生物競賽南京大學(xué)夏令營實驗

一、普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造及使用規(guī)范目前一頁\總數(shù)三十五頁\編于二十點實驗?zāi)康氖煜わ@微鏡的結(jié)構(gòu)熟練顯微鏡的使用方法目前二頁\總數(shù)三十五頁\編于二十點（一）顯微鏡的構(gòu)造1.機械裝置鏡座 即顯微鏡的基座，支持整個鏡體。鏡臂

是顯微鏡的脊梁，顯微鏡的其他部件安裝在鏡臂上。載物臺

是支持被檢物體的平臺。載物臺表面有制片夾，可以固定制片；中央有通光孔，可使光線通過。目前三頁\總數(shù)三十五頁\編于二十點鏡筒

標(biāo)準(zhǔn)長度為160mm，其上接目鏡，下接物鏡。物鏡轉(zhuǎn)換器

固定在鏡筒下端。其有數(shù)個物鏡孔，用以安裝物鏡。調(diào)焦螺旋 調(diào)節(jié)物鏡與被檢物體之間的距離，以獲得清晰的物象。分為粗調(diào)焦螺旋和細調(diào)焦螺旋。前者用于在低倍鏡下找到被檢物體的放大像，或者觀察；后者用于在高倍鏡下觀察時的精密調(diào)焦。目前四頁\總數(shù)三十五頁\編于二十點鏡座鏡臂載物臺鏡筒物鏡轉(zhuǎn)換器調(diào)焦螺旋制片夾目前五頁\總數(shù)三十五頁\編于二十點2.光學(xué)系統(tǒng)光源

現(xiàn)在使用的顯微鏡大多數(shù)自帶光源。聚光鏡

位于載物臺下方，可以聚集、調(diào)節(jié)由光源射入的光量，并能矯正色差和球面差，增加顯微鏡的鑒別力?？讖焦怅@

通常在聚光鏡內(nèi)部,位于集光透鏡下面。利用光圈操作桿，可以調(diào)節(jié)孔的大小，以調(diào)節(jié)光線的強弱。目前六頁\總數(shù)三十五頁\編于二十點物鏡

安裝在鏡筒下端，是顯微鏡的心臟。其作用是利用入射光線使被檢物體形成放大的實像，而且它還決定顯微鏡分辨率的高低。物鏡上往往刻有一系列的參數(shù)，如鏡口率（NA，其值越大，分辨率越高）、放大倍數(shù)等。目鏡 位于鏡筒上端，其作用是將已經(jīng)被物鏡所放大的物像再次加以放大，使之便于觀察。目鏡筒外側(cè)刻有放大倍數(shù)。目前七頁\總數(shù)三十五頁\編于二十點光源聚光鏡孔徑光闌物鏡目鏡目前八頁\總數(shù)三十五頁\編于二十點（二）顯微鏡的使用步驟和方法

1.取鏡與放置將顯微鏡放置在左側(cè)（單筒顯微鏡）或前方（雙筒顯微鏡）的桌面上。移動顯微鏡時，要一手拿鏡臂，一手托鏡座，需謹慎小心。2.打開光源打開光源，上升聚光鏡，開大孔徑光闌。目前九頁\總數(shù)三十五頁\編于二十點3.觀察 物鏡在最低倍數(shù)下，放置被檢標(biāo)本于載物臺上，用壓片夾夾好。 如果是雙筒顯微鏡，調(diào)整兩目鏡的距離，以便于觀察。 調(diào)節(jié)粗調(diào)焦螺旋，使載物臺緩緩上升，直至物鏡鏡頭接近標(biāo)本。這時，一邊使用目鏡觀察，一邊調(diào)節(jié)粗調(diào)焦螺旋使載物臺下降，直至視野中看到物像為止。目前十頁\總數(shù)三十五頁\編于二十點 移動載片位置，使物象處于視野的中心，此時再調(diào)節(jié)細調(diào)焦螺旋以增加物象的清晰度，其次還可以調(diào)節(jié)聚光鏡和孔徑光闌，使光線強弱適中，以便于觀察。 在低倍鏡下，了解標(biāo)本的概觀后，將目的部分移向視野的中心。此時轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器，換用高倍鏡頭。如物象不清晰，用細調(diào)焦螺旋調(diào)節(jié)，決不能在高倍鏡下使用粗調(diào)焦螺旋，以防碰壞玻片，損傷鏡頭。換用高倍鏡后，視野變暗，可調(diào)節(jié)聚光鏡和孔徑光闌以增加亮度。目前十一頁\總數(shù)三十五頁\編于二十點

使用油鏡時，在制片上滴一滴香柏油。油鏡使用完后，要及時地用蘸有乙醚的擦鏡紙把油鏡鏡頭擦拭干凈。 觀察到的物像的總放大倍數(shù)，是物鏡的放大倍數(shù)乘上目鏡的放大倍數(shù)。

目前十二頁\總數(shù)三十五頁\編于二十點4.換制片 在低倍鏡下取、換制片，決不能在高倍鏡下取、換制片，以防損傷鏡頭。5.收顯微鏡 關(guān)閉光源；下降聚光鏡；關(guān)閉孔徑光闌；轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器，使之處于最低倍數(shù)物鏡下。 顯微鏡保持清潔。顯微鏡的光學(xué)部分只能用專門的擦鏡紙擦拭。 按實驗室的要求，做好顯微鏡的使用記錄等。目前十三頁\總數(shù)三十五頁\編于二十點二、植物細胞及細胞內(nèi)容物的形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察目前十四頁\總數(shù)三十五頁\編于二十點

（一）石細胞觀察

取梨肉一小塊，置載玻片上用鑷子壓碎，0.1%番紅染液染色5分鐘。置顯微鏡下觀察。注意石細胞的形態(tài)特征、紋孔的特點。目前十五頁\總數(shù)三十五頁\編于二十點（二）淀粉粒觀察

在馬鈴薯切口刮取少量白色漿液，蒸餾水裝片。置顯微鏡下觀察（光線調(diào)暗）。注意淀粉粒的形態(tài)特征：卵圓形或橢圓形顆粒，有臍、偏心輪紋。然后在蓋玻片的一側(cè)滴一小滴碘—碘化鉀，調(diào)亮視野，觀察淀粉粒顏色的變化（原因是什么）。目前十六頁\總數(shù)三十五頁\編于二十點（三）晶體和氣孔器觀察撕取紫鴨跖草葉下表皮，用刀片取一小塊，然后置載玻片上，滴上一滴甘油后，用蓋玻片封片，在顯微鏡下觀察。注意晶體所在的細胞及晶體的類型，還有氣孔器的形態(tài)結(jié)構(gòu)以及保衛(wèi)細胞與其他表皮細胞在形態(tài)結(jié)構(gòu)上的差別。目前十七頁\總數(shù)三十五頁\編于二十點三、染色體觀察壓片用鑷子取一個根尖置濾紙上，以吸去水分，再轉(zhuǎn)移到潔凈的載玻片上，切除伸長區(qū)部分。加一小滴卡寶品紅染色液。用鑷子將根尖充分壓碎，加蓋片。在酒精燈上微熱。稍冷卻后，左手食指壓緊蓋片一角，右手持解剖針。以針尖輕輕敲擊蓋片，使細胞均勻分散。然后，再換用解剖針的木柄端敲擊蓋片，使細胞壓平。最后，在蓋片上墊一濾紙片。用拇指緊壓使其更平。目前十八頁\總數(shù)三十五頁\編于二十點三、染色體觀察觀察制片用顯微鏡仔細觀察，染色體染成紫紅色，細胞質(zhì)淡紅色或無色。蠶豆染色體數(shù)目2n=12，洋蔥為2n=16。尋找染色體數(shù)目準(zhǔn)確，而且染色體分散良好，縊痕清晰的細胞。染色體形態(tài)

目前十九頁\總數(shù)三十五頁\編于二十點蠶豆染色體組型目前二十頁\總數(shù)三十五頁\編于二十點（附）細胞分裂和細胞周期細胞周期：細胞從一次分裂開始到第二次分裂開始所經(jīng)歷的全過程。細胞周期分成四個階段：間隙期1、合成期、間隙期2和有絲分裂期。目前二十一頁\總數(shù)三十五頁\編于二十點細胞分裂和細胞周期目前二十二頁\總數(shù)三十五頁\編于二十點細胞分裂和細胞周期一、有絲分裂期（M期）（一）過程1、前期2、前中期3、中期4、后期5、末期細胞質(zhì)分裂：動物細胞中形成環(huán)溝來分割母細胞。植物細胞中則形成細胞板，進而形成新細胞壁來分隔兩個新細胞。目前二十三頁\總數(shù)三十五頁\編于二十點細胞分裂和細胞周期(二)核被膜的裂解與再生細胞分裂前中期，核纖層蛋白高度磷酸化而解體，導(dǎo)致核膜解體形成膜泡。末期時，核纖層蛋白發(fā)生去磷酸化作用而重新聚合并與膜泡結(jié)合，核膜孔也重新組成到新的核被膜上。最后，分散的核被膜重新融合為一。目前二十四頁\總數(shù)三十五頁\編于二十點細胞分裂和細胞周期（三）紡錘體的形成構(gòu)成紡錘體的纖維是由成束的微管和與微管相結(jié)合的蛋白質(zhì)組成的。極纖維和動粒纖維目前二十五頁\總數(shù)三十五頁\編于二十點細胞分裂和細胞周期紡錘體目前二十六頁\總數(shù)三十五頁\編于二十點細胞分裂和細胞周期（四）染色體的行為

前期：兩染色單體并列排列。前中期：動粒（在著絲粒外面）出現(xiàn)，紡錘體形成。中期：染色體位于赤道板上。后期：著絲粒分裂，染色體向兩極移動。秋水仙素：破壞微管的組成，因而阻止染色體移向兩極，結(jié)果形成多倍體細胞。目前二十七頁\總數(shù)三十五頁\編于二十點細胞分裂和細胞周期染色體的行為目前二十八頁\總數(shù)三十五頁\編于二十點細胞分裂和細胞周期（五）細胞器的分配各種細胞器的增生主要在前期1發(fā)生，以保證分裂產(chǎn)生的兩個新細胞均能獲得各種細胞器。有些細胞器（如線粒體和質(zhì)體），子細胞必須從母細胞中獲得。目前二十九頁\總數(shù)三十五頁\編于二十點細胞分裂和細胞周期二、分裂間期占比較大的時間比例。在此期間，細胞的形態(tài)沒有太大的變化，但生化合成方面變化很大。S期：DNA合成的時期。染色體的組蛋白也在此時合成。G1期：各種細胞器和與DNA復(fù)制有關(guān)的酶大量增加。G2期：染色體螺旋化，中心粒復(fù)制，微管蛋白及與分裂有關(guān)的物質(zhì)大量合成。目前三十頁\總數(shù)三十五頁\編于二十點細胞分裂和細胞周期G0期：有些細胞脫離細胞周期而分化成執(zhí)行一定功能的細胞，它們不再分裂，稱G0期細胞，如神經(jīng)細胞。 有些已分化的細胞，在某些因子的作用下，可以恢復(fù)其分裂能力，重新進入細胞周期，如肝細胞。 還有些細胞能夠連續(xù)分裂，從不進入G0期，如植物的頂端分生組織細胞和動物的造血干細胞。目前三十一頁\總數(shù)三十五頁\編于二十點細胞分裂和細胞周期三、細胞周期的時間 不同物種、不同組織的細胞周期所經(jīng)歷的時間不同。在恒定條件下，各種細胞的周期時間是恒定的。目前三十二頁\總數(shù)三十五頁\編于二十點細胞分裂和細胞周期四、細胞周期的控制機制細胞周期受控于一定的調(diào)節(jié)機制，使得生物體能有序地分裂和生長。細胞周期調(diào)控的關(guān)鍵在分裂間期。有2個起決定作用的控制點：從G1期進入S期和從G2期進入M期。目前三十三頁\總數(shù)三十五頁\編于二十點細胞分裂和細胞周期五、染色體（一）染色體的一般形態(tài)染色絲，染色體；主縊痕（著絲粒），次縊痕，隨