jìn)行小規(guī)模培養(yǎng)；②外源DNA總是以單方向插入，實(shí)驗(yàn)中經(jīng)常會(huì)遇到，盡管某一載體可能在兩個(gè)方向上接受DNA，但特定外源DNA區(qū)段卻更容易僅以其中一個(gè)方向插入該載體，這種情況屢見不鮮。之所以出現(xiàn)這種現(xiàn)象，是因?yàn)橥庠碊NA另一條鏈上的序列不同程度地干擾了載體基因間隔區(qū)的功能。在多克隆位點(diǎn)區(qū)內(nèi)遴選不同的位點(diǎn)插入外源DNA，或者選用可進(jìn)行定向克隆的限制酶組合，有時(shí)可避免上述問題。簡(jiǎn)答題問題：噬菌粒(Phagemid)具有那些特征？許多phagemid都有一個(gè)主要的缺點(diǎn)，即在輔助噬菌體感染后，有時(shí)候單鏈DNA的產(chǎn)量較低且重復(fù)性一般較差，試分析其原因？參考答案：①雙鏈DNA既穩(wěn)定，又高產(chǎn)，具有常規(guī)質(zhì)粒的特征;②免卻了將外源DNA片斷從質(zhì)粒亞克隆于噬菌體載體;③由于載體足夠小，故可得到長達(dá)10kb的外源DNA區(qū)段的單鏈。原因：①噬菌體攜帶的基因間隔區(qū)的確切序列，攜帶完整基因間隔區(qū)的質(zhì)?？捎捎诟蓴_輔助病毒DNA復(fù)制而抑制子代噬菌體顆粒的產(chǎn)生；②基因間隔區(qū)插入質(zhì)粒的具體位置，基因間隔區(qū)插入PBR322Hindlll位點(diǎn)所構(gòu)成的噬菌粒，會(huì)嚴(yán)重干擾野生型噬菌體的生長，而將基因間隔區(qū)插入Ahalll位點(diǎn)則不然；③輔助噬菌體的性質(zhì)，野生型絲狀噬菌體及其抗干擾突變株都被用作輔助噬菌體。輔助噬菌體基因間隔區(qū)插入了lacZ序列，因而基因II產(chǎn)物對(duì)它的識(shí)別不那么有效；④克隆于噬菌粒的外源DNA的大小與性質(zhì)，因外源DNA片斷的大小而異，單鏈DNA的產(chǎn)量可以在5?10倍之間有所差異（一般來說，外源DNA越大，產(chǎn)量越低）。另外，由于一些尚不清楚的原因，大小相同的外源DNA，其單鏈DNA的產(chǎn)量也參差不齊。簡(jiǎn)答題問題：YAC載體具有什么樣的功能性元件？為什么它在克隆大片段時(shí)具有很大的優(yōu)越性？參考答案：YAC帶有天然染色體所有的功能元件，包括一個(gè)著絲粒，一個(gè)復(fù)制起點(diǎn)，兩個(gè)端粒。YAC能夠容納長達(dá)幾百kb的外源DNA，這是質(zhì)粒和粘粒辦不到的。大片斷的插入更有可能包含完整的基因，在染色體步移中每次允許更大的步移距離，同時(shí)減少完整基因組文庫所需的克隆數(shù)目。思考題問題：作為一個(gè)最基本的載體，它必須具備哪些功能元件？思考題問題：何為a-互補(bǔ)？在載體構(gòu)建中有何作用？思考題問題：請(qǐng)簡(jiǎn)要描述?噬菌體溶原狀態(tài)和裂解循環(huán)的基因調(diào)控模式，及其在構(gòu)建載體中的作用。思考題問題：簡(jiǎn)述M13K07輔助噬菌體的遺傳學(xué)特性和生物學(xué)功能，及其在制備單鏈DNA中的作用。