第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法學(xué)時(shí)演示文稿

第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法學(xué)時(shí)演示文稿目前一頁(yè)\總數(shù)四十五頁(yè)\編于十六點(diǎn)優(yōu)選第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法學(xué)時(shí)目前二頁(yè)\總數(shù)四十五頁(yè)\編于十六點(diǎn)CaenorhabditiselegansDrosophilamelanogasterArabidopsisthaliana目前三頁(yè)\總數(shù)四十五頁(yè)\編于十六點(diǎn)第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第一節(jié)細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察方法第二節(jié)細(xì)胞組分的分析方法第三節(jié)細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞工程與顯微操作技術(shù)目前四頁(yè)\總數(shù)四十五頁(yè)\編于十六點(diǎn)第一節(jié)細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察方法

1光學(xué)顯微鏡技術(shù)（lightmicroscopy）

2

電子顯微鏡技術(shù)

(Electromicroscopy)3掃描遂道顯微鏡

(scanningtunnelingmicroscope)目前五頁(yè)\總數(shù)四十五頁(yè)\編于十六點(diǎn)一、光學(xué)顯微鏡技術(shù)（lightmicroscopy)

普通復(fù)式光學(xué)顯微鏡技術(shù)

熒光顯微鏡技術(shù)（FluorescenceMicroscopy）

激光共焦掃描顯微鏡技術(shù)（LaserScanningConfocalMicroscopy）

相差顯微鏡（phase-contrastmicroscope）（自習(xí)）目前六頁(yè)\總數(shù)四十五頁(yè)\編于十六點(diǎn)普通復(fù)式光學(xué)顯微鏡技術(shù)

分辨率是指區(qū)分開(kāi)兩個(gè)質(zhì)點(diǎn)間的最小距離目前七頁(yè)\總數(shù)四十五頁(yè)\編于十六點(diǎn)普通光學(xué)顯微鏡目前八頁(yè)\總數(shù)四十五頁(yè)\編于十六點(diǎn)各種顯微鏡的分辨率梯度目前九頁(yè)\總數(shù)四十五頁(yè)\編于十六點(diǎn)熒光顯微鏡技術(shù)

（FluorescenceMicroscopy）原理目前十頁(yè)\總數(shù)四十五頁(yè)\編于十六點(diǎn)熒光顯微鏡技術(shù)

（FluorescenceMicroscopy）應(yīng)用

直接熒光標(biāo)記技術(shù)

間接熒光標(biāo)記技術(shù)(免疫熒光標(biāo)記技術(shù))

用于特異蛋白質(zhì)等生物大分子的定性定位：如綠色熒光蛋白(GFP)的應(yīng)用

目前十一頁(yè)\總數(shù)四十五頁(yè)\編于十六點(diǎn)應(yīng)用：綠色熒光蛋白目前十二頁(yè)\總數(shù)四十五頁(yè)\編于十六點(diǎn)激光共焦掃描顯微鏡技術(shù)

（LaserScanningConfocalMicroscopy）原理：應(yīng)用： 排除焦平面以外光的干擾，增強(qiáng) 圖像反差和提高分辨率(1.4—1.7倍)，通過(guò)“光切片”觀察樣品內(nèi)部結(jié)構(gòu)，可重構(gòu)樣品的三維結(jié)構(gòu)。目前十三頁(yè)\總數(shù)四十五頁(yè)\編于十六點(diǎn)激光共焦掃描顯微系統(tǒng)(Confocal

System)目前十四頁(yè)\總數(shù)四十五頁(yè)\編于十六點(diǎn)PineTreepollen-collectedonaBio-RadMRC1024atPurdueUniversityCytometryLaboratories

利用光切片技術(shù)顯示的花粉內(nèi)部結(jié)構(gòu)目前十五頁(yè)\總數(shù)四十五頁(yè)\編于十六點(diǎn)1為轉(zhuǎn)GFP基因的煙草單細(xì)胞；2為轉(zhuǎn)SCaM1-GFP融合基因的煙草單細(xì)胞；3為轉(zhuǎn)SCaM4-GFP融合基因的煙草單細(xì)胞。

質(zhì)壁分離后轉(zhuǎn)基因煙草單細(xì)胞的激光共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞壁細(xì)胞膜細(xì)胞核細(xì)胞壁細(xì)胞壁細(xì)胞膜細(xì)胞核細(xì)胞膜細(xì)胞核細(xì)胞核細(xì)胞膜細(xì)胞壁細(xì)胞核細(xì)胞膜目前十六頁(yè)\總數(shù)四十五頁(yè)\編于十六點(diǎn)二、電子顯微鏡技術(shù)

電子顯微鏡的基本知識(shí)電鏡與光鏡的比較

電子顯微鏡的基本構(gòu)造

目前十七頁(yè)\總數(shù)四十五頁(yè)\編于十六點(diǎn)電鏡與光鏡的比較

顯微鏡分辨本領(lǐng)光源透鏡真空成像原理LMEM200nm100nm0.1nm可見(jiàn)光（400-700）紫外光（約200nm)電子束（0.01-0.9）玻璃透鏡玻璃透鏡電磁透鏡不要求真空不要求真空要求真空1.33x10-5～1.33x10-3Pa利用樣品對(duì)光的吸收形成明暗反差和顏色變化利用樣品對(duì)電子的散射和透射形成明暗反差目前十八頁(yè)\總數(shù)四十五頁(yè)\編于十六點(diǎn)電子顯微鏡的基本構(gòu)造電子束照明系統(tǒng)、成像系統(tǒng)、真空系統(tǒng)、記錄系統(tǒng)目前十九頁(yè)\總數(shù)四十五頁(yè)\編于十六點(diǎn)二、電子顯微鏡技術(shù)

電子顯微鏡的基本知識(shí)電鏡與光鏡的比較

電子顯微鏡的基本構(gòu)造

主要電鏡制樣技術(shù)

負(fù)染色技術(shù)冰凍蝕刻技術(shù)超薄切片技術(shù)電鏡三維重構(gòu)技術(shù)

目前二十頁(yè)\總數(shù)四十五頁(yè)\編于十六點(diǎn)主要電鏡制樣技術(shù)超薄切片技術(shù)用于電鏡觀察的樣本制備示意圖細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)

負(fù)染色技術(shù)（Negativestaining）

染色背景，襯托出樣品的精細(xì)結(jié)構(gòu)，如病毒、核糖體等結(jié)構(gòu)。

冷凍蝕刻技術(shù)（Freezeetching）

冰凍斷裂與蝕刻復(fù)型：主要用來(lái)觀察膜斷裂面的蛋白質(zhì)顆粒和膜表面結(jié)構(gòu)。

電鏡三維重構(gòu)技術(shù)

電鏡三維重構(gòu)技術(shù)與X-射線(xiàn)晶體衍射技術(shù)及核磁共振分析技術(shù)相結(jié)合，是當(dāng)前結(jié)構(gòu)生物學(xué)（StructuralBiology）

主要研究生物大分子空間結(jié)構(gòu)及其相互關(guān)系的主要實(shí)驗(yàn)手段。

目前二十一頁(yè)\總數(shù)四十五頁(yè)\編于十六點(diǎn)固定

包埋切片染色超薄切片技術(shù)目前二十二頁(yè)\總數(shù)四十五頁(yè)\編于十六點(diǎn)超薄切片技術(shù)圖片示例目前二十三頁(yè)\總數(shù)四十五頁(yè)\編于十六點(diǎn)冷凍蝕刻目前二十四頁(yè)\總數(shù)四十五頁(yè)\編于十六點(diǎn)二、電子顯微鏡技術(shù)

電子顯微鏡的基本知識(shí)電鏡與光鏡的比較電鏡與光鏡光路圖比較電子顯微鏡的基本構(gòu)造

主要電鏡制樣技術(shù)

負(fù)染色技術(shù)冰凍蝕刻技術(shù)超薄切片技術(shù)電鏡三維重構(gòu)技術(shù)

掃描電鏡（Scanningelectronmicroscope，SEM）

目前二十五頁(yè)\總數(shù)四十五頁(yè)\編于十六點(diǎn)掃描電鏡原理與應(yīng)用：

電子“探針”掃描，激發(fā)樣品表面放出二次電子，探測(cè)器收集二次電子成象。

CO2臨界點(diǎn)干燥法防止引起樣品變形的表面張力問(wèn)題目前二十六頁(yè)\總數(shù)四十五頁(yè)\編于十六點(diǎn)目前二十七頁(yè)\總數(shù)四十五頁(yè)\編于十六點(diǎn)三、掃描遂道顯微鏡ScanningTunnelingMicroscope,STM80年代發(fā)展起來(lái)的檢測(cè)樣品微觀結(jié)構(gòu)的儀器。反映出樣品表面形貌信息、電特性或磁特性等。特點(diǎn)：分辨率高：

側(cè)分辨率：分辨率為0.1～0.2nm，縱分辨率可達(dá)0.001nm不受介質(zhì)限制非破壞性

用途：納米生物學(xué)研究領(lǐng)域中的重要工具,在原子水平上揭示樣本表面的結(jié)構(gòu)，觀察生物大分子、膜、病毒等的結(jié)構(gòu)。目前二十八頁(yè)\總數(shù)四十五頁(yè)\編于十六點(diǎn)

2.特異蛋白抗原的定位與定性

3.細(xì)胞內(nèi)特異核酸的定位與定性

4.放射自顯影技術(shù)

1.離心分離技術(shù)第二節(jié)細(xì)胞組分的分析方法目前二十九頁(yè)\總數(shù)四十五頁(yè)\編于十六點(diǎn)一、離心分離技術(shù)

用途：分離細(xì)胞器與生物大分子及其復(fù)合物

差速離心：分離密度不同的細(xì)胞組分

密度梯度離心：精細(xì)組分或生物大分子的分離目前三十頁(yè)\總數(shù)四十五頁(yè)\編于十六點(diǎn)差速離心目前三十一頁(yè)\總數(shù)四十五頁(yè)\編于十六點(diǎn)密度梯度離心常用的介質(zhì)：蔗糖、氯化銫、甘油等。目前三十二頁(yè)\總數(shù)四十五頁(yè)\編于十六點(diǎn)二、特異蛋白抗原的定位與定性

免疫熒光技術(shù)

快速、靈敏、有特異性，但其分辨率有限免疫電鏡技術(shù)免疫膠體金技術(shù)應(yīng)用：能對(duì)蛋白進(jìn)行精細(xì)定位。如通過(guò)對(duì)分泌蛋白的定位，可以確定某種蛋白的分泌動(dòng)態(tài)；胞內(nèi)酶的研究；膜蛋白的定位與骨架蛋白的定位等。蛋白電泳(SDS)與免疫印跡反應(yīng)(Western-Blot)目前三十三頁(yè)\總數(shù)四十五頁(yè)\編于十六點(diǎn)免疫熒光技術(shù)圖片示例目前三十四頁(yè)\總數(shù)四十五頁(yè)\編于十六點(diǎn)免疫膠體金技術(shù)原理與圖片示例目前三十五頁(yè)\總數(shù)四十五頁(yè)\編于十六點(diǎn)三、細(xì)胞內(nèi)特異核酸的定位與定性

光鏡水平的原位雜交技術(shù)

（同位素標(biāo)記或熒光素標(biāo)記的探針）

電鏡水平的原位雜交技術(shù)

（生物素標(biāo)記的探針與抗生物素抗體相連的膠體金標(biāo)記結(jié)合）

目前三十六頁(yè)\總數(shù)四十五頁(yè)\編于十六點(diǎn)四、放射自顯影技術(shù)原理及應(yīng)用：利用同位素的放射自顯影，對(duì)細(xì)胞內(nèi)生物大分子進(jìn)行定性、定位與半定量研究；實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞內(nèi)生物大分子進(jìn)行動(dòng)態(tài)和追蹤研究。

目前三十七頁(yè)\總數(shù)四十五頁(yè)\編于十六點(diǎn)目前三十八頁(yè)\總數(shù)四十五頁(yè)\編于十六點(diǎn)第三節(jié)細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞工程

1細(xì)胞的培養(yǎng)2細(xì)胞工程與顯微操作技術(shù)目前三十九頁(yè)\總數(shù)四十五頁(yè)\編于十六點(diǎn)一、細(xì)胞的培養(yǎng)

動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) 類(lèi)型：原代培養(yǎng)細(xì)胞（primaryculturecell） 傳代培養(yǎng)細(xì)胞（sub-culturecell）

細(xì)胞株（cellstrain）正常二倍體，具有接觸抑制。

細(xì)胞系（cellline）染色體改變，接觸抑制喪失，無(wú)限傳代植物細(xì)胞培養(yǎng)非細(xì)胞體系（cell-freesystem）

研究DNA復(fù)制、蛋白質(zhì)合成等生命活動(dòng)目前四十頁(yè)\總數(shù)四十五頁(yè)\編于十六點(diǎn)目前四十一頁(yè)\總數(shù)四十五頁(yè)\編于十六點(diǎn)Hela細(xì)胞（左）、CHO細(xì)胞