鹽析法分離蛋白質

鹽析法分離蛋白質目前一頁\總數(shù)二十七頁\編于二十二點沉淀定義沉淀特點應用范圍沉淀分類1.沉淀法概述目前二頁\總數(shù)二十七頁\編于二十二點鹽析法

有機溶劑沉淀法選擇性變性沉淀法等電點沉淀法離子型聚合物沉淀法聚電解質沉淀法高價金屬離子沉淀法沉淀法分類目前三頁\總數(shù)二十七頁\編于二十二點活性蛋白非活性蛋白理化性質溶解度提取方法蛋白質的理化性質的回顧

目前四頁\總數(shù)二十七頁\編于二十二點鹽析沉淀步驟加沉淀劑方式陳化條件脫鹽處理2.鹽析沉淀目前五頁\總數(shù)二十七頁\編于二十二點鹽析機理示意圖目前六頁\總數(shù)二十七頁\編于二十二點目前七頁\總數(shù)二十七頁\編于二十二點目前八頁\總數(shù)二十七頁\編于二十二點①鹽離子與蛋白質分子爭奪水分子，降低了用于溶解蛋白質的有效水量，減弱了蛋白質的水合程度，破壞了蛋白表面的水化膜，導致蛋白質溶解度下降；②鹽離子電荷的中和作用，使蛋白質溶解度下降；③鹽離子引起原本在蛋白質分子周圍有序排列的水分子的極化，使水活度降低。鹽析的機理目前九頁\總數(shù)二十七頁\編于二十二點Cohn方程式logS=β-KsIKs鹽析β鹽析二次鹽析鹽析沉淀基礎目前十頁\總數(shù)二十七頁\編于二十二點圖1碳氧血紅蛋白的溶解度與硫酸銨離子強度的關系圖目前十一頁\總數(shù)二十七頁\編于二十二點不同蛋白質的溶解度曲線目前十二頁\總數(shù)二十七頁\編于二十二點蛋白質的鹽析分布曲線目前十三頁\總數(shù)二十七頁\編于二十二點溶解度曲線(a)和鹽析分布曲線(b)

目前十四頁\總數(shù)二十七頁\編于二十二點對β影響對Ks影響鹽種類鹽濃度溫度pH值鹽析影響因素目前十五頁\總數(shù)二十七頁\編于二十二點無機鹽種類的影響圖7不同鹽溶液中碳氧血紅蛋白的溶解度與離子強度的關系（25℃）

(○)NaCl;(▼)KCl;(?)MgSO4;(▲)NH4)SO4;(●)Na2SO4;(□)K2SO4;(■)檸檬酸三鈉目前十六頁\總數(shù)二十七頁\編于二十二點溫度的影響目前十七頁\總數(shù)二十七頁\編于二十二點pH對β的影響目前十八頁\總數(shù)二十七頁\編于二十二點蛋白質起始濃度的影響目前十九頁\總數(shù)二十七頁\編于二十二點二次鹽析目前二十頁\總數(shù)二十七頁\編于二十二點鹽析操作目前二十一頁\總數(shù)二十七頁\編于二十二點3等電點沉淀實例①從豬胰臟中提取胰蛋白酶原：胰蛋白酶原的pI＝8.9，可先于pH3.0左右進行等電點沉淀，除去共存的許多酸性蛋白質(pI=3．O)。工業(yè)生產胰島素(pI＝5.3)時，先調pH至8.0除去堿性蛋白質，再調pH至3.0除去酸性蛋白質(同時加入一定濃度的有機溶劑以提高沉淀效果)。②堿性磷酸酯酶的pI沉淀提取：發(fā)酵液調pH4.0后出現(xiàn)含堿性磷酸酯酶的沉淀物，離心收集沉淀物。用pH9.0的0.1mol/LTris-HCl緩沖液重新溶解，加入20～40%飽和度的硫酸銨分級，離心收集的沉淀Tris-HCl緩沖液再次沉淀，即得較純的堿性磷酸酯酶。目前二十二頁\總數(shù)二十七頁\編于二十二點4有機溶劑沉淀原理圖目前二十三頁\總數(shù)二十七頁\編于二十二點有機溶劑沉淀實例目前二十四頁\總數(shù)二十七頁\編于二十二點酵母干粉中加入0.066mol/L磷酸氫二鈉溶液，37℃水浴保溫2h，室溫攪拌3h，離心收集上清液，升溫至55℃，保溫20min后迅速冷卻離心去除熱變性蛋白，上清液中多為熱穩(wěn)定性較高的醇脫氫酶。5選擇性熱變性沉淀實例目前二十五頁\總數(shù)二十七頁\編于二十二點（1）非離子型聚合物沉淀法（2）聚電解質沉淀法（3）金屬離子