(21)-55聚酰胺色譜法在黃酮類化合物分離中應(yīng)用

聚酰胺色譜法在黃酮類化合物分離中應(yīng)用

聚酰胺分子中既有親水基團(tuán)又有親脂基團(tuán)，當(dāng)用極性溶劑（如含水溶劑）作為流動(dòng)相時(shí)，聚酰胺中的烷基作為非極性固定相，其色譜行為類似于反相分配色譜，因黃酮苷的極性大于苷元，所以黃酮苷比苷元容易洗脫；

當(dāng)用非極性流動(dòng)相（如氯仿—甲醇）時(shí)，聚酰胺則作為極性固定相，其色譜行為類似于正相分配色譜。黃酮苷元的極性小于黃酮苷，因而黃酮苷元易被洗脫。

此即是聚酰胺色譜的雙重層析原理。對(duì)分離黃酮類化合物來說，聚酰胺是較為理想的吸附劑。其吸附強(qiáng)度主要取決于黃酮類化合物分子中羥基的數(shù)目與位置及溶劑與黃酮類化合物或與聚酰胺之間形成氫鍵締合能力的大小。

聚酰胺柱層析可用于分離各種類型的黃酮類化合物，包括苷及苷元、查耳酮與二氫黃酮等。吸附解吸附

(1)

吸附的關(guān)鍵是化合物酚羥基（或羰基）與聚酰胺的羰基（或胺基H）形成氫鍵（2）解吸附是由溶劑競(jìng)爭(zhēng)形成氫鍵而取代酚羥基與聚酰胺間形成的氫鍵所致，可能有兩種方式：

a.溶劑與聚酰胺形成新氫鍵

b.溶劑與酚羥基形成氫鍵而破壞原有氫鍵（3）化合物與聚酰胺形成的氫鍵能力越強(qiáng)，吸附越強(qiáng)，越難洗脫，反之則越易洗脫即：吸附力小，先洗脫；吸附力大，后洗脫。黃酮類化合物從聚酰胺柱上洗脫時(shí)有下列規(guī)律（1）（2）母核上增加羥基，洗脫速度減緩。若以含水移動(dòng)相（如甲醇-水）作洗脫劑，黃酮苷比游離黃酮先洗脫下來，且洗脫的先后順序一般是：叁糖苷＞雙糖苷＞單糖苷＞游離黃酮；

若以有機(jī)溶劑（如氯仿-甲醇）作洗脫劑，結(jié)果則相反，游離黃酮比苷先洗脫下來。不同類型黃酮化合物，先后流出順序一般是：異黃酮>二氫黃酮醇>黃酮>黃酮醇分子中芳香核、共軛雙鍵多者則吸附力強(qiáng)，所以查耳酮往往比相應(yīng)的二氫黃酮難于洗脫。（3）（4）聚酰胺對(duì)處于C4羰基鄰位的羥基（即3-或5-位）的吸附力小于處于其它位置的羥基；具有鄰二酚羥基的黃酮的吸附力小于具有間二酚羥基或?qū)Χ恿u基的黃酮。（5）洗脫溶劑的影響聚酰胺與各類化合物在水中形成氫鍵的能力最強(qiáng)，在有機(jī)溶劑中較弱，在堿性溶劑中最弱。

因此，各種溶劑在聚酰胺柱上的洗脫能力由弱至強(qiáng)的順序?yàn)椋核技状蓟蛞掖迹舛扔傻偷礁撸急枷溲趸c水溶液或氨水＜甲酰胺＜二甲基甲酰胺（DMF）＜尿素水溶液。（6）練習(xí)A、R1＝R2＝HC、R1＝Glc,R2＝HB、R1＝H,R2＝RhaD、R1＝Glc,R2＝Rha聚酰胺柱色譜（條件60%甲醇—水洗脫）洗脫由先至后()＞()＞()＞()答案：（D）＞（B）＞（C）＞（A）原因：D的酚OH數(shù)目最少，最先被洗脫；A的酚OH數(shù)目最多，最后被洗脫；B和C的酚OH數(shù)目一樣，但位置不同；B在3位，形成分子內(nèi)氫鍵，吸附力小，先被洗脫；C在7位，未形成分子內(nèi)氫鍵，吸附力大，后被洗脫?？偨Y(jié)總黃酮溶于

，拌樣上聚酰胺（為溶劑裝柱）依次用水，稀-濃

洗脫苷（苷元相同）水10%醇